sampel
DESCRIPTION
Sampel. Pengotor. Analit. Endogen. Eksogen. Sensitivitas & Selektivitas. PENANGANAN SAMPEL. Pemurnian sampel. Pemurnian awal. Presipitasi / denaturasi protein .... (1). Protein pengotor endogen : Mengikat obat hasil analisis tidak valid Merusak alat (kolom HPLC) - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
Sampel
Pengotor Analit
Eksogen Endogen
Sensitivitas & Selektivitas
PENANGANAN SAMPEL
Pemurnian sampel
Pemurnian awal / penanganan awal
Ekstraksi
Kromatografi
Pemurnian awal
PRE-TREATMENTPresipitasi / denaturasi
protein
Ekstraksi solfen
Liofilisasi Hidrolisis konjugat
Homogenisasi
Derivatisasi kimia sebagai pendahuluan
ekstraksi
Presipitasi / denaturasi protein .... (1)
Protein pengotor endogen :Mengikat obat hasil analisis tidak
validMerusak alat (kolom HPLC)
Presipitasi / denaturasi protein
Perusakan ikatan antara protein dg obat / metabolitnya
Presipitasi / denaturasi protein .... (1)
Penambahan zat kimia
Sentrifugasi
Pemanasan
Ultrafiltrasi
Presipitasi / denaturasi protein .... (1)
Sampel Metanol Asetonitril
Sentrifuge
Endapan Supernatan
Pemanasan
Sentrifuge
Endapan Supernatan
Ekstraksi pelarut untuk menghilangkan seny hidrokarbon
Atur pH
Obat terionisasi
Ekstraksi dg pelarut organik
Fase organik /hidrofobik :hidrokarbon
Fase hidrofilik :Obat terionisasi
Liofilisasi ... (1)
Alasan pemilihan liofilisasi : Air sangat banyak, analit sangat larut air shg tidak
dapat dipisahkan secara ekstraksi pelarut Analit mudah menguap & rusak oleh pemanasan
Contoh : Feses mengandung mikroflora yang merusak
analit pada suhu kamar Feses liofilisasi serbuk larutkan dengan
pelarut yg sesuai ekstraksi
Liofilisasi ... (2)
Sampel dibekukan
Lyophilizer
Uap air divacum
Sublimasi
Padatan kering
Larutkan dg pelarut yg sesuai
Hidrolisis konjugat
Hidrolisis dengan penambahan enzim
Homogenisasi
Derivatisasi kimia
Obat / metabolit ekstraksi rusak Derivat obat / metabolit ekstraksi tidak
rusak Hidralazin ekstraksi pelarut organik (pH
basa) rusak Hidralazin + NaNO3 (pada pH asam)
tetrazolo (1,5a) phthalazin ekstraksi pelarut organik (pH basa) tidak rusak
Ekstraksi
Pemisahan senyawa berdasarkan perbedaan kelarutan
Ekstraksi padat – cairPemisahan senyawa menggunakan
kolom kromatografi.Pemisahan didasarkan perbedaan
kelarutan dalam fase gerak (pelarut)Parameter : konstanta distribusi (KD)
Ekstraksi cair – cair
KD = [Vlarutan x Wsolut dalam fase diam]
[Wfase diam x Wsolut dalam larutan]
Nilai KD dipengaruhi oleh :Polaritas pelarutKecepatan aliran larutanKontak larutan dengan fase diam
Konstanta Distribusi (KD)
Ekstraksi cair – cair ... (1)
Pemisahan didasarkan perbedaan kelarutan senyawa pada pelarut organik & air.
Parameter : koefisien partisi (P) P = Corganik / Cair
Faktor yang mempengaruhi PPelarut yang digunakanpHDerajat ionisasi
Darah utuh
Sentrifuge
serum
analit
protein CHCl3
protein CHCl3
uapkan
analit
Ekstraksi cair – cair ... (2)
Solid Phase Extraction (SPE)
Teknik SPE digunakan untuk pra-perlakuan sampel atau clean-up sampel-sampel yang kotor seperti sampel dengan kandungan matriks yang tinggi seperti garam-garam, protein, polimer, resin dll.
Efisiensi SPE dapat memperoleh recovery yang tinggi (>99 %).
Tahapan SPE
KLT
Fase diam : padat Fase gerak : cair Pemisahan
senyawa Analisis kualitatif &
kuantitatif (kurang sensitiv)
GC
Fase diam : padat / cair
Fase gerak : gas inert Analisis kualitatif &
kuantitatif Untuk pemeriksaan
zat yang volatil & tahan panas
HPLC
Fase diam : padat Fase gerak : cair Analisis kualitatif &
kuantitatif Untuk pemeriksaan
zat yang tidak tahan panas & tidak volatil
Gel Permeation Chromatography
(GPC) Pemisahan berdasar perbedaan ukuran
partikel Fase diam : gel Gel berupa butiran – butiran berpori
(dekstran, poliakrilamid, polistiren) Fase gerak : cair Contoh : pemisahan makromolekul (lemak,
protein, garam) dari sampel
TUGAS KELOMPOK PEKAN DEPAN
Buatlah presentsi kelompok (@ ±5 orang) dengan durasi 15 menit mengenai prosedur ekstraksi untuk obat dan atau metabolitnya dalam sampel biologis beserta contoh penerapannya.
Sub tema pilihan : Metode ekstraksi padat-cair Metode ekstraksi cair-cair Metode kromatografi Metode radiokimia Metode spektroskopi
HATUR NUHUN PISAN ....
Jangan lupa untuk mencari tambahan informasi dari berbagai sumber lainnya...