studi ekspresi il-2 dan jumlah sel radang …repository.ub.ac.id/667/1/ahmad febrianto.pdf · 2020....

i

STUDI EKSPRESI IL-2 DAN JUMLAH SEL RADANG MONONUKLEAR PADA JARINGAN KULIT TIKUS JANTAN

STRAIN WISTAR (Rattus novergicus) PASCA DIBERI LUKA TERBUKA YANG DITERAPI SALEP

EKTRAK KULIT BUAH NAGA (Hylocereus costaricensis)

SKRIPSI

Oleh : AHMAD FEBRIANTO

125130107111033

PROGRAM STUDI PENDIDIKAN DOKTER HEWAN FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN

UNIVERSITAS BRAWIJAYA MALANG

2017

ii




SKRIPSI

Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Kedokteran Hewan

Oleh :

AHMAD FEBRIANTO 125130107111033

PROGRAM STUDI PENDIDIKAN DOKTER HEWAN FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN

UNIVERSITAS BRAWIJAYA MALANG

2017

iii

LEMBAR PENGESAHAN SKRIPSI




Oleh:

AHMAD FEBRIANTO

125130107111033

Setelah dipertahankan di depan Majelis Penguji Pada tanggal...................

Dan dinyatakan memenuhi syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Kedokteran Hewan

Pembimbing I

Prof. Dr. Pratiwi Trisunuwati, drh., M.S

NIP. 19480615 197702 2 001

Pembimbing II

drh. Fajar Shodiq P, M.Biotech

NIP. 198705012015041001

Mengetahui, Dekan Fakultas Kedokteran Hewan

Universitas Brawijaya

NIP. 19600903 198802 2 001

iv

LEMBAR PERNYATAAN

Saya yang bertanda tangan dibawah ini:

Nama : Ahmad Febrianto

NIM : 125130107111033

Program Studi : Pendidikan Dokter Hewan

Penulis Skripsi berjudul :

Studi Ekspresi IL-2 Dan Jumlah Sel Radang Mononuklear Pada Jaringan Kulit

Tikus Jantan Strain Wistar (Rattus novergicus) Pasca Diberi Luka Terbuka Yang

Diterapi Salep Ektrak Kulit Buah Naga (Hylocereus costaricensis).

Dengan ini menyatakan bahwa:

1. Isi dari skripsi yang saya buat adalah benar-benar karya saya sendiri dan

tidak menjiplak karya orang lain, selain nama-nama yang tercantum di isi

dan tertulis di daftar pustaka dalam skripsi ini.

2. Apabila dikemudian hari ternyata skripsi yang saya tulis terbukti hasil

jiplakan, maka saya bersedia menanggung segala resiko yang akan saya

terima.

Demikian pernyataan ini dibuat dengan segala kesadaran.

Malang, 12 Juli 2017

Yang menyatakan

Ahmad Febrianto

NIM.125130107111033

v




ABSTRAK

Luka adalah rusaknya jaringan, dimana terdapat substansi jaringan yang rusak atau hilang. Kulit buah naga dapat digunakan sebagai terapi alternatif penyembuhan luka karena memiliki kemampuan sebagai anti-inflamasi. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh salep ekstrak kulit buah naga (Hylicereus costaricensis) terhadap ekspresi IL-2 dan penurunan jumlah sel radang mononuklear dalam penyembuhan luka terbuka. Hewan coba yang digunakan dalam penelitian ini sebanyak dua puluh hewan coba tikus putih (Rattus norvegicus) yang dibagi menjadi 5 kelompok yaitu kontrol positif, kontrol negatif, P1 (konsentrasi 5 %), P2 (konsentrasi 10%), dan P3 (konsentrasi 15%) pemberian salep dilakukan dua kali sehari setiap 12 jam selama 6 hari secara topikal pada daerah luka. Pengamatan jumlah sel monosit dan limfosit pada jaringan kulit menggunakan mikroskop Olympus BX51 perbesaran 400x dan dianalisis secara kuantitatif dan pengamatan ekspresi IL-2 dianalisis secara kuantitatif menggunakan microsoft excel dan SPSS for Windows dengan analisis statistik ragam ANOVA satu arah dan uji lanjutan uji

njukkan bahwa pemberian salep ekstrak kulit buah naga dengan konsentrasi 15 % dapat menurunkan jumlah dari sel radang mononuklear sebesar 80,31% dan menurunkan ekspresi IL-2 sebesar 37,75% pada jaringan kulit tikus yang diberi luka terbuka pada daerah punggung. Kesimpulan dari penelitian ini adalah salep ekstrak kulit buah naga dapat menurunkan inflamasi pada luka terbuka sehingga kesembuhan luka akan meningkat yang ditandai dengan menurunnya jumlah sel radang mononuklear dan ekspresi IL-2 pada jaringan kulit secara signifikan pada konsentrasi 15%.

Kata kunci : Luka Terbuka, Ekstrak kulit buah naga, IL-2, jumlah sel radang

vi

STUDY OF EXPRESSION IL-2 AND THE NUMBER OF INFLAMMATORY MONONUCLEAR CELLS IN SKIN

TISSUE STRAIN WISTAR MALE RATS (Rattus novergicus) POST OPEN WOUNDS TREATED OINTMENT EXTRACTS

PEEL OF DRAGON FRUIT (Hylocereus costaricensis)

ABSTRACT

Wound is a break of tissues, which have missing or damaged spesific tissues substant. Peel from a dragon fruit can be used for alternative therapy of wound healing, has ability as anti inflamatory. This aim of this research is to know effect of dragon fruit (Hylicereus costaricensis) peel extract ointment to expression of IL-2 as antiinflamatory and decrease number of inflamatory cell in the healing of the open wound. Aminal used in this study as many as twenty white rats divided into five groups: positive control, negative control, P1 concentration of 5%, 10% concentration of P2, P3 concentration of 15% for 6 days topically to the wound area and given twice daily. Monocytes and lymphocytes observation in the skin tissue of the Olympus BX51 microscope using enlargement 400x and analyzed quantitatively and observation of the expression of IL-2 analyzed quantitatively using microsoft excel and SPSS for Windows statistical analysis one-way ANOVA and advanced test of Tukey method ering ointment peel extracts of the dragon fruit with a concentration of 15% may affect significantly in reduced mononuclear inflammatory cells by 80.31% and decreased expression IL-2 by 37.75%in the skin tissue of mice which were open wound on the back. Conclusion of this research is dragon fruit peel extracts ointment can decrease inflammatory in open wound so that wound healing will increase as indicated by mononuclear inflammatory cells decrease and the expression of IL-2 on skin tissue significantly at 15% concentration.

Key word : Wound, Peel Extract Of Dragon Fruit, IL-2, Monocytes,

Lymphocytes

vii

KATA PENGANTAR

Puji syukur kehadirat Allah SWT Yang mengatur segala urusan manusia

dan atas segala limpahan rahmat, taufik, serta hidayah-Nya sehingga penulis dapat

menyelesaikan tugas akhir ini yang berjudul Studi Ekspresi IL-2 Dan Jumlah

Monosit Dan Limfosit Pada Jaringan Kulit Tikus Jantan Strain Wistar (Rattus

novergicus) Pasca Diberi Luka Terbuka Yang Diterapi Salep Ektrak Kulit Buah

Naga (Hylocereus costaricensis). Sholawat dan salam semoga teteap tercurah

kepada Nabi Muhammad SAW.

Selama penelitian dan penyusunan skripsi ini, penulis banyak mendapatkan

bantuan dari berbagai pihak. Oleh karena itu penulis menyampaikan terimakasih

dan penghargaan setinggi-tingginya kepada:

1. Prof. Dr. Pratiwi Trisunuwati, drh., M.S sebagai pembimbing I serta Drh.

Fajar Shodiq P, M.Biotech sebagai pembimbing II yang telah banyak

memberikan bimbingan, nasehat dan arahan kepada penulis.

2. Prof. Dr. Au

yang selalu memberikan dukungan tiada henti demi kemajuan FKH UB

tercinta.

3. Ayahanda tercinta Ahmad Suhairi dan Ibunda tercinta Nurjanah, kakak

tercinta Fifi Yulia Rahman serta seluruh keluarga besar yang telah

4. Seluruh staf dan asisten Laboratorium Biosains Universitas Brawijaya atas

bantuan yang diberikan selama penulis melakukan penelitian.

5. Seluruh staf dan karyawan FKH, yang telah membantu proses administrasi

dalam membuat tugas akhir.

6. Keluarga besar CEROLAS yang telah menjadi keluarga baru selama proses

pendidikan di Kedokteran Hewan dan menjadi penolong untuk meraih

kesuksesan.

7. Ucapan terimaksih penulis kepada semua sahabat angkatan terutama

angkatan 2012 yang telah banyak memberikan motivasi sehingga skripsi ini

dapat terselesaikan.

viii

Akhirnya hanya kepada Allah SWT kita kembalikan semua urusan dan

semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi semua pihak, khususnya bagi

penulis dan para pembaca pada umumnya, semoga Allah SWT meridhoi

dan dicatat sebagai ibadah disisi-Nya, Amin.

Malang, 12 Juli 2017

Penulis

ix

DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL .............................................................................................. i HALAMAN PENGESAHAN .............................................................................. iii HALAMAN PERNYATAAN .............................................................................. iv ABSTRAK .............................................................................................................. v ABSTRACT .......................................................................................................... vi KATA PENGANTAR ......................................................................................... vii DAFTAR ISI ......................................................................................................... ix DAFTAR TABEL ................................................................................................ xi DAFTAR GAMBAR ........................................................................................... xii DAFTAR LAMPIRAN ...................................................................................... xiii DAFTAR ISTILAH DAN LAMBANG ............................................................ xiv BAB I PENDAHULUAN ....................................................................................... 1

1.1. Latar Belakang ......................................................................................... 1 1.2. Rumusan Masalah .................................................................................... 2 1.3. Batasan Masalah ...................................................................................... 3 1.4. Tujuan Penelitian ..................................................................................... 3 1.5. Manfaat Penelitian ................................................................................... 4

BAB II TINJAUAN PUSTAKA ............................................................................ 5 2.1. Luka ........................................................................................................ 5 2.1.1 Deskripsi ......................................................................................... 5 2.1.2 Penyembuhan Luka ........................................................................ 6 2.2. Sitokin Interleukin-2 (IL-2) ..................................................................... 8 2.3. Sel Radang .............................................................................................. 9 2.3.1 Sel Radang Mononuklear ............................................................... 9 2.4. Jaringan Kulit ........................................................................................ 10 2.5. Obat Topikal ......................................................................................... 11 2.6. Buah Naga ............................................................................................ 12 2.7. Tikus (Rattus novergicus) ..................................................................... 16

BAB III KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESIS PENELITIAN .............. 18 3.1. Kerangka Konsep................................................................................... 18 3.2. Hipotesis Penelitian ............................................................................... 20

BAB IV METODOLOGI PENELITIAN .......................................................... 22 4.1. Waktu dan Tempat Penelitian ................................................................ 22 4.2. Alat dan Bahan Penelitian ..................................................................... 22 4.3. Tahapan Penelitian................................................................................. 22 4.4. Prosedur Kerja ....................................................................................... 23 4.4.1 Rancangan Penelitian dan Persiapan Hewan Coba ...................... 23 4.4.2 Variabel Penelitian ....................................................................... 25 4.4.3 Perlakuan Insisi Pada Hewan Coba .............................................. 25 4.4.4 Pembuatan Ekstrak Kulit Buah Naga ........................................... 26 4.4.5 Pembuatan Salep Ekstrak Kulit Buah Naga ................................. 26 4.4.6 Terapi Salep Ekstrak Kulit Buah Naga ........................................ 27 4.4.7 Pengambilan dan Pembuatan Preparat kulit ................................. 27 4.4.8 Ekspresi IL-2 dengan Metode Imunohistokimia (IHK) ............... 28

x

4.4.9 Tahapan Perhitungan Sel Radang ................................................. 28 4.5. Analisis Data .......................................................................................... 29

BAB V HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................... 30 5.1. Pengaruh Salep Ekstrak Kulit Buah Naga Terhadap Ekspresi IL-2 ...... 31 5.2. Pengaruh Salep Ekstrak Kulit Buah Naga Terhadap Penurunan Monosit dan Limfosit .................................................................................................. 36

BAB VI KESIMPULAN DAN SARAN.............................................................. 43 6.1. Kesimpulan ............................................................................................ 43 6.2. Saran ...................................................................................................... 43

DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 44 LAMPIRAN .......................................................................................................... 49

xi

DAFTAR TABEL

Tabel Halaman

2.1 Kandungan Nilai Gizi Per 100 gr Buah Naga Merah ...................................... 15

4.1 Rancangan Penelitian ....................................................................................... 24

5.1 Terapi Salep Ekstrak Kulit Buah Naga Terhadap Penurunan Ekspresi IL-2 ... 33

5.2 Terapi Salep Ekstrak Kulit Buah Naga Terhadap Penurunan Jumlah Monosit

dan Limfosit ........................................................................................................... 38

xii

DAFTAR GAMBAR

Gambar Halaman

2.1 Histologi Jaringan Kulit ................................................................................... 10

2.2 Nuah Naga Merah ............................................................................................ 13

2.3 Tikus Putih (Rattus novergicus) ....................................................................... 16

5.1 Ekpresi IL-2 Pada Jaringan Kulit Tikus Dengan Pewarnaan Imunohistokimia

Perbesaran 400x ..................................................................................................... 32

5.2 Gambaran Mikroskopis Sel Radang Yang Muncul Pada Pewarnaan HE ........ 37

xiii

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran Halaman

Lampiran 1: Kerangka Operasional Rancangan Penelitian ................................... 49

Lampiran 2: Uji Laik Etik ...................................................................................... 50

Lampiran 3: Uji Ekstrak Kulit Buah Naga ............................................................. 51

Lampiran 4: Pembuatan Ekstrak Kulit Buah Naga ................................................ 52

Lampiran 5: Pembuatan Salep Ekstrak Kulit Buah Naga ...................................... 53

Lampiran 6: Terapi Salep Ekstrak Kulit Buah Naga ............................................. 53

Lampiran 7: Pembuatan Histologi Kulit Menggunakan Metode Parafin............... 54

Lampiran 8: Pewarnaan Hematoksilin Eosin (HE) ................................................ 56

Lampiran 9: Ekspresi IL-2 Dengan Metode Imunohistokimia (IHK) ................... 58

Lampiran 10: Perhitungan Konsentrasi Salep Ekstrak Kulit Buah Naga .............. 60

Lampiran 11: Data Perhitungan Jumlah Sel Radang Mononuklear ....................... 61

Lampiran 12: Data Ekspresi IL-2 ........................................................................... 62

Lampiran 13: Hasil Uji Statistika Jumlah Sel Radang Mononuklear .................... 63

Lampiran 14: Hasil Uji Statistika Ekspresi IL-2 .................................................... 65

xiv

DAFTAR SINGKATAN DAN LAMBANG

Simbol/singkatan Keterangan

ANOVA Analysis of variance IHK Imunohistokimia NaCl Natrium klorida PBS Phospate Buffer Saline RAL Rancangan Acak Lengkap ROS Reactive Oxygen Species SA-HRP Strep Avidin Horse Radish Peroxidase TGF ß Transforming Growth Factor Beta WHO World Health Organization PMN Polimorfonuklear TGF- Transforming growth factor alpha PDGF platelet-derived growth factor VEGF Vascular endothelial growth factor FGF Fibroblast growth factor 5-HETE 5-Hydroxyeicosatetraenoic acid IL 1 Interleukin 1 IL 2 Interleukin 2 TNF- Tumor necrosis factors alpha EGF epidermal growth factor gr Gram HCL Hidrogen klorida

1

BAB I PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Beberapa tahun terakhir pemeliharaan hewan kesayangan terutama anjing

dan kucing meningkat dengan pesat. Hal ini menunjukkan bahwa anjing dan kucing

telah memiliki posisi yang unik dalam kehidupan manusia. Saat ini tidak hanya

manusia yang menjalani pengobatan apabila mengalami suatu penyakit, hewan pun

demikian mulai dari penyakit ringan hingga operasi yang menimbulkan luka guna

kepentingan sterilisasi hewan. Luka insisi (Incised wounds), terjadi karena teriris

oleh instrumen yang tajam. Misal yang terjadi akibat pembedahan. Luka merupakan

kerusakan fisik sebagai akibat dari terbukanya kulit yang menyebabkan ketidak

seimbangan fungsi dan anatomi kulit normal.

Pada saat terjadinya luka limfosit T muncul secara signifikan pada hari

kelima sampai hari ketujuh. Limfosit mempengaruhi fibroblas dengan

menghasilkan sitokin seperti IL-2. Sel T memiliki peran dalam penyembuhan luka

kronis. Munculnya luka kronis ditandai dengan adanya infiltrasi sel mononuklear

termasuk makrofag, limfosit dan plasma sel, serta proliferasi pembuluh darah.

Penyembuhan luka adalah suatu proses koordinasi yang melibatkan hubungan

antara faktor seluler, humoral dan unsur jaringan ikat. Penyembuhan luka pada

umumnya dibagi atas beberapa fase yaitu fase inflamasi, proliferasi, dan

remodelling. Saat ini obat obatan herbal telah banyak digunakan sebagai

pengobatan salah satunya buah naga. Buah naga merupakan tumbuhan yang berasal

dari daerah beriklim tropis. Buah naga biasanya hanya dimanfaatkan daging

buahnya saja dan bagian kulit buahnya dibuang begitu saja, namun sebagian orang

2

mungkin tidak mengerti bahwa pada bagian kulit buah naga tersebut mengandung

banyak zat yang berguna untuk obat antiinflamasi salah satu contohnya flavonoid.

Flavonoid sebagai salah satu kelompok senyawa fenolik yang banyak

terdapat pada jaringan tanaman dapat berperan sebagai antiinflamasi dan

antioksidan. Senyawa ini berperan sebagai penangkap radikal bebas karena

mengandung gugus hidroksil. Karena bersifat sebagai reduktor, flavonoid dapat

bertindak sebagai donor hidrogen terhadap radikal bebas. Flavonoid dapat

berkhasiat sebagai antioksida, antibakteri dan antiinflamasi. Mekanisme flavonoid

dalam menghambat proses terjadinya inflamasi melalui dua cara, yaitu dengan

menghambat permeabilitas kapiler dan menghambat metabolisme asam arakidonat

dan sekresi enzim lisosom dari sel neutrofil dan sel endothelial (Kurniawati, 2005).

Kulit buah naga dapat diekstrak dan dijadikan obat berupa salep yang

digunakan sebagai terapi alternatif pada luka. Kulit buah naga bersifat sebagai

antibakteria serta dapat merangsang pertumbuhan fibroblas untuk meningkatkan

penyembuhan luka dan menghalangi penyebaran infeksi.Penelitian ini dilakukan

untuk mengetahui bahwa kulit buah naga (Hylicereus costaricensis) dapat

digunakan sebagai salah satu pilihan terapi pada luka dilihat dari penurunan

ekspresi Interleukin-2 (IL-2) dan jumlah sel radang mononuklear yang terjadi

dalam proses inflamasi.

1.2 Rumusan Masalah

1.2.1 Apakah pemberian topikal salep ekstrak kulit buah naga (Hylicereus costaricensis)

dapat menurunkan ekspresi Interleukin-2 (IL-2) pada tikus (Ratus novergicus)

pasca diberi luka terbuka ?

3

1.2.2 Apakah pemberian topikal ekstrak kulit buah naga (Hylicereus costaricensis) dapat

berpengaruh terhadap jumlah sel radang mononuklear pada tikus (Rattus

norvegicus) pasca diberi luka terbuka ?

1.3 Batasan Masalah

Berdasarkan latar belakang yang telah diuraikan, maka penelitian ini dibatasi

pada:

1) Hewan model yang digunakan adalah tikus (Rattus novergicus) dewasa jantan

strain wistar umur 8-12 minggu dengan berat badan 150-250 Gram.

2) Kulit buah naga yang digunakan berasal dari kota Batu dan diuji determinasi di

UPT Materica Medica kota Batu.

3) Insisi pada tikus dilakukan pada daerah punggung dengan ukuran ± 1x1 cm.

4) Bentuk sediaan obat menggunakan salep dengan vaselin album sehingga

didapatkan salep dengan konsentrasi 5%, 10 %, 15%. Salep diberikan pada luka

sebanyak ±50 g, 2 kali sehari selama 6 hari.

5) Variabel yang diamati pada penelitian ini adalah pengamatan ekspresi Interleukin-

2 (IL-2) dengan menggunakan imunorasio dan jumlah sel radang mononuklear

dengan menggunakan perhitungan 5 lapang pandang.

1.4 Tujuan Penelitian

1.4.1 Mengetahui pemberian topikal salep ekstrak kulit buah naga dapat menurunkan

ekspresi Interleukin-2 (IL-2) pasca diberi luka terbuka tikus.

1.4.2 Mengetahui pemberian topikal salep ekstrak kulit buah naga dapat berpengaruh

terhadap jumlah sel radang mononuklear pasca diberi luka terbuka.

4

1.5 Manfaat Penelitian

Penelitian ini bermanfaat untuk memberikan informasi dan untuk

memberikan bukti mengenai pemberian terapi salep ekstrak kulit buah naga

(Hylicereus costaricensis) sebagai antiiflamasi yang dapat digunakan oleh

masyarakat dan telah diuji berdasarkan penurunan ekspresi Interleukin-2 (IL-2) dan

penurunan jumlah sel radang mononuklear pada tikus pasca diberi luka terbuka.

5

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Luka

2.1.1 Definisi

Luka adalah kerusakan fisik sebagai akibat dari terbukanya atau kulit

yang menyebabkan ketidakseimbangan fungsi dan anatomi kulit normal (Nagori et

al., 2011). Luka juga didefinisikan sebagai gangguan dari seluler, anatomi, dan

fungsi yang berkelanjutan dari jaringan hidup yang disebabkan oleh trauma fisik,

kimia, suhu, mikroba, atau imunologi yang mengenai jaringan (Thakur et al.,

2011). Disebutkan juga luka adalah kerusakan dari integritas epitel kulit diikuti

dengan terganggunya struktur dan fungsi dari jaringan normal sebagai akibat

dari luka memar, luka lebam, luka robek, luka koyak atau luka lecet (Soni,

2012). Luka ini mengakibatkan kehilangan kesinambungan dari epitel dengan atau

tanpa kehilangan dari jaringan penunjangnya (Nagori et al., 2011).

Menurut Nagori, et al. (2011) luka dapat diklasifikasikan berdasarkan

penyebab dasar dari luka yaitu luka terbuka dan tertutup,

a. Luka terbuka : terjadi perdarahan yang terlihat secara kasat mata dimana darah

keluar dari tubuh. Luka terbuka meliputi luka insisi, luka laserasi, abrasi atau luka

dangkal, luka tusukan kecil, luka penetrasi, dan luka tembak.

b. Luka tertutup : pada luka jenis ini darah keluar dari sistem sirkulasi darah namun

tidak keluar dari tubuh melainkan darah berada di dalam tubuh. Telihat dalam

bentuk luka memar. Luka tertutup sedikit penggolongannya tetapi lebih

berbahaya dari luka terbuka. Luka tertutup meliputi benturan atau luka memar,

hematoma atau tumor darah, dan cedera yang keras (Solanki, 2011).

6

Klasifikasi luka berdasarkan fisiologi dari penyembuhan luka. Meliputi :

c. Luka akut : merupakan cedera pada jaringan yang normalnya dilanjutkan dengan

proses perbaikan yang tersusun rapih dan tepat waktu, mengakibatkan pemulihan

integritas jaringan secara anatomi dan fungsi dapat dipertahankan. Biasanya

disebabkan oleh luka terpotong atau insisi bedah dan proses penyembuhan

luka yang lengkap dalam kerangka waktu yang diharapkan.

d. Luka kronis : terjadi karena kegagalan penyembuhan luka dalam tahap yang

normal dan kemudian masuk ke dalam tahap inflamasi yang patologi. Luka kronis

membutuhkan periode waktu penyembuhan yang lama, tidak sembuh, atau

kekambuhan yang sering. Merupakan sebab utama ketidakmampuan secara fisik.

Infeksi lokal, trauma, benda asing dan problem sistemik seperti diabetes melitus,

malnutrisi, defisiensi fungsi imun atau obat-obatan seringkali menyebabkan

luka kronis (Solanki, 2011)

2.1.2 Penyembuhan Luka

Penyembuhan luka adalah suatu bentuk proses usaha untuk memperbaiki

kerusakan yang terjadi. Komponen utama dalam proses penyembuhan luka adalah

kolagen. Fibroblas merupakan sel yang bertanggung jawab untuk sintesis kolagen.

Fisiologi penyembuhan luka secara alami meliputi fase-fase seperti di bawah ini :

a. Fase Inflamasi

Inflamasi merupakan reaksi awal bila tubuh terkena luka ( Li et al., 2007).

Fase ini terjadi segera setelah cedera dan dapat berlangsung sampai 4-6 hari

(Broughton et al., 2006). Reaksi awal adalah terjadinya vasodilatasi lokal,

keluarnya darah dan cairan menuju ruangan ekstravaskuler, dan terhambatnya

7

aliran limfatik. Semua ini mengakibatkan timbulnya tanda-tanda utama untuk

terjadinya suatu inflamasi, termasuk bengkak, merah dan panas. Respon inflamasi

akut ini biasanya antara 24-48 jam dan dapat menetap di atas 2 minggu untuk

beberapa kasus ( Li et al., 2007). Fase ini merupakan tahap awal yang alami untuk

mengangkat jaringan debris dan mencegah infeksi yang invasif (Gurtner, 2007).

b. Fase proliferasi (fibroplasi, regenerasi)

Pada fase ini aktifitas seluler lebih utama. Tahap-tahap utama meliputi

pembentukan barier permeabilitas (epitelisasi), kecukupan suplai darah

(angiogenesis) dan pembentukan kembali jaringan dermis pada jaringan yang luka

(fibroplasia) (Li et al., 2007). Ciri-ciri fase proliferasi adalah angiogenesis,

deposit kolagen, pembentukan jaringan granulasi, epitelisasi, dan kontraksi

luka (Nayak et al., 2007). Fase ini akan dimulai pada hari ke 3 bersamaan

dengan memudarnya fase inflamasi dan terus sampai pada hari ke 7, bahkan

lebih setelah luka, didominasi dengan pembentukan jaringan granulasi dan

epitelisasi (Reddy et al., 2012). Broughton, et al. (2006) menyebutkan fase

proliferasi dimulai segera setelah fase inflamasi yang berlangsung 4 - 6 hari.

c. Fase maturasi (remodeling)

Fase ini dimulai hari ke 21 sampai dengan 1 tahun. Pada fase remodeling

dan maturasi melibatkan peran fibroblast dan miofibroblas untuk membentuk

struktur jaringan yang lebih kuat, secara klinis luka akan tampak lebih berkontraksi

sampai dengan mencapai maturasi. Pada fase ini terjadi juga remodelling kolagen.

Kolagen tipe III pada fase ini secara gradual digantikan oleh kolagen tipe I dengan

bantuan matrixmetalloproteinase (MMP) yang disekresi oleh fibroblas, makrofag

8

dan sel endotel. Sekitar 80% kolagen pada kulit adalah kolagen tipe I yang

memungkinkan terjadinya tensile strength pada kulit, pada masa 3 minggu

penyembuhan, luka telah mendapatkan kembali 20% kekuatan jaringan normal

(Gurtner, 2007).

2.2 Sitokin Interleukin 2 (IL-2)

Interleukin adalah kelompok sitokin yang pertama kali terlihat untuk

diekspresikan oleh sel darah putih ( leukosit ). Mayoritas interleukin disintesis oleh

helper CD4+ T lymphocytes, serta melalui monosit, makrofag, dan sel endotel.

Interleukin mempromosikan pengembangan dan diferensiasi T, B, dan sel-sel

hematopoietik.

Interleukin-2 (IL-2) adalah faktor pertumbuhan untuk sel T yang dirangsang

antigen dan berperan pada ekspansi klon sel T setelah antigen dikenal. Ekspresi

reseptor IL-2 ditingkatkan oleh rangsangan antigen, oleh karena itu sel T yang

mengenal antigen merupakan sel utama yang berproliferasi pada respon imun

spesifik. IL-2 meningkatkan proliferasi dan diferensiasi sel imun lain (sel NK, sel

B). IL-2 meningkatkan kematian apoptosis sel T yang diaktifkan antigen melalui

Fas. Fas adalah golongan reseptor TNF yang diekspresikan pada permukaan sel T

(Bratawidjaja dkk, 2014).

IL-2 merangsang proliferasi dan diferensiasi sel T, sel B, dan sel NK. IL-2

juga mencegah respon imun terhadap antigen sendiri melalui apoptosis sel T

melalui Fas dan merangsang aktivasi sel T regulatory. Interleukin-2 (IL-2) adalah

salah satu sitokin yang bertanggung jawab untuk mengaktifkan pertumbuhan dan

9

diferensiasi limfosit. IL-2 banyak menghasilkan sel T CD4+ dan menghasilkan

sedikit sel T CD8+ (Bratawidjaja dkk, 2014).

2.3 Sel Radang

Sel radang merupakan sel-sel yang muncul akibat suatu proses inflamasi

(peradangan) pada jaringan. Sel-sel radang tersebut biasanya dapat ditemukan pada

eksudat tempat terjadinya inflamasi (radang), dimana eksudat radang terdiri dari sel

radang akut (PMN), sel radang kronis (MN), serta jaringan ikat (sel-sel fibroblas).

Yang termasuk sel PMN (polymorphonuclear) adalah sel neutrofil, eosinofil, dan

basofil. Yang termasuk sel MN (mononuclear) adalah sel limfosit, monosit, dan sel

plasma (Sudiono, dkk., 2001).

2.3.1 Sel Radang Mononuklear

Makrofag merupakan sel jaringan yang berasal dari monosit dalam sirkulasi

setelah bermigrasi dari aliran darah. Pada saat mencapai jaringan ekstravaskular,

monosit berubah menjadi makrofag, dan mampu mengadakan fagositosis terhadap

bakteri dan sisa-sisa sel dalam jumlah yang besar. Sel ini berukuran 10 sampai 30

µm dan umumnya memiliki inti lonjong atau berbentuk ginjal yang terletak

eksentris. Makrofag yang teraktivasi menyebabkan ukuran sel bertambah besar,

kandungan enzim lisosom menjadi meningkat, metabolismenya lebih aktif, dan

kemampuan membunuh mikroorganismenya lebih besar.

Limfosit muncul pada tingkat kronis reaksi inflamasi. Sel ini berhubungan

dengan sistem imun dan berfungsi untuk melepaskan zat antibodi. Limfosit terdiri

dari limfosit B, limfosit T dan sel pembunuh alami (natural killer). Secara

histologis limfosit memiliki ukuran sekitar 8-10 mikron, lebih kecil dari sel PMN.

10

Intinya bulat, gelap yang hampir memenuhi seluruh sel, sedangkan sitoplasmanya

hanya sedikit.

2.4 Jaringan Kulit

Jaringan kulit merupakan organ terbesar tubuh, menutupi sekitar 1,7 m²

permukaan tubuh dan tersusun hampir 10% dari berat total tubuh. Fungsi utama

kulit, yaitu menjadi pelindung tubuh dari lingkungan luar seperti radiasi sinar

ultraviolet, kimia, alergen, mikroorganisme, kehilangan uap, dan nutrisi tubuh.

Kulit juga berfungsi dalam proses homeostasis, mengatur suhu tubuh, dan tekanan

darah (Junqueira, L.C, 1999).

Gambar 2.1 Histologi jaringan kulit

Kulit terdiri dari dua lapisan, yaitu epidermis dan dermis. Epidermis yaitu

epitel berlapis pipih bertanduk yang merupakan pelindung primer antara

lingkungan luar dan dalam tubuh, yaitu mencegah masuknya bakteri atau senyawa

racun. Tebal epidermis berbeda-beda pada berbagai tempat di tubuh, paling tebal

pada telapak tangan dan kaki. Ketebalan epidermis hanya sekitar 5 % dari seluruh

ketebalan kulit. Epidermis tersusun atas lima lapisan tanduk yaitu stratum corneum

terdiri atas sel-sel mati mirip sisik, jernih tanpa inti, sitoplasmanya diganti keratin.

11

Kedua stratum lucidium terdiri atas selapis tipis sel eusinofilik sangat pipih dimana

organel dan ini tidak tampak karena matriks sitoplasma yang cukup padat. Ketiga

stratum granulosum yang terdiri atas tiga sampai lima lapis sel pipih dengan

sitoplasma yang mengandung granula basofil kasar yang disebut granula

keratohialin (Perdanakusuma, 2012).

Keempat stratum spinosum, memiliki beberapa lapis sel pipih dan terdiri

atas keratosit polyhedral tidak teratur. Permukaan sel ditutupi juluran sitoplasma

pendek yang berhubungan dengan juluran serupa pada sel ditutupi juluran

sitoplasma pendek yang berhubungan dengan juluran serupa pada sel bersebelahan

dengan membentuk jembatan inter sel. Stratum spinosum juga bisa disebut sebagai

stratum malpigi. Kelima stratum basale atau germinativum adalah selapis sel

kuboid atau sel silindris, masing-masing dengan juluran sitoplasma pendek pada

permukaan basalnya. Juluran sitoplasma tersebut sesuai dengan kantung pada

lamina basal dan menambatkan epitel pada dermis dibawahnya (Broughton et al.,

2006).

2.5 Obat Topikal

Obat topikal terdiri dari vehikulum (bahan pembawa) dan zat aktif. Zat aktif

merupakan komponen bahan topikal yang memiliki efek terapeutik, sedangkan zat

pembawa adalah bagian inaktif dari sediaan topikal yang dapat berbentuk cair atau

padat mengandung bahan aktif berkontak dengan kulit. Idealnya zat pembawa

mudah dioleskan, mudah dibersihkan, tidak mengiritasi serta menyenangkan secara

kosmetik. Selain itu, bahan aktif harus berada di dalam zat pembawa dan kemudian

mudah dilepaskan (Schaefer et al., 2008).

12

Farmakokinetik sediaan topikal secara umum menggambarkan perjalanan

bahan aktif dalam konsentrasi tertentu yang diaplikasikan pada kulit dan kemudian

diserap ke lapisan kulit, selanjutnya didistribusikan secara sistemik. Mekanisme ini

penting dipahami untuk membantu memilih sediaan topikal yang akan digunakan

dalam terapi. Secara umum perjalanan sediaan topikal setelah diaplikasikan

melewati tiga kompartemen yaitu: permukaan kulit, stratum korneum, dan jaringan

sehat. Stratum korneum dapat berperan sebagai reservoir bagi vehikulum tempat

sejumlah unsur pada obat masih berkontak dengan permukaan kulit namun belum

berpenetrasi tetapi tidak dapat dihilangkan dengan cara digosok atau terhapus oleh

pakaian. Unsur vehikulum sediaan topikal dapat mengalami evaporasi, selanjutnya

zat aktif berikatan pada lapisan yang dilewati seperti pada epidermis, dermis. Pada

kondisi tertentu sediaan obat dapat membawa bahan aktif menembus hipodermis.

Sementara itu, zat aktif pada sediaan topikal akan diserap oleh vaskular kulit pada

dermis dan hipodermis (Schaefer et al., 2008).

2.6 Buah Naga

Buah naga (Dragon fruit) merupakan buah tropis yang banyak digemari

oleh masyarakat karena memiliki khasiat dan manfaat serta nilai gizi cukup tinggi.

Bagian dari buah naga merah 30-35% merupakan kulit buah naga merah namun

seringkali hanya dibuang sebagai sampah. Hal ini sangat disayangkan karena kulit

buah naga merah yang memiliki manfaat tidak digunakan sebagai bahan tambahan

makanan seperti pewarna makanan. Kulit buah naga merah memiliki kandungan

pigmen alami yang dapat digunakan sebagai pewarna alami pangan.

13

Kulit buah naga merah memiliki kandungan nutrisi seperti karbohidrat,

lemak, protein dan serat pangan. Kandungan serat pangan yang terdapat dalam kulit

buah naga merah sekitar 46,7% (Saneto, 2005). Kandungan serat kulit buah naga

merah lebih tinggi dibandingkan dengan buah pear, buah orange dan buah persik

(Saneto, 2005). Menurut Santoso (2011) serat pangan memiliki manfaat bagi

kesehatan yaitu mengontrol berat badan atau kegemukan, menanggulangi penyakit

diabetes, mencegah gangguan gastrointestinal, kanker kolon (usus besar) serta

mengurangi tingkat kolestrol darah.

Menurut Panjuantiningrum (2009), kedudukan taksonomi buah naga merah

adalah sebagai berikut :

Kingdom : Plantae

Subkingdom : Tracheobionta

Superdivisi : Spermatophyta

Divisi : Magnoliophyta

Kelas : Magnoliopsida

Subkelas : Hamamelidae

Ordo : Caryophyllales

Famili : Cactaceae

Genus : Hylocereus

Spesies : Hylocereus polyrhizus

Kulit buah naga mengandung vitamin C, vitamin E, vitamin A, alkaloid,

terpenoid, flavonoid, tiamin, niasin, piridoksin, kobalamin, fenolik, karoten, dan

fitoalbumin (Jaafar et al., 2009). Keunggulan dari kulit buah naga yaitu kaya

flavonoid dan merupakan sumber antioksidan alami. Selain itu flavonoid juga

berfungsi sebagai antiinflamasi, sehingga berpotensi untuk dikembangkan menjadi

sumber antiinflamasi alami.

Gambar 2.2 Buah naga merah (Hylocereus costaricensis)

14

Flavonoid adalah antioksidan alami yang termasuk dalam golongan terbesar

senyawa fenol. Flavonoid merupakan suatu golongan metabolit sekunder yang

dihasilkan oleh tanaman. (Astuti, 2008). Flavonoid adalah suatu kelompok senyawa

fenol yang potensial sebagai antiinflamasi dan antioksidan dan memiliki

bioaktifitas sebagai obat. Flavonoid bertindak sebagai penampung yang baik

terhadap radikal superoksida, dengan melindungi lipid membran terhadap reaksi

oksidasi yang merusak. Mekanisme kerja dari flavonoid yaitu dengan mendonorkan

ion hidrogen sehingga dapat menetralisir efek toksik dari radikal bebas

(Sumardika,2013). Mekanisme flavonoid dalam menghambat proses terjadinya

inflamasi melalui dua cara, yaitu dengan menghambat permeabilitas kapiler dan

menghambat metabolisme asam arakidonat dan sekresi enzim lisosom dari sel

neutrofil dan sel endothelial (Kurniawati, 2005).

Antosianin merupakan senyawa polifenol yang kaya akan

pigmen, bertanggung jawab bagi terbentuknya warna merah, ungu dan biru dari

berbagai buah-buahan dan sayur-sayuran. Antosianin merupakan salah satu jenis

flavonoid yang banyak terdapat pada buah naga. Antosianin memiliki berbagai

potensi dan manfaat bagi kesehatan seperti antioksidan, antiinflamasi, antimikroba,

antivirus, menghambat agregasi platelet, mengurangi resiko terjadinya

kardiovaskuler dan kanker (Prior, 2003).

Secara morfologis, tanaman buah naga termasuk tanaman tidak lengkap

karena tidak memiliki daun. Perakaran tanaman epifit, yaitu merambat dan

menempel pada batang tanaman lain. Namun, dalam pembudidayaan, media untuk

merambatkan batang tanaman buah naga ini digantikan dengan tiang penopang atau

15

kawat. Batang tanaman buah naga mengandung air dalam bentuk lender dan

berlapis lilin jika sudah dewasa warnanya hijau kebiru - biruan. Batang tersebut

berukuran panjang dan bentuknya siku atau segitiga, dari batang dan cabang

tumbuh duri-duri keras sekitar 4-5 buah (Kristanto, 2008).

Secara keseluruhan, setiap buah naga merah mengandung protein yang

mampu mengurangi metabolisme badan dan menjaga kesehatan jantung, serat

(mencegah kanker usus, kencing manis, dan diet), karotine (kesehatan mata,

menguatkan otak, dan mencegah penyakit), kalsium (menguatkan tulang). Buah

naga juga mangandung zat besi untuk menambah darah, vitamin B1 (mengawal

kepanasan badan), vitamin B2 (menambah selera),vitamin B3 (menurunkan kadar

kolestrol), dan vitamin C. Kandungan zat gizi buah naga dapat dilihat di Tabel 2.2

Tabel 2.1 Kandungan Nilai Gizi per 100gr Kulit Buah Naga Merah

Komponen Kadar

Air (g) Protein (g) Lemak (g) Serat (g) Betakaroten (mg) Kalsium (mg) Fosfor (mg) Besi (mg) Vitamin B1 (mg) Vitamin B2 (mg) Vitamin C (mg) Niasin (mg)

82,5 - 83 0,16 0,23 0,21 0,23 0,7 0,9 0,005 0,012 6,3 8,8 30,2 36,1 0,55 0,65 0,28 0,30 0,043 0,045 8 9 1,297 1,300

Sumber : Taiwan Food Industry Development And Research Authorities dalam (Panjuantiningrum, 2009)

Buah naga tergolong buah batu yang berdaging dan berair. Bentuk buah

bulat agak memanjang atau bulat agak lonjong seperti yang ditunjukkan pada

Gambar 2.1. Kulit buah ada yang berwarna merah menyala, merah gelap, dan

16

kuning, tergantung dari jenisnya. Di sekujur kulitnya dihiasi dengan jumbai- jumbai

menyerupai sisik-sisik ular naga. Daging buah berserat sangat halus dan di dalam

daging buah bertebaran biji-biji hitam yang sangat banyak dan berukuran sangat

kecil. Selain itu buah naga ada yang berwarna merah, putih, dan hitam, tergantung

dari jenisnya. Daging buah bertekstur lunak dan rasanya manis sedikit masam.

(Cahyono,2009).

2.7 Tikus (Rattus novergicus)

Tikus putih (Rattus norvegicus) banyak digunakan sebagai hewan

percobaan pada berbagai penelitian. Tikus putih memiliki ciri antara lain rambut

berwarna putih dan mata yang merah, panjang tubuh total 440 mm, panjang ekor

205 mm dan bobot tikus putih pada usia dewasa sekitar 250-500 Gram seperti pada

Gambar 2.2 (Potter, 2007). Tikus putih tersertifikasi diharapkan lebih

mempermudah para peneliti dalam mendapatkan hewan percobaan yang sesuai

dengan kriteria yang dibutuhkan. Klasifikasi tikus putih adalah sebagai berikut :

Kingdom : Animalia

Kelas : Mammalia

Ordo : Rodentia

Subordo : Odontoceti

Familia : Muridae

Genus : Rattus

Spesies : Rattus novergicus

Sumber : Tikus putih (Rattus novergicus) Potter,2007

Menurut Smith, et al. (1998) Terdapat beberapa galur tikus yang sering

digunakan dalam penelitian. Galur-galur tersebut antara lain : Wistar, Sprague-

Dawley, Long Evans, dan Holdzman. Dalam penelitian ini digunakan galur

17

Sprague-Dawley dengan ciri-ciri berwarna putih, berkepala kecil dan ekornya lebih

panjang daripada badannya.

Keunggulan tikus putih dibandingkan tikus liar antara lain lebih cepat

dewasa, tidak memperlihatkan perkawinan musiman, dan umumnya lebih cepat

berkembang biak. Kelebihan lainnya sebagai hewan laboratorium adalah sangat

mudah ditangani, dapat ditinggal sendirian dalam kandang asal dapat mendengar

suara tikus lain dan berukuran cukup besar sehingga memudahkan pengamatan.

Secara umum, berat badan tikus laboratorium lebih ringan dibandingkan

berat badan tikus liar. Biasanya pada umur empat minggu beratnya 35-40 g, dan

berat dewasa rata-rata 200-250 g, tetapi bervariasi tergantung pada galur (Krinke,

2000). Tikus termasuk hewan mamalia, oleh sebab itu dampaknya terhadap suatu

perlakuan mungkin tidak jauh berbeda dibanding dengan mamalia lainnya Selain

itu, penggunaan tikus sebagai hewan percobaan juga didasarkan atas pertimbangan

ekonomis dan kemampuan hidup tikus hanya 2-3 tahun dengan lama produksi 1

tahun (Krinke, 2000) temperatur 35.90-37.50 C, konsumsi pakan 5-6 g/ 100 g BB

dan konsumsi minum 10-12 mL / 100g BB (Bogdanske, et al., 2010).

Menurut Khoshneviszadeh, et al. (2014) yang melakukan penelitian

mengenai regenerasi jaringan kulit tikus berlangsung selama 4-12 hari yang telah

dibuktikan pada hari pertama diameter luka (1cm), hari ke-4 (3mm), hari ke-8

(2mm), dan pada hari ke-12 (1mm). Hal ini telah menunjukan bahwa regenerasi

jaringan kulit tikus telah melewati fase inflamasi, fase proliferasi, dan fase maturasi

(remodeling).

18

BAB III KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESIS PENELITIAN

3.1 Kerangka Konsep

Gambar 3.1. Kerangka Konsep Penelitian

Keterangan : : Variabel bebas : Efek menghambat

: Variabel yang Diamati : Efek luka terbuka

: Efek terapi salep ekstrak kulit buah naga

Tikus putih (Rattus norvegicus)

Luka terbuka

Kerusakan jaringan perifer

Injury cell

ROS

APC ( Makrofag)

Aktifasi sel T

FLAVONOID

IL-2

Jumlah sel radang

Inflamasi

Regenerasi

Salep ekstrak Kulit Buah Naga

(Hylocereuscostaricensis)

19

Luka adalah hilang atau rusaknya sebagian jaringan tubuh. Keadaan ini

dapat disebabkan oleh trauma, benda tajam atau tumpul, perubahan suhu, zat kimia,

atau gigitan hewan.(Latuheru, 2013). Luka insisi adalah luka yang diakibatkan oleh

pembedahan, menggunakan gunting, elektroscalpel atau laser (Suwiti, 2010).

Adanya luka terbuka pada jaringan kulit hewan coba tikus (Rattus norvegicus) akan

menyebabkan kerusakan jaringan perifer sehingga menyebabkan trauma, sel

Makrofag yang teraktivasi akan melepaskan berbagai metabolit seperti Reactive

Oxygen Species (ROS). Adanya ROS akan menginduksi makrofag, kemudian

makrofag akan mengaktifkan sel T naif dan memproduksi IL-2. IL-2 adalah faktor

pertumbuhan untuk sel T yang dirangsang oleh antigen dan berperan pada ekspansi

klon sel T setelah antigen dikenal. Ekspresi reseptor IL-2 ditingkatkan oleh

rangsangan antigen, oleh karena itu sel T yang mengenal antigen merupakan sel

utama yang berproliferasi pada respon imun spesifik. Bila pada proliferasinya di

dominasi oleh lingkungan IL-12 akan menghasilkan populasi Th 1 yang melepas

sitokin dengan ciri khas termasuk IFN- . Bila lingkungan didominasi oleh IL-4

akan menghasilkan populasi Th 2 yang akan mengaktifasi eosinofil dan sintesis

berbagai kelas antibodi. Hal ini menyebabkan terjadinya pembentukan sel radang.

Adanya sel radang akan menyebabkan terjadinya inflamasi. Proses regenerasi pada

luka dipengaruhi oleh adanya inflamasi. Semakin meningkatnya inflamasi akan

menyebabkan regenerasi menjadi melambat.

Pemberian salep ekstrak kulit buah naga (Hylicereus costaricensis) yang

mengandung flavonoid (Antosianin). Flavonoid bekerja dengan mendonorkan ion

hidrogen sehingga dapat menetralisir efek toksik dari radikal bebas yang dapat

20

menurunkan jumlah ROS. Hal ini juga akan mengurangi dari aktifasi sel T sehingga

poliferasi sel T menurun akibatnya IL-2 mengalami penurunan. Selanjutnya jumlah

sel radang yang terbentuk akan menjadi menurun hal ini akan mengurangi adanya

inflamasi sehingga regenerasi dapat terjadi secara cepat. Flavonoid memiliki

potensi sebagai antiinflamasi karena memiliki gugus hidroksil yang terikat pada

karbon cincin aromatik sehigga dapat menangkap radikal bebas yang dihasilkan

dari reaksi peroksidasi lemak. Mekanisme flavonoid dalam menghambat proses

terjadinya inflamasi melalui dua cara, yaitu dengan menghambat permeabilitas

kapiler dan menghambat metabolisme asam arakidonat dan sekresi enzim lisosom

dari sel neutrofil dan sel endothelial (Kurniawati, 2005). Flavonoid terutama

bekerja pada endothelium mikrovaskular untuk mengurangi terjadinya

hipermeabilitas dan radang. Beberapa senyawa flavonoid dapat menghambat

pelepasan asam arakhidonat dan sekresi enzim lisosom dari membran dengan jalan

memblok jalur siklooksigenase (Hamid et.al, 2010) Penghambatan akumulasi

leukosit, penghambatan degranulasi neutrofil, penghambat pelepasan histamin

(Yuda,2015). Senyawa flavonoid akan menyumbangkan satu atom hydrogen untuk

menstabilkan radikal peroksi lemak (Hamid et.al, 2010).

3.2 Hipotesis Penelitian

Hipotesis dalam penelitian ini adalah:

1. Salep ekstrak kulit buah naga (Hylicereus costaricensis) dapat sebagai

antiinflamasi dilihat berdasarkan penurunan ekspresi Interleukin-2 (IL-2) pada

tikus (Rattus novergicus) pasca diberi luka terbuka.

21

2. Salep ekstrak Kulit buah naga (Hylicereus costaricensis) dapat sebagai

antiinflamasi dilihat berdasarkan penurunan jumlah sel radang mononuklear

pada tikus (Rattus novergicus) pasca diberi luka terbuka.

22

BAB IV METODOLOGI PENELITIAN

4.1 Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Juni juli 2016 yang bertempat di

Laboratorium Biomedik Fakultas Kedokteran Universitas Muhammadiyah Malang,

Laboratorium Farmakologi Universitas Brawijaya, Laboratorium Patologi Anatomi

Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya, dan Laboratorium Biosains

Universitas Brawijaya Malang.

4.2 Alat dan Bahan

Alat yang digunakan pada penelitian ini adalah kandang tikus, botol minum

tikus, timbangan, scalpel, gunting tajam-tajam, gunting tajam tumpul, pinset,

mikroskop olympus seri BX51, autoclave, penyaring karet, gelas ukur, blender,

cawan petri, oven, lemari pendingin, plastik klip, mikrotom, spuit injeksi, alat

pencukur.

Bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah tikus putih (Rattus

novergicus) jantan strain Wistar dengan berat 150-250 Gram, NaCl fisiologis,

alkohol 70 %, ketamin, herbal kulit buah naga, pakan pellet, iodine, minuman,

vaselin album, aquades, formalin 10%, larutan xylol, parafin cair, antibodi

interleukin-2.

4.3 Tahapan Penelitian

1. Persiapan hewan coba

2. Pembuatan ekstrak kulit Buah naga

3. Perlakuan luka terbuka pada hewan coba di daerah punggung.

4. Terapi salep ekstrak kulit buah naga

23

5. Pengambilan dan pembuatan preparat kulit

6. Ekspresi IL-2 dengan metode Imunohistokimia (IHK)

7. Tahap perhitungan jumlah sel radang

8. Analisis data

4.4 Prosedur Kerja

4.4.1 Rancangan Penelitian dan Persiapan Hewan Coba

Penelitian ini adalah penelitian eksperimental laboratorik dengan

menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL). Rancangan eksperimental yang

digunakan adalah rancangan eksperimen sederhana yang mana subyek dibagi

menjadi 5 kelompok secara random. Tiap kelompok terdiri dari 4 tikus. Kelompok

perlakuan dalam penelitian ini antara lain adalah :

1) Kelompok 1 adalah tikus tidak di insisi dan tidak diberi perlakuan apa-apa (kontrol

negatif).

2) Kelompok 2 adalah tikus yang telah dilakukan insisi dan tidak diberi perlakuan apa-

apa (kontrol positif).

3) Kelompok 3 adalah tikus yang telah dilakukan insisi dan dilakukan terapi ekstrak

kulit buah naga yang diberikan secara topikal dengan konsentrasi 5%.

4) Kelompok 4 adalah tikus yang telah dilakukan insisi dilakukan terapi ekstrak kulit

buah naga yang diberikan secara topikal dengan konsentrasi 10%.

5) Kelompok 5 adalah tikus yang telah dilakukan insisi dan dilakukan terapi ekstrak

kulit buah naga yang diberikan secara topikal dengan konsentrasi 15%.

Hewan model menggunakan tikus (Rattus norvegicus) jantan strain wistar

berumur 8-12 minggu. Bobot badan tikus antara 150-250 gram. Hewan coba

24

diadaptasikan selama 7 hari untuk menyesuaikan dengan kondisi di laboratorium.

Estimasi besar sampel dihitung berdasarkan rumus Frederer (Kusriningrum, 2008)

t (n-

5 (n- 15

5n

Keterangan : t : Jumlah perlakuan

n : Jumlah ulangan yang diperlukan

Berdasarkan perhitungan di atas, maka untuk 5 macam kelompok perlakuan

diperlukan jumlah ulangan paling sedikit 4 kali dalam setiap kelompok sehingga

dibutuhkan 20 ekor hewan coba.

Tabel 4.1 Rancangan penelitian

Pada percobaan ini terdapat 20 ekor tikus putih (Rattus novergicus) strain

wistar jantan sehat dengan berat 180 - 250 gram. Tikus diadaptasi selama tujuh hari

dengan pemberian pakan basal pada semua tikus. Tikus dibagi menjadi 5 kelompok

Variable yang diamati Ulangan

Ekpresi IL-2 dan Jumlah sel

radang mononuklear

1 2 3 4

Kelompok 1 (Kontrol positif)

Kelompok 2 (Kontrol negatif)

Kelompok 3 (konsentrasi 5%)



25

perlakuan dengan setiap kelompok perlakuan terdiri atas 4 ekor tikus. Komposisi

ransum yang diberikan yaitu mengandung karbohidrat, protein 10%, lemak 3%,

mineral, vitamin, dan air 12 %.

Kandang tikus berukuran 17,5 x 23,75 x 17,5. Kandang terbuat dari bahan

plastik dengan tutup terbuat dari rangka kawat. Kandang tikus berlokasi pada

tempat yang bebas dari suara ribut dan terjaga dari polutan. Lantai kandang mudah

dibersihkan dan disanitasi. Suhu optimum ruangan untuk tikus adalah 22-24°C dan

memiliki kelembapan udara 50-60% dengan ventilasi yang cukup.

4.4.2 Variabel Penelitian

Variabel yang diamati dalam penelitian ini adalah :

Variabel bebas : Luka terbuka dan dosis terapi salep ekstrak kulit buah naga

Variabel terikat : Ekspresi Interleukin-2 (IL-2) dan jumlah sel radang mononuklear.

Variabel kontrol : Tikus (Rattus novergicus), jenis kelamin, berat badan, umur,

suhu, pakan, dan kandang.

4.4.3 Perlakuan Insisi pada Hewan Coba

Tikus dihandling dengan cara menjepit kepala tikus diantara jari telunjuk

dan jari tengah tangan kanan dan ekor tikus dipegang dengan tangan kiri kemudian

dianestesi menggunakan ketamin dengan volume 0,1ml, setelah itu daerah

punggung tikus dicukur dengan cara mengolesi rambut tikus dengan sabun lalu di

cukur, setelah itu dibersihkan dengan alkohol kemudian diolesi iodine kemudian

dilakukan insisi dengan ukuran PxL ± 1x1 cm. Pembuatan Insisi dilakukan hanya

sampai subkutan sehingga tidak menembus lapisan muskulus. Kemudian diberikan

salep ekstrak kulit buah naga (Yenti, 2011).

26

4.4.4 Pembuatan Ekstrak Kulit Buah Naga

Sampel buah naga merah dikupas dan dibersihkan untuk memisahkan

daging buah dengan kulitnya, selanjutnya kulit buah dipotong kecil-kecil kemudian

dicuci setelah itu dikeringkan menggunakan oven selama 3 hari selanjutnya

diblender sampai halus. Hasil yang didapat sebanyak 250 g sampel kulit buah yang

telah halus diekstraksi dengan teknik maserasi basah menggunakan pelarut etanol

96%, dilakukan perendaman lalu kocok sampai benar-benar tercampur (±30 menit),

didiamkan 1 malam sampai mengendap, kemudian disaring dan filtratnya

ditampung, proses perendaman ini dilakukan sampai 3 kali. Filtrat tersebut

diuapkan dengan menggunakan rotary vacum evaporator biarkan larutan etanol

berhenti menetes pada labu penampung (±1,5 sampai 2 jam untuk 1 labu) ±900 ml

sehingga didapat ekstrak kental etanol kemudian ditimbang beratnya (Cahyono,

2009).

4.4.5 Pembuatan Salep Ekstrak Kulit Buah Naga

Salep dibuat dengan bahan dasar vaselin album. Menurut Naibaho dkk

(2013), salep dengan bahan dasar hidrokarbon memiliki waktu kontak dan daya

absorpsi yang tinggi dibandingkan dengan basis salep lainnya. Selain itu, basis

hidrokarbon menunjukkan daya antibakteri yang lebih besar dibandingkan basis

lainnya, ditandai dengan penyembuhan infeksi pada luka kulit yang lebih cepat.

(Pongsipulung, 2012).

Pada penelitian ini menggunakan salep dengan konsentrasi 5%, 10%, dan

15%. Pembuatan salep dengan konsentrasi tersebut yaitu dengan cara menimbang

ekstrak sebanyak 0,7 gram dan vaselin album sebanyak 13,3 gram untuk salep

27

konsentrasi 5 %, kemudian ditimbang ekstrak sebanyak 1,4 gram dan vasein album

sebanyak 12,6 gram untuk konsentrasi 10 % dan ditimbang ekstrak sebanyak 2,1

gram dan vaslin album sebanyak 11,9 gram untuk konsentrasi 15%, setelah selesai

menimbang semua bahan kemudian dicampur dengan cara mengaduk secara rata

hingga homogen. Homogenitas di uji dengan cara salep dioleskan pada objek glass

lalu diratakan dan diamati butiran partikel yang terlihat, salep homogen jika tidak

ada partikel kecil yang terlihat.

4.4.6 Terapi Salep Ekstrak Kulit Buah Naga

Pemberian salep dilakukan dua kali sehari setiap 12 jam (Smith, 2015)

dengan cara mengoleskan salep di area luka selama 6 hari, sesuai dengan periode

fase proliferasi selama penyembuhan luka (Broughton et al, 2006). Konsentrasi

yang diberikan yaitu perlakuan 1 (5%), perlakuan 2 (10%), perlakuan 3 (15%).

4.4.7 Pengambilan dan Pembuatan Preparat Kulit

Pengambilan kulit pada hewan coba tikus putih (Rattus novergicus)

dilakukan pada hari ke-6 yang selanjutnya diikuti pengambilan atau pemotongan

jaringan. Langkah awal yang dilakukan yaitu euthanasi dengan cara dislokasi leher.

Pemotongan dilakukan pada bagian subkutan, tikus diletakkan dengan posisi dorso

ventral pada papan penyayatan. Bagian kulit tempat insisi diisolasi dan dibilas

dengan NaCl fisiologis 0,9%. Kulit yang telah dipotong selanjutnya akan melalui

beberapa proses yaitu Fiksasi, yaitu proses perendaman organ kulit pada larutan

formalin 10%. Dehidrasi, yaitu perendaman kulit pada etanol bertingkat

70%,80%,90%,95%. Clearing, yaitu perendaman kulit pada xylol bertingkat xylol

I,II,III. Embeding, yaitu memasukan kulit pada parafin cair. Section, yaitu

28

perendaman kulit pada cetakan blok parafin kemudian dipotong ±5 m lalu

diletakan pada waterbath. Affixing, yaitu pengambilan irisan yang paling sempurna

dan diletakan pada kaca objek dan preparat kosong (belum terwarnai) telah selesai.

Proses selanjutnya pewarnaan preparat dengan beberapa cara yaitu Deparafinisasi,

yaitu menghilangkan parafin yang masih melekat pada kaca objek. Rehidrasi, yaitu

perendaman pada etahol bertingkat. Stanning, yaitu pewarnaan dengan pewarna

hematosilin eosin, Mounting, yaitu penetesan etelan pada kaca objek dan ditutup

kaca cover kemudian dilakukan pelabelan (Setiabudi, 2005).

4.4.8 Ekspresi IL-2 dengan Metode Imunohistokimia (IHK)

Metode Imunohistokimia (IHK) menggunakan indirect method atau metode

tidak langsung yaitu menggunakan dua macam antibodi, antibodi prmer anti mouse

IL-2 500301 dan antibodi sekunder anti mouse igG. Pelabelan antibodi sekunder

diikuti dengan dengan penambahan substrat berupa kromogen yaitu Strep Avidin

Horse Radish Peroxidase (SA-HRP) kemudian dilakukan pewarnaan dengan

pewarna diaminobenzidine (DAB), pengamatan ekspresi interleukin-2 dilakukan

dengan mikroskop perbesaran 400x dengan lima bidang pandang pengamatan.

Setelah itu hasil pengamatan difoto. Hasil foto dari mikroskop kemudian diproses

menggunakan software imunorasio untuk mengamati penurunan ekspresi IL-2.

4.4.9 Tahapan Perhitungan Jumlah Sel Radang

Preparat sampel yang sudah dibuat histopatologi dan telah diwarnai dengan

pewarnaan Hematosin Eosin (HE), diamati dibawah mikroskop perbesaran 400x

hingga 1000x. Diamati sel radang yang muncul dan dihitung jumlahnya dengan

aplikasi image raster 3. Dihitung jumlah sel radang mononuklear antara dosis

29

pemberian terapi salep ekstrak kulit buah naga dengan perlakuan yang berbeda dan

dibandingkan dengan organ hewan coba yang diberikan kontrol negatif. Sel radang

mononuklear memiliki ciri ciri inti sel besar dan berwarna gelap serta

sitoplasmanya terlihat tipis.

4.5 Analisis Data

Analisis data yang digunakan dalam penelitian ini yaitu menggunakan

analisis kuantitatif statistik untuk menghitung jumlah sel radang mononuklear dan

ekspresi IL-2 dengan uji one way ANOVA dan uji lanjutan BNJ (Beda Nyata Jujur).

ANOVA dan BNJ digunakan untuk mengetahui apakah terapi yang diberikan dapat

berpengaruh terhadap parameter yang diamati, dan data yang diperoleh dianalisis

dalam analisis kuantitatif, dengan tingkat kesalahan ( ) sebanyak 0,05%.

30

BAB V HASIL DAN PEMBAHASAN

Penelitian ini mengamati jumlah sel radang mononuklear dan ekspresi IL-2

pada luka terbuka yang di terapi dengan salep ekstrak kulit buah naga. Identifikasi

jumlah sel radang mononuklear dengan preparat kulit menggunakan pewarnaan

hematoxylin-eosin (HE) untuk mengetahui gambaran kerusakan yang terjadi pada

epidermis kulit tikus putih melalui degradasi warna yang terbentuk. Inti sel dari

jaringan akan berwarna biru akibat adanya ikatan antara hematoxylin bermuatan

positif dengan asam nukleat DNA (Deoxyribose Nucleic Acid) yang bermuatan

negatif. Pewarna eosin akan berikatan dengan sitoplasma dan matriks sel yang

mengakibatkan warna merah pada bagian tersebut (Junquiera L.C, 1999).

Penghitungan jumlah sel radang mononuklear menggunakan aplikasi Image Raster

3, untuk dapat dilakukan konfirmasi secara statistik mengenai adanya peningkatan

maupun penurunan jumlah sel radang mononuklear terhadap variabel bebas jumlah

konsentrasi salep ekstrak kulit buah naga yang dijadikan terapi pada luka insisi tikus

putih.

Tikus (Rattus norvegicus) yang telah diinsisi pada daerah punggung

kemudian diberikan terapi salep ekstrak kulit buah naga. Untuk mengetahui

pengaruh pemberian salep ekstrak kulit buah naga terhadap jumlah sel radang

mononuklear pada jaringan kulit dilakukan pewarnaan dengan metode HE dan

penurunan ekspresi IL-2 dengan metode Imunohistokimia.

31

5.1 Pengaruh Salep Ekstrak Kulit Buah Naga Terhadap Ekspresi Interleukin-2 Metode imunohistokimia (IHK) merupakan suatu proses identifikasi protein

spesifik pada jaringan atau sel menggunakan antibodi. Ekspresi Interleukin-2 (IL-

2) dengan teknik imunohistokimia ditunjukkan dengan adanya ekspresi warna

kecoklatan pada bagian sitoplasma. Adanya warna coklat diakibatkan oleh adanya

ikatan antara antigen dan antibodi yang berada pada jaringan. Antibodi yang

diberikatan pada penelitian ini digunakan 2 jenis antibodi yaitu antibodi primer

yang berikatan dengan antigen pada jaringan, dan antibodi sekunder berlabel biotin.

Pemberian antibodi sekunder diikuti dengan penambahan enzim berupa SA-HRP

(Strepta Avidin Horseradish Peroxidase) dan substratnya berupa kromogen DAB.

Kromogen DAB merupakan substrat dari peroksidase yang dapat menghasilkan

warna kecoklatan, sehingga akan terbentuk warna yang lebih jelas pada jaringan

(Elias et all, 1989). Hasil penelitian mengenai pengaruh terapi salep ekstrak kulit

buah naga terhadap ekspresi IL-2 tikus model pasca diberi luka terbuka dengan

metode imunohistokimia dapat dilihat pada gambar 5.1.

Pengukuran presentase area ekspresi IL-2 dilakukan dengan menggunakan

software immunoRatio dan didapatkan jumlah rata-rata ekspresi IL-2 pada tabel

5.1. Data yang diperoleh kemudian diuji statistik dengan menggunakan one way

ANOVA dengan hasil uji statistik.

32

Gambar 5.1. Ekspresi IL-2 jaringan kulit tikus dengan pewarnaan imunohistokimia (perbesaran 400x).

Keterangan : (A) kontrol negatif, (B) kontrol positif, (C) terapi salep ekstrak kulit

buah naga konsentrasi 5%, (D) Konsentrasi 10% dan (D) Konsentrasi 15%.

K- K+

P1 P2

P3

33

Tabel 5.1 Terapi salep ekstrak kulit buah naga terhadap ekspresi Interleukin-2 (IL-2).

Kelompok Perlakuan

Rata-rata presentase ekspresi IL-2

Peningkatan eksprei IL-2 terhadap Kontrol negatif

Penurunan ekspresi IL-2 terhadap Kontrol Positif

Kontrol negative 28,916 ± 5,1 a - -

Kontrol positif 49,5 ± 0,92d 71,18% -

P1 45,168 ± 3,14c - 8,75%

P2 41,456 ± 6,36b - 16,25%

P3 36,648 ± 3,8a - 37,75%

Hasil perhitungan ekspresi IL-2 pada kelompok tikus kontrol negatif

menunjukkan ekspresi IL-2. Adanya ekspresi IL-2 pada jaringan kulit adalah

normal karena sitokin IL-2 secara alami terdapat di dalam tubuh dalam jumlah

relatif sedikit sebagai komponen imunitas. Gambaran ekspresi IL-2 ditandai dengan

warna coklat pada bagian sitoplasma. IL-2 merupakan sitokin yang berfungsi untuk

merangsang dan mengaktifkan sistem imun terhadap respon inflamasi, dimana

dalam keadaan normal, antigen yang masuk memicu reaktivitas imun pada imunitas

nonspesifik maupun spesifik (Baratawidjaja, 2014). IL-2 adalah salah satu sitokin

yang berperan dalam mengatur respon imun, secara potensial meningkatkan

proliferasi dan fungsi sel T, sel B, dan sel NK, memperbaiki pembentukkan antigen,

dan meningkatkan produksi dan pelepasan dari sitokin lainnya (Asep dkk,2014).

Pada kelompok tikus kontrol positif terdapat ekspresi IL-2 yang melebihi kelompok

negatif. Hal ini disebabkan karena pada kelompok positif tidak diberi terapi namun

tetap diberikan perlakuan luka terbuka sehingga akan menyebabkan meningkatnya

34

ekspresi IL-2. Adanya peningkatan ekspresi IL-2 pada kelompok kontrol positif

akan menyebabkan terjadinya peningkatan dari sistem imunitas pada tikus. Seiring

meningkatnya ekspresi IL-2 maka akan meningkatkan pula jumlah sel radang

mononuklear seperti limfosit dan monosit sehingga kesembuhan luka akan

mengalami penurunan.

Berdasarkan Tabel 5.1 ditunjukkan bahwa terdapat perbedaan yang

signifikan antar perlakuan (p

35

Luka terbuka yang diberikan pada jaringan kulit hewan coba tikus (Rattus

norvegicus) akan menyebabkan kerusakan jaringan perifer sehingga menyebabkan

trauma, kerusakan jaringan tersebut dapat disebabkan oleh beberapa penyebab

salah satunya yaitu radikal bebas, radikal bebas merupakan molekul yang tidak

memiliki elektron yang berpasangan karenanya radikal bebas ini akan mengambil

elektron dari sel lain sehingga menyebabkan kerusakan jaringan dan secara

bersamaan makrofag akan aktif (Fessenden, 1986). Makrofag yang teraktivasi akan

melepaskan berbagai metabolit seperti Reactive Oxygen Species (ROS). Adanya

ROS akan menginduksi makrofag, kemudian makrofag akan mengaktifkan sel T

naif dan memproduksi IL-2. IL-2 adalah faktor pertumbuhan untuk sel T yang

dirangsang oleh antigen dan berperan pada ekspansi klon sel T setelah antigen

dikenal. Ekspresi reseptor IL-2 ditingkatkan oleh rangsangan antigen, oleh karena

itu sel T yang mengenal antigen merupakan sel utama yang berproliferasi pada

respon imun spesifik. Bila pada proliferasinya didominasi oleh lingkungan IL-12

akan menghasilkan populasi Th 1 yang melepas sitokin dengan ciri khas termasuk

IFN- . Bila lingkungan didominasi oleh IL-4 akan menghasilkan populasi Th 2

yang akan mengaktifasi eosinofil dan sintesis berbagai kelas antibodi (Bratawidjaja,

2014). Hal ini menyebabkan terjadinya pembentukan sel radang. Adanya sel radang

akan menyebabkan terjadinya inflamasi. Proses regenerasi pada luka dipengaruhi

oleh adanya inflamasi. Semakin meningkatnya inflamasi akan menyebabkan

regenerasi menjadi melambat.



36


menurunkan jumlah ROS (Nijveldt et al, 2001). Hal ini juga akan mengurangi dari

aktifasi sel T sehingga poliferasi sel T menurun akibatnya IL-2 mengalami

penurunan. Selanjutnya jumlah sel radang yang terbentuk akan menjadi menurun

hal ini akan mengurangi adanya inflamasi sehingga regenerasi dapat terjadi secara

cepat. Mekanisme flavonoid dalam menghambat proses terjadinya inflamasi

melalui dua cara, yaitu dengan menghambat permeabilitas kapiler dan menghambat

metabolisme asam arakidonat dan sekresi enzim lisosom dari sel neutrofil dan sel

endothelial (Kurniawati, 2005). Flavonoid terutama bekerja pada endothelium

mikrovaskular untuk mengurangi terjadinya hipermeabilitas dan radang. Beberapa

senyawa flavonoid dapat menghambat pelepasan asam arakhidonat dan sekresi

enzim lisosom dari membran dengan jalan memblok jalur siklooksigenase (Hamid

et.al, 2010) Penghambatan akumulasi leukosit, penghambatan degranulasi

neutrofil, penghambat pelepasan histamin (Yuda,2015). Senyawa flavonoid akan

menyumbangkan satu atom hydrogen untuk menstabilkan radikal peroksi lemak

(Hamid et.al, 2010).

5.2 Pengaruh Salep Ekstrak Kulit Buah Naga Terhadap Penurunan Jumlah Sel Radang Mononuklear

Hasil penelitian mengenai pengaruh pemberian ekstrak kulit buah naga pada

lima perlakuan yaitu tikus A (kontrol negatif), tikus B (kontrol positif), tikus C

(tikus insisi + konsentrasi 5%), tikus D (tikus insisi + konsentrasi 10%), tikus E

(tikus insisi + konsentrasi 15%) memperlihatkan adanya perbedaan pada

penurunan jumlah sel radang mononuklear (Gambar 5.2).

37

Gambar 5.2 Gambaran mikroskopis sel radang mononuklear yang muncul pada pewarnaan HE

Keterangan : (A) kontrol negatif. (B) kontrol positif. (C) terapi salep ekstrak kulit buah naga 5%. (D) terapi salep ekstrak kulit buah naga 10%. (D) terapi salep ekstrak kulit buah naga 15%.

Pada Gambar 5.2 memperlihatkan akumulasi sel radang mononuklear yang

semakin sedikit pada perlakuan P3. Sel radang mononuklear berupa limfosit

maupun monosit dapat terlihat cukup baik pada perbesaran 400x. Limfosit dapat

K- K+

P1 P2

P3

38

diidentifikasi dari inti berwarna biru gelap yang berukuran besar sedangkat monosit

dapat diidentifikasi dari bentuk inti sel nya yang mirip persis dengan kacang.

Perhitungan sel radang mononuklear menggunakan aplikasi Image Raster 3

dengan jumlah rata-rata dari 5 lapang pandang pada tiap preparat. Total lapang

pandang yang didapat dan digunakan untuk perhitungan statistik sel radang secara

kuantitatif berjumlah 100 gambar, terdiri dari gambar dari jaringan kulit hewan

coba pada K-, K+, P1, P2, dan P3 Data statistik peningkatan rata-rata jumlah sel

radang pada tiap perlakuan hewan coba dapat dilihat pada Tabel 5.2.

Sel radang merupakan sel yang muncul pada saat terjadi proses luka pada

jaringan. Manifestasi sel radang pada jaringan luka disebabkan oleh adanya

mekanisme perlindungan tubuh terhadap kerusakan seluler sehingga dilepaskannya

mediator sel radang untuk menghantarkan sel radang menuju jaringan luka untuk

diperbaiki. Pada terapi salep ekstrak kulit buah naga dengan konsentrasi berbeda,

tampak perbedaan pula jumlah sel radang yang muncul.

Tabel 5.2 Terapi salep ekstrak kulit buah naga terhadap penurunan jumlah sel radang.

Kelompok Perlakuan

Rata-rata presentase Infiltrasi Sel Mononuklear

Peningkatan Infiltrasi Sel Radang terhadap Kontrol negatif

Penurunan Infiltrasi Sel Radang terhadap Kontrol Positif

Kontrol negative 9,52 ± 1,6 a - -

Kontrol positif 50,4 ± 13d 429,41% -

P1 31,68 ± 3,4c - 37,14%

P2 15,8 ± 3,6b - 68,65%

P3 9,92 ± 2,2a - 80,31%

39

Dari data yang didapat, pada kelompok tikus kontrol negatif secara normal

tetap ditemukan sel radang. Hal ini disebabkan sel radang merupakan sel yang

secara normal juga terdapat pada jaringan sebagai bentuk imunitas alami dari dalam

tubuh dengan jumlah yang rendah meskipun tidak terjadi kerusakan jaringan.

Jumlah sel radang yang rendah pada jaringan normal ini berfungsi dalam

pertahanan diri awal saat terjadi luka pada jaringan atau inflamasi. Pada kelompok

tikus kontrol positif ditemukan sel radang melebihi kelompok negatif. Hal ini

disebabkan karena pada kelompok positif tidak diberi terapi namun tetap diberikan

perlakuan luka terbuka sehingga akan menyebabkan akumulasi infiltrasi sel radang.

Adanya akumulasi infiltrasi sel radang pada kelompok kontrol positif akan

menyebabkan terjadinya inflamasi. Sel radang akan bertambah jumlahnya seiring

dengan kerusakan jaringan yang semakin tinggi akibat zat maupun benda asing

yang bersifat toksik terakumulasi dan merusak jaringan.

Pada perbandingan antara kontrol positif terhadap kontrol negatif terdapat

peningkatan infiltrasi sel radang mononuklear sebesar 429,41%. Nilai infiltrasi sel

radang mononuklear kontrol negatif dan P1 (perlakuan 1) konsentrasi 5%

menunjukkan perbedaan nyata. Perbandingan antara kontrol positif dibandingkan

dengan P1 (perlakuan 1) konsentrasi 5% didapati adanya penurunkan infiltrasi sel

radang sebanyak 37,14%, namun belum bisa mendekati jumlah infiltrasi sel radang

kelompok kontrol negatif. Nilai infiltrasi sel radang kontrol negatif dan

P2(perlakuan 2) konsentrasi 10% menunjukkan perbedaan nyata. Perbandingan

antara kontrol positif dibandingkan dengan P2(perlakuan 2) konsentrasi 10%

didapati adanya penurunkan infiltrasi sel radang sebanyak 68,65%, namun belum

40

bisa mendekati jumlah infiltrasi sel radang kelompok kontrol negatif. Nilai

presentase kelompok P3 (perlakuan 3) konsentrasi 15% menunjukkan tidak berbeda

nyata dengan kelompok kontrol negatif. Perbandingan antara kontrol positif dengan

P3 (perlakuan 3) konsentrasi 15% didapati adanya penurunan infiltrasi sel radang

sebesar 80,31 %. Data ini dapat menunjukkan bahwa P3 (perlakuan 3) dengan

konsentrasi 15% merupakan konsentrasi yang efektif mengurangi infiltrasi sel

radang pada hewan coba.

Luka terbuka yang diberikan pada jaringan kulit hewan coba tikus (Rattus

norvegicus) akan menyebabkan kerusakan jaringan perifer sehingga menyebabkan

trauma, kerusakan jaringan tersebut dapat disebabkan oleh beberapa penyebab

salah satunya yaitu radikal bebas, radikal bebas merupakan molekul yang tidak

memiliki elektron yang berpasangan karenanya radikal bebas ini akan mengambil

elektron dari sel lain sehingga menyebabkan kerusakan jaringan dan secara

bersamaan makrofag akan aktif. Makrofag yang teraktivasi akan melepaskan

berbagai metabolit seperti Reactive Oxygen Species (ROS). Seiring bertambahnya

jumlah ROS akan menyebabkan terjadinya pembentukan sel radang. Adanya sel

radang akan menyebabkan terjadinya inflamasi.

Inflamasi merupakan suatu respon terhadap luka atau cedera pada jaringan

serta terjadinya infeksi. Pada proses inflamasi (peradangan), terjadi reaksi vaskuler

dimana cairan, elemen darah, sel darah putih (leukosit), dan mediator kimia

terkumpul pada daerah terjadinya cedera atau luka. Inflamasi merupakan

mekanisme perlindungan dimana tubuh berusaha melawan agen infeksius

berbahaya pada lokasi terjadinya cedera dengan tujuan berlangsungnya proses

41

perbaikan jaringan. Walaupun inflamasi dan infeksi memiliki hubungan, keduanya

tidaklah sama. Infeksi disebabkan oleh suatu mikroorganisme dan dapat

menyebabkan adanya proses inflamasi, namun tidak semua inflamasi disebabkan

karena adanya infeksi (Kee & Hayes, 1993).

Mediator inflamasi kimia biasa dilepaskan pada saat proses inflamasi, salah

satunya adalah prostaglandin. Prostaglandin berhasil diisolasi dari eksudat lokasi

terjadinya proses inflamasi. Prostaglandin sendiri memiliki berbagai macam efek,

diantaranya vasodilatasi, relaksasi otot polos, meningkatkan permeabilitas kapiler,

dan sensitisasi sel syaraf terhadap rasa nyeri. Berbagai macam obat seperti aspirin,

berfungsi dalam menghambat pelepasan prostaglandin, sehingga obat jenis ini

dapat disebut sebagai obat antiinflamasi (Kee & Hayes, 1993).




menurunkan jumlah ROS (Nijveldt et al, 2001) serta jumlah sel radang yang

terbentuk akan menjadi menurun hal ini akan mengurangi adanya inflamasi

sehingga regenerasi dapat terjadi secara cepat. Mekanisme flavonoid dalam

menghambat proses terjadinya inflamasi melalui dua cara, yaitu dengan

menghambat permeabilitas kapiler dan menghambat metabolisme asam arakidonat

dan sekresi enzim lisosom dari sel neutrofil dan sel endothelial (Kurniawati, 2005).

Flavonoid terutama bekerja pada endothelium mikrovaskular untuk mengurangi

terjadinya hipermeabilitas dan radang. Beberapa senyawa flavonoid dapat

menghambat pelepasan asam arakhidonat dan sekresi enzim lisosom dari membran

42

dengan jalan memblok jalur siklooksigenase (Hamid et.al, 2010) Penghambatan

akumulasi leukosit, penghambatan degranulasi neutrofil, penghambat pelepasan

histamin (Yuda,2015). Senyawa flavonoid akan menyumbangkan satu atom

hydrogen untuk menstabilkan radikal peroksi lemak (Hamid et.al, 2010).

43

BAB VI KESIMPULAN DAN SARAN

6.1 Kesimpulan

Berdasar hasil penelitian serta analisis yang telah dilakukan terkait dengan

variabel yang diamati, maka dapat ditarik kesimpulan bahwa pemberian salep

ekstrak kulit buah naga (Hylocereus costaricensis) dapat menurunkan inflamasi

pada luka terbuka sehingga kesembuhan luka akan meningkat yang ditandai dengan

menurunnya jumlah sel radang mononuklear dan ekspresi IL-2 pada jaringan kulit

secara signifikan pada terapi dengan konsentrasi 15%.

6.2 Saran

Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk mengetahui efek pemberian

salep ekstrak kulit buah naga (Hylocereus costaricensis) terhadap pet animal dan

hewan lainnya.

44

DAFTAR PUSTAKA

Asep E. Sukmayadi, Sri A. Sumiwi, Melisa I. Barliana, Anisa D. Aryanti, 2014.

Aktivitas Imunomodulator Ekstrak Etanol Daun Tempuyung (Sonchus

arvensis Linn). Fakultas Farmasi, Universitas Padjadjaran, Sumedang, Jawa Barat, Indonesia

Astuti, S. 2008. Isoflavon Kedelai Dan Potensinya Sebagai Penangkap Radikal

Bebas.Staf Pengajar Jurusan Teknologi Industri Pertanian Fakultas

Pertanian Universitas Lampung, Bandar Lampung, Lampung.

Bogdanske, J., S. Stelle, M. Riley, and B. Schiffman. 2010. Laboratory Rat

Procedural Techniques. CRC Press. Boca Raton. London. 77.

Bratawidjaja, K., dan I. Rengganis. 2014. Imunologi Dasar. Badan Penerbit

Fakultas Kedokteran. Universitas Indonesia. Jakarta. 319.

Broughton, I., J. Janis, and E. Attiger. 2006. Wound healing : an overview. Plastic

Reconstruction Surgery 117 (supplement) : 1eS-32eS. Dalas, texas

Cahyono, B. 2009, Buku Terlengkap Sukses Bertanam Buah Naga, Pustaka Mina,

Jakarta.

Elias J.M., M. Margiotta, D. Gaborc. 1989. Sensitivity and detection efficiency of

the peroxidase antiperoxidase (PAP), avidin-biotin peroxidase complex

(ABC), and peroxidase-labeled avidin-biotin (LAB) methods. Department

of Pathology, Health Sciences Center, Stony Brook, New York.American

Journal of Clinical Pathology[1989, 92(1):62-67]

Fessenden,R dan Fessenden,J., 1986 dalam Batubara, Risa widiani,2011. Uji

Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Kulit Buah Durian (Durio zibethinus

Murr) Lokal dan Fraksi-fraksinya Dengan Metode DPPH Serta Penetapan

Kadar Fenolik Dan Flavonoid Totalnya. Fakultas Farmasi. Universitas

Muhammadiyah Surakarta. Surakarta.

45

Gurtner, G. 2007. Wound healing, normal and abnormal.

surgery. 6th; p:15-22.Associate Professor of Plastic Surgery. NYU

Medical Center. New York, New York

Hamid A. 2010. Antioxidants: Its Medicinal and Pharmacological Applications.

Department of Chemistry, University of Ilorin. Kwara State, Nigeria.

Jaafar. A., R. Nazri, dan W. Khairuddin. 2009. Proximate Analysis of Dragon Fruit

(Hylecereus polyhizus),American Journalof Applied Sciences, 6 : 1341-

1346.

Junqueira, L. 1999. Histologi Dasar(Basic Histology), edisi kedelapan. Penerbit

Buku Kedokteran EGC. Jakarta, hal:357-359

Kee & Hayes. 1993. Farmakologi. Pendekatan Proses Keperawatan. Buku

Kedokteran ECG: Jakarta.

Khoshneviszadeh, M. 2014.Topical Simvastatin Enhances Tissue Regeneration in

Full-Thickness Skin Wounds in Rat Models. Medicinal and Natural

Products Chemistry Research Center, Shiraz University of Medical

Sciences, Shiraz, Iran.

Kristanto, D. 2009, Buah Naga:Pembudidayaan di Pot dan di Kebun, Penebar

Swadaya,Jakarta

Krinke, G. 2000. The Laboratory Rat. San Diego. CA: Academic Press. Hal. 15-

152.

Kurniawati, A. 2005. Uji Aktivitas Anti Inflamasi Ekstrak Metanol raptophyllum

griff pada Tikus Putih. Majalah Kedokteran Gigi Edisi Khusus Temu

Ilmiah Nasional IV, 11-13 Agustus 2005: 167-170.

Kusriningrum. 2008. Dasar Perancangan Percobaan dan Rancangan Acak

Lengkap. Fakultas Kedokteran Hewan. Universitas Airlangga. Surabaya.

Latuheru, J., J.Tambajong, dan J. Posangi. 2013. Efek Daun Sirih (Piper Betle L.)

Terhadap Penyembuhan Luka Insisi Kulit Kelinci (Oryctolagus

46

cuniculus). Bagian Farmakologi dan Terapi Fakultas Kedokteran

Universitas Sam Ratulangi.

Li, J., J. Chen, and R. Kirsner. 2007. Pathophysiology of acute wound healing.

Clinics in Dermatology. Vol: 25. p. 9-18.

Nagori, B., and R. Solanki. 2011. Role of Medicinal Plants in Wound

Healing.Research Journal of Medicinal Plant 5 (4). p. 392-405.

Naibaho, O., V. Paulina, dan W. Weny. 2013. Pengaruh Basis Salep terhadap

Formulasi Sediaan Salep Ekstrak Daun Kemangi (Omicum sanctum L.) pada

Kulit Punggung Kelinci yang Dibuat Infeksi Staphylococcus aureus. Jurnal

Ilmiah Farmasi UNSTRAT Vol. 2 No. 02.

Nayak, B., S. Sandiford, and A. Maxwell. 2007. Evaluation of the Wound-healing

Activity of Ethanolic Extract of Morinda citrifolia L.Leaf. Evid Based

Complement Alternative Medicine. 6 (3). p. 351-356.

Nijveldt R, van Nood E, van Hoorn DEC, Boelens PG, van Norren K, van Leeuwen AM. 2001 Dalam Rahmawati, G., F.N. Rachmawati., H. Winarsi., 2014.Aktivitas Superoksida Dismutase Tikus Diabetes Yang Diberi Ekstrak Batang Kapulaga Dan Glibenklamid. Fakultas Biologi. Universitas Jenderal Soedirman. Purwokerto.

Panjuantiningrum. 2009. Ekstraksi dan uji kualitas pigmen antosianin pada kulit

buah naga merah (Hylocereus costaricensis.). Jurusan Teknologi Hasil

Pertanian, Fakultas Pertanian, Universitas Muhammadiyah Malang.

Perdanakusuma, D., S. Hariani, dan A. Budi. 2012. Peranan Progenitor Keratinosit

Sel Punca Jaringan Lemak pada Proses Epitelisasi Luka Kulit Kelinci.

Departemen / SMF Bedah Plastik Rekonstruksi dan Estetik. Universitas

Airlangga, RsuD Dr. Soetomo Surabaya.

Pongsipulung, R., V. Paulina, dan Y. Banne. 2012. Formulasi dan Pengujian Salep

Ekstrak Bonggol Pisang Ambon (Musa paradisiacal var. sapientum terhadap

Luka Terbuka pada Kulit Tikus Putih Jantan Galur Wistar (Rattus

novergicus). ProGram Studi Farmasi FMIPA UNSTRAT Manado.

47

Potter, P. 2007. Rats and Mice: Introduction and use In Research. Health Sciences

Center for Educational Resources university of Washington.

Prior, R. 2003. Fruit and Vegetables in The Prevention of Cellular Oxidative Damage. Arkansas. The American Journal of Clinical Nutrition. American.Vol. 78: 570-578.

Reddy, G., B. Priyanka, A. Saranya, and Ch. Kumar. 2012. Wound Healing

Potential Of Indian Medicinal Plants. International Journal of Pharmacy

Review & Research. Vol: 2. p. 75-78.

Santoso, A. 2011. Serat pangan (Dietary fiber) dan manfaatnya bagi kesehatan.

Jurnal Magistra. Vol 2: 35-40.

Saneto, B. 2005. Karakterisasi kulit buah naga merah (Hylocereus polyrhizus.).

Jurnal Agarika. Vol 2: 143-149.

Schafer, M. and S. Werner. 2008. Cancer as an overhealing wound : An old

hypothesis revisited. Institute of Cell Biology. National Academy of

Sciences of Ukraine Vol: 9. p. 628-638.

Setiabudi, A. 2005. Perbandingan Ekspresi Sel T CD4 di Jaringan Sekitar luka

Dengan Tanpa infiltrasi Levobupivaksin Pada Nyeri Pasca Incisi. Program

Magister Ilmu Biomedik dan PPDS J Universitas Diponegoro Semarang.

[Tesis]

Smith dan Mangkoewidjojo. (1998) dalam Nasution Nurhayati. 2015. Uji Aktifitas

Ekstrak Etanol Umbi Talas Jepang (Colocasia esculenta(L) Schott var.

Antiquorum) Terhadap Penyembuhan Luka Terbuka Pada Tikus Putih

(Rattus novergicus) Jantan Galur Sprague Dawley. Farmasi. UIN Syarif

Hidayatullah. Jakarta.

Soni, H. and A. Singhai. 2012. A Recent Update of Botanicals for Wound Healing

Activity. International Research Journal of Pharmacy, 3. p. 1-6.

Sudiono, J., B. Kurniadhi, A. Hendrawan, dan B. Djimantoro. 2001. Penuntun

Praktikum Patologi Anatomi. Penerbit Buku Kedokteran ECG: Jakarta.

48

Sumardika. 2013. Ekstrak Air Daun Ubi jalar Ungu Memperbaiki Profil Lipid Dan

Meningkatkan Kadar SOD Darah Tikus Yang Diberi Makanan Tinggi

Kolesterol. Bagian farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas

Udayanan, Denpasar, Bali.

Suwiti, K. 2010. Deteksi Histologik Kesembuhan Luka Pada Kulit Pasca

Pemberian Daun Mengkudu (Morinda Citrofilia Linn). Lab Histologi,

Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Udayana. Bali.

Thakur, R., N. Jain, R. Pathak, and S. Sandhu. 2011. Practices in Wound Healing

Studies of Plants. Review Article Evidence-Based Complementary and

Alternative Medicine. p. 1-15.

Yenti, R., R. Afrianti., L. Afrianti. 2011 dalam Nasution Nurhayati. 2015. Uji

Aktifitas Ekstrak Etanol Umbi Talas Jepang (Colocasia esculenta(L) Schott

var. Antiquorum) Ter

studi ekspresi il-2 dan jumlah sel radang …repository.ub.ac.id/667/1/ahmad febrianto.pdf · 2020....

Documents