乙肝病毒乙肝病毒 YMDDYMDD 变变异和异和 18961896 位点变异位点变异

的检测的检测

病毒变异是生物遗传进化的基本因素之一。乙型肝炎病毒（ HBV ）变异是在慢性感染过程中为适应生存环境而自然发生的，也可发生于应用药物或接种疫苗后。已发现 HBV 序列的变异在基因组各个区域均可发生。

通常把病毒株分为野毒株（ wide strain ）和变异株（ variation strain ）。变异株即发生了突变、插入或缺失、移框突变等变异的病毒株。一些变异株对临床预后和病毒学反应具有重要意义 。

乙肝病毒常见的变异：乙肝病毒常见的变异：前 C/C 基因变异 :

1896 位的变异和 1899 位的变异P 基因变异 :

拉米呋啶引起 YMDD 变异X 基因的变异前 S/S 基因变异

乙肝病毒乙肝病毒 YMDDYMDD 变变异异

是由于长期使用拉米呋啶 (Lamivudine,  LAM) 做抗乙肝病

毒治疗 , 使 HBV P 区编码的DNA 聚合酶基因在 739 或 741位点发生突变 , 其编码的 HBV逆转录酶活性部位 YMDD 发生了改变。

YMDDYMDD 变异通常有变异通常有 22 种形式种形式 ::

一种为 P 区 741 位鸟嘌呤被胸腺嘧啶取代 (G→T) ，则其编码的 550 位的蛋氨酸变为亮氨酸 (YMDD→YIDD);

另一种为第 739 位腺嘌呤被鸟嘌呤取代 (A→G) ，则其编码的 550 位的蛋氨酸变为缬氨酸 (YMDD→YVDD ）。

YMDDYMDD 变异的意义变异的意义 ::

YMDD 结构域是 HBV 进行逆转录的生物活性部位，也恰恰是拉米夫定干扰 HBV 复制的药物结合位点，这 2 种变异均导致了拉米夫定与多聚酶亲合力的下降或消失 ，而导致对拉米夫定的耐药。体外实验证实， YMDD 变异株对拉米夫定的敏感性降低为野生株的万分之一 。

YMDDYMDD 变异的检测变异的检测

使用试剂：使用试剂： 杭州博赛基因诊断技术有限

公司的“乙型肝炎病毒核酸荧光定量检测及 YMDD 变异检测试剂盒”。于 2005 年 7 月中旬获得国家药监局授予的新药证书。国药证字 S20050052 。

该产品有以下优点该产品有以下优点1. 国内唯一一款获得批准文号的检测

YMDD 变异诊断试剂；2. 国内唯一一款实现 HBV DNA 定量与

YMDD 变异双检功能的试剂；3. 闭管检测：直接在反应管中对 PCR 扩

增产物进行荧光数据采集和分析；4. 结果判断简捷、明确：通过双色荧光

通道检测所得 Ct 值可直接分辨出是否发生 YMDD 变异；

试验原理试验原理

采用乙型肝炎病毒特异引物，利用核酸扩增、荧光标记探针，结合 Taqman MGB 技术，对人血清或血浆中乙型肝炎病毒核酸（ HBV DNA ）定量检测，同时对 YMDD 位点变异进行检测。

操作步骤操作步骤1.样本采集：抽取病人静脉血

2.0ml ，取血清 0.2ml送检。血清标本在 2~8℃可放置 72小时， -70 ℃可长期保存，标本不宜反复冻融。

2.样本、对照品的处理和加样3.PCR 扩增4. 结果判断

结果判断结果判断Ct 值 结果判断

A 管 Ct ＞ 38, B 管 Ct＞ 38

HBVDNA阴性

A 管 Ct≤38, B 管 Ct≤38 YMDD 野生型A 管 Ct≤38, B 管 Ct ＞38

YMDD 变异型

结果判断结果判断

蓝 :A 管曲线 红 :B 管曲线 野生型

结果判断结果判断

蓝 :A 管曲线 红 :B 管曲线 变异型

干扰素耐药的原因干扰素耐药的原因①免疫耐受：母婴垂直传播 HBV 感染后，机体免疫系统发育阶段与 HBV 感染相伴随，误将 HBV认作自身成分，而难以发挥排斥清除反应。

②病毒基因变异：主要是第 1896 位点变异，这种变异株对干扰素治疗不敏感。

③基因整合：病毒基因整合在细胞内，难以清除，可在停药后复制、表达，造成反跳和复发。

④干扰素抗体：机体可能对外源性的干扰素产生中和抗体，降低干扰素疗效。

前前 CC 区区 18961896 位点变位点变异异

是 HBV 中最常见的变异。 1896型突变株可逃逸机体的细胞免疫，干扰素治疗不敏感 , 增强病毒基因组的包装，病毒复制增强，致病性增加。迅速及时进行 A1896 位点突变检测，可以帮助医生诊断 HBeAg阴性是由于 HBV 突变还是一种康复表现。 帮助确定干扰素的治疗。

HBV1896HBV1896 位点变异检测位点变异检测

使用杭州博赛基因诊断技术有限公司的“乙型肝炎病毒 1896位点变异荧光 PCR 检测试剂”。其原理、操作与 YMDD 变异试剂基本相同。

结果判断结果判断Ct 值 结果判断

A 管 Ct ＞ 38, B 管 Ct＞ 38

HBV阴性

A 管 Ct≤38, B 管Ct≤38

1896 野生型

A 管 Ct≤38, B 管 Ct ＞38

1896 变异型

200６ .09

谢

谢