464.вирусные и микоплазменные болезни томатов в...

20
На правах рукописи СЕЙИДОВ БАЙРАММУРАД КУРБАНМУРАДОВИЧ ВИРУСНЫЕ И МИКОПЛАЗМЕННЫЕ БОЛЕЗНИ ТОМА ТОВ В ТУРКМЕНИСТАНЕ И ОБОСНОВАНИЕ МЕР БОРЬБЫ СНИМИ Специальность 06.01.11. - Защита растений. АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург 1998 Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»

Upload: -

Post on 29-Jul-2015

139 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

Page 1: 464.вирусные и микоплазменные болезни томатов в туркменистане и обоснование мер борьбы с ними

На правах рукописи

СЕЙИДОВ БАЙРАММУРАД КУРБАНМУРАДОВИЧ

ВИРУСНЫЕ И МИКОПЛАЗМЕННЫЕ БОЛЕЗНИ ТОМА ТОВ В ТУРКМЕНИСТАНЕ И ОБОСНОВАНИЕ МЕР БОРЬБЫ

СНИМИ

Специальность 06.01.11. - Защита растений.

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата

биологических наук

Санкт-Петербург 1998

Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»

Page 2: 464.вирусные и микоплазменные болезни томатов в туркменистане и обоснование мер борьбы с ними

'Томаты

Работа , вьтолнена в Научно-исследовательском институте сельского хозяйства МСХ Туркменистана и во Всероссийском научно-исследовательском институте защиты растений РАСХН

Научные руководители: доктор биологических наук, профессор Ю.И.Власов

Официальные оппоненты:

кандидат сельскохозяйственных

наук Д.Г.Гошаев

доктор биологических наук, В.А.Колобаев

доктор сельскохозяйственных наук Г.П.Атрощенко

Ведущая организация: Туркменский сельскохозяйственный институт имени СА.Ниязова

Защита диссертации состоится 14-го мая 1998 г. в 10 часов на заседании Диссертационного совета Д 020.01.01. во Всероссийском научно-исследовательском инсппуге защиты растений по адресу: 189620 Российская Федерация, г. Санкт-Петербург-Пушкин, Шоссе Подбельского, д.З, ВИЗР.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Bcfc ского научно-исследовательского института защиты растений

Автореферат разослан " 3 / " Ма-рТОж г.

Ученый секретарь Диссертационного совета, кандидат биологических наук Г.А.Наседкина

Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»

Page 3: 464.вирусные и микоплазменные болезни томатов в туркменистане и обоснование мер борьбы с ними

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Непосредственной причиной постановки темы явилось широкое распространение в Туркменистане заболевания первоначально неизвестной этиологии, названного "хлоротическая курчавость листьев томата". Оно впервые зафиксировано в массовых масштабах в тепличных хозяйствах в 1991 году, поражая все возделы­ваемые сорта томатов (Власов, Теплоухова, Оразов, Гошаев, 1994). В этот же период в открытом грунте распространилось вирусоподобное заболевание томатов типа стрика. До начала наших исследований, ко­гда возникли эпифитотии указанных болезней, вирусы на культуре то­матов в Туркменистане практически не были изучены. Лишь в публика­ции Х.Н.Оразова, Ю.И.Власова, Д.Г.Гошаева (1993) был дан предвари­тельный обзор некоторых вирусных и вирусоподобных болезней тома­тов в Туркменистане. Учитывая изложенное, а также особую вредонос­ность, массовое распространение хлор этической курчавости листьев томата и необходимость разработки мер борьбы прежде всего с этим заболеванием, тема диссертационной работы представляется нам акту­альной и своевременной.

Цель и задачи исследований. Цель - охарактеризовать общую ситуацию с вирусными и вирусоподобными болезнями томатов в Турк­менистане, изучить основные заболевания, что необходимо для выра­ботки эффективных прсфшактических мероприятий. Для достижения этой цели необходимо было решить следующие задачи: 1. получить материалы о природе новых для Туркменистана вредонос­ных вирусоподобных заболеваний томатов - хлоротическая курчавость листьев и стрик; 2. на основе проведения фитосанитарного мониторинга охарактеризо­вать в целом пораженность томатов вирусными и вирусоподобными болезнями в условиях Туркменистана, определить видовой состав пато­генов; 3. обосновать и предложить меры профилактики основных заболеваний.

Научная новизна. Получены данные об инфекционной, вирусной природе нового вредоносного заболевания томатов - хлоротическая курчавость листьев, исследованы и определены пути передачи патогена. Возбудитель - вирус с изометрической формой вирионов (размеры - по­рядка 50 нм). Инфекция не передается механически, семенами, почвой; единственный установленный переносчик вируса - оранжерейная бело-крылка. В экспериментальных условиях патоген передается прививкой.

Представлена общая характеристика пот«зкеннГ5сТи томатов вирусными и вирусоподобными болезнями_^^рвйях Т^ркуенистана. Кроме хлоротической курчавости jmerCes^a^ro^^T^ аг^чень1 стрик (вирус огуречной мозаики - BONO, MCj3«ik^^Hpyo4M"^^naA томата -ВМТо) и столбур - микоплазма (по\с^5ремейной ̂ терминологии - фято-плазма).

fl-Slle?

Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»

Page 4: 464.вирусные и микоплазменные болезни томатов в туркменистане и обоснование мер борьбы с ними

4 Практическая значимость. Предложены меры профилактики и

пути снижения вредоносности основного заболевания томатов - хлоро-тической курчавости листьев (изоляция рассады от переносчика, регу­лирование сроков посева томатов, использование толерантных сортов, применение метода "растений-примаиок").

Сформулированы основные направления комплексной защиты томатов от вирусных и микоплазменньгх заболеваний.

Даны методические рекомендации по фитосанитарному мони­торингу заболеваний томатов типа желтух (столбур и хлоротическая курчавость листьев - ,ХКЛ) с указанием сходства и отличий в проявле­нии симптомов этих болезней. •' ;

Апробация работы. Материалы исследований доложены на Все­российском съезде по защите растений (ВИЗР, декабрь 1995г), на сове­щании по экологически безопасным методам защиты растений от ви­русных и нематодных болезней (ВИЗР, апрель 1996г). -

Публикации. Опубликовано 5 статей, отражающих основные результаты исследований. .,, . v

Структура и объем работы. Объем диссертации - 102 страницы, ее структура раскрывается при изложении текста автореферата,, .

Автор глубоко благодарен научным руководителям - профессо­ру, доктору биологических наук Ю.И.Власову и кандидату сельскохо- .»• зяйственных наук безвременно скончавшемуся Д.Г.Гошаеву.;

Выражаю также благодарность за сотрудничество специали­стам-вирусологам ВИЗРа ' - кандидатам наук Т.Н.Теплоуховой, А.Е.Цыпленкову. ..-.у > ..

Благодарю специалистов тепличных хозяйств Туркменистана за помощь в проведении обследований, учетов и наблюдений за фитосани-тарным состоянием культуры томатов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Во введении обращено внимание на актуальность проблемы, ;

определены цель и задачи исследований, показана новизна и практиче­ская значимость достигнутых результатов...... ,.i . •

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ г . Приведены литературные данные о биологии вирусов и вирусо­

подобных патогенов, поражаюпщх.томаты. Особое внимание обращено . на болезни томатов, распространенные в странах, близких по климати­ческим условиям к Туркменистану. . -

2. МАТЕРИАЛ ИМЕТОДЫИССЛЕДОВАНИЙ В качестве основного исходного материала для исследований

служили растения томатов с признаками вирусных и вирусоподобных заболеваний, выращиваемые в хозяйствах открытого и защищенного ' грунта Туркменистана.

Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»

Page 5: 464.вирусные и микоплазменные болезни томатов в туркменистане и обоснование мер борьбы с ними

5 Научно-производственные опыты проводились в условиях

Туркменистана, лабораторные вирусологические исследования - пре­имущественно во Всероссийском институте защиты растений (ВИЗР) в Санкт-Петербурге - Пушкине.

Для доказательства инфекциоыности изучаемых заболеваний применялись методы инокуляции сока, прививка, передача патогена с помощью переносчиков.

При идентификации вирусов использовался комплекс методов их диагностики - индикаторный метод, электронная микроскопия, серо­логия (иммунодиагностика). Диагностические наборы для постановки реакции методом иммуноферментного анализа получали из Научно-исследовательского института картофельного хозяйства (Московская область). Известно, однако, что диагностические наборы имеются дале­ко не для всех вирусов, поражающих томаты. Поэтому на протяжении всего периода исследований мы также применяли индикаторный метод диагностики этих патогенов.

Растения-индикаторы подбирались таким образом, чтобы мож­но было идентифицировать вирусы, наиболее часто встречающиеся на томатах: ВТМ, ВОМ, вирус- брогоовости томата, возбудители болезней типа желтух и др.

При проведении диагностических исследований и при работе с переносчиками мы пользовались методическими пособиями, обобщаю­щими накопленный опыт как по идентификации вирусов, так и фито-плазм (Гиббс, Харрисон, 1978; Трофимец, 1981; Власов, Тените, Самсо-нова, 1985; Тертяк, 1990; Власов, 1992; Крылов, 1992 и др.).

Отметим, что при использовании для диагностики вирусов ме­тода электронной микроскопии изучалась ультраструктура инфициро­ванных и здоровых клеток. Для этой цели приготавливались и исследо­вались ультратонкие срезы растительных тканей. Выражаю благодар­ность специалистам кабинета электронной микроскопии ВИЗР и ВНИ-ИСХМ за помощь в проведении указанных исследований.

В полевых и тепличных условиях Туркменистана многие опыты и наблюдения повторялись из года в год, чтобы накопить достоверный материал и сделать обоснованные выводы. Так, данные по вредоносно­сти хлоротической курчавости листьев томата были собраны в специ­альных опытах при анализе урожая, который учитывался ежегодно в течение 4-х дет. Многолетние наблюдения позволили выявить различия в поражаемости сортов томатов ХКЛ. Учитывая большое влияние приемов агротехники на вирусные заболевания сельскохозяйственных культур, мы особенно тщательно фиксировали сроки посева томатов и сроки высадки рассады на постоянное место. Соответствующие сопос­тавления послужили основой для некоторых практических выводов.

При поисках вектора нового заболевания томатов - хлоротиче­ской курчавости листьев, мы исходили из того, что в ряде южных стран, с жарким климатом, вирусные заболевания томатов аналогичного типа переносятся белокрылками. По климатическим условиям Туркменистан

Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»

Page 6: 464.вирусные и микоплазменные болезни томатов в туркменистане и обоснование мер борьбы с ними

6 чрезвычайно близок к подобным странам. Что касается распростране­н и я белокрылок н а плантациях о в о щ н ь а культур в Туркменистане, т о оно носит массовый характер к а к в защищенном, т а к и в открытом грунте. Учитывая эти обстоятельства, основные исследования п р и выяв­лении переносчика возбудителя хлоротической курчавости листьев т о ­м а т а были проведены с представителями алейродидов (Aleyrodidae).

В необходимых случаях н а м и проведена статистическая обра­ботка материалов п о существующим методикам (Доспехов, 1985).

3 . Х Л О Р О Т И Ч Е С К А Я К У Р Ч А В О С Т Ь Л И С Т Ь Е В Т О М А Т А Распространенность и вредоносность болезни

Через 2-3 года после обнаружения болезни в теплицах она полу­чила широкое распространение и в полевых условиях.

В условиях тепличной культуры томата первые больные расте­н и я появляются в рассаде; н о эпифитотийное развитие болезнь приоб­ретает через 25-30 дней после высадки рассады н а постоянное место. К середине вегетации число больных растений обычно составляет 100%. Симптомы поражения тепличных томатов характеризуются сильной деформацией и значительной измельченностью листьев, ткань между жилками - морщинистая. Она обесцвечена, особенно п о краям листьев. Заболевание сопровождается частичным опадением цветков, причем, в отличие о т столбура, и х строение н е видоизменяется. Завязавшиеся плоды - мелкие, твердые, п р и сильном поражении остаются т а к и м и . в течение всего периода вегетации. ••*-.•'

В открытом грунте заболевание редко проявляется в рассадный период (рассада выращивается в пленочных теплицах), н о в поле рас ­пространение болезни так же к а к и в теплицах приобретает массовый характер. П р и этом отмечено, ч т о наиболее поражаются т о м а т ы позд- . н и х сроков высадки (конец апреля - начало мая), которые почти не пло­доносят. Если же томаты высаживаются в поле до 1-го - 15-го апреля ,То они плодоносят и д а ю т определенный урожай, показывая менее резкое развитие болезни: неярко выраженный хлороз ткани между жилками,., слабую морщинистость листьев. Тем не менее и в этом случае п о р а ж е н и е ' достилает 100%. В полевых условиях признаки хлоротической курчаво­сти листьев нередко проявляются в сочетании с другими болезнями (столбур и др.), поэтому в одинарной инфекции симптомы поражения томатов наиболее четко выражены в теплицах.

Болезнь распространена на всех сортах томатов открытого грунта - Б е л ы й налив , Новичок, Прогресс, Голландский ранний . Волго­градский ранний 323, Волгоградский 5/95 и других. В тепличных комби­н а т а х также поражаются все возделываемые сорта - Украинский теп­личный, Красная Стрела, Барыня , Гамаюн, Московский осенний, М и -н у э т . . л • . . ; . , . . ,-

О вредоносности болезни можно судить п о тому факту, ч т о в некоторых тепличных хозяйствах культура томатов стала убыточной. Что касается вредоносности болезни в открытом грунте, т о нами в тече-

Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»

Page 7: 464.вирусные и микоплазменные болезни томатов в туркменистане и обоснование мер борьбы с ними

7 ние 4-х лет сравнивалась урожайность двух сортов томата на фоне мас­сового поражения хлоротическои курчавостью листьев (Волгоградский 5/95 и Гек-яйла). В обоих случаях урожай плодов был крайне низким, но у сорта Волгоградский 5/95 во все годы наблюдений он был в 2-5 раз ниже, чем у сорта Гек-яйла. Так, в 1995-1996 гг урожай плодов с одного больного растения (в граммах) у сорта Волгоградский 5/95 составлял соответственно 109,6 и 269,3 грамма; тогда как у сорта Гек-яйла - 525,8 и 692,2 грамма. Приведенные данные свидетельствуют о некоторых сор­товых различиях в реакции томатов на ХКЛТ.

Изложенные материалы указывают на большую вредоносность заболевания и на необходимость незамедлительной разработки мер борьбы с ним. Для этого в первую очередь требовалось установить при­роду хлоротическои курчавости листьев томатов и определить пути распространения инфекции.

Установление инфекционной (вирусной) природы хлоротическои курча­вости листьев томатов.

Данные по инфекционности заболевания отражены в работах специалистов ВИЗР и Туркменистана, в большинстве из которых мы принимали участие. Так, в последней публикации (Власов, Сейидов, 1997) приведены новые, уточняющие материалы по морфологии вирио-нов возбудителя ХКЛТ.

Известно, что практически все возбудители болезней вирусной и микоплазменной природы передаются методом прививки. Поэтому бы­ли сделаны прививки побегов томатов с симптомами хлоротическои курчавости листьев на группу растений сем. Solanaceae. Результаты показаны в таблице 1. В первоначальных опытах для прививок исполь­зовалось в среднем по 10-15 подвоев соответствующего вида, на кото­рые прививались побеги от больных растений томатов. В дальнейшем, в процессе поддержания шфекционного материала прививки неодно­кратно повторялись с одинаковым результатом, совпадающим с тем, что отражен в таблице. На томатах были воспроизведены признаки типичной хлоротическои курчавости листьев, на Nicotiana glutinosa L. и Datura stramonium L. - симптомы типа желтух. При этом на здоровых растениях указанных видов, находившихся в тех же теплицах, никаких признаков отклонений от нормы не было. Иными словами - развитие симптомов на привитых растениях - это результат передачи инфекции от больных растений томата, и он не связан с какими-либо случайными факторами.

Интересно отметить своеобразное проявление симптомов болез­ни на растениях Nicotiana glutinosa. Это - морщинистость, зонтичность и пузыревидность листьев и тесное группирование их на верхушке рас­тения. Края листьев бывают более светлыми. Растения отстают в росте, но долго вегетируют.

Учитывая специфичность симптомов на Nicotiana glutinosa, это растение может быть использовано как индикатор на инфекционную

Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»

Page 8: 464.вирусные и микоплазменные болезни томатов в туркменистане и обоснование мер борьбы с ними

8 хлоротическую курчавость листьев томатов, распространенную в Турк­менистане. Следует отметить, что в доступной литературе мы не встре­чали аналогичных данных о реакции Nicotiana glutinosa на подобные заболевания.

: Таблица 1 Реакция некоторых представителей семейства Solanaceae на патоген-возбудитель хлоротической курчавости листьев томата

Вид растения

Nicotiana glutinosa L.

Datura stramonium L.

Nicotiana tabacum L. Lycopersicon esculen-tum Mill.

Способ передачи инфекции с томата Прививкой

Прививкой

Прививкой Прививкой

Основные 1 симптомы заболе­вания Зонтичность и морщинистость листьев, задержка роста расте­ний. Рекомендуется как инди­катор на вирус - i ••-.• Хлоротичность листьев между жилками Симптомы отсутствуют Хлоротическая курчавость листьев . . . . . . . .

Обращает на себя внимание отсутствие каких-либо признаков передачи инфекции на другой вид табака - Nicotiana tabacum. Это сви­детельствует о специфичном круге растений-хозяев у патогена. Отсутст­вие реакции на Nicotiana tabacum также является своего рода показате­лем для характеристики штамма, распространенного в Туркменистане.

Наряду с доказательством инфекционности болезни методом прививок, проводились поиски переносчика патогена. Этому вопросу будет посвящен следующий раздел, здесь же лишь отметим, что инфек­ционная природа хлоротической курчавости листьев томата была пока­зана и путем передачи возбудителя болезни посредством белокрылок. -

Далее, были выполнены исследования по установлению инфек­ционного агента, вызывающего заболевание. Сложность заключалась в том, что томаты часто поражаются смешанной инфекцией, и в числе выделяемых микроорганизмов могут быть и такие, которые не. имеют прямого отношения к данной болезни. • ,<

В самых первоначальных опытах действительно было показано (Самсонова и др., 1992), что из больных растений томатов сорта Укра­инский тепличный выделялись риккетсиеподобные бактерии (РПБ), образующие специфические колонии на искусственных питательных средах. Эти бактерии, являющиеся внутриклеточными паразитами, по­ражают ксилему или флоэму растений. В последующем, однако, был сделан вывод, что выделенные на питательную среду микроорганизмы типа РПБ скорее всего служат соггутствующими агентами при данном заболевании. Это подтверждено электронномикроскопическим изучени­ем ультратонких срезов больных растений томатов, на которых риккет­сиеподобные бактерии отсутствовали. В то же время при использовании

Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»

Page 9: 464.вирусные и микоплазменные болезни томатов в туркменистане и обоснование мер борьбы с ними

9 метода ультратонких срезов в клетках пораженных растений выявлены изометрические вирусные частицы размером порядка 50 нм.

В литературе возбудителей многих заболеваний, переносимых белокрылками, относят к геминивирусам. Однако в исследованном ма­териале из Туркменистана не просматривались сдвоенные вирусные частицы, наличие которых характерно для геминивирусов. Что касается размеров обнаруженных вирионов, то они также значительно больше, чем размеры геминивирусов, которые составляют 18x20 нм; Не исклю­чено, что в Туркменистане распространено несколько заболеваний раз­ной природы, связанных с распространением белокрылками. В отдель­ных случаях мы наблюдали при электронномикроскопических исследо­ваниях структуры, напоминающие геминивирусы, однако вирионы раз­мером 50 нм зафиксированы более регулярно, четко и определенно. В связи со специфической морфологией вирионов возбудителя ХКЛТ мы не можем в настоящее время полностью отождествлять ХКЛТ в Туркме­нистане с каким-либо известным вирусным заболеванием томатов. Сле­дует напомнить, что по специфической реакции на Nicotiana glutinosa возбудитель ХКЛТ также отличается от других вирусов, распростра­ненных на растениях томата. Возможно, обнаружен новый тип вирусно­го поражения этой культуры.

Резюмируя представленные в данном разделе материалы, можно сделать следующие выводы: v

а) заболевание инфекционно; б) в клетках больных растений томатов при электронно-

микроскопическом изучении ультратонких срезов обнаружены изомет­рические вирионы размером порядка 50 нм.

Материалы по инфекционности болезни, доказанной методом прививок, привели к необходимости поиска естественных путей распро­странения патогена в природе.

Белокрылки (сем. AJeyrodidae) - переносчики вируса В главе "Материал и методы исследований" мы уже отметили,

что в других странах заболевания томатов типа курчавости листьев обычно передаются белокрылками. Учитывая широкое распространение белокрылок и в Туркменистане, основное внимание было сосредоточено на выяснении роли именно этих насекомых в передаче вируса хлороти-ческой курчавости листьев томата.

Привезенные из теплиц Туркменистана листья томатов, огур­цов, перцев с личинками и пупариями насекомого были переданы спе­циалисту-энтомологу ВИЗР В.В.Ведикань для определения вида бело­крылки. Ею установлено наличие тепличной (оранжерейной) белокрыл­ки - Trialeurodes vaporariorum Westw., с которой и проводилась в ВИЗР основная работа по передаче патогена. Оранжерейная белокрылка под­держивалась на разных видах растений в опытных боксах теплицы. Для приобретения инфекционности насекомых переносили при помощи экс­гаустера на больные растения томатов сорта Красная Стрела под изо-

Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»

Page 10: 464.вирусные и микоплазменные болезни томатов в туркменистане и обоснование мер борьбы с ними

10 ляторы на одни сутки. Через 24 часа питания на больных томатах бело-крылку отлавливали эксгаустером и переносили на молодые здоровые сеянцы томатов в фазе 2-3 настоящих листьев и на дурман - Datura stramonium. Опытные растения содержались под индивидуальными изоляторами - ламповыми стеклами, закрытыми сверху мельничным газом. На каждое растение приходилось по 10-15 особей беяокрылки, питавшейся на больных томатах. Через сутки белокрылку уничтожали. Итоги опыта приведены в таблице 2. Они четко показали, что действи­тельно тепличная белокрылка служит переносчиком инфекции. Ее ви-рофорность, очевидно, чрезвычайно высокая, поскольку произошло 100%-ное заражение томатов.

Что касается растений дурмана, то внешние симптомы проявили 90% растений. Возможно, и в данном случае было 100%-ное заражение, но растения дурмана, использованные для опыта, были более старшего возраста, чем томаты, и на отдельных растениях инфекция могла внеш­не не проявиться.

Таблица 2 Передача вируса хлоротической курчавости листьев томата тепличной белокрылкой

Источник ин­фицирования белокрылки Томаты сорта Красная Стре­ла с симптома­ми хлороти­ческой курча­вости листьев

Вид заражае­мого растения

Томаты: с. Украинский тепличный

с.Волгоград-ский 5/95

Дурман - Da­tura stramo­nium L.

Число растений в опыте

10

10

20

Число зара­зившихся рас­тений

10

10

18

Симптомы заболевания

Хлоротическая курчавость листьев

Хлоротическая курчавость листьев Хлороз ткани между жилка­ми

Далее, проведен опыт по передаче вируса тепличной белокрыл­кой на специальном провокационном фоне. Он был создан в изолиро­ванном боксе, где находились томаты, пораженные хлоротической кур­чавостью, тепличная белокрылка и здоровые растения различных видов. В результате свободного распространения инфекции белокрылкой внутри изолированного бокса были заражены томаты, Datura stramo­nium и Nicotiana glutinosa с воспроизведением тех же симптомов, что получены в результате прививки, а также в предыдущем опыте с бело­крылкой. Интересно отметить, что вновь не произошло видимого зара­жения Nicotiana tabacum.

Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»

Page 11: 464.вирусные и микоплазменные болезни томатов в туркменистане и обоснование мер борьбы с ними

11 При проведении всех вышеописанных опытов, в теплицах про­

израстали растения, не имевшие контакта с белокрылкой (контроль). Они, как и следовало ожидать, остались здоровыми.

После проведенных вышеописанных опытов с оранжерейной белокрылкой, в Туркменистане на ряде сельскохозяйственных культур постепенно стало отмечаться доминирование хлопковой или табачной белокрылки - Bemisia tabaci (Мярцева, 1996). Благодаря высокой плодо­витости и быстрому развитию численность Bemisia tabaci постоянно возрастает. В связи с этим возникает естественный вопрос - не может ли и хлопковая белокрылка быть переносчиком вируса хлоротической кур­чавости листьев томата.;Этот вопрос не является, однако, простым и однозначным и подробно рассматривается в диссертации. Мы считаем, что для выяснения роли табачной белокрылки в передаче тех или иных вирусов, поражающих томаты или другие культуры в Туркменистане требуются тщательные специальные исследования. Что же касается мас­сового распространения ХКЛТ как в теплицах, так и в последующем в открытом грунте, то это вполне коррелирует с тем, что оранжерейная белокрылка заселяет в Туркменистане многие культуры не только в теп­лицах, но и в полевых условиях (Сухоручеяко и др., 1995). Определенное снижение ее численности за счет вытеснения хлопковой белокрылкой совершенно не означает, что оранжерейная белокрылка утрачивает роль переносчика вируса хлоротической курчавости листьев томата. В пре­дыдущей главе мы также отметили, что вирус распространяемый в Туркменистане оранжерейной белокрылкой, отличается от вирусов, описанных на томатах в некоторых странах и передаваемых табачной белокрылкой.

Таблица 3 Сравнительная характеристика двух вирусных заболеваний томатов, распространяемых белокрылками

Вид насекомого-переносчика Тепличная (оранжерейная) белокрылка Trialeurodes vaporarionim Westw. Табачная (хлопковая) белокрылка -Bemisia tabaci Germ

Морфология передаваемо­го вируса Вирионы изометричес­кие 50 нм в диаметре

Сдвоенные частицы 18x20 нм (геминивиру-сы)

Реакция на Nicotiana glutinosa L. Зонтичность и морщинис­тость листьев (растение-индикатор)

Симптомы отсутствуют (латентная инфекция)

Название болезни

Хлороти-ческая курчавость листьев томата

Желтая курчавость листьев томата

Примечание

Болезнь впервые описана в Турк­менистане

Болезнь известна в разных стра­нах; в Туркмени­стане достовер­но не идентифи­цирована

Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»

Page 12: 464.вирусные и микоплазменные болезни томатов в туркменистане и обоснование мер борьбы с ними

12 Обнаружение в Туркменистане нового типа вирусного пораже­

ния томатов, связанного именно с оранжерейной белокрылкой, иллюст­рируется в таблице 3, в которой проведено сравнение двух близких по симптомам, но разных по природе, вирусных заболеваний томатов.

Приведенные данные в целом ориентируют практику на защиту томатов от белокрылок не только как вредителей растений, но и как переносчиков вирусной инфекции.

Исследование других возможных путей передачи инфекции После проведенных опытов стало ясно, что в естественных усло­

виях вирус хлоротической курчавости листьев томата распространяется оранжерейной белокрылкой, а в эксперименте (наряду с белокрылкой) -посредством прививок.

Однако для получения полной картины циркуляции инфекции в природе следовало проверить и другие пути передачи вируса, даже если они маловероятны для болезней типа желтух.

Известно, что некоторые вирусы могут распространяться при инфекционных контактах, связанных с травмированием растений при процессах ухода за ними.

Что касается возбудителя хлоротической курчавости яистьев томата, то для проверки его механической передачи применялся метод инокуляции сока в ткани здоровых томатов. При этом в качестве источ­ника инокулюма использовались преимущественно листья больных то­матов из теплиц, поскольку в условиях теплиц меньше вероятности на­личия в растениях смешанной инфекции, чем в открытом грунте. В ито­ге установлено, что картину хлоротической курчавости листьев воспро­извести посредством механической передачи не удалось.

Параллельно проверялась возможность передачи вируса семе­нами томатов. Для этого использовались, семена тепличных томатов тех сортов, на которых широко распространено заболевание. В опытах, проведенных в условиях строгой изоляции от переносчика, такую пере­дачу установить не удалось. Наконец, нами проведены наблюдения, касающиеся роли почвы в сохранении и передаче вируса хлоротической курчавости листьев томата. Было отмечено, что болезнь развивается как. в новых теплицах, где ранее не выращивались томаты, так и в ста­рых тепличных комбинатах. Все подобные данные дополнительно сви­детельствуют о том, что решающим фактором передачи вируса являют­ся белокрылки.

Обоснование мер борьбы с заболеванием Практика защиты растений от вирусных заболеваний, распро­

страняемых сосущими насекомыми, указывает на большую роль агро­технических приемов в профилактике и ограничении инфекции. При эгом особое значение принадлежит регулированию сроков посева(или высадки) растений. Специалисты стремятся установить такие сроки

Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»

Page 13: 464.вирусные и микоплазменные болезни томатов в туркменистане и обоснование мер борьбы с ними

13 посева культуры, при которых она в какой-то мере "уходит" от массо­вого заселения насекомыми-переносчиками.

Естественно, что и в случае хлоротической курчавости листьев томатов следует использовать агротехнические методы для уменьшения вредоносности и распространения болезни. .

Наши наблюдения за динамикой хлоротической курчавости листьев на томатах открытого и закрытого грунта показали, что регу­лирование сроков посева и посадки томатов может принести определен­ные положительные результаты.

В закрытом грунте благоприятны более поздние сроки посева томатов (например, октябрьские вместо сентябрьских), при которых развитие и распространение хлоротической курчавости листьев проте­кает более медленно и в менее вредоносной форме.

В отбытом грунте," как уже отмечено в разделе "Распространенность и вредоносность болезни", благоприятны ранние сроки высадки рассады в доле. Эффективность этих приемов, очевидно, связана с динамикой и сроками заселения томатов белокрылкой, а так­же со сроками, приобретения ею вирофорности, что требуется изучить более детально.

Для профилактики болезни важно организовать выращивание рассады в изоляции от заселения белокрылкой (в изолированных боксах и тл.). Использование здоровой рассады позволит если не предотвра­тить, то отодвинуть развитие болезни на более поздний период, когда ее вредоносность будет менее заметной. В обычных же условиях выращи­вания рассады, т.е. без изоляции, ее зараженность хлоротической курча­востью листьев достигает 3-6%. Это высокий показатель зараженности для молодых растений, поскольку впоследствии использование такой рассады приводит к 100%-ной зараженности томатов.

Показателен зарубежный опыт по профилактике сходного забо­левания - желтой курчавости листьев томатов. За рубежом рассадные теплицы обычно оснащают сетками на окнах и дверях, защищая рассаду от проникновения белокрылки. До высадки на постоянное место расса­ду обрабатывают инсектицидами с интервалами 3-5 дней. Применяют выбраковку больных или подозрительных сеянцев. Иногда рассаду за­крывают марлевыми изоляторами. Защита рассадников и молодых се­янцев хорошо себя зарекомендовала в странах Средиземноморья.

С учетом зарубежных данных, нами также проводилась изоля­ция рассады томатов от заселения белокрылкой. Для этой цели приме­няли укрывной материал Агрил. Опыт проведен в тепличном комбинате № 2 д.о."Туркменистан" Гевэрского этрапа с сортами томатов Минуэт и Украинский тепличный. Рассада, выросшая под укрытием, практиче­ски не имела признаков заболевания, кроме 1-го - 2-х растений по каж­дому сорту, которые были удалены.

Одним из важных защитных приемов считают также использо­вание растений-приманок. Важно, чтобы они были иммунными к вирусу и предпочитаемыми хозяевами ("приманками") для белокрылки. Пита-

Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»

Page 14: 464.вирусные и микоплазменные болезни томатов в туркменистане и обоснование мер борьбы с ними

14 лсь на этих растениях, большинство особей белокрылки теряет свою вирофорность, поскольку вирус сохраняется в насекомом ограниченное время. Постепенно белокрылка переселяется на томаты, и поскольку часть ее особей все же остаются вирофорными, заражения происходят, однако в более ограниченном масштабе. Кроме того, поздняя инфекция имеет сравнительно небольшое отрицательное влияние на урожай. Ме­тод растений-приманок использовался, в частности, на Кубе против белокрылки - переносчика вируса желтой курчавости листьев томата (Цыпленков, Гонзалес, 1993). Мы считаем, что данный прием весьма перспективен и для условий Туркменистана, тем более, что четко и не­однократно установлено отсутствие заболевания типа хлоротической курчавости листьев у растений огурцов. Вместе с тем огурцы интенсив­но заселяются белокрылкой. Таким образом, огурцы являются исключи­тельно подходящим объектом для использования их в качестве расте­ний-приманок. Наши наблюдения в тепличном -комбинате № 2 д.о."Туркменистан" Гевэрского этрапа, проведенные совместно с зав. тепличным комбинатом Т.Ходжамедовым, показали, что действительно томаты, выращиваемые среди растений огурцов, редко поражаются хлоротической курчавостью листьев. Этот прием может быть использо­ван на индивидуальных приусадебных участках.

Нами проведены наблюдения за поражаемостью курчавостью листьев тех сортов томатов, которые используются в производственных условиях в Туркменистане. Как в открытом грунте, так и в теплицах отмечены некоторые различия в интенсивности развития болезни у раз­ных сортов томатов. Так, в теплицах болезнь протекала в более слабой форме у сортов Барыня и Гамаюн.

В целом в итоге проведенных исследований обоснованы сле­дующие направления в борьбе с хлоротической курчавостью листьев томатов в Туркменистане:

1) использование агротехнических приемов, прежде всего регу­лируя сроки посева и высадки томатов;

2) применение метода растений-приманок; 3) выращивание рассады в изоляции от заселения белокрылка-

ми; 4) использование сортов томатов, сравнительно выносливых к

заболеванию.

4. ДРУГИЕ ВИРУСНЫЕ И ВИРУСОПОДОБНЫЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ ТОМАТОВ

Стрик Распространение стрика томатов носило массовый характер в

начале 90-х годов, затем число больных растений снизилось. Симптомы поражения томатов характеризуются отмиранием верхушки, некротиче­ской штриховатьстью стеблей. На плодах признаки поражения разно­образны - поверхностные штрихи и пятна, некроз жилок, общее побуре-ние плода. Для установления природы болезни нами использованы им-

Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»

Page 15: 464.вирусные и микоплазменные болезни томатов в туркменистане и обоснование мер борьбы с ними

15 мунодиагностика (ИФА) и метод растений-индикаторов. С помощью ИФА инфекционный материал проверен на наличие Y-вируса и X-вируса картофеля, штаммы которых могут вызвать симптомы стрика в одинарной либо смешанной инфекции. Указанные вирусы обнаружены не были. В итоге дальнейших исследований в больных растениях был выявлен вирус огуречной мозаики (ВОМ). Этот же вирус установлен на вьюнке полевом (Convolvulus arvensis L.), произраставшим в местах вы­ращивания рассады томатов.

Вирус мозаики томатов (ВМТо) из растений, пораженных стри-ком, практически не выделялся. В результате был сделан вывод, что стрик томатов в Туркменистане связан с заражением растений вирусом огуречной мозаики, распространяемым посредством тлей.

Мозаика Вирус мозаики томата (ВМТо), относящийся к группе ВТМ,

обычно обнаруживается повсеместно, где выращиваются восприимчи­вые к вирусу сорта томатов. Особенно быстро ВМТо распространяется в защищенном грунте, достигая, как правило, эпифитотийного уровня. Это связано с множеством инфекционных контактов в теплицах, возни­кающих при процессах ухода за томатами. К числу сильно восприимчи­вых к ВМТо относится сорт томатов Украанский тепличный, который в течение нескольких лет широко возделывался в ряде хозяйств защищен­ного грунта Туркменистана. Зная высокую восприимчивость этого сор­та к вирусу, мы ожидали сравнительно легкого и систематического вы­деления ВМТо из растений тепличных томатов. В действительности наблюдалась следующая ситуация.

На фоне массового поражения сорта Украинский тепличный вирусом хлоротической курчавости листьев (до 100%), из таких расте­ний чрезвычайно редко выделялся ВМТо. Создается впечатление, что между ВХКЛТ и ВМТо происходит интерференция, и размножение ВМТо в растениях, пораженных ХКЛТ, подавляется.

В открытом грунте положение в принципе такое же, хотя в не­значительном проценте мозаичные растения томатов обнаруживаются.

Возникает вопрос о вредоносности и экономической значимости этого вируса в условиях Туркменистана. Нам представляется, что в теп­личных хозяйствах проблема радикально решается использованием гибридов томатов, устойчивых к ВМТо, хотя большинство из них так же сильно поражаются ВХКЛТ, как и восприимчивые к ВМТо. Видимо, среди сортов, устойчивых к ВМТо, необходимо использовать такие, которые являются толерантными к ВХКЛТ (Барыня, Гамаюн). Однако в открытом грунте еще возделывается немало сортов томатов, восприим­чивых к ВМТо, поэтому задача защиты растений от этого вируса оста­ется актуальной. Следовательно, известные общие меры профилактики против ВМТо (обеззараживание семян и др.) должны соблюдаться, что­бы не упустить из-под контроля ситуацию с этим вирусом.

Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»

Page 16: 464.вирусные и микоплазменные болезни томатов в туркменистане и обоснование мер борьбы с ними

16 Столбур

6 период наших исследований микоплазменное заболевание -стодбур не имело широкого распространения на томатах в Туркмени­стане, и ежегодно болезнь отмечалась на разных участках в пределах от десятых долей процента до нескольких процентов. Однако, как показы­вает международный опыт, вспышка болезни на пасленовых культурах может произойти в любое время, если условия благоприятны для массо­вой миграции цшсадок-переносчиков из естественных биоценозов на сельскохозяйственные культуры.

Столбур, как я хлоротическая курчавость листьев томата, отно­сится к болезням типа желтух, и недостаточно опытному специалисту бывает трудно разграничить эти заболевания.

В связи с изложенным, на фоне незначительного распростране­ния столбура мы видели свою задачу в том, чтобы сосредоточить вни­мание на методических вопросах. Необходимо было дать четкую харак­теристику различий в проявлении симптомов столбура и хлоротической курчавости листьев, что важно для специалистов службы защиты расте­ний при проведении ежегодного фитосанитарпого мониторинга.

Обращает на себя внимание главное отличие в симптомах стол­бура и ХКЛТ - различная патология цветков. В случае с ХКЛТ внешние изменения у образовавшихся цветков незаметны. При столбуре цветки, в зависимости от формы столбура, могут претерпевать целую гамму из­менений - позеленение и редукция лепестков, разрастание чашелистиков, "большой бутон" и др. В то же время признаки поражения листьев и плодов при двух указанных болезнях бьшают во многом сходны (таблица 4).

Таблица 4 Симптомы поражения томатов столбуром и хлоротической курчавостью листьев ,

Заболевание

СТОЛБУР

Хлоротическая курчавость листьев томата (ХКЛТ)

Симптомы на листьях Зависят от фор­мы столбура. Симптомы: ре­дукция верхних листьев, хлороз, антоциан

Морщинис­тость, курча­вость, измельченность, хлороз листьев

Симптомы на цвет­ках Позеленение и ре­дукция лепестков, разрастание чаше­листиков, "большой бутон", пролиферация завязи в вегетатив­ный побег Внешние изменения в морфологии цветков не отмече­ны

Поражение плодов

Плоды мелкие, реб­ристые, одревеснев­шие. Иногда на их поверхности - белые пятна.

Плоды мелкие, твер­дые, иногда ребристые

Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»

Page 17: 464.вирусные и микоплазменные болезни томатов в туркменистане и обоснование мер борьбы с ними

17 5. ОБСУЯОДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

, В итоге наших исследований впервые показана общая картина поражения томатов вирусными и вирусоподобными болезнями в усло­виях Туркменистана. Основным заболеванием является хлоротическая курчавость листьев томата.

Вторым по значению патогеном на томатах является возбуди­тель сгрика - вирус огуречной мозаики (ВОМ), хотя, по мере доминиро­вания на томатах ХКЛТ, эпифитотийного развития сгрика на таких полях не регистрировалось. Видимо, вирус хлоротической курчавости листьев томата в какой-то мере подавляет развитие ВОМ, так же как он подавляет развитие ВМТо. Однако это не означает уменьшения опасно­сти этих вирусов, поскольку источники инфекции остаются. В перспек­тиве может сложиться парадоксальная ситуация, когда значение ВОМ и ВМТо будет вновь возрастать по мере успешной защиты томатов от ВХКЛТ, который маскирует проявление симптомов мозаики и сгрика. Поэтому радикально проблема защиты томатов от вирусов, а также от фитоплазмы, может быть решена только комплексным подходом, когда меры борьбы будут направлены не против одного, а против нескольких основных патогенов.

Как.же организовать и осуществить комплексный подход к за­щите томатов от основных патогенов? Для построения стройной систе­мы мероприятий требуется определенное время, но на современном эта­пе на основе имеющихся данных мы можем определить основное на­правление в решении указанной задачи. Это - профилактика заболева­ний. .-у.' -••. . • ' • ' . . • •

Прежде всего территория около теплиц, поля и прилегающие к ним массивы должны быть в максимальной степени свободны от сорня­ков - резерваторов вирусов и фитоплазмы. <

Далее, требует комплексного подхода борьба с переносчиками (белокрылки, тли, цикадки). Одно из простых и эффективных решений в этом плане - изоляция рассады от заселения насекомыми-переносчиками. Выращивание рассады томатов в изоляции от насеко­мых позволяет сохранить ее в здоровом состоянии и отодвинуть на бо­лее поздние сроки процессы заражения растений.

В селекционной работе безусловно должен учитываться видовой состав обнаруженных нами патогенов на томатах. Поскольку создание сортов с групповой или комплексной устойчивостью к нескольким виру­сам и к фитоплазмам - чрезвычайно сложная задача, необходимо начать ее решение хотя бы с двух объектов - ВХКЛТ и ВОМ. Эти патогены -наиболее вредоносные для томатов в условиях Туркменистана.

. В заключение укажем на необходимость осуществления службой защиты растений, с участием специалистов научных учреждений, еже­годного фнтосанитарного мониторинга на посадках томатов и других овощных культур.

Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»

Page 18: 464.вирусные и микоплазменные болезни томатов в туркменистане и обоснование мер борьбы с ними

18 ВЫВОДЫ И ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. В результате проведенных обследований и фитопатологиче-ского анализа материала на томатах в Туркменистане идентифициро­вано три вирусных заболевания: хлоротическая курчавость листьев, стрик (возбудитель - ВОМ), мозаика (возбудитель - ВМТо), а также микоплазменное заболевание - столбур.

. 2. Основным заболеванием, наносящим большой экономический ущерб культуре томата, является хлоротическая курчавость листьев. Болезнь поражает все сорта томатов защищенного и открытого грунта.

3. Показано, что возбудителем хлоротической курчавости листь­ев томатов является вирус с изометрической формой вирионов и разме­рами порядка 50 нм. Инфекция не передается механически, семенами, почвой, и единственный установленный переносчик вируса - оранже­рейная белокрылка Trialeurodes vaporariorum Westw. В эксперименталь­ных условиях патоген также передается посредством прививки.

4. Хорошим растением-индикатором на вирус хлоротической курчавости листьев томатов (ХКЛТ) является Nicotiana glutinosa, реаги­рующая на заражение специфическими симптомами зонтичносги и морщинистости листьев. Эта реакция однотипна как в результате пере­дачи инфекции прививкой, так и тепличной белокрылкой. В доступной литературе нами не найдено аналогичных данных о реакции Nicotiana glutinosa на заболевания томатов типа желтух.

5. В качестве мер, снижающих вредоносность заболевания, ис­пытаны различные агротехнические приемы. Установлено, что на теп­личных томатах поздних осенних сроков сева болезнь развивается в менее вредоносной форме. Наоборот, для томатов открытого грунта более благоприятны ранние сроки посева и высадки рассады в грунт. Показана положительная роль растений огурцов (непоражаемых ВХКЛТ) как растений-приманок для белокрылки, что приводит к рез­кому снижению распространения болезни у томатов, произрастающих между посадками огурцов. Не исключено, что питаясь на огурцах, бело­крылка теряет свою вирофорность и перестает быть переносчиком ин­фекции на томаты. Положительный эффект установлен при выращива­нии рассады томатов под специальным пленочным укрытием (Агрил), предохраняющим рассаду от заселения белокрылкой.

6. Среди томатов открытого и защищенного грунта отмечены отдельные сорта, толерантные (выносливые) к заболеванию. К ним от­носятся в теплицах сорта Барыня и Гамаюн.

7. Микоплазменное заболевание томатов - столбур, имело в го­ды наших исследований незначительное распространение. Нами даны методические рекомендации по фитосанитарному мониторингу болез­ней томатов типа желтух (столбур и ХКЛТ) с указанием сходства и от­личий в проявлении признаков этих заболеваний. В случае с ХКЛТ внешних изменений цветков не происходит, тогда как при столбуре па­тология цветков ("большой бутон" и др.) - наиболее характерный при­знак поражения фитоплазмой.

Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»

Page 19: 464.вирусные и микоплазменные болезни томатов в туркменистане и обоснование мер борьбы с ними

19 8. В диссертации сформулированы основные направления ком­

плексной защиты томатов от вирусных и микоплазменных заболеваний - ХКЛТ, стрика, мозаики и столбура. Среди предлагаемых профилакти­ческих мероприятий важнейшее значение имеют: выращивание здоро­вой рассады (в изоляции от насекомых-переносчиков), уничтожение сорняков около теплиц, на полях и прилегающих к ним территориях, использование устойчивых и толерантных сортов.

По материалам диссертации опубликованы следующие работы: 1. Власов Ю.И., Теплоухова Т.Н., Сейидов Б. Новое вирусное

заболевание томатов в СНГ - хлоротическая курчавость листьев // Все­российский съезд по защите растений. Тезисы докладов. - СПб., 1995. -С. 38-39.

2. Vlasov Y.I., Teploukhova T.N.., Lebsky V.K., Sejidov В. Chlorotic leaf curi of tomatoes - the new virus diseases in Turkmenistan // Eur. J. Plant Pathol. (13 Int. Plant Prot. Congress Abst.) -1995. - N 1399.

3. Сейидов Б., Гошаев Д. Помидорын вирус кесели ве она гаршы гереш чэрелери // Туркменистанну оба хожалык. -1996. - № 8.

4. Сейидов Б. Обоснование мер борьбы с вирусным заболевани­ем томата - хлоротической курчавостью листьев // Актуальные пробле­мы фитовирусологии и защиты растений. Материалы научной конфе­ренции, Минск, ПКФ "Экаунт", 1997. - С. 39-40.

5. Власов Ю.И., Сейидов Б. Новое инфекционное заболевание томатов - хлоротическая курчавость листьев // Агро XXI, 1997. - № 4.-С. 8-9.

ООО "Инновационный центр защиты растений" ВИЗР 95 120, тир. 100 экз.

Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»

Page 20: 464.вирусные и микоплазменные болезни томатов в туркменистане и обоснование мер борьбы с ними

Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»