臨床實驗室如何應用形態學進行絲狀菌鑑別檢驗

芮弗士醫事檢驗中心技術主任 呂振富

演講內容• 黴菌感染的主因• 絲狀黴菌鑑定的基本觀念• 實驗室如何準備絲狀黴菌鑑定的設備與

材料• 黴菌生理與型態介紹 ( 圖譜 )

黴菌引起的感染主因

多數為機緣性的感染，最常見者為酵母菌感染，尤其下列病人：

免疫力下降者長期使用抗生素、類固醇、細胞毒藥物者使用 IV導管者DM患者IV毒癮者

絲狀黴菌鑑定很簡單

大部分黴菌都有特殊形態，包括：菌落：顏色 ( 正面與背面 ) 、質地、邊緣、可溶性色素等

顯微形態：細胞大小、顏色、分生方式，及長成的形態等

輔助試驗：非常少數需要用到生化鑑定作為輔助溫度其他試驗

任何顯微鏡觀察應特別重視大小量尺觀念

• 顯微鏡之目鏡測微尺• 若無測微尺，則可以對照大小均勻的細胞：

Stapylicoccus aureus ：直徑約 1μm

正常 RBC ：直徑約 7.5μm

臨床分離絲狀黴菌

常見的黴菌：酵母菌、酵母樣菌，約占臨床分離的黴菌之 85-95%

絲狀黴菌較少：約占臨床分離的黴菌之5-15%

皮膚絲狀 ( 癣 ) 菌：皮膚科醫師通常會依據驗診斷癣或溼疹或其他皮膚病，所以很少開立檢驗

絲狀黴菌檢體與培養菌絲染色染色劑與染色方法很簡單：10%KOH( 可加派克藍色墨水或螢光劑 CFW) ：黴菌檢體觀察用，軟化角質與化痰Lactophenol cotton blue ：絲狀黴菌鑑別用子囊孢子染色：耐酸染色 (Kinyoun法， 3%HCL 酒精脫色 )其他輔助染色：Gram stainCalcofluor White

黴菌初培養用培養基

常見黴菌的初培養用培養基很簡單：Sabouraud Dextrose Agar(SDA) ：典型的形態與色素BHI ：挑剔性真菌用SABHI ： SDA+BHI( 建議用 )

Mycosel or IMA ：選擇性培養基，含氯黴素與 Cycloheximide

Potato Dextrose Agar(PDA) ：可刺激產孢與色素 其他： CHROagar( 酵母菌 ) 、 DTM or RSM( 皮膚絲狀菌 )

培養基若不常用，建議買來後再單片密封包裝，避免乾燥。

黴菌鑑定用培養基常見黴菌的鑑定用培養基很簡單：Sabouraud Dextrose Agar(SDA) ：典型的形態與色素， Slide culture

Potato Dextrose Agar(PDA) ：可刺激產孢與色素， Slide culture

Cornmeal Agar with 1% dextrose ：刺激紅髮癬產生紅色素毛髮穿洞試驗Trichophyton agars

Urea agar(Christensen)

SDA with 15% NaCl

Tyrosine or Xanthine agar

Germ tube test with H2O for 一些暗色菌絲的大分生孢子培養基若不常用，建議買來後再單片密封包裝，避免乾燥。

黴菌培養設備與注意事項培養的培養箱：室溫培養箱：一般是建議使用低溫培養箱。若否則只要室內溫度能維持 25-30 oC ，適當的防護，到處都作為培養箱37 oC 培養箱：除非出現雙形性的黴菌或鑑定需要，否則很少用到。若與細菌共用培養箱，應注意污染細菌的問題注意保濕 ( 防乾燥 ) ：慢速生長菌的培養時間通常需要 7-14天，可使用薄的 PE塑膠袋密封。 ( 酵母菌只要48-72 小時 )

鑑定絲狀黴菌的基礎引起的疾病檢體內的黴菌特性培養溫度環境與培養時間培養基上的形態：正面與背面顏色、質地、色素顯微鏡的形態：無性生殖結構、有性生殖結構、菌絲分隔、菌絲顏色本所黴菌形態的工具書：美國 ASM 出版的 Medical Important Fungi

Identifying Filamentous Fungi

其他

如何準備顯微觀察的標本• 膠帶黏附法• 傳統 的 Riddell Slide Culture 技術• 簡化的 Slide Culture 技術

黴菌生理與型態介紹

( 絲狀黴菌圖譜為主 )