การทดลองที่ 7 เจลฟ...

106

การทดลองที่ 7 เจลฟลเตรชันและไดอะไลซิส

อ.ชัยวัฒน วามวรรัตน 1. เจลฟลเตรชัน (Gel filtration)

เปนเทคนิคโครมาโทกราฟอีกหลักการหนึ่ง ซึ่งแยกสารตางๆออกจากกันตามขนาดโมเลกุล เมื่อ

นําไปผานคอลัมนบรรจุเจล วิธีการนี้เรียกไดวาเปน size exclusion chromatography หรือ molecular sieve chromatography เจลที่ใชผลิตขึ้นจากพอลิเมอรที่เปนเดกซแทรน (dextran) หรืออะกาโรส

(agarose) หรือ พอลิอะคริลาไมด (polyacrylamide) ซึ่งมีช่ือการคาตางๆ กันดงัตารางที่ 1 ตารางที่ 1 ตัวอยางเจลชนิดตางๆ

ช่ือการคา ชนิดของโพลิเมอร ขนาดโมเลกลุที่แยกได

(ดาลตัน)

Sephadex G-10 Dextran 0 – 700

Sephadex G-25 Dextran 1,000 – 5,000




Bio-gel P-2 Polyacrylamide 100 – 1,800

Bio-gel P-5 Polyacrylamide 1,000 – 6,000





Sepharose 6 B Agarose 10,000 – 4,000,000



พอลิเมอรเหลานี้ถูกเช่ือมเขาดวยกันเปนโครงขายสามมิติอนภุาคเม็ดเล็กๆ ที่มีสมบัติพองตัวไดในน้าํแตไม

ละลายน้ํา ภายนอกมีรูพรุนที่ยอมใหน้ําหรือสารโมเลกุลขนาดเล็กกวารูพรุนผานเขาไปในเมด็เจลได สาร

โมเลกุลขนาดใหญกวารูพรุนผานเขาภายในเม็ดเจลไมได จึงถูกชะออกมาตามชองวางระหวางเม็ดเจล เม็ด

เจลแตละชนดิมีขนาดรูพรุนที่แตกตางกัน ดังนัน้ในการแยกสารโมเลกุลขนาดตางๆ กัน จะตองเลือกชนิด

ของเม็ดเจลที่มีขนาดรูพรุนเหมาะสมที่สามารถแยกสารแตละชนดิออกมาไดอยางชัดเจน ชวงขนาดโมเลกุลที่

แยกไดของเมด็เจลแตละชนดิสรุปไวในตารางที่ 1

107

รูปที่ 1 การแยกสารโดยวิธีเจลฟลเตรชั่น

การแยกสารที่มีขนาดตางกันโดยผานคอลัมนเจลมีข้ันตอนทีด่ําเนนิไปดังรูปที่ 1 เร่ิมตนโดยการเติม

สารละลายผสมที่มีสารขนาดโมเลกุลใหญและเล็กผสมรวมกันลงบนผวิเจลที่บรรจุในคอลัมน (รูป ก) จากนั้นเติมตัวชะ ซึ่งจะชะสารผานเขาไปในคอลัมนเจล ภายในคอลัมนเจลสามารถแบงพ้ืนที่ออกไดเปน 2 บริเวณ

คือ บริเวณภายในเม็ดเจลและบริเวณชองวางภายนอกระหวางเม็ดเจล สารโมเลกุลขนาดใหญทีไ่มสามารถ

ผานรูพรุนเขาไปภายในเม็ดเจลจะเคลื่อนที่อยูเฉพาะบรเิวณชองวางภายนอกระหวางเม็ดเจล ดังนั้นจึง

เคลื่อนที่ผานคอลัมนไดอยางรวดเร็วและถูกชะออกมากอน ขณะที่สารโมเลกุลขนาดเล็กมีการเคล่ือนที่และ

กระจายตัวอยูทั้งสองบริเวณ จะเคลื่อนที่อยางชาๆ และถูกชะออกมาภายหลัง (รูป ข และ ค) ปริมาตรของตัวชะที่ใชชะสารโมเลกุลขนาดเล็กผานออกมาจากคอลัมนจึงมากกวาปริมาตรของตวัชะที่ใชชะสารโมเลกุล

ขนาดใหญออกจากคอลัมน การที่ตองใชตวัชะเปนปริมาตรเทาใดในการ ชะสารซึ่งมขีนาดโมเลกุลขนาดหนึ่ง

ผานออกจากคอลัมนนั้น สามารถหาไดจากความสัมพนัธของปจจัยตางๆ ที่เขียนเปนสมการไดดังนี ้ Ve = VO + KdVi เม่ือ Ve (elution volume) คือ ปริมาตรของตัวชะที่ใชชะสารที่มีขนาดโมเลกุลขนาดหนึ่งออกมาจากคอลัมน Vo (void volume) คือ ปริมาตรของบริเวณภายนอกเม็ดเจลทั้งหมด คดิเฉพาะในสวนของคอลัมนที่

มีเจลบรรจุอยู Vi (volume of solvent inside the gel particles) คือ ปริมาตรของบริเวณที่อยูภายในเม็ดเจล

ทั้งหมดทุกอนภุาค Kd คือ คาสัมประสิทธิ์การกระจายตัวของสารระหวางบริเวณภายในอนุภาคเจลและบริเวณภายนอก

อนุภาคเจล สารที่ไมสามารถผานเขาไปในอนุภาคเจลไดเลย มีคา Kd เปน 0 และใชปริมาตรของตัวชะในการชะสารผานออกมาจากคอลัมน หรือ Ve เทากับ Vo สวนสารที่สามารถผานเขาไปในอนภุาคเจลได คา Kd ของสารพวกนี้อยูระหวาง 0 ถึง 1 ในกรณีที่สารมีคา Kd = 1 Ve ของสารนี้เทากับ Vo + Vi

108

เทคนคิเจลฟลเตรชันน้ีมีประโยชนมากในทางชีวเคมี เชน

1. การแยกสารชีวโมเลกุล เชน โปรตีนที่มีขนาดโมเลกุลแตกตางกันออกจากกนั เพ่ือใหโปรตีนที่เรา

ตองการมีความบริสุทธิ์สูงข้ึน

2. การหาน้ําหนักโมเลกุลของโปรตีน ตัวอยางโปรตนีทีใ่ชไมจําเปนตองมีความบริสุทธิ์สูง และตองมี

โปรตีนมาตรฐานที่บริสุทธิแ์ละทราบน้าํหนักโมเลกุล เพ่ือใชในการสรางกราฟมาตรฐาน โปรตีนมาตรฐาน

ถูกเติมในคอลัมนที่เตรียมอยางประณีต และชะโปรตนีมาตรฐานแตละตัวออกจากคอลัมน หาคา Ve ของ

โปรตีนมาตรฐานแตละตัวจากกราฟความสมัพันธระหวางปริมาณโปรตนีและปริมาตรของตัวชะที่เก็บไดจาก

คอลัมน ดังในรูปที่ 2 จากนั้นนาํคา Ve ที่ไดมาเขียนกราฟโดยแกน Y เปนน้าํหนกัโมเลกุลในสเกลเชิงล็อก

(log scale) และแกน X เปนปริมาตรที่ใชในการชะ เสนกราฟที่ไดเปนเสนตรง ดังในรูปที ่3 หาคา Ve

ของโปรตีนตัวอยางโดยใชคอลัมนเจลอันเดิมแลวนาํมาอานคาน้าํหนกัโมเลกุลกับกราฟมาตรฐาน

รูปที่ 2 กราฟการชะโปรตีนมาตรฐานแตละชนิด

ก = hemoglobin ข = egg albumin รูปที่ 3 กราฟมาตรฐานของโปรตีนมาตรฐาน

ค = chymotrypsinogen ง = myoglobin จ = cytochrome C 3. การแยกโปรตีนและเกลือออกจากกัน (desalting) ตะกอนโปรตีนที่ไดหลังการตกตะกอนดวยเกลือ

แอมโมเนียมชัลเฟตยังคงมีเกลือแอมโมเนยีมซัลเฟตปนอยู การกําจัดออกทาํไดงายโดยละลายตะกอน

โปรตีนดวยบฟัเฟอรปริมาตรนอยๆ แลวเติมลงในคอลัมนเจล เจลที่เลือกใชตองกันโปรตนีไมใหเขาไป

ภายในเม็ดเจล คือใหโปรตีนมีคา Kd เปน 0 สําหรับเจลชนิดนั้น และใหเกลือเขาไปภายในเม็ดเจลได

สะดวก คือใหมีคา Kd ที่สูงกวามาก โปรตีนจึงถูกชะดวยบัฟเฟอรออกมาจากคอลัมนกอนเกลือ

4. การเปลี่ยนบัฟเฟอรของโปรตีน เม่ือตองการเปลีย่นการละลายของโปรตีนในบัฟเฟอรชนิดหนึ่งไปสู

บัฟเฟอรชนิดใหม ทาํไดโดยเติมโปรตนีในสารละลายบัฟเฟอรเดิมลงในคอลัมนเจลที่อยูในบฟัเฟอรชนิด

ใหม แลวชะดวยบัฟเฟอรชนิดใหม เจลที่ใชตองกันโปรตีนไมใหเขาสูภายในเมด็เจลเลย โปรตีนจะผานเขา

มาอยูในบัฟเฟอรชนิดใหมและออกจากคอลัมนอยางรวดเร็ว สวนบัฟเฟอรชนิดเดิมจะออกมาในภายหลัง

109

2. ไดอะไลซสิ (dialysis)

เปนวิธีการที่แยกสารออกจากกันโดยใชเย่ือบาง ซึ่งมีขนาดรูยอมใหสารโมเลกุลเล็กแพรผานไดและ

กันการผานของสารโมเลกุลใหญ (semipermeable membrane) วัสดุที่ใชทําเยื่อบางมักเปนเซลลูโลสแอซีเตท (cellulose acetate) หรือเรียกกันทั่วไปวา เซลโลเฟน (cellophane) เมื่อนําสารละลายผสมของสารโมเลกุลใหญและสารโมเลกลุเล็กใสลงในถุงเซลโลเฟนแลวนําไปแชในน้ํา สารโมเลกุลใหญไมสามารถผาน

เย่ือบางไดจะยังคงอยูในถุง สวนสารโมเลกุลเล็กสามารถแพรผานออกมานอกถุงได โดยกระจายตัวจาก

ภายในถุงซึ่งมคีวามเขมขนสูงออกสูภายนอกถุงที่มีความเขมขนต่ํากวา เมื่อถึงภาวะสมดุลความเขมขนของ

สารโมเลกุลเล็กภายในถุงและภายนอกถุงจะเทากัน ดังในรูปที่ 4 ถามีการเปลี่ยนน้าํภายนอกถุงใหคงไวซึ่งความเขมขนต่าํอยูเสมอ สารโมเลกุลเล็กจะแพรออกมาไดเร่ือยๆ จนเกือบหมด การกวนน้ําภายนอกถุงและ

ใหถุงเซโลเฟนเคล่ือนไหวอยูตลอดเวลาชวยใหถึงภาวะสมดุลไดเร็วขึ้น ขอพึงระวังในการเลือกใชวิธีนี้ คือ

การเกิดออสโมซีส (osmosis) เม่ือความเขมขนของสารโมเลกุลเล็กในถุงเซลโลเฟนมีอยูสูงจะทําใหน้ําผานเขาไปในถุงในตอนแรกอยางมากมายกอนที่สารโมเลกุลเล็กเคล่ือนออกจากถุง ทําใหปริมาณน้ําภายในถุง

เพ่ิมขึ้นและเมื่อเพ่ิมมากเกินจะเกิดแรงดนัทําใหถุงเซลโลเฟนฉีกขาดได ดังนั้นตองไมเติมสารละลายผสมจน

เต็มถุงเซโลเฟน ควรเหลอืพ้ืนที่ไวสําหรับการเพิ่มปริมาตรน้าํภายในถุงและรีดไลอากาศออกจากพื้นที่สวน

ดังกลาวกอนผูกปมปดถุง (ดังรูปที ่ 5 ก.) วิธีการนี้มีประโยชนมากในทางชวีเคมี เชน การแยกเกลือ

แอมโมเนียมซลัเฟตออกจากโปรตีน การเปล่ียนบัฟเฟอรใหสารละลายโปรตนี การแยกไอออนเล็กหรือ

โมเลกุลเล็กซึ่งจับกับสารชีวโมเลกุลอยางหลวมๆ เชน NAD

วัตถุประสงคของการทดลองนี้ คือ ใหเห็นถึงหลักการแยกสารของวิธีการทั้งสอง โดยใชตัวอยางซึ่ง

เปนสารละลายผสมของบลูเดกซแทรน (blue dextran) ซึ่งเปนสารโมเลกุลขนาดใหญน้ําหนักโมเลกุลระดับลานขึ้นไปและมีสีน้ําเงินกับเฟอรริกคลอไรด (ferric chloride : FeCl

3) ซึ่งเปนสารโมเลกุลเล็กและมีสี

เหลือง ตัวอยางการทดลองนี้จะไมพบในการปฏิบตัิงานชีวเคมีจริง แตหลักการเปนเชนเดียวกับการแยก

โปรตีนขนาดตางๆ ออกจากกัน การแยกโปรตีนออกจากเกลือแอมโมเนียมซัลเฟต

110

การทดลองที่ 9.1 การแยกสารโดยวิธีเจลฟวเตรชัน

สารเคมทีี่ใช 1. เซฟาเดกซ จี – 25

2. สารละลายผสมของบลูเดกซแทรนและเฟอรริกคลอไรด

วิธีทดลอง

1. นําเซฟาเดกซ จี– 25 ที่แชน้ําจนพองตัวเตม็ที่ มาบรรจุลงในคอลัมนทลีะนอยจนไดความสูงตามตองการ

คือ 10 เซนติเมตร และ 20 เซนติเมตร 2. เติมน้ํากล่ันลงไปในคอลัมนเร่ือย ๆ อยางตอเนื่อง เพ่ือวัดอัตราการไหลของคอลัมนที่เตรียมได โดยจบั

เวลานับจาํนวนหยดที่ไดตอเวลา 1นาที และวัดปริมาตรจํานวน 5 หยดท่ีเก็บไดจากคอลัมนดวยกระบอกตวง

ขนาด 10 มิลลิลิตร 3. ปลอยน้ําในคอลัมนใหระดบัน้ําลดลงถึงผิวเจล แลวจึงเติมสารละลายผสมของบลูเดกซแทรนและเฟอร

ริกคลอไรด 5 หยดทันท ี และนําหลอดทดลองมารองรับน้ําที่ออกมาจากคอลัมนตลอดเวลา โดยเก็บหลอด

ละ 5 หยด 4. ปลอยใหสารละลายผสมซึมลงเขาไปในเจลจนหมด ลางหนาเจลดวยตัวชะ คือ น้ํากล่ันตามทนัทคีรั้งละ

1 หยด 5 – 6 คร้ัง โดยหยดตอเนื่องกันทันทีหลังจากที่หยดกอนหนานัน้ซึมเขาไปในเจลแลว พึงระวังอยา

ใหผิวเจลฟุงกระจายเวลาหยด 5. เม่ือสารละลายผสมเขาไปในเจลเรียบรอยแลว เติมตัวชะใหเต็มคอลมัน และเติมอยูสม่ําเสมอจนกระทั่งส้ินสุดการทดลองเมื่อแถบสีตางๆ ถูกชะออกมาหมด 6. สังเกตแถบสทีี่ปรากฏในคอลัมน บันทึกสีของแถบสีในคอลัมน ยุตกิารเก็บน้าํตัวอยางเมื่อแถบสีทั้งหมดถูกชะออกมาจากคอลัมนอยางสมบูรณ 7. บันทึกสีของน้าํตัวอยางที่เก็บไดในหลอดทดลองแตละหลอด แลวเตมิน้ํากล่ันลงไปหลอดละ 3 มิลลิลิตร นําทุกหลอดไปวัดคาการดดูแสงที่ 370 นาโมเมตรของเฟอรริกคลอไรด และที่ 620 นาโนเมตรของบลูเดกซแทรน โดยใชน้าํกล่ันเปนสารละลายเปลาในการตัง้เปอรเซ็นตแสงสองผานเปน 100% กรณีที่วัดคาการดูดแสงทีค่วามยาวคลื่นใดไดเกิน 1 ใหเจือจางดวยน้าํกลั่นเพิ่มเขาไปอีก แลวบันทกึปริมาตรน้าํกลั่นที่เติมลง

ไปทั้งหมดไวสําหรับใชการคาํนวณหาจํานวนเทาที่ไดเจือจางไป 8. นําขอมูลที่ไดมาเขียนกราฟ โดยใหแกน Y เปนคาการดูดแสง และแกน X เปนลําดับของหลอดน้ําตัวอยางที่เก็บได ตารางบันทึกผลการทดลองที่ 9.1

ความสูงของคอลัมนเจล 10 เซนติเมตร 20 เซนติเมตร

อัตราการไหล (หยด/นาท)ี ปริมาตร 5 หยดที่เก็บจากคอลัมน

คิดเปนปริมาตร (มิลลิลิตร)

111

น้ําตัวอยางที่เก็บจากคอลัมนเจล หลอดที่

ความสูง 10 เซนติเมตร 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

สีของน้ําตัวอยางที่เก็บไดจากคอลัมน เติมน้ํากลั่นลงในแตละหลอดเปน

ปริมาตร (มิลลิลิตร)

ปริมาตรรวมหลังเติมน้ํากลั่น(มิลลิลิตร)

จํานวนเทาที่ไดเจือจางไป (ก) คาการดูดแสงที่ 370 นาโนเมตร ที่วัด

ไดของหลอดที่เจือจางแลว (ข)

คาการดูดแสงที่ 370 นาโนเมตร ของน้ํา

ตัวอยางที่เก็บจากคอลัมนเจล (= ก × ข กรณีที่มีการเจือจาง)

คาการดูดแสงที่ 620 นาโนเมตร ที่วัด

ไดของหลอดที่เจือจางแลว (ค)


ตัวอยางที่เก็บจากคอลัมนเจล (= ก × ค กรณีที่มีการเจือจาง)

11 12 13 14 15 16 17 18 19 20












112

น้ําตัวอยางที่เก็บจากคอลัมนเจล ความสูง 10 เซนติเมตร

21 22 23 24 25 26 27 28 29 30












31 32 33 34 35 36 37 38 39 40












113

น้ําตัวอยางที่เก็บจากคอลัมนเจล หลอดที ่

ความสูง 20 เซนติเมตร 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10












11 12 13 14 15 16 17 18 19 20












114

น้ําตัวอยางที่เก็บจากคอลัมนเจล ความสูง 20 เซนติเมตร

21 22 23 24 25 26 27 28 29 30












31 32 33 34 35 36 37 38 39 40












115

รูปที่ 6 กราฟคาการดูดแสงที่ 370 และ 620 นาโนเมตร ของลําดบัหลอดน้ําตัวอยางที่เก็บจากคอลัมน

เจล เซฟาเด็กซ จ-ี25 ความสูง 10 เซนติเมตร

รูปที่ 7 กราฟคาการดูดแสงที่ 370 และ 620 นาโนเมตรของลําดับหลอดน้ําตัวอยางที่เก็บจากคอลัมน

เจลเซฟาเด็กซ จี-25 ความสูง 20 เซนติเมตร

116

สรุปและวิจารณผลการทดลองที่ 9.1 การทดลองที่ 9.2 การแยกสารโดยวิธีไดอะไลซสิ

สารเคมทีี่ใช 1. ถุงเซลโลเฟน (dialysis tubing)

2. สารละลายผสมบลูเดกซแทรน และ เฟอรริกคลอไรด

วิธีทดลอง

1. แชทอเซลโลเฟนยาวประมาณ 2 นิ้ว ใหเปยกเต็มที่ 2. ใชเชือกมัดปลายทอเซลโลเฟนดานหนึ่งและขมวดปมดงึใหแนน 3. เปดปากถุงที่อีกปลายหนึ่งและบรรจุสารละลายผสมลงไปประมาณ 3 มิลลิลิตร แลวใชเชือกมัดปากถุง

ใหแนน ลางทําความสะอาดคราบตางๆ ที่อยูภายนอกถุงใหเรียบรอย 4. แชถุงเซลโลเฟนในบีกเกอรขนาด 250 มิลลิลิตร ทีบ่รรจุน้ํากล่ันไว 177 มิลลิลิตร คนน้ํากล่ันดวย

การใชเครื่อง magnetic stirrer 5. ดูดตัวอยางน้าํในบีกเกอรดวยปเปตออกมาเปนระยะๆ ทุก 3 นาที ครั้งละ 2 มิลลิลิตร ใสลงในหลอด

ทดลองแลวเตมิน้ํากล่ันอีก 1 มิลลิลิตรใหมีปริมาตรรวม 3 มิลลิลิตร เม่ือคาการดูดแสงของสีของน้ําในบีก

เกอรคงที่แลวใหนําถุงเซลโลเฟนออกมาจากบีกเกอร 6. ซับน้าํภายนอกถุงเซลโลเฟนออก ตัดปมแลววัดปริมาตรของสารละลายที่อยูในถงุเซลโลเฟน 7. บันทึกสีและวดัคาการดดูแสงของสารละลายผสม สารละลายที่อยูในถุงเซลโลเฟน และตัวอยางน้ําที่เก็บ

ไดจากบีกเกอรทุกหลอดท่ี 370 นาโนเมตรของเฟอรริกคลอไรดและที่ 620 นาโนเมตรของบลูเดกซแทรน

โดยใชน้ํากลั่นเปนสารละลายเปลาสําหรับตั้งเปอรเซ็นตแสงสองผานเปน 100% กรณีที่วัดคาการดูดแสงที่ความยาวคลืน่ใดไดเกิน 1 ใหเจือจางดวยน้ํากล่ันเพิ่มเขาไปอีก แลวบนัทึกปริมาตรน้ํากล่ันทีไ่ดเตมิลงไป

ทั้งหมดไวสําหรับใชการคาํนวณหาจํานวนเทาที่ไดเจือจางไป 8. นําขอมูลคาการดูดแสงของตวัอยางน้ําแตละหลอดที่เก็บได ณ เวลาตางๆ มาเขียนกราฟ โดยใหแกน

X เปนเวลา และแกน Y เปนคาการดดูแสง 9. นําขอมูลการทดลองมาเปรียบเทียบเพื่อศกึษาชนดิและปริมาณของสารที่อยูภายในและภายนอกถุง เซลโลเฟนกอนทําการทดลองและหลังทําการทดลอง

117

ตารางบันทึกผลการทดลองที่ 9.2-1

หลอดของนาทีที่ 3 6 9 12 15 18 21 24 27 30

ปริมาตรน้ํากลั่นที่เติมลงในตัวอยางน้ํา ที่เก็บจากบีกเกอรทุกๆ 3 นาที(มิลลิลิตร)


จํานวนเทาที่ไดเจือจางไป (ก) คาการดูดแสงที่ 370 นาโนเมตร ที่วัดไดเมื่อเจือจางแลว (ข)

คาการดูดแสงที่ 370 นาโนเมตร ของตัวอยางน้ําท่ีเก็บจากบีกเกอร (= ก × ข กรณีที่มีการเจือจาง)

คาการดูดแสงที่ 620 นาโนเมตร ที่วัดไดเมื่อเจือจางแลว (ค)

คาการดูดแสงที่ 620 นาโนเมตร ของตัวอยางน้ําท่ีเก็บจากบีกเกอร (= ก × ค กรณีที่มีการเจือจาง)

33 36 39 42 45 48 51 54 57 60

ปริมาตรน้ํากลั่นที่เติมลงในตัวอยางน้ํา ที่เก็บจากบีกเกอรทุกๆ 3 นาที(มิลลิลิตร)


จํานวนเทาที่ไดเจือจางไป (ก) คาการดูดแสงที่ 370 นาโนเมตร ที่วัดไดเมื่อเจือจางแลว (ข)

คาการดูดแสงที่ 370 นาโนเมตร ของตัวอยางน้ําท่ีเก็บจากบีกเกอร (= ก × ข กรณีที่มีการเจือจาง)

คาการดูดแสงที่ 620 นาโนเมตร ที่วัดไดเมื่อเจือจางแลว (ค)

คาการดูดแสงที่ 620 นาโนเมตร ของตัวอยางน้ําท่ีเก็บจากบีกเกอร (= ก × ค กรณีที่มีการเจือจาง)

118

ตารางบันทึกผลการทดลองที่ 9.2-2

คาการดูดแสงที ่ สีของสาร 370 นาโนเมตร 620 นาโนเมตร ละลาย

*สารละลายผสมบลูเด็กซแทรนและเฟอรริกคลอไรดกอนทําไดอะไลซิส

น้ําภายนอกถุงเซลโลเฟนกอนทําไดอะไลซสิ

**สารละลายผสมบลูเด็กซแทรนและ เฟอรริกคลอไรด ภายในถุงหลังทําไดอะไลซิส

น้ําภายนอกถุงเซลโลเฟนหลงัทําไดอะไลซสิ

* เจือจางดวยน้ํากล่ัน…………..มิลลิลิตรกอนทําการวัดคาการดูดแสงที ่370 นาโนเมตร เปนการเจือจาง

ไป……………เทา ** เจือจางดวยน้ํากล่ัน………….มิลลิลิตรกอนทําการวัดคาการดดูแสงที…่………….นาโนเมตร เปนการเจือจางไป…………….เทา

รูปที่ 8 กราฟคาการดดูแสงที่ 370 และ 620 นาโนเมตร ของน้ําภายนอกถุงเซลโลเฟนท่ีเก็บ

ณ นาทีตาง ๆ

119

สรุปและวิจารณผลการทดลองที่ 9.2

คําถาม

1. จงเปรียบเทียบวิธีการแยกสารแบบเจลฟลเตรชันและไดอะไลซิส โดยพิจารณาถึงดานตางๆ เชน ความ

รวดเร็ว การเลือกใชกับตัวอยางที่มีปริมาตรมากและนอย การแยกออกเปนสวนยอยๆ ฯลฯ 2. ในการทดลองที่ 9.2 ถาเฟอรริกคลอไรดที่มีอยูในถุงเซลโลเฟนมีความเขมขน 3 โมลารเมื่อถึงภาวะ

สมดุลโดยไมมีการเปลี่ยนน้าํในบีกเกอรเลย เฟอรริกคลอไรดที่อยูในถุงมีความเขมขนเปนเทาใด 3. ในการแยกโปรตีนที่ผสมกันอยูในสารละลาย ซึ่งประกอบดวยโปรตนี ก, ข, ค และ ง ซึ่งมีน้ําหนัก

โมเลกุลเปน 100,000, 30,000, 35,000 และ 60,000 ตามลําดับ โดยใชหลักการของเจลฟลเตรชัน 3.1 ถาทานตองการแยกโปรตีน ง ออกมาใชงานแตเพียงชนดิเดียว ทานจะเลือกใชเจลเซฟาเดกซชนดิใด

และจงใหเหตผุลตอการตัดสินใจของทาน 3.2 เจลเซฟาเดกซที่ทานเลือกใช จะทาํใหโปรตีนถูกชะออกมาตามลําดบัอยางไร ฉบับปรับปรุง 18 สค. 2555

การทดลองที่ 7 เจลฟ...

Documents