Actualités sur le dépistageActualités sur le dépistagedu cancer de la prostate etdu cancer de la prostate etle PSA en pratique courantele PSA en pratique couranteX. RébillardX. Rébillard -- Y. FullaY. FullaX. RébillardX. Rébillard -- Y. FullaY. Fulla

AtelierAtelier B08B08Modérateur : F. ThuillierModérateur : F. Thuillieravec la collaboration de Siemens Diagnosticsavec la collaboration de Siemens Diagnostics38ème Colloque National38ème Colloque Nationaldes Biologistes des Hôpitauxdes Biologistes des HôpitauxMontpellierMontpellier –– 28/09 au 02/10/200928/09 au 02/10/2009

ACNBH

Agrément FMCN° 100 168

DECLARATION D’INTERETDECLARATION D’INTERET

DANS LE CADRE DE MISSIONS DE FORMATIONDANS LE CADRE DE MISSIONS DE FORMATION

REALISEES POUR L’ACNBHREALISEES POUR L’ACNBH

3838èmeème Colloque NationalColloque Nationaldes Biologistes des Hôpitauxdes Biologistes des Hôpitaux

MontpellierMontpellier –– 28/09 au 02/10/200928/09 au 02/10/2009

CNBH2009

Dr. FULLADr. FULLAExerçant au CH COCHINExerçant au CH COCHINdéclare sur l’honneurdéclare sur l’honneurne pas avoir d'intérêtne pas avoir d'intérêt, direct ou indirect (financier) avec les entreprises, direct ou indirect (financier) avec les entreprisespharmaceutiques, du diagnostic ou d’éditionspharmaceutiques, du diagnostic ou d’éditionsen relation avec le DMDIV et/ou le sujet présentéen relation avec le DMDIV et/ou le sujet présenté..

Outils biologiques pour une meilleureOutils biologiques pour une meilleureprise en charge du cancer de la prostateprise en charge du cancer de la prostate

Objectifs : améliorer la sensibilité et laObjectifs : améliorer la sensibilité et la Objectifs : améliorer la sensibilité et laObjectifs : améliorer la sensibilité et laObjectifs : améliorer la sensibilité et laObjectifs : améliorer la sensibilité et laspécificité des moyens de dépistage duspécificité des moyens de dépistage ducancer de prostatecancer de prostate

Diminuer le nombre de biopsies “inutiles”Diminuer le nombre de biopsies “inutiles”

Objectifs : améliorer la sensibilité et laObjectifs : améliorer la sensibilité et laspécificité des moyens de dépistage duspécificité des moyens de dépistage ducancer de prostatecancer de prostate

Diminuer le nombre de biopsies “inutiles”Diminuer le nombre de biopsies “inutiles”

Importance du PSA et problématiqueImportance du PSA et problématique

Augmentation des prescriptions de PSA (dépistageAugmentation des prescriptions de PSA (dépistageindividuel)individuel)

PSAT au dépistage : seuil unique de prescription dePSAT au dépistage : seuil unique de prescription debiopsies (2 ou 4 ng/mL)biopsies (2 ou 4 ng/mL)

CNBH2009

biopsies (2 ou 4 ng/mL)biopsies (2 ou 4 ng/mL)

Quels paramètres en routine clinique : PSAT, PSAL ouQuels paramètres en routine clinique : PSAT, PSAL ouPSAC et ratio L/T ou C/TPSAC et ratio L/T ou C/T

PSATPSAT--PSACPSAC--PSAL : variabilité des dosages /automatesPSAL : variabilité des dosages /automates

Optimisation et perspectivesOptimisation et perspectives

PSA Prostate Specific AntigenPSA Prostate Specific Antigen

Glycoprotéine de 237 AA, PM 33 000, produiteprincipalement par la cellule épithéliale de la prostate (N,HBP, Prostatites et Cancer)

Sérine Protéase de la famille des Kallicréines (HK3) jouantun rôle majeur dans la liquéfaction du liquide séminal

Glycoprotéine de 237 AA, PM 33 000, produiteprincipalement par la cellule épithéliale de la prostate (N,HBP, Prostatites et Cancer)

Sérine Protéase de la famille des Kallicréines (HK3) jouantun rôle majeur dans la liquéfaction du liquide séminal

CNBH2009

un rôle majeur dans la liquéfaction du liquide séminal

Antigénicité importante

Demi-vie : 2-3 jours

Formes circulantes :» PSA libre : 33 kD, immunoréactif, forme prédominante pour N et HBP

» PSA-ACT (100 kD) : immunoréactif, forme prédominante pour cancer

» PSA-AMG (780 kD) : épitopes "occultés" (PSA encapsulé)

un rôle majeur dans la liquéfaction du liquide séminal

Antigénicité importante

Demi-vie : 2-3 jours

Formes circulantes :» PSA libre : 33 kD, immunoréactif, forme prédominante pour N et HBP

» PSA-ACT (100 kD) : immunoréactif, forme prédominante pour cancer

» PSA-AMG (780 kD) : épitopes "occultés" (PSA encapsulé)

IsoformesIsoformes du PSAdu PSA

Biology of Prostate-Specific AntigenSteven P. Balk, Yoo-Joung Ko, and Glenn J. BubleyJ. Clinical Oncology, vol 21, No 2, 2003: 383-391

Prépro-PSA clivé dans cellule

Pro-PSA clivé par HK2

PSA mature actif (237 AA)

Formes autres :- pro-PSA (-2 et -5)

- PSA clivé

Dans le sang le PSA actif estrapidement lié aux anti-protéasesLes autres produits circulent sousforme de PSA libre.

PSA sperme et sang

ACTACTACTACTACTACT

Gel séminal

Passage sang

PSA

PROSTATE

CNBH2009CNBH

2009

PSA

ACTACT

PSA

PSA

AMGAMG

PSA libre : 33 kDa (E. inactive : Lys 145)• prédominant pour N et HBP (20-90%)• ~ 10% dans le cancer de la prostate• demi-vie 1-2h

PSA libre : 33PSA libre : 33 kDakDa (E. inactive : Lys 145)(E. inactive : Lys 145)

•• prédominant pour N et HBP (20prédominant pour N et HBP (20--90%)90%)•• ~ 10% dans le cancer de la prostate~ 10% dans le cancer de la prostate•• demidemi--vie 1vie 1--2h2h

PSA-ACT : 100 kDa (PSA complexé)• minoritaire pour N et HBP• ~ 90% dans le cancer de la prostate• demi-vie 2-3 jours

PSAPSA--ACT : 100ACT : 100 kDakDa (PSA complexé)(PSA complexé)

•• minoritaire pour N et HBPminoritaire pour N et HBP•• ~ 90% dans le cancer de la prostate~ 90% dans le cancer de la prostate•• demidemi--vie 2vie 2--3 jours3 jours

PSA-AMG : 800 kDa (PSA occulté)• encapsulation complète des sites antigéniques• demi-vie très courte 2-3 minutes

PSAPSA--AMG : 800AMG : 800 kDakDa (PSA occulté)(PSA occulté)

•• encapsulationencapsulation complète des sites antigéniquescomplète des sites antigéniques•• demidemi--vie très courte 2vie très courte 2--3 minutes3 minutes

PSAPSAACTACTACT

PSAPSAPSA

PSAPSAPSA

AMGAMGAMG

PSAPSAACTACTACT

PSAPSAPSA

PSAPSAPSA

AMGAMGAMG

PSA SERIQUEPSA SERIQUE

22 -- 44 ngng//mLmL

5050 -- 95% PSA95% PSA--ACTACT

55 -- 50% PSA50% PSA librelibre

( PSA( PSA--AMG nonAMG non dosédosé))

PSA SEMINALPSA SEMINAL

0,30,3 -- 33 mg/mg/mLmL

6060 -- 70%70% actifactif

3030 -- 40%40% inactifinactif

< 5% PSA< 5% PSA -- PCIPCI

PSA

PSA

Liquéfaction

106

PSA : spécificité de tissu, pas de cancerPSA : spécificité de tissu, pas de cancer

Corrélation PSA et volume de la prostate»sécrétion par g de prostate :

tissu normal : sécrétion de 0,3 µg/L/g

tissu cancéreux : sécrétion de 3,5 µg/L/g

» index PSA/volume prostate (écho endorectale) : PSAD N et HBP : 0,044 et Cancer : 0,581 (p<0,002)

Corrélation PSA et volume de la prostate»sécrétion par g de prostate :

tissu normal : sécrétion de 0,3 µg/L/g

tissu cancéreux : sécrétion de 3,5 µg/L/g

» index PSA/volume prostate (écho endorectale) : PSAD N et HBP : 0,044 et Cancer : 0,581 (p<0,002)

CNBH2009

N et HBP : 0,044 et Cancer : 0,581 (p<0,002)

»vélocité : taux de croissance de PSA/an (seuil à 0,75µg/L/an)

Corrélation PSA et stade clinique (pronostic)

Suivi thérapeutique» témoin de la prostatectomie radicale (<LD après qq T)» taux détectable ou croissant : indicateur de récidive» témoin de la radiothérapie et du traitement aux anti-androgènes

N et HBP : 0,044 et Cancer : 0,581 (p<0,002)

»vélocité : taux de croissance de PSA/an (seuil à 0,75µg/L/an)

Corrélation PSA et stade clinique (pronostic)

Suivi thérapeutique» témoin de la prostatectomie radicale (<LD après qq T)» taux détectable ou croissant : indicateur de récidive» témoin de la radiothérapie et du traitement aux anti-androgènes

Variations du PSAVariations du PSAVariations du PSAVariations du PSA Stabilité in vitro

» à température ambiante : 24-48 h

» à 4°C : 14 j

» à -20°C : 6 mois à 12 ans

» après plusieurs cycles de décongélation

Variabilité individuelle

Stabilité in vitro» à température ambiante : 24-48 h

» à 4°C : 14 j

» à -20°C : 6 mois à 12 ans

» après plusieurs cycles de décongélation

Variabilité individuelle

T.R. : variabilité +/T.R. : variabilité +/--

Rétention aiguë des urinesRétention aiguë des urines

ProstatitesProstatites»» Aiguës ++ , ou SubaiguësAiguës ++ , ou Subaiguës

Ejaculation :Ejaculation :

T.R. : variabilité +/T.R. : variabilité +/--

Rétention aiguë des urinesRétention aiguë des urines

ProstatitesProstatites»» Aiguës ++ , ou SubaiguësAiguës ++ , ou Subaiguës

Ejaculation :Ejaculation :

CNBH2009

Variabilité individuelle» pas de cycle circadien

» diminution chez les patients

hospitalisés

(18-50% 24h après admission)

» augmentation avec l'âge

» variabilité ethnique

Variabilité individuelle» pas de cycle circadien

» diminution chez les patients

hospitalisés

(18-50% 24h après admission)

» augmentation avec l'âge

» variabilité ethnique

»» augmentation moyenne de 0,8 ng/mLaugmentation moyenne de 0,8 ng/mL

1 heure après (87 % des cas)1 heure après (87 % des cas)

»» Retour à la N en 48 h (97 % des cas)Retour à la N en 48 h (97 % des cas)

Echographie endorectale ?Echographie endorectale ?

Biopsie de la prostateBiopsie de la prostate

Finastéride (Chibroproscar) :Finastéride (Chibroproscar) :baisse de 50 % après 6 mois de traitementbaisse de 50 % après 6 mois de traitement

»» augmentation moyenne de 0,8 ng/mLaugmentation moyenne de 0,8 ng/mL

1 heure après (87 % des cas)1 heure après (87 % des cas)

»» Retour à la N en 48 h (97 % des cas)Retour à la N en 48 h (97 % des cas)

Echographie endorectale ?Echographie endorectale ?

Biopsie de la prostateBiopsie de la prostate

Finastéride (Chibroproscar) :Finastéride (Chibroproscar) :baisse de 50 % après 6 mois de traitementbaisse de 50 % après 6 mois de traitement

P S A totalP S A totalDiscordances entre les dosagesDiscordances entre les dosages

P S A totalP S A totalDiscordances entre les dosagesDiscordances entre les dosages

Causes de variation du PSAAnalytique, physiologique, intertechniques

Architecture du dosage “sandwich”

Composition des Ag

Causes de variation du PSAAnalytique, physiologique, intertechniques

Architecture du dosage “sandwich”

Composition des Ag

CNBH2009

Composition des Ag

Spécificité des AC

RemèdesHarmonisation “Stanford”

Equimolarité

Importance d’un dosage correct de PSA

Composition des Ag

Spécificité des AC

RemèdesHarmonisation “Stanford”

Equimolarité

Importance d’un dosage correct de PSA

Y. Fulla2004

SignalSignal

ConcentrationConcentration

IRMAIRMA

11 22AgAg

Différences entre méthodesDifférences entre méthodes

Standardisation (YangStandardisation (Yang-- Hybritech)Hybritech)22°°IC on PSA Stanford (Sept 1994) désigneIC on PSA Stanford (Sept 1994) désignele Standard International :le Standard International :

-- 90% PSA90% PSA--ACTACT

Standardisation (YangStandardisation (Yang-- Hybritech)Hybritech)22°°IC on PSA Stanford (Sept 1994) désigneIC on PSA Stanford (Sept 1994) désignele Standard International :le Standard International :

-- 90% PSA90% PSA--ACTACT

CNBH2009

-- 10% PSA libre10% PSA libre

•• PSA total : standard OMS 96/670PSA total : standard OMS 96/670

•• PSA libre : standard OMS 96/668PSA libre : standard OMS 96/668

Spécificité des ACSpécificité des AC»»Polyclonaux, MonoclonauxPolyclonaux, Monoclonaux»»Reconnaissance EQM des formes libreReconnaissance EQM des formes libre--liéeliée

-- 10% PSA libre10% PSA libre

•• PSA total : standard OMS 96/670PSA total : standard OMS 96/670

•• PSA libre : standard OMS 96/668PSA libre : standard OMS 96/668

Spécificité des ACSpécificité des AC»»Polyclonaux, MonoclonauxPolyclonaux, Monoclonaux»»Reconnaissance EQM des formes libreReconnaissance EQM des formes libre--liéeliée

Contrôle de qualité externeContrôle de qualité externe

•• Probioqual : contrôle externeProbioqual : contrôle externe

CNBH2009

•• Afssaps : CQ et évaluationAfssaps : CQ et évaluation

Principaux systèmes de dosage PSATPrincipaux systèmes de dosage PSAT

Roche 26 %Roche 26 %

Abbott 24 %Abbott 24 %

Siemens 17 %Siemens 17 %(Bayer 8%, DPC 7%, Dade 2%)(Bayer 8%, DPC 7%, Dade 2%)

(Probioqual 2009 sur 600 PSAT)(Probioqual 2009 sur 600 PSAT)

Abbott 28 %Abbott 28 %

Biomérieux 25 %Biomérieux 25 %

Siemens 12 %Siemens 12 %(Bayer 6%, DPC 5%, Dade 1%)(Bayer 6%, DPC 5%, Dade 1%)

(Afssaps 2008 sur 1900 PSAT)(Afssaps 2008 sur 1900 PSAT)

CNBH2009

(Bayer 8%, DPC 7%, Dade 2%)(Bayer 8%, DPC 7%, Dade 2%)

Beckman 12 %Beckman 12 %

Biomérieux 9 %Biomérieux 9 %

Tosoh 8 %Tosoh 8 %

Kryptor 4 %Kryptor 4 %

(Bayer 6%, DPC 5%, Dade 1%)(Bayer 6%, DPC 5%, Dade 1%)

Roche 15 %Roche 15 %

Beckman 12 %Beckman 12 %

Tosoh 6 %Tosoh 6 %

Kryptor 2 %Kryptor 2 %

Divers 1 % ( dont Hybritech Tandem RIA, Prostatus Autodelfia)Divers 1 % ( dont Hybritech Tandem RIA, Prostatus Autodelfia)

ProbioqualProbioqual20062006

CNBH2009

ProbioqualProbioqual20082008

CNBH2009

Probioqual 2007Probioqual 2007

CNBH2009

PSA libre 2007PSA libre 2007

CNBH2009

Contrôles AfssapsContrôles Afssaps (M. Noël)(M. Noël)

Composition :Composition :»» Matrice sérique d’origine humaine (pool de donneurs)Matrice sérique d’origine humaine (pool de donneurs)»» Surchargée avecSurchargée avec

Liquide séminal humain (PSA libre)Liquide séminal humain (PSA libre)

PSAPSA--ACT (PSA total)ACT (PSA total)

CNBH2009

PSAPSA--ACT (PSA total)ACT (PSA total)

»» LyophilisésLyophilisés

Essais de conformités avant l’envoi :Essais de conformités avant l’envoi :»» Homogénéité du lotHomogénéité du lot»» Innocuité virale, stérilité bactérienneInnocuité virale, stérilité bactérienne»» Vérification des spécifications et stabilité desVérification des spécifications et stabilité des

échantillons après reconstitution (48 H à 4échantillons après reconstitution (48 H à 4°°C)……C)……

6 0

8 0

1 0 0

1 2 0L

/T%

IA4 1

IA4 0

IA3 7

IA3 6

IA3 3

IA3 2

IA2 9

IA2 8

C.N.Q. AFSSAPS1996

1999

2000

2001

CNBH2009

0

2 0

4 0

-5 0 5 1 0 1 5 2 0 2 5 3 0 3 5 4 0 4 5 5 0 5 5 6 0

P S AT

IA5 7

IA5 5

IA5 1

IA5 0

IA4 7

IA4 62003

2005

2007

2008Diagramme ratio PSA-L/PSA-T par type de contrôle

Plus l’échantillon est riche en PSA, plus la variabilité inter-techniques’accroît pour le PSA-T et pour le rapport PSA-L / PSA-T

La dispersion inter-technique du rapport PSA-L / PSA-T est toujourstrès importante et peut poser problème dans la zone décisionnelle.

50

60

70

80

90

100

110L

/T%

Réponse CNQ Afssaps par technique(2005)

PSA US MagiaPSA 3G ImmuliteMagia 120LKryptorImxImmuno1ImmuliteI1/CisElecsysCobas Core IICisbioAxsym/AEFSMArchitectAIAACS 180/Advia CentaurACS 180Access/Access Hybritech

CNBH2009

0

10

20

30

40

50

-,5 0 ,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 4 4,5

Ln PSAT

VitrosVidasPSA US Magia

Diagramme ratio L/T par système de dosage

Le ratio L/T % est estimé de façon très différented’une trousse à l’autre. Quel que soit l’échantillon,le comportement des trousses est similaire :

* Elecsys et Cobas Core : L/T % le plus bas

* Vidas : L/T % le plus élevé

Réponses par technique (2008)

60

80

100

120

L/T

% Hybritech Tandem

Elecsys

Dimension

Cobas Core II

Cisbio

Axsym/AEFSM

Architect

AIA

ACS 180/Advia Centaur

ACS 180

Access/Access Hybritech

CNBH2009

0

20

40

60

L/T

%

-,5 0 ,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 4 4,5

LnPSAT

VitrosVidiaVidasRIA

PSA US Magia

PSA 3G Immulite

Magia 120L

Kryptor

Imx

Immuno1

Immulite

I1/Cis

50

60

70

80

90

100

L/T

%

2000

2005

2001

Vidia

Vidas

PSA 3G Immulite

Kryptor

Imx

Immulite

Hybritech Tandem

Elecsys

Dimension

Cobas Core II

Axsym/AEFSM

Architect

AIA

ACS 180/Advia Centaur

Access/Access HybritechRéponses par technique

50

60

70

80

90

100

L/T

%

2000

2005

2001

CNBH2009

IA57

IA55

IA51

IA50

IA47

IA46

IA41

IA40

IA37

IA36 2000

2001

2003

2005

20072008

0

10

20

30

40

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10PSAT

2007

20082003

2005

Vidia

0

10

20

30

40

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10PSAT

2007

20082003

2005

Contrôle de marché PSAContrôle de marché PSA (G. Lebrun)(G. Lebrun)

ProblématiqueProblématique

»» CNQ PSA total : CV inter techniques satisfaisants 1999, 2000, 2001CNQ PSA total : CV inter techniques satisfaisants 1999, 2000, 2001

(10%). CV accru en 2002 (14(10%). CV accru en 2002 (14--16%). Augmentation dûe à16%). Augmentation dûe à

l’apparition de nouvelles techniques ?l’apparition de nouvelles techniques ?

»» CNQ PSA libre (ou complexé) : CV très important (30%)CNQ PSA libre (ou complexé) : CV très important (30%)

CNBH2009

»» CNQ PSA libre (ou complexé) : CV très important (30%)CNQ PSA libre (ou complexé) : CV très important (30%)

Mise en place d’un contrôle du marché PSA :Mise en place d’un contrôle du marché PSA :

»» Exactitude PSA total (par rapport au standard)Exactitude PSA total (par rapport au standard)

»» Equimolarité PSA totalEquimolarité PSA total

»» Exactitude PSA libre (par rapport au standard)Exactitude PSA libre (par rapport au standard)

»» Evaluation des notices (Directive 98/79/CE)Evaluation des notices (Directive 98/79/CE)

Protocole techniqueProtocole technique

* Dosage des échantillons 2, 4 et 10 ng/ml de* Dosage des échantillons 2, 4 et 10 ng/ml dePSA total présentant des taux de 0, 25, 50, 75 etPSA total présentant des taux de 0, 25, 50, 75 et100% de PSA libre100% de PSA libre

* Ces échantillons ont été préparés à partir des* Ces échantillons ont été préparés à partir des

CNBH2009

* Ces échantillons ont été préparés à partir des* Ces échantillons ont été préparés à partir desstandards (PSA libre, PSA complexé) destandards (PSA libre, PSA complexé) del’Université de Stanford (Stamey), dilués dans dul’Université de Stanford (Stamey), dilués dans dutampon PBS + BSA 1%tampon PBS + BSA 1%

* Dosage en triple par site (45 dosages/trousse)* Dosage en triple par site (45 dosages/trousse)

Environ 1800 dosages réalisésEnviron 1800 dosages réalisés

Résultats ExactitudeRésultats ExactitudePSA totalPSA total

8 dispositifs sur 21 présentent des résultats8 dispositifs sur 21 présentent des résultats

satisfaisants selon expertssatisfaisants selon experts

* ADVIA CENTAUR PSA (Siemens)* ADVIA CENTAUR PSA (Siemens)

* ACS 180 PSA (Siemens)* ACS 180 PSA (Siemens)

* ADVIA IMS PSA (Siemens)* ADVIA IMS PSA (Siemens)

PSA librePSA libre8 dispositifs sur 19 présentent des résultats8 dispositifs sur 19 présentent des résultats

satisfaisants selon expertssatisfaisants selon experts

* ARCHITECT PSA Libre (Abbott)* ARCHITECT PSA Libre (Abbott)

* IMX PSA Libre (Abbott)* IMX PSA Libre (Abbott)

* AXSYM PSA Libre (Abbott)* AXSYM PSA Libre (Abbott)

CNBH2009

* ADVIA IMS PSA (Siemens)* ADVIA IMS PSA (Siemens)

* KRYPTOR PSA Total (Brahms),* KRYPTOR PSA Total (Brahms),

* TPSA FLEX DIMENSION (Siemens)* TPSA FLEX DIMENSION (Siemens)

* PSA Total IRMA (Diasorin),* PSA Total IRMA (Diasorin),

* IMMULITE 2000 PSA 3G (Siemens)* IMMULITE 2000 PSA 3G (Siemens)

* PROSTATUS AUTODELFIA* PROSTATUS AUTODELFIA

PSA libre/PSA total (Perkin Elmer)PSA libre/PSA total (Perkin Elmer)

* AXSYM PSA Libre (Abbott)* AXSYM PSA Libre (Abbott)

* ACS 180 CPSA (Siemens)* ACS 180 CPSA (Siemens)

* TANDEM HYBRITECH R PSA Libre* TANDEM HYBRITECH R PSA Libre

(Beckman)(Beckman)

* PROSTATUS AUTODELFIA PSA* PROSTATUS AUTODELFIA PSA

libre/PSA total (Perkin Elmer)libre/PSA total (Perkin Elmer)

* FREE PSA ELECSYS (Roche)* FREE PSA ELECSYS (Roche)

* AIA PACK UCPA (Tosoh).* AIA PACK UCPA (Tosoh).

Résultats EquimolaritéRésultats EquimolaritéCapacité du système à reconnaître de façon identique les formes libre et liée

8 dispositifs sur 21 présentent des résultats satisfaisants selon experts :

* ARCHITECT PSA TOTAL (Abbott)

* AXSYM PSA TOTAL (Abbott)

CNBH2009

* AXSYM PSA TOTAL (Abbott)

* TANDEM HYBRITECH R PSA (Beckman)

* PSA TOTAL IRMA (Diasorin)

* IMMULITE 2000 PSA 3G (Siemens)

* VITROS (Ortho Clinical Diagnostics)

* PROSTATUS AUTODELFIA PSA libre/PSA total (Perkin Elmer)

* AIA PACK PA (Tosoh Bioscience).

Bilan CNQ et évaluation AfssapsBilan CNQ et évaluation Afssaps Malgré l’utilisation par un nombre à peu près constant deMalgré l’utilisation par un nombre à peu près constant de

laboratoires, de trousses présentant à titre individuel unelaboratoires, de trousses présentant à titre individuel uneprécision correcteprécision correcte

Les données recueillies par le CNQ depuis 1999 montrentLes données recueillies par le CNQ depuis 1999 montrentl’existence de dispersions interl’existence de dispersions inter--techniques non négligeablestechniques non négligeablespour les dosages du PSA total et du PSA libre.pour les dosages du PSA total et du PSA libre.

CNBH2009

pour les dosages du PSA total et du PSA libre.pour les dosages du PSA total et du PSA libre.

Il en découle une variabilité du rapport PSAIl en découle une variabilité du rapport PSA--L / PSAL / PSA--TTtoujours très importante difficilement conciliable avec latoujours très importante difficilement conciliable avec lanotion de seuil diagnostic uniquenotion de seuil diagnostic unique

Besoin de recommandations pour harmoniser les résultatsBesoin de recommandations pour harmoniser les résultats(standardisation,…)(standardisation,…)

Résultats et annales sur :Résultats et annales sur : www.afssaps.sante.fr

Optimisation des performances du PSAOptimisation des performances du PSA Données connuesDonnées connues

»» PSAT : zone grise de 4 à 10 ng/L (2 à 10)PSAT : zone grise de 4 à 10 ng/L (2 à 10)

»» PSAD : fiabilité estimation US volume prostatePSAD : fiabilité estimation US volume prostate

»» Ajustement PSAT à l’âgeAjustement PSAT à l’âge

Ratio PSAL/PSATRatio PSAL/PSAT

CNBH2009

Ratio PSAL/PSATRatio PSAL/PSAT»» Zone grise de 10% à 25%Zone grise de 10% à 25%

PSA complexé et ratio PSAC/PSATPSA complexé et ratio PSAC/PSAT

Formes moléculaires du PSA libreFormes moléculaires du PSA libre

Cinétique d’un marqueur tumoralCinétique d’un marqueur tumoral»» Ajustement monoexponentielle , TDAjustement monoexponentielle , TD

Algorithme probabilité de cancer de prostateAlgorithme probabilité de cancer de prostate

Normes en fonction de l'âgeNormes en fonction de l'âge

Age (ans) 40-49 50-59 60-69 70-79

PSA µg/L 0-2,5 0-3,5 0-4,5 0-6,5

Age (ans) 40-49 50-59 60-69 70-79

PSA µg/L 0-2,5 0-3,5 0-4,5 0-6,5

CNBH2009

PSA µg/L 0-2,5 0-3,5 0-4,5 0-6,5

Volume P mL 13-51 15-60 17-70 20-82

PSAD µg/L / mL 0-0,08 0-0,10 0-0,11 0-0,13

PSA µg/L 0-2,5 0-3,5 0-4,5 0-6,5

Volume P mL 13-51 15-60 17-70 20-82

PSAD µg/L / mL 0-0,08 0-0,10 0-0,11 0-0,13

Oesterling et Coll.Oesterling et Coll.

JAMA 1993 / 270, 7, 860JAMA 1993 / 270, 7, 860--864864

Oesterling et Coll.Oesterling et Coll.

JAMA 1993 / 270, 7, 860JAMA 1993 / 270, 7, 860--864864

PSAL : PSA libre par dosage direct.ex : IRMA Cisbio, AxSym Abbott, Vidas Biomérieux, ...

PSA complexé ou PSAL indirect : PSA libre calculépar différence entre les dosages de PSA total et PSAcomplexé à l’ACT (FPSAi = TPSA – CPSA).

PSAL : PSA libre par dosage direct.ex : IRMA Cisbio, AxSym Abbott, Vidas Biomérieux, ...

PSA complexé ou PSAL indirect : PSA libre calculépar différence entre les dosages de PSA total et PSAcomplexé à l’ACT (FPSAi = TPSA – CPSA).

Différentes déterminations du PSA libreDifférentes déterminations du PSA libre

CNBH2009

complexé à l’ACT (FPSAi = TPSA – CPSA).ex : Immuno 1, Centaur (Bayer)

PSA non complexé : PSA libre obtenu après blocagedu PSA complexé à l’ACT par le réactif ACTPR(Scantibodies) puis dosage par un réactif TPSA.ex : d’origine pour AIA 21 (Tosoh), possible pour d’autressystèmes (Immuno 1 Bayer, ...)

complexé à l’ACT (FPSAi = TPSA – CPSA).ex : Immuno 1, Centaur (Bayer)

PSA non complexé : PSA libre obtenu après blocagedu PSA complexé à l’ACT par le réactif ACTPR(Scantibodies) puis dosage par un réactif TPSA.ex : d’origine pour AIA 21 (Tosoh), possible pour d’autressystèmes (Immuno 1 Bayer, ...)

CPSACPSACPSACPSACPSA ng/mLCPSA ng/mLCPSA ng/mLCPSA ng/mL

60606060

70707070

80808080

90909090

100100100100

C / T %C / T %C / T %C / T %

C/T%C/T%C/T%C/T% L/T%L/T%L/T%L/T%

60606060

70707070

80808080

90909090

100100100100

FPSA / PSAT %FPSA / PSAT %FPSA / PSAT %FPSA / PSAT %

NNNNKKKKAAAA

10101010

100100100100

CNBH2009

0000

10101010

20202020

30303030

40404040

50505050

60606060

0000

10101010

20202020

30303030

40404040

50505050

60606060

0,10,10,10,1

1111

5050

6060

7070

8080

9090

100100

KK

AA

RVVTRVVT

PP

NN

F Cis / T I1 %F Cis / T I1 %

PSAL/PSAT (n = 450)PSAL/PSAT (n = 450)PSAL/PSAT (n = 450)PSAL/PSAT (n = 450)

L/T% Sensibilité Spécificité

seuil 10% 35% 99%

seuil 18% 70% 90%

seuil 25% 90% 50%

Sujet jeune (<50 ans) :

L/T% Sensibilité Spécificité

seuil 10% 35% 99%

seuil 18% 70% 90%

seuil 25% 90% 50%

Sujet jeune (<50 ans) :

CNBH2009

00

1010

2020

3030

4040

0.10.1 11 1010 100100 10001000 PSAT I1PSAT I1

privilégier la SensibilitéPSAT 2 ng/mL, Ratio haut 25%

Sujet agé (>70 ans) :privilégier la SpécificitéPSAT 6 ng/mL, Ratio bas 10%

privilégier la SensibilitéPSAT 2 ng/mL, Ratio haut 25%

Sujet agé (>70 ans) :privilégier la SpécificitéPSAT 6 ng/mL, Ratio bas 10%

Active PSAActive PSA

Inactive PSAInactive PSAPro-PSA

Prostate cancerProstate cancer ::

La désorganisation des cellulesLa désorganisation des celluleset de la membrane basaleset de la membrane basalesentraîne une diminution de laentraîne une diminution de latransformation luminale du protransformation luminale du pro--PSA en PSA actif et du PSAPSA en PSA actif et du PSAactif en PSA inactif. On observeactif en PSA inactif. On observealors une augmentation relativealors une augmentation relativede PSA lié et de prode PSA lié et de pro--PSA dansPSA dansle sang. Une perte partielle desle sang. Une perte partielle des

Isoformes du PSAIsoformes du PSA

CNBH2009

ACTACT ACTACT

Prostate normaleProstate normale ::

L’épithélium sécrétoire entouré par les cellules et la membrane basale sécrète leL’épithélium sécrétoire entouré par les cellules et la membrane basale sécrète lepropro--PSA dans la lumière où HK2 scinde le proPSA dans la lumière où HK2 scinde le pro--peptide en PSA actif. Une partie depeptide en PSA actif. Une partie dece PSA actif diffuse dans le sang où il se lie rapidement aux inhibiteurs dece PSA actif diffuse dans le sang où il se lie rapidement aux inhibiteurs deprotéases (principalement l’alpha1protéases (principalement l’alpha1--antichymotrypsine ACT). Ce PSA actif subitantichymotrypsine ACT). Ce PSA actif subitaussi dans la prostate des clivages pour donner du PSA inactif qui peut passer dansaussi dans la prostate des clivages pour donner du PSA inactif qui peut passer dansle sang où il ne se liera pas aux antile sang où il ne se liera pas aux anti--protéases et circulera sous forme de PSA libre.protéases et circulera sous forme de PSA libre.

le sang. Une perte partielle desle sang. Une perte partielle descellules basales est observéecellules basales est observéedans les états PIN (Prostaticdans les états PIN (ProstaticIntraepith. Neoplasia)Intraepith. Neoplasia)

Steven Balk, Yoo-JoungKo, and Glenn BubleyJ. Clin. Oncol., vol 212,2003: 383-391

Cinétique du PSA au dépistageCinétique du PSA au dépistage Le profil cinétique est informatif dans le cadre du dépistage du cancer de la

prostate avec calcul des paramètres cinétiques : pente de croissance, temps

de doublement (la vélocité annuelle linéaire est une interpolation simplifiée).» Le seuil de PSAV usuellement fixé à 0,75 ng/mL/an a été abaissé à 0,35 ng/mL/an,

» correspondant à un TD de 4 ans calculé d’après le modèle de croissance exponentielle.

Possibilité d’une exploitation cinétique : un profil cinétique permet de suivre

l’évolution du cancer par l’évolution du PSA circulant.

CNBH2009

l’évolution du cancer par l’évolution du PSA circulant.» différencier K et NK selon le type de croissance du PSA.

» différencier K rapidement évolutif (agressif et/ou métastatique) et K d’évolution lente

K évolutif = croissance importante, d’où taux de production de PSA important avec TD court (< 4 ans)

K peu évolutif = croissance lente avec TD long (> 10 ans)

(d’après Benecchi,Urol 2007) Statut Pente de croissance (k)

Type decroissance TD

Contrôle Non-Cancer <0,1 ng/mL/an Linéaire > 70 ans

HBP Non-Cancer 0,1 à 0,3 ng/mL/an Linéaire 12 à 17 ans

Cancer localisé Cancer 0,5 à 3 ng/mL/an Exponentielle < 3 ans

Cancer métastasé Cancer 1 à 26 ng/mL/an Exponentielle < 2 ans

2525

3030

3535

4040

4545

5050

PSA µg/LPSA µg/L

06 /9106 /91YangYang

04 / 9104 / 91YangYang

11 / 9411 / 94

07 / 9207 / 92YangYang

**

**

**

****

****

CochinCochin

LAMLAM

TPSA et FPSATPSA et FPSAR = 31 %R = 31 % (97/02)(97/02)

R = 29 %R = 29 % (97/04)(97/04)

Opéré en Mai 97Opéré en Mai 97Histo : Adénome sans signe deHisto : Adénome sans signe de

malignitémalignité

TPSA et FPSATPSA et FPSAR = 31 %R = 31 % (97/02)(97/02)

R = 29 %R = 29 % (97/04)(97/04)

Opéré en Mai 97Opéré en Mai 97Histo : Adénome sans signe deHisto : Adénome sans signe de

malignitémalignité

CNBH2009

00

55

1010

1515

2020

2525

Zone de NormalitéZone de Normalité

09 / 9309 / 93HybritechHybritech

02 / 9702 / 97BayerBayer

11 / 9411 / 94Elsa 1Elsa 1

10 / 9610 / 96Elsa 2Elsa 2

04 / 9704 / 97BayerBayer

******

**

**

Cinétique PSACinétique PSA

CNBH2009

00

55

1010

1515

2020

2525

3030

3535

4040

4545

5050

19901990 19911991 19921992 19931993 19941994 19951995 19961996 19971997 19981998

Zone de référenceZone de référence

PSA µg/LPSA µg/L

RTUPRTUP

RTUPRTUP

01/9101/91Elsa 1Elsa 1

01/9001/90YangYang

04/9604/96BayerBayer

05/9705/9701/9801/98LCLLCL

11/9811/98DiaconnessesDiaconnesses

03/9903/99LCLLCL

R=16%R=16%R=23%R=23%

R=18%R=18%

BiopsieBiopsieBB--

BB --

BB --BB --

BB --BB --

BB --

Suivi de PSA total pendant 10 ansSto. (né en 1929)

Suivi de PSA total pendant 10 ansSuivi de PSA total pendant 10 ansStoSto. (n. (néé en 1929)en 1929)

ChibroChibroChibro

XatralXatralXatral

ChibroChibroChibro

XatralXatralXatral

CNBH2009

Suivi de PSA total (WSuivi de PSA total (W…… , 1927), 1927)

000

555

101010

151515

202020

252525

303030

353535

PSA µg/LPSA µg/LPSA µg/L

Zone de référenceZone de référenceZone de référence

RTUPRTUPRTUP

1°B-1°B1°B--

198919891989 199019901990 199119911991 199219921992 199319931993 199419941994

ScalScalScal

2°B-2°B2°B--

3°B-3°B3°B--

4°B+4°B+4°B+

LCLLCLLCL

LCLLCLLCLR=8%R=8%R=8%

199519951995 199619961996

ScalScalScalScalScalScal

CNBH2009CNBH

2009

00

55

1010

1515

2020

2525

3030

3535

4040

4545

5050

00 500500 10001000 15001500 20002000 25002500 30003000 35003500

1° B1° B-- 2° B2° B-- 3° B3° B-- 4° B4° B-- 6° B6° B-- 7° B7° B--RTUPRTUP

Modèle exponentiel :Taux initial 13,5 ng/mL

Croissance 1,06 fois par anTD 13 ans

Modèle exponentielModèle exponentiel ::Taux initial 13,5Taux initial 13,5 ngng/mL/mL

Croissance 1,06 fois par anCroissance 1,06 fois par anTD 13 ansTD 13 ans

Temps (j)Temps (j)

PSAPSA ngng/mL/mL

PSATPSAT

CroissanceCroissance

R%R%

Cinétique PSATCinétique PSAT

StoSto.. (9/09/29)(9/09/29)

0%0%

5%5%

10%10%

15%15%

20%20%

25%25%

30%30%

35%35%

40%40%

45%45%

50%50%

R%R%

RTUPRTUP

5° B5° B--

CNBH2009

00

55

1010

1515

2020

2525

3030

3535

4040

4545

5050

00 500500 10001000 15001500 20002000 25002500 30003000

Temps (j)Temps (j)

0%0%

5%5%

10%10%

15%15%

20%20%

25%25%

30%30%

35%35%

40%40%

45%45%

PSATPSAT

CroissanceCroissanceCroissance

R%R%R%

Modèle exponentiel :

Taux initial 9,8 ng/mLCroissance 1,2 fois par an

TD = 3,6 ans

Modèle exponentielModèle exponentiel ::

Taux initial 9,8Taux initial 9,8 ngng/mL/mL

Croissance 1,2 fois par anCroissance 1,2 fois par anTD = 3,6 ansTD = 3,6 ans

AdénoKAdénoK GleasonGleason 2+32+3

CinCinéétique W.H.tique W.H.

1°B-1°B1°B-- 2°B-2°B2°B-- 3°B-3°B3°B-- 4°B+4°B+4°B+

PSAPSA ngng/mL/mL

Pics PSAPics PSA

Cinétique PSA

0,1

1,0

10,0

100,0

déc-96 déc-97 déc-98 déc-99 déc-00 déc-01 déc-02 déc-03 déc-04 déc-05

PS

AT

ng

/mL

0%

1%

10%

100%

PSAT

Croissance

R% (N>18%)

Modèle exponentiel :

Taux initial 1,05 ng/mL

Croissance x1,10 par an

TD = 7 ans

CNBH2009

Gar. (1923)

0

5

10

15

20

25

0 365 730 1095 1460 1825 temps (j)temps (j)

PSA ng/mL

0%

5%

10%

15%

20%

25%

30%

35%

40%

45%

50%

TPSA

Croiss. expo

Ratio %

:Modèle exponentielPSA initial 7,28 ng/mLCroissance x 1,3/an

TD = 3 ans

1°B-(6)

3°B±(6)

2°B-(8)

4°B+(8)

4°B+ : AdénoK Gleason 6/10PR 28/05/97 Gleason 5/10

Gar.Gar. (1923)(1923)

06/92 06/93 06/94 06/95 06/96 06/97

CNBH2009

CinétiquePSA

0

5

10

15

20

25

30

0 183 365 548 730 913 1095 1278 1460 1643 1825 2008 2190 2373 2555

Temps (j)

PS

AT

ng/m

L

0%

5%

10%

15%

20%

25%

30%

35%

40%

45%

50%

55%

60%

PSAT

Croissance

R%(N>18%)

Modèle exponentiel :

Tauxinitial 2,86ng/mL

Croissance x1,1par an

TD=5,8ans

1°B- 2°B-

CinétiquePSA

0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

0 183 365 548 730 913 1095 1278 1460 1643 1825 2008 2190

Temps (j)

PS

AT

ng/m

L

0%

5%

10%

15%

20%

25%

30%

35%

40%

45%

50%

PSAT

Croissance

R%(N>18%)

Modèle exponentiel :

Tauxinitial 2,5ng/mL

Croissance x1,13par an

TD=5,9ans

Modèle exponentiel sans pics :

Taux initial 2,37 ng/mL

Croissance x1,08 par an

TD=9,5 ans

Calcul de risque de KPCalcul de risque de KP

CNBH2009

Risque nRisque néégatif : cas 1gatif : cas 1

CNBH2009

Risque positifRisque positif

CNBH2009CNBH

2009

Risque nRisque néégatif : cas 2gatif : cas 2

CNBH2009

ProstataClassProstataClassDr. StephanDr. Stephan (AACC 2002)(AACC 2002)

•• 6 centres : All6 centres : All--HollHoll--CanCan

•• 1200 biopsies K ou HBP1200 biopsies K ou HBP

•• Se détection KP > ratioSe détection KP > ratio

•• PSA entre 2 et 4 : ANN a détecté 72% et 65%PSA entre 2 et 4 : ANN a détecté 72% et 65%de K avecde K avec SpSp 90% et 95% respectivement.90% et 95% respectivement.

•• ROC :ROC : tPSAtPSA = 0.54= 0.54%%fPSAfPSA = 0.76= 0.76

ANN = 0.88ANN = 0.88

www.charite.de/ch/uro/SitemapProstatabiopsieProClass.zip

Les marqueurs d’agressivité tumoraleLes marqueurs d’agressivité tumorale Marqueurs ARN :Marqueurs ARN : PCA3PCA3 (ARNm mesuré dans les urines après massage prostatique exprimé(ARNm mesuré dans les urines après massage prostatique exprimé

en score PCA3 ou rapport ARNm PCA3/ARNm PSA x 1000 avec seuil à 35)en score PCA3 ou rapport ARNm PCA3/ARNm PSA x 1000 avec seuil à 35)

Métabolomes (profil protéomique) :Métabolomes (profil protéomique) : SarcosineSarcosine (dérivé N-methyl de la glycine trèsélevé dans les KP en progression métastatique et détecté dans les urines)

Marqueurs protéiques :» PSCA (Prostate Stem Cell Antigen) : protéine membranaire fortement exprimée dans le K

métastatique, marqueur cellulaire urinaire après massage prostatique et marqueur pourl’imagerie In Vivo avec Ac humanisé marqué.

» EPCA (Early Prostate Cancer Antigen) : protéines matrice nucléaire dont les altérations sont

CNBH2009

» EPCA (Early Prostate Cancer Antigen) : protéines matrice nucléaire dont les altérations sontcommunément associées au KP.

» uPA (Sérine Protéase) et uPAR (Récepteur spécifique ou urokinase-type PlasminogenActivator Receptor) : ces protéines semblent liées à la progression tumorale.

»» gènes de fusion sur CTC, marqueurs urinaires potentielsgènes de fusion sur CTC, marqueurs urinaires potentiels

» AMACR (Alpha-MethylAcyl-CoA Racemase) enzyme impliquée dans le métabolismeoxydatif et la biosynthèse des AG, surexprimée dans les tissus P tumoraux (Ac sur biopsie)

Antibodyomes (profil immunomique) :Antibodyomes (profil immunomique) : détection d’autodétection d’auto--Ac contre Ag tumeurAc contre Ag tumeur

Autres :Autres : Annexine 3,Annexine 3, kallikrein-related peptidase 2 (KLK2), marqueurs sécrétées oumembranaires des cellules circulantes, etc…

ConclusionConclusion

Harmonisation analytique :Harmonisation analytique :»» PSA total : ouiPSA total : oui

»» PSA libre et ratio L/T ou C/T : nonPSA libre et ratio L/T ou C/T : non

Utilisation clinique usuelle :Utilisation clinique usuelle :

CNBH2009

Utilisation clinique usuelle :Utilisation clinique usuelle :»» PSA total et ratio L/T % ou C/T % au dépistagePSA total et ratio L/T % ou C/T % au dépistage

»» Cinétique PSA total ou PSA complexéCinétique PSA total ou PSA complexé

en suivi thérapeutique : nadiren suivi thérapeutique : nadir -- T1/2T1/2 -- TDTD

possible au dépistagepossible au dépistage

Nouveaux marqueurs à validerNouveaux marqueurs à valider»» PCA3, Sarcosine, Annexine ….PCA3, Sarcosine, Annexine ….

Modalités de pratique du PSAModalités de pratique du PSA

Questionnaire à remplir sur l’adresse suivante: http://enquetes.urologie.org/index.php?sid=18

Objectifs : état des lieux sur les pratiques du dosage PSA

Au niveau technique : choix des systèmes recommandés

CNBH2009

Standardisation internationale reconnue

Contrôle de Qualité pour guider le choix des réactifs

Interprétation des résultats (+/- données cliniques)

Utilisations particulières : cinétique, calcul de risque,marqueurs nouveaux

Dialogue biologiste-clinicien et patient