aflatoxin a
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Aflatoxinas
UNIVERSIDADE FEDERAL DO MARANHÃOCENTRO DE CIENCIAS SOCIAIS, SAUDE E TECNOLOGIA – CCSST
DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA DE ALIMENTOSDISCIPLINA: ANÁLISE DE ALIMENTOS
BRUNA BRITOJAM BARBOSAPOLYANA CARREIRO
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Aspergiluus flavus Aspergiluus pararasiticus
São um grupo de compostos tóxicos; produzidos por certas cepas Aspergiluus flavus e A. pararasiticus;
As mais conhecidas são: B1 e B2A produção é favorecida em temperaturas de 23° a 26°
Aflatoxinas
e G1 e G2
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Os alimentos estão constantemente expostos à diversos tipos de contaminação;
Representa um problema de saúde pública; As contaminações ocorrem com maior intensidade
em nozes, amendoins e outras sementes oleosas, incluindo milho e sementes de algodão;
Esta contaminação geralmente está relacionada aos grãos armazenados e rações dadas aos animais,podendo ocorrer desde o processo de germinação até o armazenamento.
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Merecem especial atenção por parte da indústria dos alimentos.
As aflatoxinas pode permanecer no alimento após a morte do fungo que as produz, podendo apresentar-se em alimentos onde não são verificadas alterações visíveis.
A exposição a altas concentrações de aflatoxinas produz graves danos
Colônia de Aspergillus flavus em cultivo em uma
placa de Petri.
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Possuem importância toxigênica conhecida;
O melhor método para controlar micotoxinas em alimentos: Prevenir.
Aspergillus flavus em grãos de amendoim
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DETERMINAÇÃO DE AFLATOXINA
A cromatografia envolve uma série de processos de separação de misturas.
Classificação das técnicas cromatográficas
oDe acordo com o sistema cromatográfico;
oDe acordo com a fase móvel;
oDe acordo com a Fase Estacionária;
oDe acordo com o modo de separação;
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As técnicas mais usadas para a quantificação de micotoxinas:
Cromatográficas
o Cromatografia em Camada Delgada (CCD);
o Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE);
o Cromatografia Gasosa acoplada a Espectrometria de Massa (CG/MS).
DETERMINAÇÃO DE AFLATOXINA
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FE camada fina aplicada sobre o vidro (sólido)
FM solvente com afinidade contrária a da FE (líquido)
Semelhante à cromatografia em papel, porém mais rápida e com melhor resolução
Técnica
Preparação das placas cromatográficas
Seleção da fase móvel
Revelação dos cromatogramas
adsorventes mais usados: sílica gel G e
alumina G
Aplicação das amostras nas cromatoplacas
Cromatografia em camada delgada
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Cromatografia em camada delgada
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Cromatografia em camada delgada
DETERMINAÇÃO DE AFLATOXINA
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Materiais e métodos
• Reagentes: metanol, clorofórmio, KCl e CuSO4;• Na eluição: ácido fórmico, acetato de etila e tolueno e placas cromatográficas de sílica gel;• 36 amostras, sendo 21 de amendoins e 15 de paçoca;• B1, B2, G1 e G2• cromatografia em camada delgada: sistema solvente de eluição: (60:30:10), tolueno, acetato de etila e ácido fórmico;• detecção por comparação visual da fluorescência, frente a luz UV.
Cromatografia em camada delgada
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Segue o fluxograma da técnica de separação, extração e purificação para determinação de aflatoxinas B1, B2, G1 e G2 em amostras de amendoim e paçoca.
Cromatografia em camada delgada
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+150mL de CuSO4+5g de celite-agitar e filtrar
Funil de separação+150mL de H2O+10mL de clorofórmio-agitar por 3 min
+270mL de metanol+30mL de KCl 4%-liquidificador por 5 min-filtrar
+10mL de clorofórmio-agitar por 3 min
Banho de H2O a 80°C até a secura-ressuspender em 500uL de clorofórmio
50g de amostra
150ml do filtrado
150ml do filtrado
5ml da fase clorofórmica
150ml da fase aquosa
5ml da fase clorofórmica
CCD
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Cromatografia em camada delgada
DETERMINAÇÃO DE AFLATOXINA
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Cromatografia em camada delgada
Discussão
• O método analítico constituído pela cromatografia em camada delgada, com prévia extração líquido-líquido, mostrou-se satisfatório para a determinação de aflatoxinas em amendoim e paçocas;
• Os resultados obtidos nesse estudo confirmam a necessidade do freqüente monitoramento das micotoxinas, especialmente as aflatoxinas, visto que estas são substâncias potencialmente carcinogênicas.
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Cromatografia Líquida de Alta Eficiência
Cromatografia com fase líquida
O termo cromatografia com fase líquida têm sido usado para descrever vários sistemas cromatográficos, incluindo as cromatografias líquido-líquido, líquido-sólido, por troca iônica e de exclusão por volume, que empregam todas uma fase líquida móvel.
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Cromatografia Líquida de Alta Eficiência
o O uso de pressões elevadas ;
o O uso de partículas menores;
o O sítio de adsorção, maior ;
o Uso de colunas menores;
o Volumes menores de amostras;
o Gasto menor de fase móvel;
o Trabalha-se na faixa dos microlitros (µL).
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DETERMINAÇÃO DE AFLATOXINA
Artigo: Determinação de aflatoxina B1 em rações e aflatoxina M1 no leite de propriedades do Estado de São Paulo.
*Autores: (Carlos Augusto Fernandes de OliveiraI; Luciana Soares SebastiãoI; Helena FagundesI; Roice Eliana RosimI; Andrezza Maria FernandesII)
Cromatografia Líquida de Alta Eficiência
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DETERMINAÇÃO DE AFLATOXINA
Cromatografia Líquida de Alta Eficiência
A análise de aflatoxinas :
• colunas de imunoafinidade para purificação dos extratos
Quantificação realizada :
• cromatografia líquida de alta eficiência
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DETERMINAÇÃO DE AFLATOXINA
Cromatografia Líquida de Alta Eficiência
A AFB1
40% das rações em níveis de
1,0 a 19,5 μg.kg-1
A AFM1
36,7% de amostras de leite positivas variou
de 0,010 a 0,645 μg.L-1
(0,5 μg.L-1) para AFM1
Apenas uma amostra de leite estava acima do limite de tolerância adotado no Brasil.
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OBRIGADA!
“Jesus, fala – me da coragem e sobretudo, dá – me coragem. Talvez seja o que mas me falte ainda que me falta tanta coisa.”