目的タンパク質を内包したエクソソームを産生する...

目的タンパク質を内包したエクソソームを産生するシステムXPack Protein Packaging Vector

63244Webページ番号詳しくはWebで

特　長�

AmpR

pUC ORI

SV40 ORⅠSV40 poly-A

3’ΔLTRWPRE

EF1αMCS

XPack tag

MSCVCMV or

cPPT

RSV 5’LTR

XPackLentivectors

XPAK510PA-1 (CMV)XPAK710PA-1 (MSCV)

MCS5’-XhoⅠBamHⅠNotⅠEcoRⅠNheⅠPstⅠ- 3’

ベクターマップ

使用例�XPack-GFP localizationpattern during packing

XPack exosome Western blotControlexosomes

XPack-GFPexosomes

CETP Ab GFP Ab

Target cell delivery of XPack-GFP

Fluorescence target cell images Target cell lysate Western blots+ Controlexosomes

+ XPack-tagGFP exosomes

αGAPDH

αGFP

A

C

B

A）�XPack-GFP（#XPAK530PA-1）をHEK293 細胞にトランスフェクションし，24時間後に蛍光顕微鏡でGFPの局在を解析した。

B）�48 時間後，ExoQuick-TC を用いて培養液上清からエクソソームを単離し，ウェスタンブロッティングでGFPを検出した。

C）�単離したエクソソームをHEK293 細胞に添加し，24時間後に蛍光顕微鏡で細胞内のGFP の局在を，細胞ライセートを用いウェスタンブロッティングにより GFP を検出した。

XPack-Luciferaseexosome luminescence

Luminescence of target recipient cellstreated with XPack-Luc exosomes

Controlexosomes

XPack-Lucexosomes

Untreatedcells

Cells + HEKexosomes

Cells + XPack-Lucexosomes

Luminescence (RLU)

Luminescence (RLU) Control + XPack-Luc

A B

XPack-Luciferase（#XPAK532PA-1）を HEK293 細胞にトランスフェクションし，48時間後に ExoQuik-TC でエクソソームを単離した。A）�回収したエクソソームのルシフェラーゼ活性を測定した。B）�回収したエクソソームを HEK293 細胞に添加し，24 時間後に D-ルシフェリンを�用いてルシフェラーゼ発現量を測定した。

■ HEK-293 Exosomes ■ XPack-CDKN1B Exosomes

Rate of Cell Proliferation

5μg Exosomes 50μg Exosomes 100μg Exosomes

1

0.8

0.6

0.4

0.2

0

XPack クローニングベクター（#XPAK510PA-1）に，細胞周期阻害物質 CDKN1B 遺伝子を導入後，HEK293 細胞にトランスフェクションし，48 時間後に培養液上清からExoQuick-TC でエクソソームを単離した。単離したエクソソームをHEK293 細胞に添加し，72時間後にMTTアッセイを行った。

※ExoQuick-TC についてはp.4 〜 5をご覧下さい。

［メーカー：SBI］

商品コード プロモーター 包　装 価格（￥）

XPAK510PA-1 CMV10�μg 118,000

SBI145100

XPAK710PA-1 MSCV SBI147100

■クローニング用レンチウイルスベクター

［メーカー：SBI］

商品コード レポーター プロモーター 包　装 価格（￥）

XPAK530PA-1 GFP

CMV 10�μg 122,000

SBI145300

XPAK531PA-1 RFP SBI145310

XPAK532PA-1 Luciferase SBI145320

XPAK730PA-1 GFP

MSCV 10�μg 122,000

SBI147300

XPAK731PA-1 RFP SBI147310

XPAK732PA-1 Luciferase SBI147320

■レポーターXPack 発現用レンチウイルスベクター

［メーカー：SBI］

商品コード レポーター プロモーター 包　装 価格（￥）

XPAK530VA-1 GFPCMV 1�vial 122,000

SBI145302

XPAK532VA-1 Luciferase SBI145322

XPAK730VA-1 GFPMSCV 1�vial 122,000

SBI147301

XPAK732VA-1 Luciferase SBI147321

■レポーターXPack 発現用レンチウイルス

掲載されている製品はウイルスベクター関連製品のため，購入時にご使用者確認書が必要です。ご注文の際は，フナコシホームページ（http://www.�funakoshi.co.jp/document_download）に掲載の「ウイルスベクター関連製品ご使用者確認書」に必要事項をご記入の上，販売店担当者にお渡し下さい。なお，製品をご使用の際には「遺伝子組換え生物等の使用等の規制による生物の多様性の確保に関する法律（カルタヘナ法）」および所属組織における安全管理規定に従い，しかるべき施設で実験を行って下さい。詳細は文部科学省ライフサイエンス課のホームページをご覧下さい。http://www.lifescience.mext.go.jp/bioethics/anzen.html

●！ウイルスベクター関連製品ご購入時のご注意

●�エクソソーム膜を標的とするペプチド配列“XPack”に任意のタンパク質を結合させると，XPack とともにエクソソーム内にパッケージングされ，その後エクソソームは細胞外へと分泌されます。

●�XPack-融合タンパク質を作製するためのクローニング用ベクターおよびレポーター発現用ベクターをご用意しています。いずれもレンチウイルスベースのベクターです。

●�各ベクターにはピューロマイシン耐性遺伝子が組み込まれています。※レポータータンパク質（GFP�/�Luciferase）を取り込ませたエクソソームを発現する細胞株もあります。詳細はWebをご覧下さい。

※細胞培養の際にはエクソソームの混入が起きないよう，ウシ由来エクソソーム除去済み FBS（p.8 参照）をご使用下さい。

フナコシニュース2017年 5月 15日号（No.634）funakoshi news

エクソソーム工学（輸送・導入・標識）

本誌に掲載されている製品はすべて研究用です

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