analisis prednisolon dengan spektrofotometri derivatif.docx

BAB I

PENDAHULUAN

I. LATER BELAKANG

Prednisolon adalah glukokortikoid sintetik, ia memiliki lima kali potensi kortison

asetat tetapi dalam dosis setara menyebabkan retensi natrium berkurang dan cairan

meskipun beresiko lebih terhadap lambung. Metode kromatografi dan spektrofotometri

diperkenalkan untuk penentuan prednisolon. Tetracycline adalah klasik, khas, generik dan

relatif murah,golongan tetrasiklin adalah obat pilihan pada infeksi dengan Mycoplasma

pneumoniae, klamidia, rickettsia dan beberapa spirochetes. Mereka digunakan dalam

rejimen kombinasi untuk mengobati penyakit tukak lambung dan duodenum yang

disebabkan olehHelicobacter pylori. Metode terakhir untuk penentuan tetrasiklin

termasukmetode volumetrik, metode elektrokimia, metode spektrofotometri dan metode

kromatografi.

Kloramfenikol bersifat bakteriostatik

berdasarkanpenghambatanbiosintesisproteinbakteridan pada tingkat lebih rendah dalam

ribosom inang. kloramfenikol adalahantibiotik spektrum luas aktif terhadap bakteri

aerobikdan anaerobik, gram positif dangramnegatif.Hal ini juga aktif terhadap rickettsia

tetapi tidak pada klamidia. Metodeterakhir untukpenentuankloramfenikol termasuk

kromatografidanmetode spektrofotometri.Kombinasiprednisolon dengan tetrasiklin atau

dengan kloramfenikolmemberikan aktivitasantibakteri yang sangat lokal terhadap

Grampositive dan mikroorganisme Gram negatif,spesifik antiinflamasi dan antialergi

aksi.

Spektrofotometri derivatif adalah analisisuntuk menyelesaikan beberapa

campuransenyawa dengan spektrum tumpang tindih. Zero-crossing diukur dengan

mencari nilaiturunan dari kurva jumlah analit dangangguan pada nilai absorbansi

(panjang gelombang)sesuai dengan zero-crossing. Spektrum rasio derivatif

mampumenyelesaikan tumpang tindihspektrum. Dalam metode ini, spektrum penyerapan

campuran dicatat dan dibagi, amplitudo-by-amplitudo, dengan spektrum penyerapan

larutan standar salah satu komponen, dan kemudian turunan pertama dari spektrum rasio

diperoleh. Konsentrasi komponen lain kemudian ditentukan dari grafik kalibrasi.

Metode kalibrasi multivariat diterapkan spektralData sedang semakin digunakan

untuk analisisfarmasi. Classical least squares (CLS) dan principalcomponents

regression(PCR) analisis sebagian besarmetode multivariat sederhana yang dapat

dilakukandengan perangkat lunak statistik mudah diakses.Teknik CLS mengasumsikan

bahwa respon (absorbansi)di masing-masing frekuensi (panjang gelombang) sebanding

denganunit konsentrasi komponen. Model adalah kesalahandiasumsikan berasal dari

pengukuran spektralabsorbansi. Jadi CLS mensyaratkan bahwa semua campurkomponen

kimia yang dikenal dan termasuk dalamData kalibrasi ditetapkan. CLS memiliki

keuntungan dari peningkatanpresisi saat menggunakan banyak frekuensi,karena

sinyalrata-rata.

Kalibrasi diwujudkan dengan merekam spektrum dim campuran standar, yang

diketahui panjang gelombang n-komposisi komponen c. Spektrum (absorbansiatau emisi)

disusun menjadi kolom matriks Y (dimensi n x m), dengan komposisi masing-

masingcampuran membentuk kolom konsentrasi matriks X ( c x m )

Y = K . X (1)

Dengan pengetahuan sebelumnya dari X dan dengan merekamdata untuk Y, maka matriks

sensitivitas, K, dapatdihitung, tapi setelah rearrengment persamaan 1persamaan berikut

dengan mengalikan persamaankomponen dengan nilai Xt sebagai : Y . Xt = K . X .

Xtkemudian,

K = (X. Xt) -1.Y. Xt (2)

Untuk menghindari berada di bawah yang ditentukan, harus adapengukuran pada panjang

gelombang lebih dari adakomponen (yaitu n ≥ c ). Jika n > c maka komponenkonsentrasi

dalam campuran yang tidak diketahui diperolehdari spektrum oleh,

Xunknown = (Kt .K)-1 . Kt.Yunknown

Metode ini CLS secara intuitif menarik karenadidasarkan pada beberapa hubungan

umum diasumsikan, misalnya Hukum Beer’s, dan dapat digunakan untuk cukup

komplekskomposisi campuran kalibrasi , yaitu yangkonsentrasi masing-masing

absorbansi. PCR adalahprosedur dua langkah, pada langkah pertama, satu

memperkirakanjumlah komponen utama oleh satu atau lebihdari kriteria berikut,

persentase menjelaskanvarians, mengingat nilai satu kriteria, uji Scree dancross validasi.

Mereka dapat dianggap sebagaivariabel baru yang meringkas secara optimal variasiyang

terjadi dalam spektrum, dalam langkah kedua, CLSditerapkan pada variabel laten yang

baru diperoleh. Ketika co-linearitas antara variabel asli terjadi, plot komponen utama

sering membiarkan interpretasi yang lebih baik dari variasi yang diamati dalam kumpulan

data dari plot variabel asli yang dipilih oleh CLS. Sebagai metode pemodelan, itu kurang

performant dari CLS saat melakukan prediksi dalam domain kalibrasi dan ketika model

memang linier. Hal ini lebih dapat diandalkan jika ekstrapolasi mungkin diperlukan. Ini

adalah metode linear, tapi ia mampu tampil cukup baik untuk data cukup nonlinear.

Seperti CLS, itu adalah metode yang umum.

II. TUJUAN

Menunjukkan kemampuan turunan pertama, rasio spektrofotometri derivatif, classical

least squares (CLS) dan principle component regression(PCR) untuk analisis simultan

mempelajari obat dalam campuran tanpa perlu atau awal langkah pemisahan.

BAB II

METODE EKSPERIMEN

Alat :

Spektrofotometer UV Vis (Milton Roy, Amerika Serikat)

Kuvet 1CM

Computer Pentium III750Mhz

Alat-alat gelas

Bahan :

Tetrecort® salep

Cortiphen® tetes mata dan salep

Etanol absolut

Cara kerja :

Persiapan larutan stock dan standar

Larutan stok yang otentik yang dibuat dengan melarutkan jumlah yang akurat

ditimbang (50mg) dari obat dipelajari dalam 50 mL etanol. Penambahan larutan dengan

sesuai dari larutan stok diselesaikan secara kuantitatif dengan pelarut untuk mendapatkan

larutan standar kerja yang cocok sesuai dengan rentang kalibrasi linier untuk setiap obat.

Pembuatan larutan sampel dari bentuk sediaan farmasi

Untuk salep:

Lima tabung salep dievakuasi dalam gelas bersih dan dicampur dengan baik, timbang

seberat 5 g salep diekstraksi pada pemanasan dan pengadukan dengan pelarut yang cocok dan

difiltrasi untuk 50 mL labu ukur. Bagian pertama dari filtrat dibuang. Penambahan larutan

dengan berbeda larutan disiapkan diencerkan dengan etanol untuk menghasilkan pengenceran

yang berbeda mirip dengan yang di bentuk sediaan.

Untuk tetes mata:

10 ml cortiphen® tetes mata setara dengan 50 mg prednisolon dan 20

mgkloramfenikol diencerkan dengan etanol 50 mL dalam labu ukur50 mL, 5 mL diencerkan

dengan 50 mL dengan etanol dalam labu ukur 50 mL dimana setiap 1 mL mengandung 100

µg prednisolon dan 40 µg kloramfenikol. Penambahan larutan berbeda larutan disiapkan

diencerkan dengan etanol untuk menghasilkan pengenceran dengan konsentrasi yang berbeda

mirip dengan yang di bentuk sediaan.

prosedur umum

Prosedur untuk penentuan rentang linearitas dari larutan standar

Untuk mendapatkan kurva kalibrasi untuk menerapkan analisis kuantitatif enam

larutan dari masing-masing komponen murni, masing-masing campuran disiapkan dengan

konsentrasi dalam kisaran kalibrasi. Kisaran tersebut sebelumnya diverifikasi untuk

mematuhi hukum Beer’s untuk masing-masing sampel obat.

Prosedur untuk persiapan laboratorium disiapkan campuran larutan

Campuran disiapkan disusun oleh sejumlah campuran yang diketahui larutan kerja

salah satu komponen campuran dengan jumlah yang telah diketahui larutan kerja dari

komponen lain dalam proporsi yang berbeda (rasio) untuk memverifikasi ketepatan metode

untuk analisis campuran tersebut dan mencocokkan formulasi komersial yang memiliki

konsentrasisebanding.

Prosedur persiapan untuk larutan sampel

Larutan sempel dipersipkan dari Pengenceran yang berbeda dalamlarutankerja. dosis

diuji untuk mengetahui kandungan obat sebagai prosedur untuk langkah prediksi.

Prosedur untuk teknik penambahan standar

Sebagian larutan kerja bentuk sediaan yang kuantitatif ditransfer ke enam labu

volumetrik, maka bagian seri larutan kerja otentik kedua obat yang ditambahkan ke dalam

tiap labu dan larutan telah diselesaikan dengan menggunakan pelarut dan diukur pada

panjang gelombang tertentu.

BAB III

HASIL DAN PEMBAHASAN

Spektrum absorpsi untuk obat diteliti menunjukkan spektrum yang tumpang tindih.

spektrum yang tumpang tindih dapat dengan mudah diberikan oleh (Di) 0,5, dimana Di adalah

besarnya ketergantungan yang dapat dihitung untuk campuran dua komponen dari

persamaan:

dimana k1 dan k2 adalah I x n matriks koefisien regresi untuk obat dipelajari dan kt adalah

dialihkan k matriks.

Analisis spektrofotometri derivatik teknik zero-crossing

Pada gambar 1 dan 2 menunjukkan bahwa penyerapan spektrum prednisolon tumpang

tindih dengan spektrum penyerapan tetrasiklin dan kloramfenikol, masing-masing. Dalam

sesuai derivatif pertama (1D) kurva (Gambar 3), tetrasiklin hidroklorida menunjukkan baik

penyerapan turunan pertama (1D) nilai pada = 245,5 dan 350,5 nm sedangkan prednisolon

tidak memilikikontribusi. Di sisi lain, prednisolon menunjukkan suatu penyerapan pada

derivatif pertama (1D) = 236,5 dan 266,5 nm dimana tetrasiklin hidroklorida absorbansinya

adalah nihil. Dalam Gambar 4, kloramfenikol menunjukkan baik penyerapan pada turunan

pertama (1D) = 242,5 dan 293.5nm sedangkan prednisolon tidak memiliki kontribusi.

Prednisolon menunjukkan suatu penyerapan maksimum pada turunan pertama (1D) pada λ =

234,5 dan 272,5 nm dimana absorbansi kloramfenikol adalah nihil. Parameter analisis untuk

uji campuran biner (campuran I dan campuran II) dari obat yang diteliti disajikan pada

Tabel.1

Teknik rasio Derivatif

Pengaruh Δλ untuk mendapatkan turunan pertama dari spektrum rasio serta pengaruh

konsentrasi pembagi pada grafik kalibrasi untuk campuran diusulkan dipelajari dalam rangka

untuk memilih faktor-faktor yang mempengaruhi penentuan terbaik. Hasil penelitian

menunjukkan bahwa Δλ = 3 nm dianggap yang paling cocok, sedangkan konsentrasi pembagi

tidak berpengaruh signifikan terhadap hasil uji untuk campuran dipelajari.

Untuk penentuan prednisolon, spektrum penyerapan prednisolon dibagi dengan

larutan standar tetrasiklinhidroklorida. (12,4 µg/mL) dan kloramfenikol (18 µg/mL) seperti

yang ditunjukkan pada Gambar 5 dan 6, masing-masing. Derivatif pertama dari spektrum

rasio dikembangkan dihitung dengan Δλ = 3 nm. Gambar 7 dan 8 menunjukkan bahwa

prednisolon dapat ditentukan dengan mengukur amplitudo pada banyak panjang gelombang

dimana tetrasiklinhidroklorida dan kloramfenikol tidak memiliki kontribusi, tapi itu

menemukan bahwa amplitudo pada 260.5 dan 266,5 nm (untuk prednisolon dalam campuran

I) dan 227,5 dan 245,5 nm (untuk prednisolon dalam campuran II) memberikan hasil yang

paling akurat dan sensitif.

Dalam penentuan tetrasiklin hidroklorida dan kloramfenikol dengan teknik rasio

derivatif, spektrum penyerapan larutan standar tetrasiklin HCl atau kloramfenikol dibagi

(amplitudo dengan amplitudo pada panjang gelombang yang sesuai) dengan penyerapan

spektrum larutan standar 10 dan 20 µg/ml prednisolon untuk campuran I dan campuran II,

masing-masing, untuk memperoleh rasio spektrum yang sesuai (Gambar 9 dan 10). Derivatif

pertama dari spektrum rasio yang diperoleh dihitung dengan Δλ = 3 nm, (Angka 11 dan 12).

Dari angka tersebut, dapat diketahui bahwa, baik tetrasiklin hidroklorida dan kloramfenikol

dapat ditentukan dengan adanya prednisolon dengan mengukur amplitudo pada 227,5 dan

287,5 nm (campuran I) dan pada 218,5 dan 287,5 nm (campuran II), di mana tidak ada

kontribusi dari prednisolon.

Dalam kondisi tertentu dan panjang gelombang tertentu untuk setiap obat, persamaan

regresi untuk obat diturunkan menggunakan least-squares regession analys, Tabel 1

merangkum hasil yang diperoleh untuk semua teknik yang digunakan, hasilnya termasuk

intercepts (a), slope (b), koefisien korelasi (r), koefisien determinasi (r2), limit of detection

(LOD) dan limit of quantification (LOQ)

Teknik validasi dari spektofotometri derivatif

I. Linearitas

Linearitas dari metode yang diusulkan dievaluasi untuk setiap obat dengan

menganalisis serangkaian konsentrasi yang berbeda masing-masing obat dipelajari

dalam kisaran dinyatakan dalam Tabel 1 dan dalam dan tanpa adanya konsentrasi

tertentu dari komponen lain dalam campuran. Pengujian dilakukan sesuai dengan

kondisi eksperimental ditetapkan sebelumnya. Rasio derivatif pertama untuk setiap

obat diukur, pada panjang gelombang tertentu (Tabel 1) dan diplot terhadap

konsentrasi. Sebuah garis lurus diperoleh dalam setiap kasus. Analisis statistik dari

grafik ini menggunakan metode kuadrat terkecil dibuat untuk slope, mencegat dan

koefisien korelasi. Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa linearitas grafik

kalibrasi dan kepatuhan dengan hukum Beer’s telah divalidasi, seperti yang

digambarkan oleh nilai-nilai yang sangat baik dari koefisien korelasi dari persamaan

regresi dan nilai-nilai kecil penyadapan. Selain itu, kemiringan grafik kalibrasi untuk

setiap obat adalah independen terhadap konsentrasi dari komponen lain dalam

campuran (Tabel 1).

Table I Parameter analisis untuk penentuan prednisolon, hidroklorida tetrasiklin dan

kloramfenikol dengan teknik spektrofotometri derivatif yang diusulkan.

Standard of solution

techniqueConc.

(µg/ml)λ(nm)

Linear regretion equation parameters

a b R r2 LOD (µg/ml)

LOQ (µg/m

l)Tetracycline HCl(mix I)

₁D (Zero crossing)

5-30 245.5 -0.0055 0.00075 0.9998 0.9996 0.25 0.84

5-30 350.5 0.00048 0.00057 0.9999 0.9998 0.32 1.06

¹D (derivative ratio)

5-30 227.5 -0.0199 -0.0071 0.9999 0.9998 1.44 4.80

5-30 287.5 1.04548 0.9304 0.99999

0.9998 1.11 3.71

Prednisolone(mix I)

¹D(zero crossing)

5-30 236.5 -0.005 0.00078 0.9999 0.9998 0.32 1.04

5-30 266.5 -0.0004 -0.0013 0.9999 0.9998 0.60 2.00

¹D (Derivative ratio)

5-30 260.5 -0.0025 -0.148 0.9998 0.9996 1.02 3.39

5-30 266.5 0.00133 -0.0133 0.9998 0.9996 1.12 3.78

Chloramphenicol

¹D (zero crossing)

10-35 242.5 0.00329 0.00073 0.9999 0.9998 0.60 2.00

(mix II) 10-35 293.5 0.0002 0.00051 0.9999 0.9998 0.62 2.08


10-35 218.5 0.00354 0.00559 0.9997 0.9994 2.20 7.35

10-35 287.5 0.0046 0.03808 0.9999 0.9998 0.48 1.60

Prednisolone(mix II)

¹D (zero crossing)

10-35 234.5 0.01134 0.00255 0.9999 0.9998 0.40 1.33

10-35 272.5 0.00059 0.0014 0.9999 0.9998 0.63 2.08


10-35 227.5 -0.0309 0.02317 0.9997 0.9994 1.64 5.46

10-35 245.5 0.01237 -0.0180 0.9998 0.9996 1.25 4.18

a: intersep, b: slope, r: koefisien korelasi, r2: koefisien determinasi, LOD= 3σ/S, LOQ= 10σ/S (di mana σ adalah standar deviasi intercept dan S adalah sensitivitas).

Gambar 1 Tingkat tumpang tindih seperti yang ditunjukkan oleh spektrum penyerapan tetrasiklin hidroklorida (>) (30 µg / mL) dan prednisolon (---) (30 µg / mL)

Gambar 2 Tingkat tumpang tindih seperti yang ditunjukkan oleh spektrum penyerapan kloramfenikol (>) (30μg/mL) dan prednisolon (---) (15 µg/mL).

Gambar 3 penentuan turunan Pertama dari tetrasiklin hidroklorida (>) di 245,5 dan 350,5 nm dan prednisolon (---) di 236,5 dan 266,5 nm menggunakan teknik spektrofotometrizero-crossing.

Gambar 4 penentuanturunanPertama kloramfenikol (>) di 242,5 dan 293,5 nm dan prednisolon (---) di 234,5 dan 272,5 nm menggunakan teknik spektrofotometrizero-crossing.

Gambar 5 Rasio spektrum prednisolon (5-30 µg/mL). Bilangan pembagi adalah 12,40 µg/ml tetrasiklin hidroklorida

Gambar 6 Rasio spektrum prednisolon (10-35 µg/mL). Bilangan pembagi adalah 18 µg/mL kloramfenikol.

Gambar 7 Turunan pertama rasio spektrum prednisolon (5-30 µg/mL). Bilangan pembagi adalah 12,40 µg/mL tetrasiklin hidroklorida.

Gambar 8 Turunan pertama rasio spektrum prednisolon (10-35 µg/mL) Bilangan pembagi adalah 18 µg/mL kloramfenikol.

Gambar 9 Rasio spektrum hidroklorida tetrasiklin (5-30 µg/mL) Bilangan pembagi adalah 10 µg/mL prednisolone

Gambar 10 Rasio spektrum kloramfenikol (10-35 µg/mL) Bilangan pembagi adalah 20 µg/mL prednisolon.

Gambar 11 Pertama rasio spektrum turunan dari tetrasiklin hidroklorida (5-30 µg/mL) Bilangan pembagi adalah 10 µg/mL prednisolon.

Gambar 12 Rasio Pertama spektrum turunan kloramfenikol (10-35 µg/mL) Bilangan pembagi adalah 20 µg/mL prednisolon

II. AkurasiPenelitian ini dilakukan dengan penambahan jumlah yang diketahui dari tiap

obat dengan plasebo yang mengandung baik eksipien saja atau konsentrasi tertentu

dari komponen lain dalam campuran. Setiap analit diuji pada tingkat yang berbeda di

bawah dan di atas klaim label masing-masing. Campuran yang dihasilkan diuji dan

akurasi kemudian dihitung dari hasil uji sebagai persentase analit ditemukan oleh

pengujian tersebut. Para pemulihan baik diperoleh (Tabel 2-5) menunjukkan bahwa

akurasi yang baik dari metode yang diusulkan dan tidak ada gangguan dari eksipien

dan komponen lain yang hadir dalam bentuk sediaan.

Tabel 2 Analisis statistik hasil yang diperoleh untuk uji prednisolon dalam campuran I oleh diusulkan metode spektrofotometri derivatif

Statistical parameter

Reported methods*

¹D (zero crossing) ¹D derivative ratio236.5 nm

266.5 nm

260.5 nm 266.5 nm

Pure X 99.60 100.25 100.10 99.56 99.68±S 0.72 0.82 0.69 0.89 0.88n 6 6 6 6 6S² 0.51 0.67 0.48 0.79 0.77t - 1.459 1.228 0.068 0.172F - 1.297 1.089 1.528 1.494

Laboratory prepare mixtures

X 99.0 99.82 99.91 99.38 99.36±S 0.45 0.76 0.79 1.00 1.32n 5 5 5 5 5S² 0.20 0.58 0.62 1.00 1.74t - 2.076 2.238 0.723 0.734F - 2.2852 3.082 5.812 4.938

Tetra cort Ointment 30/5

X 99.0 98.50 99.04 100.00 99.00±S 0.45 0.20 1.10 1.00 1.00n 5 5 5 5 5S² 0.20 0.04 1.21 1.00 1.00t - 1.816 0.000 2.039 0.00F - 5.062 5.975 4.938 4.938

Standard addition technique

X - 99.95 99.99 98.22 99.01±S - 1.10 0.28 0.32 0.45S² - 1.21 0.08 0.11 0.09

Nilai teoritis pada batas kepercayaan 95% adalah; t = 2,306 dan F = 6.39 (n 1 = 5, n2 = 5); t = 2,228 dan F = 5.05 (n1 = 6, n2 = 6), X = berarti, n = jumlah pengamatan, S = standar deviasi; S2 = varians

III. Presisi

Untuk menguji pengulangan dari metode yang diusulkan, penentuan terpisah

pada tingkat konsentrasi yang berbeda dilakukan untuk setiap obat baik sendiri atau

dengan adanya konsentrasi tertentu dari komponen lainnya. Hasil yang diperoleh

(Tabel 2-5) menunjukkan bahwa, standar deviasi relatif kurang dari 2%, yang

mengindikasikan tingkat presisi yang tinggi dari metode yang diusulkan.

IV. Selektivitas

Metode selektivitas dicapai dengan menyiapkan campuran yang berbeda dari

obat diuji dalam rentang linearitas. Campuran mengandung jumlah bervariasi dari

satu komponen dan jumlah konstan yang lain. Campuran disiapkan laboratorium

dianalisis sesuai dengan prosedur sebelumnya. Turunan pertama dari nilai rasio untuk

setiap komponen diukur pada panjang gelombang tertentu (Tabel 1). Analisis statistik

data menunjukkan bahwa kemiringan grafik kalibrasi untuk setiap obat adalah

independen pada konsentrasi komponen lain dari campuran. Ini berarti bahwa turunan

pertama dari nilai amplitudo rasio campuran itu hanya fungsi dari konsentrasi obat

pada panjang gelombang tertentu. Akibatnya, hasil yang diperoleh (Tabel 2-5) juga

menunjukkan selektivitas tinggi dari metode yang diusulkan dan potensinya untuk

penentuan simultan campuran ini.

Multivariate Calibration Analysis

Spektrum absorpsi dari obat yang diteliti ditunjukkan pada Gambar 1 dan 2. Seperti

dapat dilihat, Spektral yang tumpang tindih terjadi di wilayah 220-364 nm dan 212-320 nm,

untuk komponen campuran I dan campuran II, masing-masing. Tingkat spektral tumpang

tindih diberikan oleh (Di) 0.5. Dalam kasus senyawa saat ini dipelajari, spektrum menyebabkan

Di = 0,50 menyiratkan 70,70% dan 0.464 menyiratkan 68.12% tumpang tindih spektrum

untuk campuran I dan campuran II, masing-masing. Tabel 6 menunjukkan jumlah sebenarnya

dan diprediksi ± kesalahan (%) dari obat yang dipelajari. Hasil mengkonfirmasi tingkat tinggi

perjanjian dan menunjukkan bahwa kedua metode yang cocok untuk analisis dalam domain

yang diberikan untuk masing-masing obat.

Beberapa campuran disiapkan menjadi sasaran CLS dan analisis PCR untuk

mengkonfirmasi kesesuaian model kalibrasi untuk penentuan obat dipelajari dalam larutan

sampel. Tabel 7 merangkum hasil yang diperoleh untuk laboratorium campuran biner

disiapkan disarankan. Seperti bisa dilihat, konsentrasi diprediksi oleh model yang sangat

dekat dengan konsentrasi nyata, hasil dalam semua kasus yang memuaskan.

Di sisi lain, hasil untuk bentuk sediaan komersial dan laboratorium disiapkan

campuran dengan konsentrasi sebanding yang ditemukan dicocokkan. Hal ini menunjukkan

bahwa, eksipien ini atau tambah dan aditif tidak mengganggu penentuan.

Selain itu, hasil untuk bentuk sediaan yang dibandingkan dengan yang diperoleh

dengan menerapkan metode yang digunakan. Seperti terlihat pada Tabel 8, hasilnya yang

sesuai dari prosedur dilaporkan seperti yang ditunjukkan oleh t hitung dan nilai F.

Tabel 3 Analisis statistik hasil yang diperoleh untuk uji tetrasiklin hidroklorida dengan teknik spektrofotometri derivatif yang diusulkan.


Reported methods*

¹D (zero crossing) ¹D derivative ratio245.5nm 350.5nm 227.5 nm 287.5

nmPure X 100.8 100.21 99.91 99.98 100.12

±S 0.68 1.11 1.1 1.21 0.32N 6 6 6 6 6S² 0.46 1.23 1.21 1.46 0.10T - 1.110 1.686 1.447 2.138F - 2.665 2.617 3.166 3.202


X 100.50 100.17 99.53 99.75 99.92±S 0.40 1.00 0.96 0.91 0.65N 5 5 5 5 5S² 0.16 1.00 0.92 0.83 0.42T - 0.685 2.086 1.687 1.699F - 6.250 5.760 5.176 2.641

Tetra cort Ointment 30/5

X 100.50 101.0 100.57 100.11 101.0±S 0.40 0.42 0.65 0.20 0.37N 5 5 5 5 5S² 0.16 0.18 0.42 0.04 0.14t - 1.976 0.472 2.000 1.976F - 1.000 3.062 4.000 1.000


X - 100.05 100.05 9.00 98.99±S - 0.82 1.39 0.91 0.86S² - 0.67 1.93 0.58 0.60

Nilai teoritis pada batas kepercayaan 95% adalah; t = 2,306 dan F = 6.39 (n1 = 5, n2 = 5); t = 2,228 dan F = 5.05 (n1 = 6, n2 = 6), X = berarti, n = jumlah pengamatan, S = standar deviasi; S2 = varians

* Dilaporkan metode untuk otentik [27], metode untuk laboratorium campuran olahan dan preparat farmasi dilaporkan [28]

Tabel 4 Analisis statistik hasil yang diperoleh untuk uji prednisolon dalam campuran II oleh diusulkan metode spektrofotometri derivatif.


Reported methods*

¹D (zero crossing) ¹D derivative ratio234.5 nm

272.5 nm

272.5 nm 245.5 nm

Pure X 99.60 99.91 99.93 99.91 99.98±S 0.72 0.47 0.89 0.75 0.98

n 6 6 6 6 6S² 0.51 0.22 0.79 0.57 0.96t - 0.88 0.70 O.74 0.77F - 2.35 1.55 1.11 1.88


X 99.00 100.03 99.81 99.80 99.87±S 0.45 0.97 0.79 0.77 0.72n 5 5 5 5 5S² 0.20 0.94 0.63 0.59 0.52t - 2.16 1.98 2.01 2.30F - 4.64 3.11 2.91 2.56

Cortiphen Drop 6/15

X 99.54 100.20 100.20 99.53 99.93±S 0.49 0.20 0.79 0.57 0.39n 3 3 3 3 3S² 0.24 0.40 0.62 0.33 0.15t - 2.160 1.230 0.023 1.079F - 6.002 2.599 1.353 1.79

Cortiphen Ointment 1/0.5

X 99.54 99.80 100.20 100.60 100.00±S 0.49 0.31 0.80 0.81 0.86n 3 3 3 3 3S² 0.24 0.10 0.64 0.66 0.74t - 0.777 1.219 1.939 0.805F - 2.498 2.666 2.733 3.080

Standard edition technique

x - 99.84 99.60 98.14 98.67±S - 0.35 0.30 0.42 0.26S² - 0.12 0.09 0.18 0.31X - 99.50 99.67 97.97 98.00±S - 0.41 0.53 0.51 0.45S² - 0.17 0.28 0.15 0.68

Nilai teoritis pada batas kepercayaan 95% adalah; t = 2,306 dan F = 6.39 (n 1 = 5, n2 = 5); t = 2,228 dan F = 5.05 (n1 = 6, n2 = 6); t = 2,776 dan F = 19,0 (n1 = 3, n2 = 3), X = berarti, n = jumlah observasi, S = standar deviasi; S2 = varians

* Dilaporkan metode untuk otentik [27], metode untuk laboratorium campuran olahan dan preparat farmasi dilaporkan [28].

Tabel 5 Analisis statistik hasil yang diperoleh untuk uji kloramfenikol oleh teknik spektrofotometri derivatif yang diusulkan.


Reported methods*

¹D (zero crossing) ¹D derivative ratio242.5nm 293.5nm 218.5 nm 287.5

nmPure X 99.90 100.11 100.56 100.04 100.21

±S 0.93 0.63 0.96 0.96 0.58n 6 6 6 6 6S² 0.87 0.40 0.92 0.92 0.34t - 0.458 1.210 0.257 0.693F - 2.179 1.066 1.066 2.571


X 99.68 99.81 100.11 100.74 99.10±S 0.84 0.91 0.84 1.19 1.15n 5 5 5 5 5S² 0.71 0.83 0.71 1.42 1.32t - 0.235 0.809 1.627 0.911F - 1.174 1.000 2.007 1.874

Cortiphen drop 6/15

X 99.50 100.80 100.33 100.50 98.50±S 0.87 0.47 1.26 1.36 0.59n 3 3 3 3 3S² 0.75 0.22 1.59 1.84 0.35t - 2.277 0.939 1.073 1.648F - 3.426 2.098 2.444 2.174

Cortiphen ointment 1/0.5

X 99.50 99.00 99.00 99.70 99.00±S 0.87 o.32 0.37 1.10 0.77n 3 3 3 3 3S² 0.75 0.10 0.14 1.20 0.59t - 0.934 1.916 0.247 0.745F - 7.392 5.529 1.599 1.277


X - 100.20 99.70 99.58 99.54±S - 0.56 0.71 0.66 0.65S² 0.31 0.50 0.51 0.55X - 98.80 100.10 99.01 98.78±S - 0.40 0.36 0.34 0.40S² 0.16 0.13 0.10 0.12

Nilai teoritis pada batas kepercayaan 95% adalah; t = 2,306 dan F = 6.39 (n1 = 5, n2= 5); t = 2,228 dan F = 5.05 (n1 = 6,n2 = 6); t = 2,776 dan F = 19,0 (n1 = 3, n2 = 3) X = berarti, n = jumlah observasi, S = standar deviasi; S2 = varians

* Dilaporkan metode untuk otentik [26], metode untuk campuran disiapkan laboratorium dilaporkan dan [29] metode yang dilaporkan untuk farmasi persiapan [28]

Tabel 6 Jumlah aktual dan prediksi obat dipelajari diberikan dengan menerapkan CLS dan analisis PCR dalam domain linier.

Real(µg/ml)Cls pcr

Predicted (µg/ml)

Recovery (%)

RRMSE*(%) Predicted (µg/ml)

Recovery (%)

RRMSE*(%)

Prednisolone ( mix 1)

5 5.03 100.60 0.60 0.95 99.00 1.00

10 10.03 100.30 0.30 9.92 99.20 0.8015 14.9 99.33 0.67 14.9 99.33 0.6720 19.8 99.00 1.00 19.8 99.00 1.0025 25.1 100.40 0.40 24.8 99.20 0.8030 30.1 100.33 0.33 29.5 98.33 1.67

Tetracycline(mix I)

5 4.93 98.60 1.40 4.97 99.40 0.6010 9.91 99.10 0.90 9.92 99.20 0.8015 14.8 98.67 1.33 14.9 99.33 0.6720 19.9 99.50 0.50 19.8 99.00 1.0025 25.1 100.40 0.40 24.8 99.20 0.8030 30.1 100.33 0.33 29.4 98.00 2.00

Prednisolone(mix II)

10 9.94 99.40 0.60 9.9 99.00 1.0015 15.2 101.33 1.33 14.5 96.67 3.3320 19.8 99.00 1.00 19.7 98.50 1.5025 24.7 98.80 1.20 24.4 97.60 2.4030 30.0 100.00 0.00 29.4 98.00 2.0035 35.3 100.86 0.86 34.6 98.86 1.14

Chloramphenocol

(mix II)10 9.84 98.40 1.60 9.91 99.10 0.9015 14.8 98.67 1.33 14.7 98.00 2.0020 20.1 100.50 0.50 19.7 98.50 1.5025 25.1 100.40 0.40 24.3 97.20 2.8030 30.2 100.67 0.67 29.1 97.00 3.0035 34.9 99.71 0.29 34.5 98.57 1.43

* RRMSE adalah Akar Relatif Berarti Kesalahan Squared

Tabel 7 Hasil yang diperoleh dengan menerapkan CLS dan analisis PCR dengan campuran disiapkan laboratorium.

Mix componentreal

(µg/ml)

CLS PCRFound

(µg/ml)Found

(%)RRMSE

(%)Found

(µg/ml)Found

(%)RRMSE

(%)

1Tetracycline HCL 10 10.02 100.20 0.20 9.95 99.50 0.50

Prednosolone 25 24.6 98.40 1.60 24.8 99.20 0.80


Prednosolone 30 29.5 98.33 1.67 30.1 100.33 0.33


Prednosolone 20 19.9 99.50 0.50 19.9 99.50 0.504 Tetracycline HCL 25 25.1 100.40 0.40 24.9 99.60 0.40

Prednosolone 10 9.83 98.30 1.70 9.2 92.00 8.00


Prednosolone 25 24.4 97.60 2.40 25.1 100.40 0.40


Prednosolone 15 14.7 98.00 2.00 15.2 101.33 1.33


Prednosolone 5 5.0 100.00 0.00 4.9 98.00 2.00


Prednosolone 30 29.6 98.67 1.33 29.4 98.00 2.00

1Chloramphenico

l12 12.2 101.67 1.67 11.9 99.17 0.83

prednosolone 30 29.8 99.33 0.67 29.7 99.0 1.00

2Chloramphenico

l13 13.2 101.54 1.54 12.9 99.23 0.77

prednosolone 32.5 32.3 99.39 0.61 31.6 97.23 2.77

3Chloramphenico

l25 25.1 100.40 0.40 24.7 98.80 1.20

prednosolone 15 14.9 99.33 0.67 15.1 100.67 0.67

4Chloramphenico

l20 20.3 101.5 1.50 20.1 100.50 0.50

prednosolone 10 9.9 99.00 1.00 10.0 100.00 0.00

5Chloramphenico

l30 29.5 98.33 1.67 29.8 99.33 0.67

prednosolone 15 14.9 99.33 0.67 14.9 99.33 0.67

6Chloramphenico

l20 20.4 102.0 2.00 19.5 97.50 2.50

prednosolone 20 19.6 98.00 2.00 19.8 99.00 1.00

7Chloramphenico

l30 29.4 98.00 2.00 29.2 97.33 2.67

prednosolone 10 10.1 101.0 1.00 9.9 99.00 1.00

8Chloramphenico

l10 10.2 102.0 2.00 9.9 99.00 1.00

prednosolone 10 9.8 98.20 1.80 9.9 99.00 1.00

Tabel 8 Hasil yang diperoleh dengan menerapkan CLS dan analisis PCR untuk bentuk sediaan komersial

Dosage Form

component CLS (% ± S) RRMSE (%) PCR (% ± S) RRMSE (%) Reported (% ± S)

TetracortOintment

Tetracycline HCL 101.0±0.45t= 1.857F=1.266

1.00 99.5±0.70t=2.774F=3.062

0.50 100.5±0.4(28)

prednisolone 98.6±0.25t=1.737F=3.240

1.40 99.4±0.31t=1.637F=2.107

0.60 99.04±0.4(28)

Cortiphen Drops

chloramphenicol 100.5±0.50t=1.726

0.50 98.83±0.56t=1.122

1.17 99.5±0.87(29)

F=3.028 F=2.414prednosolone 99.33±0.20

t=0.683F=6.002

0.67 95.33±0.40t=1.152F=1.501

4.67 99.04±0.4(29)

Cortiphen ointment

chloramphenicol 99.00±1.04t=0.693F=1.429

1.00 99.7±0.83t=3.601F=1.099

3.00 99.5±0.87(29)

prednosolone 98.00±0.92t=2.559F=3.525

2.00 98.00±0.90t=2.603F=3.374

2.00 99.04±0.4(29)

Nilai teoritis pada batas kepercayaan 95% adalah t = 2,776 dan F = 19,0 (n1= 3, n2= 3)

BAB IV

PENUTUP

Kesimpulan

Derivatif,rasioderivatif,CLS danmetodePCRdapat digunakan untuk penentuan

simultan tetrasiklin HCl, kloramfenikol dan prednisolonsebagaicampuran binerbaik dalam

bentuk bubuk murni atau dalam sediaan farmasinya. Metode yang tepat, akurat dan

sederhana. Juga, tidak ada langkah pemisahan diperlukan. Mereka cepat dan tidak

memerlukan peralatan mahal atau canggih jika dibandingkan dengan metode kromatografi.

Jadi, metode yang benar-benar divalidasi dan cocok untuk laboratorium kontrol kualitas, di

mana biaya dan waktu sangat penting.

Daftar Pustaka

Anonim.1979. Farmakope Indonesia Edisi III. Jakarta: Depkes RI

Anonim.1995. Farmakope Indonesia Edisi IV. Jakarta: Depkes RI

Prof.Dr. gholib gandjar Ibnu, DEA.,Apt dkk. 2010. Kimia Farmasi Analisis. PUSTAKA

PELAJAR. Yogyakarta

analisis prednisolon dengan spektrofotometri derivatif.docx

Documents