bai kien tap
TRANSCRIPT
MỤC TIÊU
Hi uể đ c đ nh nghĩa ượ ị nuôi c y t bàoấ ế Hi u và gi i thích ể ả đ c m t s kỹ thu t nuôi c y ượ ộ ố ậ ất bàoế Nuôi c quanơ Nuôi m nh môả Nuôi t bào đ nế ơ
— N mắ đ c tình hình nghiên c u và ng d ng ượ ứ ứ ụTBG Vi t Namở ệ
L CH S NGHIÊN C UỊ Ử Ứ
- Kỹ thu t này đ c phát tri n vào đ u th k 20ậ ượ ể ầ ế ỷ - S ra đ i c a kháng sinh và t nuôi giúp hình thành ự ờ ủ ủnên lĩnh v c nuôi c y t bào.ự ấ ế - Th t không may là « ậ KỸ THU TẬ » này không đ c ượd y trong tr ng h c.ạ ườ ọ
CÁC KI U NUÔI C Y T BÀO ?Ể Ấ Ế
NUÔI C QUANƠ• Toàn b phôi ho c c quan ộ ặ ơ
đ c thu nh n t c th và ượ ậ ừ ơ ểđem nuôi
• Thu n l iậ ợ– Ch c năng sinh lý bình ứ
th ng đ c duy trìườ ượ– T bào duy trì kh năng ế ả
bi t hóa đ y đ . ệ ầ ủ• B t l iấ ợ– Kích th c m u khó ki m ướ ẫ ể
soát– Phát tri n ch m. ể ậ
NUÔI C QUANƠ
NUÔI C Y MÔẤ
• Các m nh nh đ c thu nh n kh i mô và ả ỏ ượ ậ ỏnuôi trong môi tr ng nuôiườ
• Thu n l iậ ợ– M t s ch c năng sinh lý có th duy trì đ c. ộ ố ứ ể ượ– Kích th c m u có th ki m soát đ c. ướ ẫ ể ể ượ
• B t l iấ ợ– Ngu n g c t ch c mô b m t đi. ồ ố ổ ứ ị ấ
NUÔI T BÀOẾ• T bào đ c tách kh i các m nh ế ượ ỏ ả
mô nh b ng c h c ho c enzyme, ỏ ằ ơ ọ ặđ c nuôi theo ki u l p đ n ho c ượ ể ớ ơ ặd ch huy n phù. ị ề
• Thu n l iậ ợ– Nhân kh i trong th i gian dài. ố ờ– Ki m soát đ c kích th c, t l t ể ượ ướ ỉ ệ ế
bào
• B t l iấ ợ– T bào có th m t đi kh năng bi t ế ể ấ ả ệ
hóa
T bào g c trung mô t y x ng ng iế ố ủ ươ ườ(Ngu n: B môn Mô – Phôi, Tr ng ĐH Y Khoa Ph m Ng c Th ch)ồ ộ ườ ạ ọ ạ
QUY TRÌNH T NG QUÁTỔ
L A CH N T BÀO NUÔIỰ Ọ Ế
American Type
Culture Collection
(ATCC)
T các phòng thí ừnghi mệ— D tăng tr ngễ ưở— B o qu n đ s ả ả ể ửd ng trong t ng laiụ ươ
• TBG phôi (đ ng v t)ộ ậ• T bào m m phôi (đ ng v t)ế ầ ộ ậ• T bào g c (t y x ng, máu ế ố ủ ươ
cu ng r n, mô m , th n ố ố ỡ ầkinh, gan ….)
• T bào sinh d ng (nguyên ế ưỡbào s i, t bào máu ngo i vi ợ ế ạ…)
• R t đa d ngấ ạ• Chuyên bi tệ• D ng thành ph mạ ẩ• T pha chự ế• Môi tr ng có huy t ườ ế
thanh (đ ng v t)ộ ậ• Môi tr ng không ườ
huy t thanhế
MÔI TR NG NUÔI T BÀOƯỜ Ế
THI T B NUÔI Ế ỊC Y T BÀOẤ Ế
M T S THI T B - D NG CỘ Ố Ế Ị Ụ Ụ DÙNG Đ NUÔI C Y T BÀOỂ Ấ Ế
• T nuôi COủ 2
• Chai nuôi• Đĩa nuôi• H th ng b o ệ ố ả
qu n l nhả ạ• Nit l ngơ ỏ• Tube quay ly tâm
• Máy h p kh trùngấ ử• Máy s y khôấ• Tube b o qu nả ả• Kính hi n viể• Máy đ c ELISAọ• FACS (Flow
Cytometry)
T COỦỦ 2
T THAO TÁCỦ
ĐĨA NUÔI T BÀOẾ• Đĩa nuôi (Dishes)• Gi ng nuôi (Multiwell ế
plates)• Chai nuôi (Flasks)• Flasks on slide
T B O QU N L NH SÂUỦ Ả Ả Ạ
MÁY QUAY LY TÂM
MÁY H P KH TRÙNGẤ Ử
MÁY S Y KHÔẤ
KÍNH HI N VIỂ
MÁY PHÂN TÍCH SINH H C PHÂN TỌ Ử
MÁY TÁCH T BÀO (Ế FACS)
CytellTM Cell Imaging System
B O QU N T BÀOẢ Ả Ế
• Thu nh n t bào, ly ậ ếtâm, đ m t bào.ế ế
• Huy n phù t bào ề ếtrong 90% FBS+10% DMSO (Môi tr ng ườb o qu nả ả
• B o qu n nhi t đ ả ả ở ệ ộ-1960C trong nit ơl ng.ỏ
• Ki m soát ch ng ể ươtrình máy tính (gi m ả1 phút/ 1 đ )ộ
QUY TRÌNH B O QU NẢ Ả
KỸ THU T NUÔI C B NẬ Ơ Ả
KỸ THU T VÔ TRÙNGẬ
C Y CHUY N – NHÂN KH I T BÀOẤ Ề Ố Ế
B O QU N T BÀOẢ Ả Ế
KỸ THU T VÔ TRÙNG – QUY T Đ NH THÀNH CÔNGẬ Ế Ị
TÓM T T ẮNUÔI C Y MÔ VÀ T BÀOẤ Ế
+ Ngu n mô:ồ- Lo i t bào/mô gì? ạ ế
+ D ng c nuôi:ụ ụ- Chai c y/đĩa c y/gi ng ?ấ ấ ế
+ Môi tr ng nuôi c yườ ấ- Môi tr ng gì? Thành ph n nh th nào?ườ ầ ư ế
+ Thi t b nuôi c yế ị ấ- T c y? T thao tác? T m? T gi hóa ủ ấ ủ ủ ủ ấ ủ ữ
ch t ấ+ Ph ng pháp nuôi c y: ươ ấ
- D ch treo hay bám dính ?ị+ B o qu n:ả ả
- B ng dung d ch gì ?ằ ị