ass.Azra Bačić

Vježba I Mikroskop i tehnika mikroskopiranja

FARMACEUTSKO-ZDRAVSTVENI FAKULTET UNT

KAKO JE SVE POČELO?

Antoni van Leeuwenhoek

• Antony van Leeuwenhoek nizozemski trgovac i naučnik

• Poznat je kao "otac mikrobiologije" i strastveni promatrač mikroskopski sitnog svijeta

• Najpoznatiji je po izumu prvog mikroskopa• Koristeći ručno-izrañene mikroskope, bio je prvi čovjek koji je promatrao jednoćelijske organizme, mišićno tkivo, bakterije, spermatozoide i protok krvi u kapilarama

• Za svoga života izbrusio je oko 500 optičkih leća i stvorio oko 400 vrsta različitih mikroskopa od kojih danas postoji samo 9.

• Njegovi mikroskopi izrañivani su od srebrenih i bakrenih metalnih okvira koji su pričvršćivali rukom brušene leće.

• Mikroskopi koji su sačuvani do danas imaju moćpovećanja od čak 275 puta;

Mikroskop• Naziv mikroskop dolazi od grčke riječi mikros – malen i

skope – gledan. • To je optički instrument koji povećava slike predmeta suviše

sitnih da bi se mogli promatrati golim okom.• Normalno oko najjasnije vidi predmete na udaljenosti 25

cm, udaljeniji predmeti izgledaju manji, a bliži veći., ali nejasniji.

• Mikroskop omogućava da se predmet promatra pod širim vidnim uglom, da se maksimalno približi oku, a da slika predmeta ostane oštra i jasna.

• Mikroskop se sastoji od dva sistema leća ( okular i objektiv );

• na donjem kraju tubusa, iznad preparata nalazi se objektiv, a na gornjem kraju je okular

• Objektiv se sastoji od više leća male žarišne daljine koje djeluju kao jedinstvena konveksna leća.

• Okular je dio najbliži oku, sastoji se od dvije leće koje djeluju kao jedinstvena konveksna leća.

• To je povećalo kojim se povećava slika predmeta dobivena objektivom jer radi na principu lupe.

• Objektiv daje realnu, povećanu i obrnutu sliku predmeta, a okular tu sliku samo povećava.

• Kondenzor se nalazi ispod stolića čija se frontalna leća vidi kroz otvor na stoliću.

• Sastoji se od sabirnih leća koje skupljaju zrake svjetlosti spuštaju na preparat.

• Svrha mu je da osvijetli uzorak. Na kondenzoru se nalazi iris-zaslon ili blenda s polugom za pokretanje, a ispod je lupa koja se može pokrenuti iz ležišta.

• Ispod kondenzora je ogledalo.• Optički dijelovi mikroskopa se čiste papirnatim rupčićem, a

mehanički dijelovi platnenim rupčićem.

PRIJE SVEGA?DA PONOVIMO!!!

Osnovni dijelovi mikroskopa su:a - podlogab - nepomični dio stalkac - pomični dio stalkad - tubusd1 - prostor za prizmue - stolićf - "revolver" za objektiveg - objektivh - okulari - veliki ili makrometarski vijakj - mali ili mikrometarski vijakk - zrcalo (ili drugi izvor svjetla)l - ABBE-ov kondenzorm - vijak za vertikalno pomicanje kondenzoran - iris-zaslono - okvir za filterep - vijak za horizontalno pomicanje kondenzora

Tehnika mikroskopiranja

• Svi optički dijelovi mikroskopa brišu se mekom krpom.• Nakon što ste očistili optičke dijelove, na stolić

stavite preparat koji planirate mikroskopirati pazeći da materijal koji mikroskopirate bude na gornjoj površini predmetnog stakalca.

• Upalite izvor svjetlosti pomoću ogledala fokusirajte svjetlost na stolić.

• Provjerite da li je materijal na predmetnici točno na sredini stolića, te učvrstite preparat na stoliću.

• Na revolveru odaberite rotacijom okular sa najmanjim povećanje ( 10X ). Gledajući sa strane ( ne kroz okular ) okrećući makrovijak podignite stolić mikroskopa do kraja

• Noviji mikroskopi imaju tzv. graničnik koji sprečava oštećenje preparata ili leće mikroskopa. Stariji mikroskopi nemaju graničnik, pa treba pažljivo podizati stolić.

• Nakon toga gledajući kroz okular , uz pomoć makrovijka nañite sliku, te je izoštrite pomoću mikrovijka. ( kako bi bili sigurni da je to što vidite uistinu mikroskopska slika-pomaknite malo predmetnicu, ako se nañena slika takoñer pomiče, onda je ona mikroskopska slika, a ako se ne pomiče onda se radi o prljavštini ili izgrebanom objektivi ili okularu.)

• Nakon što je mikroskopska slika pronañena, kako bi što bolje je proučili povećamo povećanje na način što na revolveru odaberemo objektiv sa većim povećanjem.

• Mikroskopska slika se izoštrava okretanjem mikrovijka.

MIKROSKOPIRANJE POD IMERZIJOM

• Ovaj način mikroskopiranja je dobio ime po tome što se posebno mineralno ulje ( najčešće cedrovo ulje ) stavlja izmeñu leće i mikroskopskog razmaza.

• Ulje se koristi jer povećava ugao loma svjetlosti, odnosno indeks refrakcije, a time se povećava količina svjetla koja ulazi u objektiv.

a) Preparat se stavi na stolić mikroskopa učvrsti se.b) Na sredinu se stavi kap imerzionog uljac) Na revolveru se odabere imerzioni objektiv ( 100x) te gledajući

sa strane s pomoću makrovijka podiže stolić mikroskopa tako da leća objektiva uroni u kap imerzionog ulja

d) Nakon toga , gledajući kroz okular, okrećući makrovijak nañe se slika koja se izoštri pomoću mikrovijka .

Pravilo!

• Za sve vrijeme mikroskopiranja leća imerzionog objektiva mora biti stalno uronjena u imerziono sredstvo.

• ZA VJEŽBU !

Elektronski mikroskop•Umjesto leća i objektiva koristi zraku elektrona koju usmjerava fokusirajući elektromagnetske polje.•Granica razlučivosti elektronskog mikroskopa je 0,1 - 0,2 nm što omogućava viñenje mnogo detaljnije slike (200 - 350 nm kod svjetlosnog mikroskopa).

•Elektronski mikroskop omogućuje velika povećanja (100 000 ×) tankih presjeka preparata (režu se ultramikrotomom, debljine do 20 nm). •Elektronska mikroskopija omogućila je promatranje i proučavanje staničnih organela poput •membrane,•ribosoma, •mikrotubula i •mikrofilamenata.

• Dva su osnovna tipa:

a) TEM (transmisijski elektronski mikroskop) –oblikuje sliku pomoću elektrona koji prolaze kroz objekt promatranja

b) SEM (skenirajući elektronski mikroskop) -skenira površinu preparata te sliku oblikuje otkrivajući elektrone koji se odbijaju od vanjske površine preparata, promatranjem struktura stječe se dojam dubine

PREPARATI

• Svaki predmet ili dio predmeta podešen za gledanje mikroskopom je mikroskopski preparat

• Način izrade pojedinih preparata ovisi od predmeta i cilja planiranog posmatranja ali se materijal predviñen za mikroskopiranje uvijek stavlja na predmetno staklo i pokriva pokrovnim staklom

• Mikroskopski preparati mogu biti:–Privremeni–Trajni

Privremeni preparati

• Obično služe za jednokratno ili kratkotrajno posmatranje

• Prave se na licu mjesta• Zovu se i mokri (svježi)

Trajni preparati

• Se mogu upotrebljavati i više godina• Procedura njihovog pravljenja je duža i

komplikovanija

Rad sa mikroskopom

Zadatak 1. Pravljenje privremenih (svježih) preparata

EMULZIJA (VODE I ULJE)

• U staklenu posudu ili epruvetu nasuti vodu i dodati nekoliko kapi ulja.

• Dobro promućkati emulziju i na predmetno staklo, staklenim štapićem, staviti jednu kapljicu emulzije

• Zatim pod uglom oko 45 oC staviti pokrovno staklo• Paziti da preparat sa strana bude suh kako se ne bi

oštetili optički dijelovi mikroskopa• Ako na preparatu ima viška tečnosti treba je ukolniti

filter-papirom• Ovako pripremljen preparat staviti na mikroskopski

stolić, naći sliku pod malim uvećanjem, a zatim i srednjim

• U vidnom polju uočiti sitne tamije kružiće koji predtavljaju kapljice ulja, te zračne mjehuriće ili vodu

• Nacrtati i obilježiti sliku u vidnom polju!