JF M S E , 28(3), pp. 653~660, 2016. www.ksfme.or.kr

산해양 연구 권 통권, 28 3 , 81 , 2016. http://dx.doi.org/10.13000/JFMSE.2016.28.3.653

- 653 -

서 론. Ⅰ

국내 가 양식 에 경남 해지1970

역 심 시작 어 국 행,

었 나 이후 가 를 , 2000

가 재 노 늘어남에 라 그 소

요를 지 지 못 여 재 산업이 많이

축 고 있는 실 이다 이에 가 양식업계에.

는 과 같 요 재창출 해 여러

면 많 노 고 있다 이에 가 여 .

가 노카르 감염증 국내 가 양

식장에 매 생 여 폐사를 일 킴 써 양

식 어업인들에게 심각 경 해를 주고 있

는 질병이다 종 해산어나 담 어 에 생.

는 균 질병 나인 노카르 증 열

어인 트라, Hyphessobrycon innesi 에

처 그 감염사 가 보고 었다(Valdez and

이후 미국 지개송어Conroy, 1963). ,

Oncorhynchus mykiss (Snieszko et al., 1964),

크 연어, Oncorhynchus tshawytscha (Wolke and

등 연어과 어Meade, 1974) (Isik wt al., 1999)

weakfish, Cynoscion regalis (Cornwell et al.,

Corresponding author : 061-690-8981 jdk0123@korea.kr

(R2016065)

가물치에 한 Nocardia seriolae의 인 감염과 조직학 찰

남실* 한 * 명 * 도정 * 정승희* 조 ** 도

(* 수산과학원 **경상 도 어 산업 )

Artificial Infection with Nocardia seriolae and the Histological Examination

at Snakehead Channa argus

(Nam-Sil LEE* Hyun-Ja HANㆍ * Myoung-Sug KIMㆍ * Jeong-Wan DOㆍ * Sung-Hee JUNGㆍ *ㆍ

Hyae-In CHO** Jin-Do KIMㆍ )

(* National Institute of Fisheries Scienceㆍ**Gyeongbuk Native Fish Business Center)

Abstract

Snakehead, Channa argus were intraperitoneally infected with Nocardia seriolae. at the concentrations of

1.5×107 cfu/ or 1.5×10㎖ 8 cfu/ . The infected fish were kept in aquaria at 25 and 30 for 3 weeks. ㎖ ℃ ℃

Clinical signs and mortality were monitored daily to evaluate the virulence. All artificially infected fish

showed the same clinical sign found in naturally infected fish. All the fish infected with 1.5×108 cfu/ of ㎖

N. seriolae died within 24days. N. seriolae showed higher virulence to snakehead at the temperature 30 . ℃

Internal lesions such as whitish nodules in the infected internal organs were not correlated with mortality

but some degenerative changes were observed in all the infected organs within a week. Whitish nodules in

the infected organs which are the typical character in nocardial infection was initially found at two weeks

after the artificial infection in snakehead.

Key words : Artificial infection, Nocardia seriolae, Snakehead

- 654 -

일본 어2011), , Seriolae quinqueradiata

만 큰입 베스(Kusuda and Nakagawa, 1978), ,

Micropterus salmoides 농어(Chen, 1992), ,

Lateolabrax japonicus (Chen et al., 2000) three

striped tigerfish, Terapon jarbua (Wang et al.,

그리고 국 부2009) , , Larimichthys crocea

등 담 어 해산어 에 (Wang et al., 2005)

감염 어 폐사 사 원인균 분리 동 , ,

진단법 등에 많 보고가 있다 특히 가.

, Channa argus에 Nocardia seriolae 감염

과 분리에 해 는 에 해 , Wang et al., (2007)

처 보고 었다.

국내에 는 양식산 가 에 량폐사를 일

키는 원인균 Nocardia 를 보고 고 이후 sp.

본 균 N. seriolae 동 며 어 노카,

르 감염증에 특 과 어 부 노카르

균 신속히 검출 검사법에 PCR

해 리 보고 다, (Park et al., 2005; 2009;

그러나 국내 양식 가 에 Lee et al., 2009).

있어 주 감염원 경 등에 해 재 지

명 히 지지 며 장 조직 내에 결,

이 면 이 결 외부에 포 등에

막 므 항생 에 료 효과가

없어 뚜 료 책이 없는 실 이다.

라 본 연구에 는 국내 양식장 병

든 가 부 분리 여 N. seriolae 동

균주를 사용 여 건강 가 에 사 과 균

농도를 달리 여 인 감염시킴

써 나타나는 감염상황과 주요 조직 내 결

조직 내 병변 등 찰 여 질병에

료 에 자료를 모색 고자

다.

재료 방법. Ⅱ

시험어1.

시험어는 노카르 증 생이 없었 양어

장 부 후 당 산 어 마리100 g 100

장 를 구입 다 구입 어는 ( 17.5-21.3 ) . ㎝

내 면 양식연구 겨 여과 식

리 조 트 효 량 개 조 내에 조( 50 , 8 )ℓ

당 각각 마리 용 여 일간 시 용 합10 30

사료를 이면 다. N. seriolae 균에

인 감염시험 시작 에는 시험어 5

마리를 작 추출 여 균에 감염이

없 인 후에 시험에 사용 다 . N.

seriolae 감염 여부 인 작 추출 시

험어 마리를 해부 여 신장조직 일부를 취5

여 를 추출 후DNA , N. seriolae 검출

해 작 특이 인 primer NS1:

과 5 ' - A C T C A C A G C T C A A C T G T G G - 3 '

사용 여NG1:5'-ACCGACCACAAGGGGG 3' , –

실시 고 양 체인 PCR N. seriolae 균과 함께

동 여 그 결과를 인 다(Miyoshi and

Suzuki, 2003).

시험균주2.

시험용 균주는 에 부산 지역에 소재 는 2014

폐사가 생 양식장에 채집 병든 가

부 분리 어 생 특 시험 (CK-14008)

N. seriolae 동 해 개 특이 를 primer

사용 여 실시 여 동 균 사용PCR

다 인 감염시험에 들어가 에는 보존.

어있 균 BHI Agar plate Lowenstein-Jensen

에 양 여 재분리 다 분리 medium .

균 양 특 염색 항산 염색 , Gram

등 실시 여 N. seriolae 균임 재 인 다 .

인 감염 균 보는 brain heart

평 지에 에 일간 infusion agar (BHIA) 25 5℃

양 다 집락 멸균 루 집균

다 이를 멸균 생리식염 에 탁시 며 그 원.

단 희 시 일 농도를 맞추10

어 사용 다.

- 655 -

균액의 농도별 인 감염시험3.

N. seriolae 균 농도별 인 감염 실

시 다 균 . 1.5×107 cfu/ 1.5×10㎖ 8 cfu/

개 농도 주사 시험구 개 조2 1㎖

구 개 시험구를 다 균 감염 3 .

각 희 농도별 조 균 시험어 복강

내에 개체별 주사 여 감염시 다 동0.2 . ㎖

시에 조구에는 개체별 같 량 멸균 생

리식염 를 복강내에 주사 다 감염 시킨 .

후에는 매일 시험어 폐사상황 주요 장 내

결 등 주 이상 계속 찰 면 3

며 폐사 직 시험어 주요 장 조

직 내에 결 부 부 균 재분리

고 에 동 실시 다PCR .

수온별 인 감염시험4.

별 인 감염시험 개 25 30 2℃ ℃

시험구를 여 실시 다 감염 법 .

균 농도별 인 감염시험과 같 법 균

시험어 복강 내에 직 주사 는

법에 해 개체별 실시 다 감염에 사용.

균 농도별 인 감염 시험구 슷

인 2.1×108 다 농도별 인 감염시 cfu/ . ㎖

험에 같이 인 감염 후 매일 시험어 폐사

상황 주요 장 내 결 등 찰,

며 폐사 직 시험어 부 균 재

분리 고 에 동 실시 다PCR .

병리조직학 변화5.

인 감염 어 병리조직 변 를 찰

여 균 농도를 1.6×106 복 cfu/㎖

강내 주사 시험구 마리 를 다 인(20 ) .

감염 후에는 지 면 주일 간30 1℃

격 주간 병 인 증상 는 폐사 직3

어 를 마리 택 여 부검 여 조사5

다 즉 어 가미 근 신장 장 간. , , , , ,

장 부 취 조직 포르말린에 ,

고 다 시간 내에 여 동 고, 12~24

시간 차 고 다 이후 충분 12 2 .

를 거 다 단계별 에 탈, (100~70%) ,

에 명 과 거쳐 라 에 포매xylene

여 라 조직 럭 작 고 마이크 톰,

이용 여 께 (Leica, Germany) 4 ㎛

여 슬라이드 라스에 부착시 다 이어 슬라이.

드 상 분 거 고 에 건조시50℃

자동 자동염색시스 (Leica, Germany)

염색 실시 후H&E(Hematoxylin and Eosin) ,

입 여 미경 찰 다(Zaiss,

Germany).

결 과. Ⅲ

균의 농도별 인 감염시험1.

건강 가 복강 내에 농도를 다르게

단계 2 N. seriolae 균 주사 여 인 감염

시험 실시 결과 균 농도가 낮 , 1.5×107

감염시킨 시험구에 는 감염 후 일째cfu/ 21㎖

지 마리도 폐사 지 며 일째에는 , 23

마리가 폐사 나 폐사 시험어 주요 장2

가미 등에 결 찰

없었다 생존 마리 시험어에 도 결. 8

찰 없었다 면에 균 농.

도가 단계 높 1.5×108 감염시킨 시 cfu/㎖

험구에 는 감염 후 일째부 폐사 시작21

여 일째에 모 폐사 다 폐사 모든 시험24 .

어를 상 해부 여 조사 결과 마리 , 10

마리에 주요 조직 내에 결 이 찰7

었다 편 조구에 는 어느 마리([Fig. 1]).

에 도 결 는 폐사가 없었다 .

인 감염어 결 부 부 재분리 균

법에 해 PCR N. seriolae 동 었다 .

수온별 인 감염시험2.

- 656 -

인 감염 후 를 지 개25 30 2℃ ℃

시험구 부 폐사 폐사 직 시험어를

해부 여 병변 인 다 . 25℃

지 시험구에 는 감염후 일째부 폐사 20

시작 여 시험 종료시인 일째 지 마리가 폐27 3

사 며 폐사 마리 모 간 장 신장 등 3 , ,

주요 장 내에 여러 개 결 고 있

었다 그러나 나 지 생존 마리에([Fig. 2]). 7

는 결 찰 없었다 를 . 30℃

지 시험구에 는 폐사 생이 감염 후 일18

째부 나타나 시작 다 시험구. 30℃

에 폐사 마리 마리만 주요 장 내에 10 3

결 고 있었다 인 감염어 ([Fig. 3]).

결 부 부 재분리 균 법에 해 PCR

N. seriolae 동 었다 .

[Fig. 1] The mortality and formation of nodules in organs of intraperitoneally injected fishes with different

concentration of Nocardia seriolae.

[Fig. 2] The mortality and formation of nodules in organs of intraperitoneally injected fishes with 2.1×108

cfu/ of ㎖ Nocardia seriolae at 25 and 30 of water temperature. ℃ ℃

- 657 -

[Fig. 3] Formation of white nodules in liver,

spleen and kidney at experimentally

infected snakehead with Nocardia

seriolae

병리조직학 변화3.

인 감염후 시험어 주요 장 조직 내에,

일어나는 경시 인 병리조직 변 를 찰

결과 감염 주후 간에 , 1

주 염증 이 인 며 장과 ([Fig. 4-1]),

신장에 는 구 포 침 과 그 주

충 이 찰 었다 특히 신장 ([Fig. 4-2, 4-3]).

뇨 상 에 뚜 산 과립 침 이 찰

었다 는 결 ([Fig. 4-3]).

보이지 나 일부개체에 조직 본 미

경 찰에 소 결 이 찰 도

다 감염 주 후에는 도 뚜 이 찰. 2

는 흰색 결 이 간 장 신장 롯 여 장, ,

주변 러싸고 있는 지 조직에 도 나타나

시작 다 그러나 심장([Fig. 4-4, 4-5, 4-6]).

과 소 가미에 는 결 이 지

다 감염 후 주째에는 결 이 다. 3

량 찰 었 며 주째보다 결 크 도 크고 , 2

주 조직 사도 뚜 게 나타났다([Fig. 4-7,

4-8, 4-9]).

고 찰. Ⅳ

노카르 증 국내 해외에 여러 종

담 어 해산어에 감염 어 해를 주고 있는

질병 있다 (Labrie et al., 2008).

굴에 있어 도 감염 어 폐사를 일 킨다는 보고

도 있다 자어나 어(Engelsma et al., 2008).

에 개월간 검출이 지 고도 히 진행

는 만 인 질병이다 노카르 증에 .

미생 병리생리 연구 보는 많, ,

지 다 재 국내 가 양식(Shpperd, 2006).

장에 시 고 있는 노카르 감염증

경우에 있어 도 가 자어나 어 에는 일

인 양 법 는 노카르 균이 지 내

에 장이 느리며 잘 검출 지 나 어

가 도 장 여 장 조직 내에 흰500~700 g

색 결 는 등 증상이 나타나면 균

검출이 용이해진다 라 이 질병에 해 신속.

히 고 처 해 개 특이

를 이용 에 해 검출 여야 다primer PCR

(Park et al., 2009).

어 노카르 균 실험 감염과

여 담 어인 큰입 베스 장 에 ( 10~13 )㎝

N. asteroides 균 0.8~8 (3.5×10㎎ 8~3.5×109 cfu/

농도 근 복강내 주사 여 병원 )㎖

찰 결과 일째에 폐사 며 감염, 28 100％

어 근 심장 신장 장 간 가미에, , , , ,

흰색 결 이 인 었다(Chen et al., 1992).

- 658 -

[Fig. 4] Tissue sections(H&E stain) of artificially infected snakehead. 1:Liver of a week after injection,

2:Spleen of a week after injection, 3:Kidney of a week after injection, 4:Liver of two weeks

after injection, 5:Spleen of two weeks after injection, 6:Kidney of two weeks after injection,

7:Liver of three weeks after injection, 8:Spleen of three weeks after injection, 3:Kidney of

three weeks after injection. N; nodules, a: aorta, v: vein, arrows: hyaline droplets infiltration in

epithelium of renal tubules, bar:200㎛

N . seriolae 에 실험 감염과 해

는 주 해산어종에 보고 어 있다. N. seriolae

균 크 농어에 34~40 g 1×107 농도 cfu/㎖

복강 내에 주사 여 일 이내에 량 폐사10

면 자연 감염어 사 증상 나타내었다

부 체 (Chen et al., 1992). Wang et al.(2005) (

에 180~200 g) N. seriolae 균 복강주사 경구 , ,

침지법 인 감염시험 실시 결과 복,

강 내 주사 침지에 감염실험에 는

폐사가 나타났 나 경구감염에 해 는 100% ,

폐사가 나타나지 다고 다 양식 어에 .

있어 는 균Itano et al.(2006, 2008) N. seriolae

가지 농도별 복강주사 침지 근 주사 경3 , , ,

구감염 감염어 동거 등 여러 가지 법 ,

감염 도 여 각각 다른 LD50 값 얻었 며 ,

복강주사 경우, 1.9×102 낮 균농도에 cfu/㎖

도 LD50에 이르 다.

Three striped tigerfish N. seriolae 감염사 보

고에 건강 어 에 1.2×107 1.2×10∼ 8 cfu/㎖

균 감염시 주간 찰 결과 이상 5 , 95 %

- 659 -

폐사 나타내었다(Wang et al., 2009). Wang

가 에 있어 노카et al.(2007) 180-200 g

르 증에 연구에 분리 균 복강주

사 경구 감염 침지법 등에 인 감염 , ,

실시 여 감염 후 일 이내에 모든 시험어가 폐18

사 었다.

본 연구에 는 국내 병든 가 에 분리

N. seriolae균 후 건강 가 에 100 g

높 농도인 1.5×108 복강 내에 cfu/㎖

주사 여 감염시킨 결과 감염 후 일 후부 , 21

일 사이에 모든 시험어가 폐사 다 이를 24 .

같 어종 실시 결Wang et al.(2007)

과 여보면 본 시험에 사용 시험어 ,

크 는 작고 균 농도가 높 에도 불구 고

감염 후 폐사에 이르는 시간이 다소 었다 이.

는 어체별 균에 항 차이 는 균주

간 독 차이일 것 사료 다 . Wang

다른 어종이지만 슷 균량 et al.(2009)

주간 찰 여 이상 폐사 이 나타났 5 95%

Nocardia 속 균 어체 내에 히 증

식 여 폐사를 일 키는 것 생각 다.

별 감염실험에 는 를 25 30 30℃ ℃ ℃

지 시험구가 폐사 시작이 시험구보다 25℃

빨랐 며 일째에 모 폐사 여 이 폐사시27

폐사 과 상 어 나타났다 그러나 . 30℃

시험구에 폐사 마리 마리만 주요 장 10 3

내에 결 고 있었다 이는 폐사 결.

이 연 어 나타나지 는다는 것

명 다.

조직 인 변 를 찰 실험구 경

우 주사농도가 다른 실험구에 해 다소 낮 지,

만 주사 후 일주일째에 간 장 신장 조직 내, ,

에 이미 변 변 가 찰 었 며 개체에 라,

는 결 단계이거나 소 결 이

찰 었다 주째 이후 부검 시에는 . 2

뚜 게 흰색 결 이 찰 는 개체가 많

며 이런 개체는 병리조직 찰에 도 결,

이 부 주변 조직 결 이

지 다른 장 가미 심장 소 등 에( , , )

도 변 변 가 찰 었다 라 본 균 감염.

과 히 찰 해 는 좀 낮 농

도 감염시 장시간 고 찰해야 것

생각 다.

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Received : 29 February, 2016

Revised : 25 March, 2016

Accepted : 11 April, 2016