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Función de las importinasTRANSCRIPT
Araceli Mejia Salvador
Transporte de RNAs al citoplasma Una labor de “Importinas”
8-Agosto-2013
El transporte núcleo-citoplasmático es realizado mediante una familia de transportadores-receptores que interaccionan con RNAs y con el complejo nuclear.
Importinas Heterodimero formados por dos subunidades α y β.
Exportinas
Utilizando una combinación de técnicas:
Cristalografía de rayos X Estudios de mutagénesis Presentaron
Pruebas Ultracentrifugación analítica ↓ Ensayos in vivo
Desempeñan un papel clave en la regulación de la unión de la ARN cubiertos por el CBC en las células.
Importina-α y importina-β,
Se modifican como resultado de la adición
Proteína eIF-4E CBC
Esencial para el reconocimiento y la unión de dos proteínas de unión al ARN
El ARNm
Es crucialSubunidad ribosomal menor reconozca el extremo 5‘ del ARNm
Búsqueda de codón de inicio y traducción de proteínas.
eIF-4F
eIF-4A
eIF-4G
eIF-4E
La unión entre el ARN cubierto y el eIF-4E es bajo estricta regulación del factor de crecimiento
eIF-4E
Depende de la fosforilación de una familia de proteínas
Lo que aumenta su afinidad por la cubierta
UniónDesencadena liberaciónRegular
Se modifican como resultado de la adición
Proteína eIF-4F CBC
Esencial para el reconocimiento y la unión de dos proteínas de unión al ARN
El ARNm
CBC• Heterodímer
o
Subunidad de 20 kDa
(CBP20)
Subunidad reguladora de
80 kDa (CBP80)
Se une a ARNmediante ciertos
factores Es un elemento importante durante los diferentes aspectos del procesamiento de ARN
La exportación de ARNm al citoplasma.
Worch R, et al. Sugieren que el CBC tiene una afinidad ↑ por el ARN que el eIF-4E.
Mediante Uso de
fluorescencia Resonancia de
plasmón superficial
Compararón Cinética de las interacciones
7-metil-guanosina+eIF-4E v/s
7-metil- guanosina+CBC
La asociación de transcritos de ARN unidos a CBC estaban fuertemente a favor de estas consideraciones termodinámicas y dinámicas.
La concentración celular de eIF-4E era ↓ en comparación con la del CBC
Se trato de entender cómo las importinas confieren estos efectos reguladores sobre el CBC.
Hubo ciertos contactos clave con CBP20 implicados en la unión del RNA que no se llevaron acabo.
Construcción análogo
Importina-α
Importina- αΔ
Suprimido el dominio de unión
importina-β
CBC(CBP80+CBP20)+ Importina-αΔ
Lo que llevó a considerar que importina-β podría estar jugando este papel en el tetrámero:
CBP80+CBP20+importin-+ importin-β
¿La importina-β podría desplazar los RNA cubiertos mediante su unión a las regiones sobre CBP20?
Discernir el desencadenamiento de Importina-β
La mutación en CBP80
Tener un efecto estabilizador en loop
α2-α3 de CBP20
Afecta + las interacciones entre Tyr20 y Tyr43 de CBP20 y el anillo de metil guanosina de la estructura de la tapa del RNA.
“Surco de unión" interactúa 1ros 14 residuos de CBP20
v/s
Determinó 14 residuos de aminoácidos N-terminales y los residuos C-terminales 126-156 de CBP20 son puntos de contacto críticos para unión importin β.
Importina-β
REGULACIÓN DEPENDIENTE DE IMPORTINAS
Hidrólisis Ran-GTP
Complejo deficiente
RNA
Señal Localización
IPO8 Importina 8 Componente importante del complejo de proteína Ago
humanas.
Modula localización nuclear de Ago2
El agotamiento de Importina 8 interfiere con los miARN guiando así a un silenciamiento de los genes.
Se considera: Factor de especificidad en la vía de los genes que puede cumplir funciones adicionales en la importación Ago nucleares.