exudat lingual

SC ELITE MEDICAL SRL

CARACALLABORATOR DE

ANALIZE MEDICALE

PROCEDURA EXAMINARE

Cod:PE-03

IDENTIFICAREA SI TESTAREA SENSIBILITATII GERMENILOR PATOGENI

DIN EXUDATUL LINGUAL, ANTIFUNGIGRAMA

Editia:1 Revizia:1

Pagina:1

PROCEDURA SPECIFICĂ“IDENTIFICAREA ŞI TESTAREA SENSIBILITĂŢII

GERMENILOR PATOGENI DIN EXUDATUL LINGUAL, ANTIFUNGIGRAMA”

COD: PE-03

Editia: 1Revizia: 1Data: 01.2013Examplar nr:

ELABORAT,DR. POPESCU LILIANA

VERIFICAT,SEF LABORATORDR. POPESCU LILIANA

APROBAT,MANAGER DR. ENACHE DRAGOS

Avertisment: Documentul de fata este proprietatea SC ELITE MEDICAL SRL CARACAL. Reproducerea integrala sau partiala a prezentului document, in orice publicatie si prin orice procedeu (electronic, mecanic, fotocopie, microfilm) este interzisa daca nu exista acordul scris al LABORATORULUI DE ANALIZE MEDICALE

Copiile sunt numerotate si controlate


CARACALLABORATOR DE

ANALIZE MEDICALE

PROCEDURA EXAMINARE

Cod:PE-03



Editia:1 Revizia:1

Pagina:2

LISTA DIFUZARE

NR. EXEMPLAR MANUAL

EDITIA/REVIZIA

DESTINATAR (FUNCTIE SAU NUME)

SEMNATURA DATA

1 1 / 1 SEF LABORATOR

2 1 / 1 RMC

3 1 / 1 RENAR


CARACALLABORATOR DE

ANALIZE MEDICALE

PROCEDURA EXAMINARE

Cod:PE-03



Editia:1 Revizia:1

Pagina:3

PAGINA REVIZIILOR IN VIGOARE

NR. CRT

NR. FISA DE MODIFICARE/DATA

CAPITOLE SI SUBCAPITOLE AFECTATE DE MODIFICARI

NUME RESPONSABIL CALITATE

SEMNATURA

0 1 2 3 40 Ed.1/revizia0 Redactarea initiala

1Ed.1/revizia1 Inlocuire RMC Pencu Mirela 1.2


CARACALLABORATOR DE

ANALIZE MEDICALE

PROCEDURA EXAMINARE

Cod:PE-03



Editia:1 Revizia:1

Pagina:4

CUPRINS

NR. CAP.

DENUMIRE CAPITOL NR. PAG.

PAGINA DE GARDA 1LISTA DE DIFUZARE 2

PAGINA REVIZIILOR IN VIGOARE 3CUPRINS 4

1. SCOP 52. DOMENIU DE APLICARE 5

3. DOCUMENTE DE REFERINTA 5

4. DEFINITII SI ABREVIERI 6

5. ECHIPAMENTE DE ANALIZA.MATERIALE 66. DESCRIEREA ACTIVITATII-REGULI DE PROCEDURA 67. RESPONSABILITATI 148. INREGISTRARI 159. ANEXE 15


CARACALLABORATOR DE

ANALIZE MEDICALE

PROCEDURA EXAMINARE

Cod:PE-03



Editia:1 Revizia:1

Pagina:5

IDENTIFICAREA ŞI TESTAREA SENSIBILITĂŢII GERMENILOR PATOGENI DIN EXUDATUL LINGUAL, ANTIFUNGIGRAMA

1. SCOP

Procedura prezintă modul de executare pentru: - Identificarea agenţilor patogeni din exudatul nazal. -Testarea sensibilităţii în vitro pentru bacteriile patogene izolate din exudatul nazal, prin efectuarea antibiogramei.

2. DOMENII DE APLICARE

Procedura va fi aplicată de către personalul responsabil de încercare din cadrul compartimentului bacteriologie din cadrul Laboratorul de Analize Medicale SC ELITE MEDICAL.

3. DOCUMETE DE REFERINŢĂ

3.1. Metode de laborator de uz curent, Ed. Med., Vol.II , 1977, Ministerul Sănătăţii, ACADEMIA DE Ştiinţe Medicale, pag. 16-29,85-93. 3.2. Tratat de Microbiologie Clinica Buiuc ,1999,Ed.Medicala,Bucuresti. 3.3. Instrucţiuni de folosire cu tabele de sensibilitate ale discurilor de antibiotice. 3.4. Instrucţiuni de folosire pentru mediile de cultură: geloză sânge, AABTL, CLED, TSI, MIU, MILF,Citrat, Sabouraud, Chapman. 3.5. Instrucţiuni de folosire ale truselor de tipare a stafilococilor şi a streptococilor. 3.6 .Instrucţiuni de folosire pentru kit-ul de coloraţie Gramm.


CARACALLABORATOR DE

ANALIZE MEDICALE

PROCEDURA EXAMINARE

Cod:PE-03



Editia:1 Revizia:1

Pagina:6

4. DEFINIŢII ŞI ABREVIERI:

-floră microbiană saprofită = floră microbiană normală sau populaţii bacteriene complexe, autohtone, adaptate la condiţiile gazdei umane, care populează repere anatomice din primele ore de existenţă ale organismului uman-floră microbiană patogenă. Patogenitatea este capacitatea reală sau potenţială a unei bacterii de a determina natural sau în condiţii experimentale, un proces infecţios şi este atributul unei specii microbiene, în raport cu o gazdă aflată într-o stare convenţională de rezistenţă.-microorganisme condiţionat patogene (oportuniste) – aparţin microbiogenozei normale a tegumentelor şi mucoaselor, în mod normal nepatogene, devin patogene prin surprinderea gazdei în momente de scădere generală a rezistenţei antiinfecţioase sau prin introducerea lor accidentală în număr mare în anumite teritorii ale organismului , în mod normal sterile.-Mediul II solid tip Sabouraud-se foloseste pentru cultivarea levurilor.

5. ECHIPAMENTE DE ANALIZĂ.MATERIALE: - autoclav, -termostat, -hotă cu flux laminar vertical, -anse de însămânţare, -bec de gaz Bunsen, -placi Petri, -eprubete şi stative, -standard McFarland.

6. DESCRIEREA ACTIVITĂŢII – REGULI DE PROCEDURĂ

Pregătirea pacientului pentru recoltare:-pacientul este informat explicit despre tehnica de recoltare.

Recoltarea probelor

Exudatul lingual se preleva in : a) în interiorul laboratorului în spaţii special amenajate, b) în exteriorul laboratorului: cabinete de ORL,etc.


CARACALLABORATOR DE

ANALIZE MEDICALE

PROCEDURA EXAMINARE

Cod:PE-03



Editia:1 Revizia:1

Pagina:7

Prelevatul clinic:

-să fie recoltat înainte de începerea terapiei antifungice,-recipiente sterile adecvate , -continut corespunzator solicitarii-se recolteaza preferabil dimineata inainte ca pacientul sa fi mancat sau sa se fi spalat pe dinti, daca recoltarea nu se efectueaza dimineata este necesar ca aceste operatiuni sa fie facute cu minimum 4 ore inainte de recoltare.-proba se recolteaza prin raclaj de pe limba. Probele se recepţionează în maxim două ore de la prelevare, este recomandat ca insamântăriile pe mediile de cultura sa se faca imediat ce probele ajung la laborator.

Nu se acceptă prelevatele :- nemarcate,-care au depăşit timpul de transport,-necorespunzătoare solicitării.

Etichetarea recipienţilor:

-proba biologică şi cererea de analize se preiau de către compartimentul recepţie-registratură,- nume, prenume, data naşterii, adresă, tipul prelevatului, solicitarea de examen, tratamentul cu antibiotice anterior şi actual,-data şi ora recoltării, -data şi ora recepţionării probei,-se etichetează probele cu numele şi numărul din registru de intrare,-se transportă rapid în laborator în compartimentul microbiologie.

Transportul şi păstrarea prelevatelor

-prompt – preferabil în maxim 2-3 ore , este recomandat ca transportul sa se faca la temperatura ambianta.

Pregătirea probelor pentru lucru

-se scriu caietele de lucru,-se resping probele care nu sunt corect închise, desfăcute, vărsate sau recoltate in recipienţi necorespunzători.


CARACALLABORATOR DE

ANALIZE MEDICALE

PROCEDURA EXAMINARE

Cod:PE-03



Editia:1 Revizia:1

Pagina:8

Etape de lucru

I). Bacterioscopie directă:

a). preparat proaspăt între lama si lamela b). preparat colorat Gram

II) Însămânţări

-pe mediile: agar Sabouraud cu Chloramfenicol si Gentamicina, mediu care inhiba multiplicarea bacteriilor contaminante si permite o buna dezvoltare a levurilor.

III) Incubarea la termostat.

-după incubare 24 ore la 37° C, în cazul culturilor pozitive, se notează aspectele macroscopice ale coloniilor si se procedează la identificarea genului si speciei

IV. ) Prezentam criterii minimale necesare identificării principalilor fungi prezenti la nivel lingual: Candida spp., Aspergillus spp., Alternaria spp., Geotrichum candidum, Fusarium spp., Acremonium spp., Scopulariopsis spp., Trichosporon spp., Histoplasma capsulatum, Coccidioides imitis;

a)caractere de cultura: Cultivarea produselor patologice se face pe agar Sabouraud cu Chloramfenicol si Gentamic-ina, mediu care inhiba multiplicarea bacteriilor contaminante si permite o buna dezvoltare a lev-urilor.

Pe mediile de cultura levurile de interes medical se dezvolta in 48-72 de ore de incubare, in anumite suspiciuni diagnostice perioada de urmarire prelungindu-se pana la 7 zile.

Dupa obtinerea primoculturii se verifica obligatoriu puritatea acesteia, deoarece contaminarea bacteriana compromite etapele ulterioare de identificare a speciei. In acest scop se efectueaza frotiuri colorate Gram care vor fi examinate la microscop cu obiectivul de imersie. In cazul prezentei bacteriilor se fac repicari in vederea purificarii culturii


CARACALLABORATOR DE

ANALIZE MEDICALE

PROCEDURA EXAMINARE

Cod:PE-03



Editia:1 Revizia:1

Pagina:9

b)caractere microscopice:

In cadrul examenului cultura si identificare fungi cu antifungigrama se urmareste izolarea in special a levurilor..

Examenul microscopic urmareste prezenta, forma si dimensiunile formatiunilor levurice: blastospori, pseudohife, hife, eventual artrospori. Detalii precum prezenta sau absenta capsulei, modul de inmugurire vor fi retinute ca aspecte importante pentru viitoarea identificare. La pacien-tii sub tratament antifungic este posibila evidentierea levurilor la examenul microscopic in ab-senta cresterii acestora pe mediile de cultura.

c)caractere biochimice:

Uzual, se face cu ajutorul unui sistem biochimic standardizat bazat pe fermentarea a 7 zaharuri si un test enzimatic. Cu ajutorul acestui sistem se pot identifica urmatoarele specii: Candida spp., Cryptococcus spp., Trichosporon spp., Saccharomyces cerevisiae, Rhodotorula Pentru tulpinile ce nu pot fi identificate utilizand sistemul mentionat anterior, se foloseste un alt sistem biochimic bazat pe fermentarea a 13 zaharuri si 3 teste enzimatice, ce permite identificarea urmatoarelor specii: Candida spp., Cryptococcus spp., Trichosporon spp., Saccharomyces cerevisiae, Geotrichum spp., Prototheca wickerhamii.


CARACALLABORATOR DE

ANALIZE MEDICALE

PROCEDURA EXAMINARE

Cod:PE-03



Editia:1 Revizia:1

Pagina:10

V. ) Următoarea etapa în stabilirea diagnosticului bacteriologic este efectuarea:

Antifungigramei difuzimetrice standard

Pentru determinarea sensibilitatii la antifungice se foloseste urmatoarelor antifungice: Amfotericina B, Nystatin, Flucytosine, Fluconazol, Ketoconazol, Miconazol, Econazol.

1. Antifungigrama difuzimetrică se efectuează pe mediu Saubouraud in cazul levurilor. Se face o suspensie bacteriana într-un flacon steril de 0.5uMc Farland, care se disperseaza pe o placa petri pe care aplică discurile de antifungice la 30 mm distanţă .

Se incubează placa la termostat 24 h.Se citeşte zona de inhibiţie si se raportează caracterul

SENSIBIL/INTERMEDIAR/REZISTENT în funcţie de indicaţiile producătorului.

PRINCIPUIUL METODEI

O cantitate de substanta antifungica este depusa pe suprafata unui mediu de cultura , preinsamantat cu bacteria testata. Concomitent se produc doua fenomene: difuzarea substantei antimicrobiene si cresterea bacteriei.

In zonele in care substanta antimicrobiana realizeaza concentratii mai mari decat concentratia minima inhibitoare, bacteria nu creste.

INDICATII

Metoda este indicata pentru laboratoarele care testeaza un numar relativ mic de tulpini bacteriene cu crestere rapida la 35 -37 0C, fara diferente semnificative, de la tulpina la tulpina, a ratei de crestere.


CARACALLABORATOR DE

ANALIZE MEDICALE

PROCEDURA EXAMINARE

Cod:PE-03



Editia:1 Revizia:1

Pagina:11

SCOP, OPTIUNE, ORIENTARE, MONITORIZARE

Scopul terapiei antimicrobiene ramane acela de a distruge sau cel putin de a stanjeni multiplicarea unui agent patogen intr-un organism care, la un moment dat, nu poate realiza el insusi aceasta sau o face insuficient.

Optiunea, orientarea si controlul terapiei antimicrobiene sunt decizii bazate pe triada formata de: subtilitatea rationamentului clinic; cunoasterea farmacologiei substantelor antimicrobiene;rezultatul testelor de laborator;

Pentru necesitatile terapeutice curente definim o tulpina microbiana In raport cu un medicament antimicrobian ca:- sensibila: in situatia in care concentratia minima inhibitoare (CMI) este de minimum 2-4 ori mai mica decat nivelul medicamentului in ser sau alte umori, in conditiile administrarii unor doze mici sau repetate, normale. In aceste conditii, efectul terapeutic este posibil. - rezistenta: daca CMI este mai mare decat nivelul medicamentului in ser sau alte umori. In acest caz medicamentul este toxic pentru pacient inainte de a fi toxic pentru germenul respectiv.- intermediara, sau moderat sensibila: daca CMI este apropiata de nivelul medicamentului din sange sau alte umori. in acest ultim caz, efectul terapeutic este intermediar sau imprevizibil, cu exceptia situatiilor in care se pot administra doze foarte mari si medicamentul se concentreaza in focarul de infectie, sau poate fi administrat local.

Dintre multiplele metode, procedee si variante, pentru laboratorul clinic se recomanda metoda difuzimetrica. Aceasta este mai usor de executat, mai economica si asigura o reproductibilitate de aproximativ 90%, daca se respecta strict toate conditiile de lucru.

MODUL DE LUCRU

Insamantarea. Se imerseaza tamponul de vata steril in suspensia bacteriana etalonata. Se scurge excesul de lichid prin rotirea tamponului pe peretii eprubetei. Se descarca tamponul in striuri paralele pe toata suprafata mediului, succesiv in trei directii, prin rotirea placii cu 600. Insamantarea se poate realiza si prin inundare, urmata de eliminarea lichidului in exces.

Placile insamantate se lasa la uscat pentru absorbtia inoculului, prin mentinerea la temperatura camerei 5 -15 minute pana la depunerea discurilor. Discurile se vor aseza in placa numai atunci cand nu mai exista lichid pe suprafata mediului.

Se depun discurile cu substante antifungice la distanta de minimum 15 mm de marginea placii si de 30 mm intre centrele a doua discuri vecine.

Dupa repartizarea discurilor, placile se incubeaza imediat, la 370 C, timp de 16-18 ore.


CARACALLABORATOR DE

ANALIZE MEDICALE

PROCEDURA EXAMINARE

Cod:PE-03



Editia:1 Revizia:1

Pagina:12

CITIREA SI INTERPRETAREA REZULTATELOR ANTIFUNGIGRAMEI

Dupa trecerea perioadei de incubatie se masoara cu rigla gradata in mm diametrul zonelor de inhibitie completa, in lumina reflectata pe fond negru mat.

In caz de urgenta, placile pot fi citite la 5-6 ore de incubare, cu conditia verificarii diametrelor zonelor de inhibitie dupa 16-18 ore. .

Se urmareste inhibitia completa a cresterii, facând abstractie de coloniile fine, periferice, vizibile numai la scrutare atenta prin transparenta..

Se verifica daca diametrele zonelor de inhibitie a fiecarei substante antimicrobiene se cuprind in limitele variatiei admise (conform tabelelor universale, standardului NCCLS)

Arhivarea rezultatelor


CARACALLABORATOR DE

ANALIZE MEDICALE

PROCEDURA EXAMINARE

Cod:PE-03



Editia:1 Revizia:1

Pagina:13

Registrele de analiză din sectorul bacteriologic se arhivează pe o perioadă de cinci ani fiind stocate pe hard-disk, pentru o perioadă de cinci ani în serverul din departamentul informatic al laboratorului.

Protecţia personalului

În timpul lucrului personalul poartă mânuşi de unică folosinţă şi va purta echipamentul de protecţie. De asemenea se vor respecta dispoziţiile standard şi instrucţiunile de protecţia muncii. Astfel:

- personalul va purta echipament de protecţie corespunzător-recoltarea se va realiza în spaţii cu geamuri închise -manevrarea mijloacelor de încercare şi a probelor recoltate se va face cu atenţie-deşeurile se vor colecta în containere speciale-spălarea mâinilor se va face după fiecare recoltare-se vor decontamina suprafeţele de lucru-recipientele se manevrează cu atenţie fiind plasat pe o suprafaţă orizontală în zona de lucru;-spălarea mâinilor şi dezinfectarea lor-respectarea precauţiunilor standard şi a instrucţiunilor privind securitatea muncii

Stabilirea incertitudinii de măsurare

Pentru parametrii bacteriologici laboratorul de analize medicale are în evidenţă tulpini standardizate de Candida albicans. Se efectuează 10 determinări: descărcări pe mediu de cultură şi respectiv stabilirea caracterului de patogenitate pentru germenii standardizaţi. Repetabilitatea rezultatului certifică asupra conformităţii procedurale anterior descrise. Pentru această procedură se efectuează determinări trimestriale, lunare şi/sau săptămânale sau ori de câte ori responsabilul de analiză observă valori discordante în rezultate.

7. Responsabilitati


CARACALLABORATOR DE

ANALIZE MEDICALE

PROCEDURA EXAMINARE

Cod:PE-03



Editia:1 Revizia:1

Pagina:14

Asistenţii din serviciul recoltare: -recoltează probele şi completează „Registru de Recoltare”, -înmânează probele asistentului care transportă probele în condiţii standardizate către compartimentul microbiologie

Asistentul medical din cadrul compartimentului microbiologiede din cadrul laboratorului de analize medicale al SC ELITE MEDICAL :-face recepţia probelor aduse de asistent, -atribuie cererii un număr de registru în laborator, etichetează probele pe care scrie numele prenumele şi codul numeri al pacientului,-scrie caietele de lucru.

Medicul responsabil de activitatea din cadrul sectorului bacteorologie:-verifică numărul de registru şi corespondenţa lor cu probele de lucru, -examinează înregistrările, dispune repetarea unor determinări daca observa valori neconcordante,-executa determinarile biologice,-elaboreaza prezenta procedura.

Seful de laborator:-verifica si validează (semnează si parafează) „ Buletinul de investigaţii paraclinice”.-adauga comentarii generale, dacă este cazul.-dispune repetarea unor determinări daca observa valori neconcordante.-verifica si participa la elaborarea prezentei proceduri.

Responsabilul Managementul Calitatii: -difuzează prezenta procedura.

Directorul General:

-aproba prezenta procedura.

8. INREGISTRARI


CARACALLABORATOR DE

ANALIZE MEDICALE

PROCEDURA EXAMINARE

Cod:PE-03



Editia:1 Revizia:1

Pagina:15

-Tabel catagrafie- autocontrol aeromicroflora cod FL-5.17-01 - Tabel catagrafie- autocontrol suprafete cod FL-5.17-02

-Caietele de lucru ale sectorului bacterologie CL- 03 -Caietul de control al sterilizarii si autoclavarii FL.5.7.4 -Caietul de control intern al mediilor de cultura si al discurilor de antibiograma CLCI 03-01,respectiv CLCI 03-02

9. ANEXE

Prezenta produra nu are anexe

exudat lingual

Documents