jurnal kckt

7/29/2019 jurnal kckt

1/5

Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner 2005

921

KEBERADAAN RESIDU ANTIBIOTIKA TILOSIN

(GOLONGAN MAKROLIDA) DALAM DAGING AYAM ASAL

DAERAH SUKABUMI, BOGOR DAN TANGERANG

(Status of Tylosin Antibiotic Ressidue in Chicken Meat Samples from

Sukabumi, Bogor and Tangerang)

YUNINGSIH,T.B.MURDIATI dan S.JUARIAH

Balai Penelitian Veteriner, PO Box 151, Bogor 16114

ABSTRACT

Tylosin (maacrolide antibiotics) is commonly usedd in feed additives besidee in treaatment. Improper

used of tylosin can cause residue, resistance and allergic reactions. In order to find out the extend of theresidue content, so an improved method has been developed for determination of tylosin in tissue. The tissue

were extracted with acetonitrile and isooctane and its filtrate was applied to SPE cartriddge (C-18), then wereeluted with methanolic ammonium 0.1 M and detected by High Pressure Liquid Chromatography (HPLC)

wwith UV detection at 287 nm, C-18 Bondapak coloumb, mobile phase: 0.05 M NaHPO4; CH3CN = 65 : 35,

pH 2.5. The validation improved method were repeatability precision (5 replicatee standars aat 1concentration) calibration and linearity (replicate standars at 5 concentratious) and recovery (replicate spike

samples with 3 concentration of standard). Its method applied to 36 tissue sample ffrom Sukabumi,

Tangerang aand Bogor. The result of validation method were relaative standard deviation: 5,23%, linearity

(correlation coeficient): 0.9975 aand mean of recovery 101.91, 86,66 and 94,74%. The validation result ofimproved method is quite significant 15 of 36 samples were positive tylosin, containing 0.0006-0.0845 ug/g

which below the maximum ressidue limits (MRL tylosin in tisue 0.1 ug/g.

Key Words: Tlosin Antibbiotic Residue, Chicken Meat, HPLC

ABSTRAK

Antibiotika tilosin (golongan makrolida) merupakan antibiotika yang sudah umum ditambahkan dalam

pakan (feed additives), disamping untuk pengobatan. Pemakaian yang tidak beraturan akan menyebabkanresidu dalam produk hewani, disamping mempunyai efek toksik langsung juga menyebabkan reaksi alergi

dan resistensi. Untuk mengetahui sejauhmana residu tilosin dalam daging, maka dicoba pengembangan

metoda analisis residu antibiotika tilosin, yaitu mengekstraksi daging dengan asetonitril dan isooctane

kemudian hasil ekstrak dimurnikan melalui cartridge C18 (Sep-Pak C18) dan dielusi dengan campuranlarutan amonium metanol dan deteksi dengan alat kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) dengan kolom C-

18 Bondapak, fase gerak : 0,05M NaHPO4: CH3CN= 65: 35 pada p.H= 2,5, kecepatan alir 1,5 ml/menit dan

panjang gelombang 287 nm, dengan detektor U.V. Uji validasi pengembangan metoda, yaitu dilakukan uji

kesesuaian sistem, kalibrasi dan linearitas dan uji perolehan kembali (recovery). Kemudian metoda hasilpengembangan diaplikasikan terhadap sampel lapang, sebanyak 36 sampel daging ayam asal peternakan

daerah Kabupaten Sukabumi, Bogor dan Tangerang, dan ampel asal pasar tradisional di Bogor. Hasil validasi

metoda menunjukkan simpangan baku: 5,23%, linearitas: koefesien korelasi = 0,9975 dan rata- rata perolehan

kembali dari penambahan larutan standar tilosin, masing-masing yaitu 2,0 ug (3 ulangan), 5,0 ug (2 ulangan)dan 10,0 ug (3 ulangan) adalah 101,91, 86,66 dan 94,74%. Nilai hasil uji validasi sesuai dengan nilai

ketentuan dalam kriteria uji validasi, maka pengembangan metoda residu tilosin dalam daging cukup baik.

Hasil analisis residu tilosin terhadap sampel lapang menunjukkan 15 dari 36 sampel positif, yaitu berkisarantara 0,00060,0845 ug/g tilosin yang masih dibawah ambang batas yang diperbolehkan.(ambang batastilosin dalam daging: 0,1 ug/g) dan sampel lainnya negatif.

Kata Kunci: Residu Antibiotika Tilosin, Daging Ayam, KCKT


2/5


922

PENDAHULUAN

Pemakaian obat-obatan antibiotika

terutama dibidang peternakan yang terus

menerus dan tidak memperhatikan waktu hentiantibiotika (withdrawal time) dalam industri

peternakan akan menyebabkan residu

antibiotika dalam produk hewani, dapat

menyebabkan reaksi alergi, resistensi dankemungkinan keracunan.

Adanya residu antibiotika golongan

tetrasiklin dan penisilin telah banyakdilaporkan. Akan tetapi residu antibiotika

golongan makrolida belum banyak dilaporkan,

kecuali dari luar negeri (CHAN et al, 1994;

OKAet al, 1995). Padahal antibiotika golonganmakrolida dipakai secara luas dalam industri

peternakan yang umumnya dipergunakan untuk

pengobatan penyakit pernafasan disampingditambahkan dalam campuran makanan

sebagai perangsang pertumbuhan (growth

promotor). (MELLOR, 2000; DELEPINE et al.,

1996).Masih banyak peternak yang melakukan

kesalahan dalam pemberian (pemakaian dosis)

antibiotika pada ternaknya karena hanya untukmengejar keuntungan atau target produksi yang

diinginkan. Dilain pihak, kesalahan pemberian

dosis (over dosis) dapat meninggalkan residu

dalam jaringan organ ternak yang mungkindapat mengakibatkan keracunan bagi

konsumen. Dengan bahayanya residu ini, maka

European Union menetapkan nilai MaksimumResidu Limit (MRL) untuk golongan

makrolida tertentu dalam daging, misalnya

untuk spiramisin adalah 100 ug/kg, 50 ug/kg

untuk tilmikosin, 100ug/kg untuk tilosin dan400 ug/kg untuk erithromisin (COMMITTE FOR

VET. MEDICINAL PRODUCTS, 1995). Lebih

lanjut, European Community (EC)Commission Decision 93/256/EEC

menyatakan bahwa MRL dalam daging untuk

tilmicosin 50 ug/kg, 100 ug/kg untuk tilosin,

200 ug/kg dan 300 ug/kg masing- masing

untuk spiramisin dan neospiramisin.Antibiotika tilosin dan tilmikosin

merupakan 2 dari 16 antibiotika golonganmakrolida yang menunjukkan antimikroba

paling aktif/kuat melawan bakteri gram

positive dan mycoplasma spp. Begitu juga

menurut UNANDAR (2000) menyatakan bahwa

tilosin adalah salah satu dari golonganmakrolida yang mempunyai bahan aktif yang

efektif dalam pencegahan dan pengobatan pada

ayam termasuk meningkatkan produktivitas,sehingga paling banyak dipergunakan oleh

peternak.

Untuk mengetahui sejauhmana keberadaanresidu antibiotika golongan makrolida tilosin

dalam daging ayam, maka dicoba penelitian

pengembangan metoda analisis residu tilosin.Pengembangan metoda dilakukan dengan cara

modifikasi metoda menurut GAUGAIN dan

ANGER (1999), sampel daging diekstraksidengan bahan kimia organik asetonitril,

kemudian hasil ekstraksi dimurnikan melaluicatridge C18, dan hasil pemurnian dideteksi

dengan alat KCKT. Selanjutnya metoda hasil

pengembangan diaplikasikan terhadap sampel

lapang.

MATERI DAN METODE

Penelitian dibagi dalam 2 tahap, yaitu:

pengembangan metoda residu tilosin dalam

daging dan analisis residu antibiotika tilosindalam sampel lapang.

Pengembangan metoda residu tilosin dalam

daging

Pengembangan metoda dilakukan denganmodifikasi metoda menurut GAUGAIN dan

ANGER(1999).

Timbang 5 g sampel daging dan tambahkan25 ml asetonitril, homogenkan dengan alat

homogeniser, kemudian dikocok selama 3

menit dengan alat vortex dan tambahkan 10 mlisooktan kemudian kocok perlahan-lahan.

Untuk pemisahan lapisan yang sempurna dari

hasil pengocokan, maka dilakukan sentrifus

dengan kecepatan 3000rpm selama 10 menit.

Kemudian lapisan atas dibuang dan lapisanbawah diambil untuk pemeriksaan. Lakukan

pemurnian (clean up) dari lapisan bawah

tersebut dengan memasukkan lapisan tersebutkedalam catridge C18 (Sep Pak C18) yang

telah dikondisikan dengan 10 ml metanol dan

10 ml aquabides. Setelah itu catridge dielusidengan 1,0 ml larutan 0,1 M ammonium-metanol, kemudian 0,5 ml larutan dipotasium

hidrogen phosphate buffer (34,84 g

dipotassium hidrogen fosfat dalam 1Laquabides). Hasil elusi dievaporasi dengan alat

rotavapor dan hasil pengeringan siap untuk


3/5


923

diinjeksikan pada alat KCKT dengan

mempergunakan kolom C-18 Bondapak danfase gerak campuran larutan NaH2PO4 0,05M:

CH3CN= 65: 35 pada p.H 2,5, kecepatan alir:

1,5 ml/menit, panjang gelombang 287 nmdengan UV detektor.

Uji validasi

1. Uji kesesuaian sistem2. Kalibrasi dan linearitas3. Uji perolehan kembali (recovery) dengan

penimbangan 5 g sampel daging yang

masing-masing untuk blanko (tanpa

penambahan standar) dan penimbanganuntuk penambahan larutan standar tilosin

masing- masing dengan konsentrasi 2,0 ug

dengan pemeriksaan 3 ulangan, kemudian5,0 ug pemeriksaan 2 ulangan dan 10,0 ug

pemeriksaan 3 ulangan

Analisis residu antibiotika tilosin dalam

sampel lapang

Sebagai bahan pemeriksaan yaitu sampel

lapang yang berupa daging ayam broiler asal

dari beberapa peternakan ayam di daerah JawaBarat, yaitu daerah Kabupaten Sukabumi,

Kabupaten Tangerang, Kabupaten Bogor dan

sampel asal pasar tradisional di Bogor.

Kemudian dilakukan pemeriksaan residutilosin dalam sampel lapang tersebut denganmempergunakan metoda hasil pengembangan

(tahap 1).

HASIL DAN PEMBAHASAN

Uji validasi untuk kesesuaian sistem

dilakukan untuk mengetahui apakah alat,metoda dan sistem KCKT yang digunakan

dapat memberikan hasil yang baik. Uji ini

dilakukan penyuntikan ulang larutan standar

tilosin dengan konsentrasi 10 ppm sebanyak 5

kali dan hasilnya simpangan baku relatif:

5,23%. Sementara itu, ketentuan simpanganbaku maksimum 10% untuk sistem KCKT

yang baik, maka sistem KCKT dalam analisis

tilosin ini dapat dipergunakan. Kemudiankalibrasi dan linearitas diperoleh dengan

injeksi konsentrasi mulai 0,5; 1,0; 2,0; 5,0 dan

10,0 ppm, diperoleh koefisien korelasi: r =

0,9975, maka ada hubungan linear antarakonsentrasi dan luas area di bawah peak.

Kemudian untuk uji perolehan kembali dengan

penambahan 2,0 ug standar tilosin dengan 3ulangan, 5,0 ug dengan 2 ulangan dan 10,0 ug

dengan 3 ulangan pemeriksaan dan hasilnya

menunjukkan nilai rata-rata recovery masing-

masing adalah 101,91; 86,66; dan 94,74%

tertera pada Tabel 2. Sementara itu, nilai

recovery menurut ketentuan kriteria uji validasiuntuk analisis residu obat adalah kisaran antara

70110% (CODEX, 1993), makapengembangan metoda analisis residu

antibiotika tilosin dalam daging cukup baik.

Tabel 1. Uji kesesuaian sistem dari KCKT untuk

deteksi tilosin

Ulangan injeksi pada

KCKT

Luas area di bawah

peak

1 99307

2 90586

3 115506

4 116313

5 119714

Rata-rata 114241,8

Simpangan baku 10671

Simpangan baku relatif 5,23%

Uji linearitas

No. injeksi

pada KCKT

Konsentrasi

tilosin (ppm)

Luas area di

bawah peak

1 0,5 4467

2 1,0 4364

3 2,0 20365

4 5,0 57621

5 10,0 120369

Koefesien korelasi: r = 0,9975

Hasil pengembangan metoda analisis residutilosin diaplikasikan terhadap sampel lapang

yang jumlahnya masing-masing sebanyak 9

sampel asal Sukabumi, 7 sampel asal

Kabupaten Tangerang, 8 sampel asal

Kabupaten Bogor dan 10 sampel asal pasartradisionaldiBogor. Hasilanalisisresidutilosindalam sampel lapang tertera pada Tabel 2.


4/5


924

Tabel 2. Hasil uji recovery pengembangan metoda analisis residu tilosin dalam daging

Penambahan standar tilosin (ug) Hasil recovery (ug) Hasil recovery (%) Rata-rata recovery (%)

2,0 2,02 100,78

2,0 2,02 103,482,0 2,07 101,47 101,91

5,0 5,28 105,63

5,0 3,38 67,70 86,6610,0 7,31 73,05

10,0 11,67 116,71

10,0 9,45 94,47 94,74

Tabel 3. Hasil analisis residu tilosin dalam daging

ayam asal Bogor, Subumi, Tangerang dan

pasar tradisional di Bogor

Kode sampel Kandungan tilosin (ug/g)

Bogor

B1 -B2 -

B3 -

B4 -

B5 -B6 -

B7 -B8 -

Sukabumi

S1 0.0022

S2 0,0845S3 -

S4 -

S5 -

S6 -

S7 0,0085

S8 -S9 0,0011

Tangerang

T1 0,0011T2 0,0042

T3 -

RPU T! 0,0025

RPU T2 0,0008RPU T3 0,0006

RPU T4 -

RPU T5 -

RPU T6 0,0042Pasar tradisional

Ps B1 -

Ps B2 -

Ps B3 -

Ps B4 -Ps B5 -

Ps B6 0,0061

Ps B7 0,0013Ps B8 0,0012

Ps B9 0,0094

Ps B10 0,0026

Berdasarkan hasil pemeriksaan residu

dalam sampel lapang menunjukkan sampel

daging ayam asal daerah Sukabumi sebanyak 4

dari 9 sampel (44,44%) mengandung tilosinyang berkisar antara 0,0011-0,0845 ug/g.

Kemudian sampel asal dari daerah Tangerang

sebanyak 6 dari 9 sampel (66,66%)mengandung tilosin yang berkisar antara

0,00060,0042 ug/g. Sementara itu, sampel

asal daerah Bogor sebanyak 8 sampel tidakmengandung tilosin (tidak terdeteksi) dan 5

dari 10 sampel (50%) asal pasar tradisional di

Bogor mengandung tilosin yang berkisar antara0,00120,0094 ug/g.

Berdasarkan pengamatan hasil pemeriksaan

residu antibiotika tilosin terhadap keseluruhan

sampel lapang menunjukkan bahwa 15 dari 36

sampel (41%) adalah positif tilosin dan yanglainnya negatif.

Berdasarkan ketentuan batas maksimum

residu (BMR) untuk tilosin dalam dagingadalah 0,1ug/g (SNI, 2000), maka kandungan

residu tilosin dalam keseluruhan sampel masih

jauh dibawah nilai batas maksimum residu(BMR), dan semua sampel daging ayam

tersebut aman untuk dikonsumsi.

KESIMPULAN

Berdasarkan penelitian analisis residu

antibiotika tilosin terhadap sampel dagingayam, maka dapat diambil kesimpulan bahwa:

1. Nilai hasil uji validasi pengembanganmetoda sesuai dengan ketentuan dalamnilai kriteria uji validasi, maka analisis

residu tilosin dalam daging cukup baik.

2. Hasil pemeriksaan residu antibiotikatilosin terhadap sampel lapang: 15 dari 36

(41%) sampel daging ayam mengandung

positif tilosin dan lainnya negatif.


5/5


925

3. Semua sampel daging ayam mengandungtilosin berkisar antara 0,0006 - 0,0845ug/g yang masih dibawah nilai BMR,

sehingga aman untuk dikonsumsi.

4. Sebagai saran yaitu sebaiknya tetap harusdiperhatikan waktu pengobatan antibiotika

pada ternak sampai masa panen, sehingga

dapat diketahui apakah sudah melewatiatau masih dalam waktu henti antibiotika

tersebut (terkontrol) untuk menghindarkanadanya residu.

DAFTAR PUSTAKA

CHAN,W.,G.C.GERHARDT dan C.D.C.SALISBURY.1994. Determination of Tylosin and

Tilmicosin Residues in Animal Tissues by

Reversed Phase Liquid Chromatography. J.AOAC 77(2): 331333.

CODEXALIMENTARIUS.1993. Residues of VeterinaryDrugs in Foods. Foods and AgricultureOrganization of the United Nations. Vol. 3, 2nd

ed. Italy.

COMMITTEEFORVETERINARYMEDICINALPRODUCTS.1995. Reccord of the meeting of the working

group on the safety residues. (Unpublisheddata).

DAMME, K. 1999. Natural enhancers could replace

antibiotics in turkey feed. World Poult. 15:

2728.

DELEPINE, B., D.H. PESSEL dan P. SANDERS. 1996.Multiresidue Method for Confirmation of

Macrolide Abtibiotics in BovineMuscle by

Liquid Chromatography/ Mass Spectrometry.

J. AOAC. 79(2): 397404.

GAUGAIN, M.J. dan ANGER, B. 1999. Multiresidue

Chromatographic Method for the

Determination of Macrolide Residues inMuscle by High Performance Liquid

Chromatography with UV Detection. J.

AOAC. 82(5): 10461053.

MELLOR, S. (2000). Antibiotics are not only growthpromotor. World Poult. 16: 1415.

OKA,H,H.NAKAZAWA,K.HANADA dan J.D.MAC.NEIL. 1995. Chemical Analysis of Macrolide

Antibiotics. Chemical Analysis for

Agriculture. pp. 165205.

STANDARNASIONAL INDONESIA. No. 01-6366-2000.

Badan Standar Nasional Jakarta.

UNANDAR, T. 2000. Mengenal Aspek Ilmiah

Tylosin. Infovet. Edisi 066.

jurnal kckt

Documents