MMAANNUUAALL DDEE LLAABBOORRAATTOORRIIOO DDEE MMIICCRROOBBIIOOLLOOGGIIAA..

FFaaccuullttaadd ddee CCiieenncciiaass BBáássiiccaass.. PPrrooggrraammaa ddee QQuuíímmiiccaa..

LLeeoonnaarrddoo PPaaddiillllaa SSaannaabbrriiaa.. BBaacctteerriióóllooggoo.. MMSScc.. AAggoossttoo ddee 22000066

PPrraaccttiiccaa ddee llaabboorraattoorriioo NNoo 11..

MMiiccrroossccooppííaa yy TTiinncciioonneess ..

11.. MMiiccrroossccooppííaa:: OObbjjeettiivvooss::

11-- CCoonnoocceerr ee iiddeennttiiffiiccaarr llaass ddiiffeerreenntteess ppaarrtteess ddeell mmiiccrroossccooppiioo yy ssuu uussoo.. 22-- AApprreennddeerr eell mmaanneejjoo aaddeeccuuaaddoo ddeell mmiiccrroossccooppiioo..

IInnttrroodduucccciióónn:: GGrraacciiaass,, aa llaa iinnvveenncciióónn ddeell mmiiccrroossccooppiioo yy aa llaass oobbsseerrvvaacciioonneess rreeaalliizzaaddaass aa ttrraavvééss ddee eessttee,, ffuuee ppoossiibbllee eell ccaammbbiioo ddeell ppeennssaammiieennttoo aall ppaassaarr ddee uunnaa tteeoorrííaa aassiimmbbiióóttiiccaa,, aa uunnaa tteeoorrííaa ssiimmbbiióóttiiccaa.. EEssttee mmaarraavviilllloossoo aappaarraattoo ppeerrmmiittiióó vveerr uunn mmuunnddoo mmiiccrroossccóóppiiccoo ddeessccoonnoocciiddoo;; ddee aallllíí vviieennee ssuu nnoommbbrree.. EEll mmiiccrroossccooppiioo ccoommppuueessttoo ccoonnssiissttee eenn ddooss ssiisstteemmaass ddee lleenntteess,, eell oobbjjeettiivvoo yy eell ooccuullaarr,, mmoonnttaaddooss eenn eexxttrreemmooss ooppuueessttooss ddee uunn ttuubboo cceerrrraaddoo.. EEll oobbjjeettiivvoo eessttáá ccoommppuueessttoo ddee vvaarriiaass lleenntteess qquuee ccrreeaann uunnaa iimmaaggeenn rreeaall aauummeennttaaddaa ddeell oobbjjeettoo eexxaammiinnaaddoo.. LLaass lleenntteess ddee llooss mmiiccrroossccooppiiooss eessttáánn ddiissppuueessttaass ddee ffoorrmmaa qquuee eell oobbjjeettiivvoo ssee eennccuueennttrree eenn eell ppuunnttoo ffooccaall ddeell ooccuullaarr.. CCuuaannddoo ssee mmiirraa aa ttrraavvééss ddeell ooccuullaarr ssee vvee uunnaa iimmaaggeenn vviirrttuuaall aauummeennttaaddaa ddee llaa iimmaaggeenn rreeaall.. EEll aauummeennttoo ttoottaall ddeell mmiiccrroossccooppiioo ddeeppeennddee ddee llaass lloonnggiittuuddeess ffooccaalleess ddee llooss ddooss ssiisstteemmaass ddee lleenntteess.. EEqquuiippooss -- mmiiccrroossccooppiioo..

PARTES DE UN MICROSCOPIO ÓPTICO

SSiisstteemmaa óóppttiiccoo OOCCUULLAARR:: LLeennttee ssiittuuaaddaa cceerrccaa ddeell oojjoo ddeell oobbsseerrvvaaddoorr.. AAmmppllííaa llaa iimmaaggeenn ddeell oobbjjeettiivvoo.. OOBBJJEETTIIVVOO:: LLeennttee ssiittuuaaddaa cceerrccaa ddee llaa pprreeppaarraacciióónn.. AAmmppllííaa llaa iimmaaggeenn ddee ééssttaa.. CCOONNDDEENNSSAADDOORR:: LLeennttee qquuee ccoonncceennttrraa llooss rraayyooss lluummiinnoossooss ssoobbrree llaa pprreeppaarraacciióónn.. DDIIAAFFRRAAGGMMAA:: RReegguullaa llaa ccaannttiiddaadd ddee lluuzz qquuee eennttrraa eenn eell ccoonnddeennssaaddoorr.. FFOOCCOO:: DDiirriiggee llooss rraayyooss lluummiinnoossooss hhaacciiaa eell ccoonnddeennssaaddoorr.. SSiisstteemmaa mmeeccáánniiccoo SSOOPPOORRTTEE:: MMaannttiieennee llaa ppaarrttee óóppttiiccaa.. TTiieennee ddooss ppaarrtteess:: eell ppiiee oo bbaassee yy eell bbrraazzoo.. PPLLAATTIINNAA:: LLuuggaarr ddoonnddee ssee ddeeppoossiittaa llaa pprreeppaarraacciióónn.. CCAABBEEZZAALL:: CCoonnttiieennee llooss ssiisstteemmaass ddee lleenntteess ooccuullaarreess.. PPuueeddee sseerr mmoonnooccuullaarr,, bbiinnooccuullaarr,, RREEVVÓÓLLVVEERR:: CCoonnttiieennee llooss ssiisstteemmaass ddee lleenntteess oobbjjeettiivvooss.. PPeerrmmiittee,, aall ggiirraarr,, ccaammbbiiaarr llooss oobbjjeettiivvooss.. TTOORRNNIILLLLOOSS DDEE EENNFFOOQQUUEE:: MMaaccrroommééttrriiccoo qquuee aapprrooxxiimmaa eell eennffooqquuee yy mmiiccrroommééttrriiccoo qquuee ccoonnssiigguuee eell eennffooqquuee ccoorrrreeccttoo.. MMAANNEEJJOO YY UUSSOO DDEELL MMIICCRROOSSCCOOPPIIOO ÓÓPPTTIICCOO

11.. CCoollooccaarr eell oobbjjeettiivvoo ddee mmeennoorr aauummeennttoo eenn ppoossiicciióónn ddee eemmpplleeoo yy bbaajjaarr llaa ppllaattiinnaa ccoommpplleettaammeennttee..

22.. CCoollooccaarr llaa pprreeppaarraacciióónn ssoobbrree llaa ppllaattiinnaa ssuujjeettáánnddoollaa ccoonn llaass ppiinnzzaass mmeettáálliiccaass.. 33.. CCoommeennzzaarr llaa oobbsseerrvvaacciióónn ccoonn eell oobbjjeettiivvoo ddee 44xx ((yyaa eessttáá eenn ppoossiicciióónn)) oo ccoollooccaarr eell

ddee 1100 aauummeennttooss ((1100xx)) ssii llaa pprreeppaarraacciióónn eess ddee bbaacctteerriiaass.. PPaarraa rreeaalliizzaarr eell eennffooqquuee::

11.. AAcceerrccaarr aall mmááxxiimmoo llaa lleennttee ddeell oobbjjeettiivvoo aa llaa pprreeppaarraacciióónn,, eemmpplleeaannddoo eell ttoorrnniilllloo mmaaccrroommééttrriiccoo.. EEssttoo ddeebbee hhaacceerrssee mmiirraannddoo ddiirreeccttaammeennttee yy nnoo aa ttrraavvééss ddeell ooccuullaarr,, yyaa qquuee ssee ccoorrrree eell rriieessggoo ddee iinnccrruussttaarr eell oobbjjeettiivvoo eenn llaa pprreeppaarraacciióónn ppuuddiiéénnddoossee ddaaññaarr aallgguunnoo ddee eellllooss oo aammbbooss..

22.. MMiirraannddoo,, aahhoorraa ssíí,, aa ttrraavvééss ddee llooss ooccuullaarreess,, iirr sseeppaarraannddoo lleennttaammeennttee eell oobbjjeettiivvoo ddee llaa pprreeppaarraacciióónn ccoonn eell mmaaccrroommééttrriiccoo yy,, ccuuaannddoo ssee oobbsseerrvvee aallggoo nnííttiiddaa llaa mmuueessttrraa,, ggiirraarr eell mmiiccrroommééttrriiccoo hhaassttaa oobbtteenneerr uunnaa iimmaaggeenn bbiieenn ddeeffiinniiddaa..

33.. PPaassaarr aall ssiigguuiieennttee oobbjjeettiivvoo.. LLaa iimmaaggeenn ddeebbeerrííaa eessttaarr yyaa ccaassii eennffooccaaddaa yy ssuueellee sseerr ssuuffiicciieennttee ccoonn mmoovveerr uunn ppooccoo eell mmiiccrroommééttrriiccoo ppaarraa llooggrraarr eell eennffooqquuee ffiinnoo.. SSii aall ccaammbbiiaarr ddee oobbjjeettiivvoo ssee ppeerrddiióó ppoorr ccoommpplleettoo llaa iimmaaggeenn,, eess pprreeffeerriibbllee vvoollvveerr aa eennffooccaarr ccoonn eell oobbjjeettiivvoo aanntteerriioorr yy rreeppeettiirr llaa ooppeerraacciióónn ddeessddee eell ppaassoo 33.. EEll oobbjjeettiivvoo ddee 4400xx eennffooccaa aa mmuuyy ppooccaa ddiissttaanncciiaa ddee llaa pprreeppaarraacciióónn yy ppoorr eelllloo eess ffáácciill qquuee ooccuurrrraann ddooss ttiippooss ddee ppeerrccaanncceess:: iinnccrruussttaarrlloo eenn llaa pprreeppaarraacciióónn ssii ssee ddeessccuuiiddaann llaass pprreeccaauucciioonneess aanntteerriioorreess yy mmaanncchhaarrlloo ccoonn aacceeiittee ddee iinnmmeerrssiióónn ssii ssee oobbsseerrvvaa uunnaa pprreeppaarraacciióónn qquuee yyaa ssee eennffooccóó ccoonn eell oobbjjeettiivvoo ddee iinnmmeerrssiióónn..

EEmmpplleeoo ddeell oobbjjeettiivvoo ddee iinnmmeerrssiióónn::

11.. BBaajjaarr ttoottaallmmeennttee llaa ppllaattiinnaa.. 22.. SSuubbiirr ttoottaallmmeennttee eell ccoonnddeennssaaddoorr ppaarraa vveerr ccllaarraammeennttee eell ccíírrccuulloo ddee lluuzz qquuee nnooss

iinnddiiccaa llaa zzoonnaa qquuee ssee vvaa aa vviissuuaalliizzaarr yy ddoonnddee hhaabbrráá qquuee eecchhaarr eell aacceeiittee..

33.. GGiirraarr eell rreevvóóllvveerr hhaacciiaa eell oobbjjeettiivvoo ddee iinnmmeerrssiióónn ddeejjáánnddoolloo aa mmeeddiioo ccaammiinnoo eennttrree ééssttee yy eell ddee xx4400..

44.. CCoollooccaarr uunnaa ggoottaa mmíínniimmaa ddee aacceeiittee ddee iinnmmeerrssiióónn ssoobbrree eell ccíírrccuulloo ddee lluuzz.. 55.. TTeerrmmiinnaarr ddee ggiirraarr ssuuaavveemmeennttee eell rreevvóóllvveerr hhaassttaa llaa ppoossiicciióónn ddeell oobbjjeettiivvoo ddee

iinnmmeerrssiióónn.. 66.. MMiirraannddoo ddiirreeccttaammeennttee aall oobbjjeettiivvoo,, ssuubbiirr llaa ppllaattiinnaa lleennttaammeennttee hhaassttaa qquuee llaa lleennttee

ttooccaa llaa ggoottaa ddee aacceeiittee.. EEnn eessee mmoommeennttoo ssee nnoottaa ccoommoo ssii llaa ggoottaa aasscceennddiieerraa yy ssee aaddoossaarraa aa llaa lleennttee..

77.. EEnnffooccaarr ccuuiiddaaddoossaammeennttee ccoonn eell mmiiccrroommééttrriiccoo.. LLaa ddiissttaanncciiaa ddee ttrraabbaajjoo eennttrree eell oobbjjeettiivvoo ddee iinnmmeerrssiióónn yy llaa pprreeppaarraacciióónn eess mmíínniimmaa,, aauunn mmeennoorr qquuee ccoonn eell ddee 4400xx ppoorr lloo qquuee eell rriieessggoo ddee aacccciiddeennttee eess mmuuyy ggrraannddee..

88.. UUnnaa vveezz ssee hhaayyaa ppuueessttoo aacceeiittee ddee iinnmmeerrssiióónn ssoobbrree llaa pprreeppaarraacciióónn,, yyaa nnoo ssee ppuueeddee vvoollvveerr aa uussaarr eell oobbjjeettiivvoo 4400xx ssoobbrree eessaa zzoonnaa,, ppuueess ssee mmaanncchhaarrííaa ddee aacceeiittee.. PPoorr ttaannttoo,, ssii ddeesseeaa eennffooccaarr oottrroo ccaammppoo,, hhaayy qquuee bbaajjaarr llaa ppllaattiinnaa yy rreeppeettiirr llaa ooppeerraacciióónn ddeessddee eell ppaassoo 33..

99.. UUnnaa vveezz ffiinnaalliizzaaddaa llaa oobbsseerrvvaacciióónn ddee llaa pprreeppaarraacciióónn ssee bbaajjaa llaa ppllaattiinnaa yy ssee ccoollooccaa eell oobbjjeettiivvoo ddee mmeennoorr aauummeennttoo ggiirraannddoo eell rreevvóóllvveerr.. EEnn eessttee mmoommeennttoo yyaa ssee ppuueeddee rreettiirraarr llaa pprreeppaarraacciióónn ddee llaa ppllaattiinnaa.. NNuunnccaa ssee ddeebbee rreettiirraarr ccoonn eell oobbjjeettiivvoo ddee iinnmmeerrssiióónn eenn ppoossiicciióónn ddee oobbsseerrvvaacciióónn..

1100.. LLiimmppiiaarr eell oobbjjeettiivvoo ddee iinnmmeerrssiióónn ccoonn ccuuiiddaaddoo eemmpplleeaannddoo uunn ppaappeell eessppeecciiaall ppaarraa óóppttiiccaa.. CCoommpprroobbaarr ttaammbbiiéénn qquuee eell oobbjjeettiivvoo 4400xx eessttáá ppeerrffeeccttaammeennttee lliimmppiioo..

22.. TTiinncciioonneess.. IInnttrroodduucccciióónn:: LLaass bbaacctteerriiaass ssoonn pprrááccttiiccaammeennttee ttrraannssppaarreenntteess ((hhiiaalliinnaass)),, ppoorr eelllloo nnoo eess rreeccoommeennddaabbllee ssuu eessttuuddiioo mmeeddiiaannttee llaa oobbsseerrvvaacciióónn ddee ssuussppeennssiioonneess ddee ccéélluullaass eenn aagguuaa oo ttaammppoonneess.. EEll eemmpplleeoo ddee ccoolloorraanntteess bbiioollóóggiiccooss ppeerrmmiittee aauummeennttaarr eell ccoonnttrraassttee eennttrree llaa ccéélluullaa bbaacctteerriiaannaa yy eell mmeeddiioo aammbbiieennttee yy aa ttrraavvééss ddeell eemmpplleeoo ddee ttééccnniiccaass eessppeecciiaalleess,, eess ppoossiibbllee ddiissttiinngguuiirr aallgguunnooss ddee llooss ccoonnssttiittuuyyeenntteess cceelluullaarreess mmááss iimmppoorrttaanntteess.. CCuuaallqquuiieerraa sseeaa eell pprroocceeddiimmiieennttoo ddee ttiinncciióónn,, ééssttee pprroodduuccee llaa mmuueerrttee ddee llaa ccéélluullaa yy eenn cciieerrttoo mmooddoo llaa aalltteerraacciióónn ddee llaa eessttrruuccttuurraa ffííssiiccaa ddee llaa bbaacctteerriiaa.. 11.. CCoolloorraanntteess SSoonn ccoommppuueessttooss qquuíímmiiccooss qquuee ppoosseeeenn uunn ggrruuppoo ccrroommóóffoorroo qquuee oottoorrggaa ccoolloorr aa llaa mmoollééccuullaa yy uunn ggrruuppoo aauuxxooccrroommoo qquuee oottoorrggaa aall ccoolloorraannttee llaa ccaappaacciiddaadd ddee ddiissoocciiaarrssee eelleeccttrroo--llííttiiccaammeennttee yy ppoorr lloo ttaannttoo ffoorrmmaarr ssaalleess.. EEll ggrruuppoo aauuxxooccrroommoo eess eell qquuee ffaacciilliittaa llaa uunniióónn ddeell ccoolloorraannttee aa oottrraass ssuussttaanncciiaass ccoonn ccaarrggaa eellééccttrriiccaa.. LLooss ccoolloorraanntteess ssee ccllaassiiffiiccaann ccoommoo ccoolloorraanntteess nnaattuurraalleess yy ssiinnttééttiiccooss.. LLooss ccoolloorraanntteess nnaattuurraalleess ssoonn uuttiilliizzaaddooss pprriinncciippaallmmeennttee ccoonn ffiinneess hhiissttoollóóggiiccooss.. LLaa mmaayyoorrííaa ddee llaass ttiinncciioonneess bbaacctteerriiaannaass ssoonn rreeaalliizzaaddaass ccoonn ccoolloorraanntteess ssiinnttééttiiccooss,, eenn ssuu mmaayyoorrííaa aanniilliinnaass,, llaass ccuuaalleess ddeerriivvaann ddeell bbeennzzeennoo.. CCoolloorraanntteess áácciiddooss,, bbáássiiccooss yy nneeuuttrrooss:: LLooss ccoolloorraanntteess mmááss uussaaddooss ssoonn ssaalleess,, llaass ccuuaalleess eessttáánn ccoonnssttiittuuiiddaass ppoorr uunn mmoolleeccuullaa ccaarrggaaddoo ppoossiittiivvaammeennttee yy uunnaa ccaarrggaaddoo nneeggaattiivvaammeennttee.. PPoorr eejjeemmpplloo,, aazzuull ddee mmeettiilleennoo eess aaccttuuaallmmeennttee llaa ssaall cclloorruurroo aazzuull ddee mmeettiilleennoo..

AAzzuull ddee mmeettiilleennoo((++)) ++ cclloorruurroo((--))

aa)) TTiinncciióónn bbáássiiccaa eess aaqquueellllaa eenn qquuee eell ccoolloorr eessttáá ddaaddoo ppoorr llaa mmoollééccuullaa ccaarrggaaddoo ppoossiittiivvaammeennttee,, ccoommoo eell eejjeemmpplloo aanntteerriioorr.. bb)) TTiinncciióónn áácciiddaa eess aaqquueellllaa eenn qquuee eell ccoolloorr eessttáá ddaaddoo ppoorr eell mmoollééccuullaa ccaarrggaaddoo nneeggaattiivvaammeennttee.. EEoossiinnaattoo((--)) ++ SSooddiioo((++)) cc)) TTiinncciióónn nneeuuttrraa eess aaqquueellllaa rreessuullttaannttee ddee mmeezzccllaass eennttrree ssoolluucciioonneess aaccuuoossaass ddee cciieerrttooss ccoolloorraanntteess áácciiddooss yy bbáássiiccooss.. EEnn ggeenneerraall,, llaass bbaacctteerriiaass ttiieenneenn aaffiinniiddaadd ppoorr llooss ccoolloorraanntteess ddee ccaarráácctteerr bbáássiiccoo.. EEssttooss ccoolloorraanntteess lllleevvaann eenn ssuu ppaarrttee ccrroommóóffoorraa ccaarrggaa eelleeccttrrooppoossiittiivvaa,, llaa qquuee tteennddrrííaa uunnaa ffuueerrttee aaffiinniiddaadd ppoorr llaass ssuussttaanncciiaass eelleeccttrroonneeggaattiivvaass qquuee nnoorrmmaallmmeennttee pprreesseennttaann llaass bbaacctteerriiaass.. EEll ppHH ddeell mmeeddiioo ttiieennee ggrraann iinnfflluueenncciiaa eenn llaa ttiinncciióónn yyaa qquuee ppeerrmmiittee uunnaa mmaayyoorr oo mmeennoorr ddiissoocciiaacciióónn eelleeccttrroollííttiiccaa ddeell ggrruuppoo aauuxxooccrroommoo,, ppeerrmmiittiieennddoo ddee eessttaa mmaanneerraa uunnaa mmaayyoorr oo mmeennoorr aaffiinniiddaadd ppoorr llooss ggrruuppooss qquuíímmiiccooss ssoobbrree llooss ccuuaalleess ssee uunnee.. SSii ssee aauummeennttaa eell ppHH ddeell mmeeddiioo eexxiissttee uunnaa mmaayyoorr aaffiinniiddaadd ddeell ccoolloorraannttee ppoorr llaa bbaacctteerriiaa,, ssuucceeddiieennddoo lloo ccoonnttrraarriioo ssii eell ppHH ssee hhaaccee mmááss áácciiddoo.. LLaa ffiijjaacciióónn ddee ccoolloorraanntteess aa llaa ccéélluullaa bbaacctteerriiaannaa ssee ffaacciilliittaa ccoonn eell uussoo ddee mmoorrddiieenntteess,, ccoonn llooss qquuee ffoorrmmaann ccoommppuueessttooss iinnssoolluubblleess ((yyooddoo,, ffeennooll,, áácciiddoo ttáánniiccoo,, ooxxaallaattoo ddee aammoonniioo,, eettcc..)).. AAllgguunnooss ddee llooss ccoolloorraanntteess mmááss eemmpplleeaaddooss eenn mmiiccrroobbiioollooggííaa ssoonn:: aazzuull ddee mmeettiilleennoo,, vviioolleettaa ddee ggeenncciiaannaa,, ffuuccssiinnaa bbáássiiccaa,, ssaaffrraanniinnaa,, vveerrddee ddee mmaallaaqquuiittaa,, eettcc.. 22.. TTiinncciioonneess LLaass ttiinncciioonneess ppuueeddeenn ccllaassiiffiiccaarrssee eenn:: ttiinncciioonneess ssiimmpplleess,, ddiiffeerreenncciiaalleess yy eessppeecciiaalleess.. aa)) TTiinncciioonneess ssiimmpplleess.. SSoonn aaqquueellllaass eenn qquuee ssee uuttiilliizzaa uunn ssoolloo ccoolloorraannttee yy ccoonnssiisstteenn eenn eexxtteennddeerr yy ffiijjaarr llaa pprreeppaarraacciióónn,, lluueeggoo ssee ccuubbrree ccoonn eell ccoolloorraannttee yy ddeessppuuééss ddee ddooss mmiinnuuttooss,, ssee llaavvaa ccoonn aagguuaa,, ssee sseeccaa ssuuaavveemmeennttee ssoobbrree llaa llllaammaa yy ccoonn ppaappeell ffiillttrroo,, ppaarraa lluueeggoo oobbsseerrvvaarr aall mmiiccrroossccooppiioo ccoonn eell oobbjjeettiivvoo ddee iinnmmeerrssiióónn.. LLaass bbaacctteerriiaass ssee ttiiññeenn eenn ffoorrmmaa hhoommooggéénneeaa ddee llaa mmiissmmaa ccoolloorraacciióónn.. LLaa uuttiilliiddaadd ddee eessttaa ttiinncciióónn eess rreellaattiivvaa,, yyaa qquuee ssóólloo eess ffaaccttiibbllee oobbsseerrvvaarr ffoorrmmaa yy aaggrruuppaacciióónn cceelluullaarr.. bb)) TTiinncciioonneess ddiiffeerreenncciiaalleess.. PPeerrmmiitteenn eessttaabblleecceerr ddiiffeerreenncciiaass ttiinnttoorriiaalleess eennttrree ggrruuppooss ddee bbaacctteerriiaass,, ddeebbiiddoo aa eelllloo ssoonn llaass mmááss uuttiilliizzaaddaass eenn llaa iiddeennttiiffiiccaacciióónn ddee bbaacctteerriiaass.. EEssttaass ttiinncciioonneess ssee bbaassaann eenn llaa aapplliiccaacciióónn ddee ddooss ccoolloorraanntteess eenn eettaappaass ssuucceessiivvaass eennttrree llaass qquuee ssee aapplliiccaann mmoorrddiieenntteess yy ccoommppuueessttooss qquuíímmiiccooss ddeeccoolloorraanntteess;; ddee eessttaa ffoorrmmaa llaass bbaacctteerriiaass ddee ddiiffeerreennttee aaffiinniiddaadd ttiinnttoorriiaall ssee oobbsseerrvvaann tteeññiiddaass ddee ddiissttiinnttoo ccoolloorr..

OObbjjeettiivvooss::

11.. CCoonnoocceerr eell ffuunnddaammeennttoo ddee llaass ccoolloorraacciioonneess.. 22.. EEssttuuddiiaarr llooss ddiiffeerreenntteess ttiippooss ddee ccoolloorraacciioonneess.. 33.. RReeaalliizzaarr pprraaccttiiccaa ddee ccoolloorraacciióónn ddee ggrraamm.. 44.. OObbsseerrvvaarr yy ddiiffeerreenncciiaarr llaass ddiiffeerreenntteess mmoorrffoollooggííaass bbaacctteerriiaannaass..

TTiinncciióónn ddee GGrraamm 11.. RReeaalliizzaarr uunn eexxtteennddiiddoo eenn uunnaa llaammiinnaa ppoorrttaaoobbjjeettooss ttoommaannddoo uunn eessccoobbiilllloonn yy rreeaalliizzaannddoo uunn ffrroottiiss ddee llaa bbooccaa.. FFiijjaarr eell ffrroottiiss aall ccaalloorr.. 22.. CCoolloorreeaarr ppoorr 11 mmiinnuuttooss ccoonn ccrriissttaall vviioolleettaa,, ccuuiiddaannddoo qquuee eell ccoolloorraannttee ccuubbrraa ttooddaa llaa pprreeppaarraacciióónn.. 33.. EElliimmiinnaarr eell eexxcceessoo ddee ccoolloorraannttee yy llaavvaarr rrááppiiddaammeennttee ccoonn aagguuaa,, mmaanntteenniieennddoo eell ppoorrttaaoobbjjeettoo eenn ppoossiicciióónn iinncclliinnaaddaa.. 44.. CCuubbrriirr eell ffrroottiiss ccoonn lluuggooll dduurraannttee 6600 sseegguunnddooss.. 55.. LLaavvaarr nnuueevvaammeennttee ccoonn aagguuaa.. 66.. aaddiicciioonnaarr aallccoohhooll cceettoonnaa ((aallccoohhooll 9955°° yy aacceettoonnaa aall 33%%)) ppoorr 3300 sseegguunnddooss.. 77.. LLaavvaarr ccoonn aagguuaa.. 88.. aaddiicciioonnaarr ssaaffrraanniinnaa ppoorr 3300 sseegguunnddooss.. 99.. LLaavvaarr ccoonn aagguuaa,, sseeccaarr yy oobbsseerrvvaarr aall mmiiccrroossccooppiioo ccoonn aacceeiittee ddee iinnmmeerrssiióónn.. CCoonn bbaassee aa llooss rreessuullttaaddooss ddee llaa ttiinncciióónn ddee GGrraamm,, llaass bbaacctteerriiaass qquuee rreettiieenneenn eell ccrriissttaall vviioolleettaa yy aappaarreecceenn ccoolloorreeaaddaass ddee vviioolleettaa iinntteennssoo,, ssoonn GGrraamm ppoossiittiivvaass yy aaqquueellllaass qquuee ppiieerrddeenn eell ccrriissttaall vviioolleettaa yy ssee vvuueellvveenn aa tteeññiirr ccoonn llaa ssaaffrraanniinnaa ddiilluuiiddaa ttoommaannddoo uunn ccoolloorr rroojjoo ssoonn GGrraamm nneeggaattiivvaass.. AAll rreeaalliizzaarr llaa ttiinncciióónn ddee GGrraamm,, ssee ddeebbee tteenneerr llaa pprreeccaauucciióónn ddee nnoo uuttiilliizzaarr ccuullttiivvooss bbaacctteerriiaannooss mmuuyy vviieejjooss,, yyaa qquuee llooss rreessuullttaaddooss oobbtteenniiddooss ppuueeddeenn iinndduucciirr aa eerrrroorr;; aassíí eenn ccuullttiivvooss bbaacctteerriiaannooss rreellaattiivvaammeennttee vviieejjooss ddee bbaacctteerriiaass GGrraamm((++)),, aallgguunnaass ssee oobbsseerrvvaann ccoommoo GGrraamm((--)),, eelllloo ssee ddeebbee aa llaa aacciiddiiffiiccaacciióónn ppaauullaattiinnaa ddeell ccuullttiivvoo,, ddiissmmiinnuuyyeennddoo llaa aaffiinniiddaadd ttiinnttoorriiaall.. OOttrraa ffoorrmmaa ddee ddeetteerrmmiinnaarr ssii llaass bbaacctteerriiaass ssoonn GGrraamm((++)) oo GGrraamm((--)) eess aa ttrraavvééss ddeell tteesstt ddee ssoolluubbiilliiddaadd ddeell KKOOHH.. TTeesstt ddeell hhiiddrróóxxiiddoo ddee ppoottaassiioo ((KKOOHH)) EEssttee mmééttooddoo eessttáá bbaassaaddoo eenn llaa mmaayyoorr rreessiisstteenncciiaa ddee llaass ppaarreeddeess cceelluullaarreess ddee llaass bbaacctteerriiaass GGrraamm((++)),, aall ttrraattaammiieennttoo ccoonn uunnaa ssoolluucciióónn ddee KKOOHH aall 33%%.. EEnn llaa mmaayyoorrííaa ddee llooss ccaassooss llaass bbaacctteerriiaass GGrraamm nneeggaattiivvaass nnoo ppoosseeeenn ppaarreeddeess qquuee rreessiissttaann aa llaa ssoolluubbiilliiddaadd ddeell KKOOHH.. EEssttee tteesstt ffuuee ddeessccrriittoo ppoorr pprriimmeerraa vveezz eenn JJaappóónn ((RRyyuu,, 11993388 yy 11994400)),, ppeerroo ssóólloo rreecciieenntteemmeennttee ssee eessttáá uuttiilliizzaannddoo;; aall rreessppeeccttoo,, GGrreeggeerrsseenn ((11997788)) hhaa rreeaalliizzaaddoo uunnaa eevvaalluuaacciióónn ddeettaallllaaddaa ddee ééll aa ttrraavvééss ddee ttrraabbaajjooss bbaacctteerriioollóóggiiccooss rruuttiinnaarriiooss ddee llaabboorraattoorriioo,, ppaarrttiiccuullaarrmmeennttee eenn llooss ccaassooss qquuee llaa ttiinncciióónn ddee GGrraamm eess dduuddoossaa,, eejjeemmpplloo:: BBaacciilllluuss sspp..,, qquuee eess GGrraamm vvaarriiaabbllee.. LLaa ttééccnniiccaa ccoonnssiissttee eenn ddeeppoossiittaarr 11--22 ggoottaass ddee KKOOHH aall 33%% ssoobbrree uunn ppoorrttaaoobbjjeettoo.. CCoonn uunn aassaa ccoonn hhiilloo ddee ppllaattiinnoo,, ssee ssaaccaa ddeessddee uunn mmeeddiioo ddee ccuullttiivvoo ssóólliiddoo,, uunnaa oo vvaarriiaass ccoolloonniiaass ((ddee nnoo mmááss ddee 2244 hhoorraass ddee eeddaadd)) ppeeqquueeññiittaass ddee llaa bbaacctteerriiaa;; ééssttaass ssee aaggiittaann eenn eell KKOOHH ppoorr 55--1100 sseegguunnddooss.. SSii llaa ssoolluucciióónn ddee KKOOHH ssee ppoonnee vviissccoossaa yy aall lleevvaannttaarr eell aassaa,, ssee ffoorrmmaa uunn

hhiilloo ddee vviissccoossiiddaadd qquuee ssiigguuee aa uunnaa ddiissttaanncciiaa ddee 00,,55--22 ccmm oo mmááss;; eessttoo ssiiggnniiffiiccaa qquuee llaa rreeaacccciióónn eess ppoossiittiivvaa yy ooccuurrrree eenn bbaacctteerriiaass GGrraamm((--)).. SSii nnoo hhaayy vviissccoossiiddaadd,, ssee pprroodduuccee uunnaa ssuussppeennssiióónn aaccuuoossaa qquuee nnoo ssiigguuee aall aassaa,, llaa rreeaacccciióónn eess nneeggaattiivvaa yy ooccuurrrree eenn bbaacctteerriiaass GGrraamm((++)).. PPrreegguunnttaass::

11.. ¿¿ IInnvveessttiigguuee qquuee eess uunn ccrroommóóffoorroo yy uunn aauuxxooccrroommoo yy ppoorr qquuee ssoonn iimmppoorrttaanntteess eenn llaa oobbsseerrvvaacciióónn ddeell ccoolloorr??..

22.. ¿¿EExxpplliiqquuee qquuee ffuunncciióónn ccuummppllee ccaaddaa uunnoo ddee llooss ccoolloorraanntteess uuttiilliizzaaddooss eenn llaa ttiinncciióónn ddee GGrraamm??..

33.. ¿¿EExxpplliiqquuee ppoorr qquuee llaass bbaacctteerriiaass ggrraammnneeggaattiivvaass aall aaddiicciioonnaarrlleess KKOOHH ffoorrmmaann uunnaa ssoolluucciióónn vviissccoossaa yy llaass ggrraamm ppoossiittiivvaass nnoo??..

44.. IInnvveessttiigguuee oottrrooss ttiippooss ddee mmiiccrroossccooppiiaa aaddeemmááss ddee llaa mmiiccrroossccooppiiaa ddee lluuzz yy eellaabboorree uunn ccuuaaddrroo ccoommppaarraattiivvoo ((ssiimmiilliittuuddeess yy ddiiffeerreenncciiaass))..

PPrraaccttiiccaa ddee llaabboorraattoorriioo NNoo 22..

PPrreeppaarraacciióónn ddee mmeeddiiooss ddee ccuullttiivvoo yy eesstteerriilliizzaacciióónn

IInnttrroodduucccciióónn.. LLooss mmeeddiiooss ddee ccuullttiivvoo ssoonn uunnaa mmeezzccllaa ddee nnuuttrriieenntteess qquuee eenn ccoonncceennttrraacciioonneess aaddeeccuuaaddaass yy eenn ccoonnddiicciioonneess ffííssiiccaass óóppttiimmaass,, ppeerrmmiitteenn eell ccrreecciimmiieennttoo ddee llooss mmiiccrroooorrggaanniissmmooss.. EEssttooss mmeeddiiooss ssoonn eesseenncciiaalleess eenn eell LLaabboorraattoorriioo ddee MMiiccrroobbiioollooggííaa ppoorr lloo qquuee uunn ccoonnttrrooll eenn ssuu ffaabbrriiccaacciióónn,, pprreeppaarraacciióónn,, ccoonnsseerrvvaacciióónn yy uussoo,, aasseegguurraa llaa eexxaaccttiittuudd,, ccoonnffiiaabbiilliiddaadd yy rreepprroodduucciibbiilliiddaadd ddee llooss resultados obtenidos. PPaarraa qquuee llaass bbaacctteerriiaass ccrreezzccaann aaddeeccuuaaddaammeennttee eenn uunn mmeeddiioo ddee ccuullttiivvoo aarrttiiffiicciiaall ddeebbee rreeuunniirr uunnaa sseerriiee ddee ccoonnddiicciioonneess ccoommoo ssoonn:: tteemmppeerraattuurraa,, ggrraaddoo ddee hhuummeeddaadd yy pprreessiióónn ddee ooxxííggeennoo aaddeeccuuaaddoo,, aassíí ccoommoo uunn ggrraaddoo ccoorrrreeccttoo ddee aacciiddeezz oo aallccaalliinniiddaadd.. UUnn mmeeddiioo ddee ccuullttiivvoo ddeebbee ccoonntteenneerr llooss nnuuttrriieenntteess yy ffaaccttoorreess ddee ccrreecciimmiieennttoo nneecceessaarriiooss yy ddeebbee eessttaarr eexxeennttoo ddee ttooddoo mmiiccrroooorrggaanniissmmoo ccoonnttaammiinnaannttee.. EEll aaggaarr eess uunn eelleemmeennttoo ssoolliiddiiffiiccaannttee mmuuyy eemmpplleeaaddoo ppaarraa llaa pprreeppaarraacciióónn ddee mmeeddiiooss ddee ccuullttiivvoo.. SSee lliiccúúaa ccoommpplleettaammeennttee aa llaa tteemmppeerraattuurraa ddeell aagguuaa hhiirrvviieennddoo yy ssee ssoolliiddiiffiiccaa aall eennffrriiaarrssee aa 4400 ggrraaddooss.. CCoonn mmíínniimmaass eexxcceeppcciioonneess nnoo ttiieennee eeffeeccttoo ssoobbrree eell ccrreecciimmiieennttoo ddee llaass bbaacctteerriiaass yy nnoo eess aattaaccaaddoo ppoorr aaqquueellllaass qquuee ccrreecceenn eenn ééll.. LLaa GGeellaattiinnaa eess oottrroo aaggeennttee ssoolliiddiiffiiccaannttee ppeerroo ssee eemmpplleeaa mmuucchhoo mmeennooss yyaa qquuee bbaassttaanntteess bbaacctteerriiaass pprroovvooccaann ssuu lliiccuuaacciióónn.. EEnn llooss ddiiffeerreenntteess mmeeddiiooss ddee ccuullttiivvoo ssee eennccuueennttrraann nnuummeerroossooss mmaatteerriiaalleess ddee eennrriiqquueecciimmiieennttoo ccoommoo hhiiddrraattooss ddee ccaarrbboonnoo,, ssuueerroo,, ssaannggrree ccoommpplleettaa,, bbiilliiss,, eettcc.. LLooss hhiiddrraattooss ddee CCaarrbboonnoo ssee aaddiicciioonnaann ppoorr ddooss mmoottiivvooss ffuunnddaammeennttaalleess:: ppaarraa iinnccrreemmeennttaarr eell vvaalloorr nnuuttrriittiivvoo ddeell mmeeddiioo yy ppaarraa ddeetteeccttaarr rreeaacccciioonneess ddee ffeerrmmeennttaacciióónn ddee llooss mmiiccrroooorrggaanniissmmooss qquuee aayyuuddeenn aa iiddeennttiiffiiccaarrllooss.. EEll ssuueerroo yy llaa ssaannggrree ccoommpplleettaa ssee aaññaaddeenn ppaarraa pprroommoovveerr eell ccrreecciimmiieennttoo ddee llooss mmiiccrroooorrggaanniissmmooss mmeennooss rreessiisstteenntteess.. TTaammbbiiéénn ssee aaññaaddeenn ccoolloorraanntteess qquuee aaccttúúaann ccoommoo iinnddiiccaaddoorreess ppaarraa ddeetteeccttaarr,, ppoorr eejjeemmpplloo,, llaa ffoorrmmaacciióónn ddee áácciiddoo oo ccoommoo iinnhhiibbiiddoorreess ddeell ccrreecciimmiieennttoo ddee uunnaass bbaacctteerriiaass yy nnoo ddee oottrraass ((eell RRoojjoo FFeennooll ssee uussaa ccoommoo iinnddiiccaaddoorr yyaa qquuee eess rroojjoo eenn ppHH bbáássiiccoo yy aammaarriilllloo eenn ppHH áácciiddoo.. LLaa VViioolleettaa ddee GGeenncciiaannaa ssee uussaa ccoommoo iinnhhiibbiiddoorr yyaa qquuee iimmppiiddee eell ccrreecciimmiieennttoo ddee llaa mmaayyoorriiaa ddee llaass bbaacctteerriiaass GGrraamm--ppoossiittiivvaass)).. UUnn mmeeddiioo ddee ccuullttiivvoo aaddeeccuuaaddoo ppaarraa llaa iinnvveessttiiggaacciióónn mmiiccrroobbiioollóóggiiccaa hhaa ddee ccoonntteenneerr,, ccoommoo mmíínniimmoo,, ccaarrbboonnoo,, nniittrróóggeennoo,, aazzuuffrree,, ffóóssffoorroo yy ssaalleess iinnoorrggáánniiccaass.. EEnn mmuucchhooss ccaassooss sseerráánn nneecceessaarriiaass cciieerrttaass vviittaammiinnaass yy oottrraass ssuussttaanncciiaass iinndduuccttoorraass ddeell ccrreecciimmiieennttoo.. TTooddaass eessttaass ssuussttaanncciiaass ssee ssuummiinniissttrraabbaann oorriiggiinnaallmmeennttee eenn ffoorrmmaa ddee iinnffuussiioonneess ddee ccaarrnnee,, eexxttrraaccttooss ddee ccaarrnnee oo eexxttrraaccttooss ddee lleevvaadduurraa.. SSiinn eemmbbaarrggoo,, llaa pprreeppaarraacciióónn ddee eessttaass ssuussttaanncciiaass ppaarraa ssuu aapplliiccaacciióónn aa llooss mmeeddiiooss ddee ccuullttiivvoo pprroovvooccaabbaa llaa ppéérrddiiddaa ddee llooss ffaaccttoorreess nnuuttrriittiivvooss lláábbiilleess.. AAccttuuaallmmeennttee,, llaa ffoorrmmaa mmááss eexxtteennddiiddaa ddee aappoorrttaarr eessttaass ssuussttaanncciiaass aa llooss mmeeddiiooss eess uuttiilliizzaarr ppeeppttoonnaa qquuee,, aaddeemmááss,, rreepprreesseennttaa uunnaa ffuueennttee ffáácciillmmeennttee aasseeqquuiibbllee ddee nniittrróóggeennoo yy ccaarrbbóónn yyaa qquuee llaa mmaayyoorrííaa ddee llooss mmiiccrroooorrggaanniissmmooss,, qquuee nnoo ssuueelleenn uuttiilliizzaarr ddiirreeccttaammeennttee llaass pprrootteeíínnaass nnaattuurraalleess,, ttiieenneenn ccaappaacciiddaadd ddee aattaaccaarr llooss aammiinnooáácciiddooss yy oottrrooss ccoommppuueessttooss mmááss ssiimmpplleess ddee nniittrróóggeennoo pprreesseenntteess eenn llaa ppeeppttoonnaa.. EEnn llooss llaabboorraattoorriiooss ddee mmiiccrroobbiioollooggííaa ssee uuttiilliizzaann ddiiffeerreenntteess ttiippooss ddee mmeeddiiooss ddee ccuullttiivvoo qquuee ppuueeddeenn sseerr pprreeppaarraaddooss eenn ffoorrmmaa llííqquuiiddaa oo eenn ffoorrmmaa ssóólliiddaa..

UUssuuaallmmeennttee ppaarraa pprreeppaarraarr uunn mmeeddiioo ssóólliiddoo ssee ppaarrttee ddee uunn mmeeddiioo llííqquuiiddoo aall qquuee ssee llee aaññaaddee uunn aaggeennttee ssoolliiddiiffiiccaannttee ccoommoo eell aaggaarr,, llaa ggeellaattiinnaa oo llaa ssíílliiccaaggeell.. LLooss mmeeddiiooss ddee ccuullttiivvoo ssee ppuueeddeenn ccllaassiiffiiccaarr ddee aaccuueerrddoo aa llaa nnaattuurraalleezzaa ddee ssuuss ccoonnssttiittuuyyeenntteess eenn:: MMeeddiiooss nnaattuurraalleess oo ccoommpplleejjooss:: ccoonnssttiittuuiiddooss ppoorr ssuussttaanncciiaass ccoommpplleejjaass ddee oorriiggeenn aanniimmaall oo vveeggeettaall,, llaass qquuee ssoonn uussuuaallmmeennttee ccoommpplleemmeennttaaddaass ppoorr llaa aaddiicciióónn ddee mmiinneerraalleess yy oottrraass ssuussttaanncciiaass.. EEnn eellllooss nnoo ssee ccoonnoocceenn ttooddooss llooss ccoommppoonneenntteess nnii llaass ccaannttiiddaaddeess eexxaaccttaass pprreesseenntteess ddee ccaaddaa uunnoo ddee eellllooss.. MMeeddiiooss ddeeffiinniiddooss oo ssiinnttééttiiccooss:: ssoonn llooss mmeeddiiooss qquuee ttiieenneenn uunnaa ccoommppoossiicciióónn qquuíímmiiccaa ddeeffiinniiddaa ccuuaallii yy ccuuaannttiittaattiivvaammeennttee.. GGeenneerraallmmeennttee ssee uussaann eenn ttrraabbaajjooss ddee iinnvveessttiiggaacciióónn.. DDee aaccuueerrddoo aall uussoo ddeell mmeeddiioo ddee ccuullttiivvoo,, ééssttooss ssee ccllaassiiffiiccaann eenn:: MMeeddiioo eennrriiqquueecciiddoo:: mmeeddiioo qquuee pprreesseennttaa uunn ggrraann eexxcceessoo ddee nnuuttrriieenntteess yy ssee uuttiilliizzaann ppaarraa mmiiccrroooorrggaanniissmmooss qquuee ttiieennee ggrraannddeess eexxiiggeenncciiaass nnuuttrriicciioonnaalleess.. MMeeddiiooss sseelleeccttiivvooss:: eessttáánn ddiisseeññaaddooss ppaarraa eell aaiissllaammiieennttoo ddee mmiiccrroooorrggaanniissmmooss eessppeeccííffiiccooss.. MMeeddiiooss ddiiffeerreenncciiaalleess:: ssoonn mmeeddiiooss qquuee ccoonnttiieenneenn iinnddiiccaaddoorreess ddee pprroodduuccttooss ddeerriivvaaddooss ddee llaa aaccttiivviiddaadd mmeettaabbóólliiccaa mmiiccrroobbiiaannaa.. NNoo ccoonnttiieenneenn nniinnggúúnn ttiippoo ddee ssuussttaanncciiaa ccoonn aaccttiivviiddaadd aannttiimmiiccrroobbiiaannaa.. PPeerrmmiitteenn rreevveellaarr ccaarraacctteerrííssttiiccaass ffiissiioollóóggiiccaass ddee llooss mmiiccrroooorrggaanniissmmooss.. LLooss mmeeddiiooss ddee ccuullttiivvoo ssee ppuueeddeenn pprreeppaarraarr eenn eell llaabboorraattoorriioo aa ppaarrttiirr ddee ccaaddaa uunnoo ddee ssuuss ccoonnssttiittuuyyeenntteess bbáássiiccooss oo ppoorr ssiimmppllee rreehhiiddrraattaacciióónn ddee pprroodduuccttooss aasseeqquuiibblleess ccoommeerrcciiaallmmeennttee ((mmeeddiiooss ddee ccuullttiivvoo ddeesshhiiddrraattaaddooss)).. GGeenneerraallmmeennttee ssee pprreeffiieerree ééll uussoo ddee llooss mmeeddiiooss ddee ccuullttiivvoo ddeesshhiiddrraattaaddooss ppoorrqquuee,, aaddeemmááss ddee ssiimmpplliiffiiccaarr eell ttrraabbaajjoo,, ccoonn eellllooss ssee ttiieennee mmaayyoorr pprroobbaabbiilliiddaadd ddee oobbtteenneerr rreessuullttaaddooss rreepprroodduucciibblleess.. PPaarraa ssuu pprreeppaarraacciióónn ssee ddeebbeenn tteenneerr eenn ccuueennttaa llooss ssiigguuiieenntteess aassppeeccttooss::

PPrreeppaarraarrllooss ssóólloo aa ppaarrttiirr ddee pprroodduuccttooss qquuee pprroovveennggaann ddee ffaabbrriiccaanntteess oo pprroovveeeeddoorreess qquuee ssuummiinniissttrreenn pprroodduuccttooss ddee ccaalliiddaadd..

UUttiilliizzaarr aagguuaa ddeessttiillaaddaa oo ddeessmmiinneerraalliizzaaddaa ccoonn uunnaa ccaalliiddaadd mmiiccrroobbiioollóóggiiccaa yy ffiissiiccooqquuíímmiiccaa aaddeeccuuaaddaa..

UUttiilliizzaarr mmaatteerriiaalleess ddee vviiddrriioo bbiieenn llaavvaaddooss yy eennjjuuaaggaaddooss ccoonn aagguuaa ddeessttiillaaddaa oo

ddeessmmiinneerraalliizzaaddaa.. CCoonnttrroollaarr eell ttiieemmppoo yy llaa tteemmppeerraattuurraa rreeccoommeennddaaddaa dduurraannttee ssuu eesstteerriilliizzaacciióónn..

NNuunnccaa ssee ddeebbeenn eexxcceeddeerr llaass ccoonnddiicciioonneess sseeññaallaaddaass ppoorr eell ffaabbrriiccaannttee..

AALLMMAACCEENNAAMMIIEENNTTOO DDEE LLOOSS MMEEDDIIOOSS DDEE CCUULLTTIIVVOO LLooss mmeeddiiooss ddee ccuullttiivvoo ddeesshhiiddrraattaaddooss ssee ddeebbeenn aallmmaacceennaarr eenn eennvvaasseess sseellllaaddooss bbaajjoo llaass ccoonnddiicciioonneess qquuee sseeññaallee eell ffaabbrriiccaannttee.. GGeenneerraallmmeennttee ssee aallmmaacceennaann eenn uunn lluuggaarr ffrreessccoo

((eennttrree 1155 yy 2255ooCC)),, ccoonn ppooccaa hhuummeeddaadd yy pprrootteeggiiddooss ddee llaa lluuzz ssoollaarr ddiirreeccttaa.. NNuunnccaa ssee ddeebbeenn aallmmaacceennaarr cceerrccaa ddee aauuttooccllaavveess,, hhoorrnnooss,, nnii oottrraa ffuueennttee ddee ccaalloorr oo vvaappoorr.. LLooss mmeeddiiooss ddee ccuullttiivvoo ddeesshhiiddrraattaaddooss ssee ddeebbeenn ddeessccaarrttaarr ccuuaannddoo ssee hhiiddrraatteenn oo ddeeccoolloorreenn.. UUnnaa vveezz qquuee eell mmeeddiioo ddee ccuullttiivvoo hhaa ssiiddoo pprreeppaarraaddoo yy eesstteerriilliizzaaddoo ssee ddeebbee aallmmaacceennaarr eennttrree 22 yy 88ooCC,, aa mmeennooss qquuee eell mmeeddiioo rreeqquuiieerraa aallgguunnaa ccoonnddiicciióónn ddiiffeerreennttee.. SSee ddeebbeenn mmaanntteenneerr eenn rreecciippiieenntteess bbiieenn cceerrrraaddooss ppaarraa eevviittaarr ssuu ddeesshhiiddrraattaacciióónn.. OOBBJJEETTIIVVOO AAll ffiinnaalliizzaarr eell ttrraabbaajjoo pprrááccttiiccoo eell eessttuuddiiaannttee eessttaarráá eenn ccaappaacciiddaadd ddee::

11.. PPrreeppaarraarr aaddeeccuuaaddaammeennttee mmeeddiiooss ddee ccuullttiivvoo aa ppaarrttiirr ddee mmeeddiiooss ddee ccuullttiivvoo ddeesshhiiddrraattaaddooss..

22.. IInnddiiccaarr eell mmééttooddoo ddee eesstteerriilliizzaacciióónn aapprrooppiiaaddoo.. PPRROOCCEEDDIIMMIIEENNTTOO

11.. LLeeaa ccuuiiddaaddoossaammeennttee llaass iinnssttrruucccciioonneess ddee pprreeppaarraacciióónn ddeell mmeeddiioo ddee ccuullttiivvoo aassiiggnnaaddoo..

22.. AAggrreegguuee llaa ccaannttiiddaadd ddee aagguuaa ddeessttiillaaddaa nneecceessaarriiaa ppaarraa llaa ccaannttiiddaadd ddee mmeeddiioo aa pprreeppaarraarr..

33.. PPeessee llaa ccaannttiiddaadd eexxaaccttaa ddeell mmeeddiioo ddeesshhiiddrraattaaddoo.. 44.. CCiieerrrree iinnmmeeddiiaattaammeennttee eell ffrraassccoo ddee mmeeddiioo ddee ccuullttiivvoo.. 55.. AAggrreegguuee eell mmeeddiioo ddeesshhiiddrraattaaddoo aall aagguuaa ddeessttiillaaddaa.. 66.. CCaalliieennttee eenn eessttuuffaa hhaassttaa qquuee hhaallllaa uunnaa ddiissoolluucciióónn ccoommpplleettaa ddeell mmeeddiioo.. 77.. SSeeppaarree 220000mmll ddeell mmeeddiioo ddiissuueellttoo yy ccaalleennttaaddoo eenn uunn EErrlleenn--MMeeyyeerr ddee 225500 mmll ppaarraa

pprreeppaarraarr mmeeddiioo llííqquuiiddoo.. 88.. AAggrreegguuee aaggaarr--aaggaarr ppaarraa qquuee qquueeddee aa uunnaa ccoonncceennttrraacciióónn ddeell 66%% PP//VV aall mmeeddiioo

lliiqquuiiddoo rreessttaannttee.. 99.. CCaalliieennttee nnuueevvaammeennttee hhaassttaa llaa ddiissoolluucciióónn ccoommpplleettaa ddeell aaggaarr--aaggaarr.. 1100.. TTaappee llooss EErrlleenn--MMeeyyeerr ccoonn uunnaa ttoorruunnddaa ddee aallggooddóónn yy ppóónnggaallee llaa ttiirriillllaa

vveerriiffiiccaaddoorraa ddee aauuttooccllaavvee ((ccaammbbiioo ddee ccoolloorr aa 112211ooCC)).. 1111.. AAuuttooccllaavvee ppoorr 2200 mmiinnuuttooss.. TTeennggaa ccuuiiddaaddoo ccuuaannddoo ssaaqquuee eell mmeeddiioo ddeell aauuttooccllaavvee

ppoorrqquuee aauunn eessttaa ccaalliieennttee.. 1122.. DDeejjee eennffrriiaarr hhaassttaa qquuee sseeaa ccaappaazz ddee ccoollooccaarr eell EErrlleenn--MMeeyyeerr ssoobbrree llaa ppiieell,, eenn eessttee

mmoommeennttoo ccoommiieennccee aa sseerrvviirr eell mmeeddiioo eenn llaass ccaajjaass ddee ppeettrrii,, ttuubbooss yy eenn llooss ttuubbooss,, aaddiicciioonnaannddoo aapprrooxxiimmaaddaammeennttee 1155 aa 2200 mmll ppoorr ccaajjaa ddee ppeettrrii yy lllleennee uunn ppooccoo mmeennooss ddee llaa mmiittaadd,, llooss ttuubbooss..

1133.. DDeejjee ssoolliiddiiffiiccaarr ccoommpplleettaammeennttee eell aaggaarr,, AAllgguunnooss ttuubbooss ddééjjeellooss ssoolliiddiiffiiccaarr ddee ffoorrmmaa iinncclliinnaaddaa..

1144.. SSeellllee llaass ccaajjaass yy llooss ttuubbooss ccoonn ppaappeell ppaarraa ffiillmm oo cciinnttaa ddee eennmmaassccaarraarr,, gguuaarrddee eenn lluuggaarr sseeccoo yy sseegguurroo,, yyaa qquuee eessttee mmeeddiioo ssee uuttiilliizzaarraa eenn llaa pprrááccttiiccaa ssiigguuiieennttee..

1155.. SSeeppaarree,, uunn ttuubboo ddee mmeeddiioo lliiqquuiiddoo,, oottrroo ssoolliiddóó yy uunnaa ccaajjaa ddee ppeettrrii ccoonn mmeeddiioo ssoolliiddóó ppaarraa iinnccuubbaarr aa 3377ooCC..

PPrreegguunnttaass::

11.. ¿¿ PPaarraa qquuee ssee ddeejjaann iinnccuubbaannddoo aallgguunnooss mmeeddiiooss ddee ccuullttiivvoo rreecciiéénn pprreeppaarraaddooss eenn iinnccuubbaacciióónn??..

22.. ¿¿EEll mmeeddiioo ddee ccuullttiivvoo pprreeppaarraaddoo eenn llaa pprraaccttiiccaa eenn qquuee ccaatteeggoorrííaa lloo ccllaassiiffiiccaarrííaa yy

ppoorr qquuee??..

33.. IInnvveessttiigguuee ddee ddoonnddee pprroovviieennee eell aaggaarr--aaggaarr yy ccuuaall eess ssuu eessttrruuccttuurraa..

44.. IInnvveessttiigguuee ddiiffeerreenntteess mmééttooddooss ddee eesstteerriilliizzaacciióónn,, eellaabboorree uunn ccuuaaddrroo ccoommppaarraattiivvoo..

55.. EExxpplliiqquuee ¿¿ppoorrqquuee mmééttooddoo eesstteerriilliizzaarrííaa uunnaa ssoolluucciioonn ddee LL--gglluuttaammiinnaa yy ddee aannttiibbiióóttiiccoo aannttiimmiiccóóttiiccoo??..

NNOOTTAA:: LLooss ssiigguuiieenntteess eelleemmeennttooss ddeebbeenn sseerr ttrraaííddooss ppoorr llooss eessttuuddiiaanntteess

CCiinnttaa ddee eennmmaassccaarraarr (( ppeeggaarr eell ppaappeell)).. AAllggooddóónn ggaassaa (( ppaarraa hhaacceerr llooss ttaappoonneess ddee llooss eerrlleennmmeeyyeerr))..

PPrraaccttiiccaa ddee llaabboorraattoorriioo NNoo 33

AAIISSLLAAMMIIEENNTTOO DDEE MMIICCRROOOORRGGAANNIISSMMOOSS..

IInnttrroodduucccciióónn

LLaa mmaayyoorrííaa ddee llooss mmiiccrroooorrggaanniissmmooss nnoo ssee eennccuueennttrraann aaiissllaaddooss,, ssiinnoo iinntteeggrraaddooss eenn ppoobbllaacciioonneess mmiixxttaass.. PPaarraa lllleevvaarr aa ccaabboo eell eessttuuddiioo ddee eessttooss mmiiccrroooorrggaanniissmmooss yy ddee ssuuss pprrooppiieeddaaddeess,, eess nneecceessaarriioo sseeppaarraarr uunnooss ddee oottrrooss yy ttrraabbaajjaarr ccoonn eessppeecciieess aaiissllaaddaass,, oobbtteenniieennddoo ccuullttiivvooss aaxxéénniiccooss oo ppuurrooss.. UUnn ccuullttiivvoo aaxxéénniiccoo oo ppuurroo eess aaqquueell qquuee ccoonnttiieennee uunn ssóólloo ttiippoo ddee mmiiccrroooorrggaanniissmmoo yy qquuee pprroocceeddee ggeenneerraallmmeennttee ddee uunnaa ssoollaa ccéélluullaa;; eell ccrreecciimmiieennttoo ddee ééssttaa oorriiggiinnaa,, eenn mmeeddiioo ssóólliiddoo,, uunnaa mmaassaa ddee ccéélluullaass ffáácciillmmeennttee vviissiibbllee qquuee rreecciibbee eell nnoommbbrree ddee ccoolloonniiaa.. PPaarraa oobbtteenneerr ccuullttiivvooss aaxxéénniiccooss oo ppuurrooss aa ppaarrttiirr ddee uunnaa ppoobbllaacciióónn mmiiccrroobbiiaannaa mmiixxttaa,, ssee uuttiilliizzaann llaass ddeennoommiinnaaddaass ttééccnniiccaass ddee aaiissllaammiieennttoo,, qquuee ffuueerroonn ddeessaarrrroollllaaddaass dduurraannttee eell ssiigglloo XXIIXX.. UUnnoo ddee llooss pprriinncciippaalleess uussooss ddee llaass ttééccnniiccaass ddee aaiissllaammiieennttoo mmiiccrroobbiiaannoo,, aaddeemmááss ddee llaa oobbtteenncciióónn ddeell ccuullttiivvoo aaxxéénniiccoo,, eess ppooddeerr oobbsseerrvvaarr eell ttiippoo ddee ccoolloonniiaass,, ccoolloorr yy eell oolloorr ddee llaass mmiissmmaass;; ttooddaass eessttaass ccaarraacctteerrííssttiiccaass ssuummaaddaass aa llaa mmoorrffoollooggííaa bbaacctteerriiaannaa yy ssuu ddiiffeerreenncciiaacciióónn aa ttrraavvééss ddee llaa ccoolloorraacciióónn ddee GGrraamm,, ssoonn llaa bbaassee ffuunnddaammeennttaall ppaarraa ppooddeerr ccoommeennzzaarr rreeaalliizzaarr uunnaa iiddeennttiiffiiccaacciióónn ddeell mmiiccrroooorrggaanniissmmoo.. AAddeemmááss eess iinnddiissppeennssaabbllee oobbtteenneerr ccoolloonniiaass aaiissllaaddaass ppaarraa ppooddeerr rreeaalliizzaarr llaass pprruueebbaass bbiiooqquuíímmiiccaass.. OObbjjeettiivvooss::

11.. FFaammiilliiaarriizzaarrssee ccoonn eell mmaanneejjoo ddee mmiiccrroooorrggaanniissmmooss.. 22.. CCoonnoocceerr llaass ddiiffeerreenntteess ttééccnniiccaass ddee aaiissllaammiieennttoo eenn ccaajjaa ddee ppeettrrii yy ttuubbooss.. 33.. OObbtteenneerr ccoolloonniiaass sseeppaarraaddaass uuttiilliizzaannddoo uunnoo oo mmááss mmééttooddooss.. 44.. EEssttuuddiiaarr llaa mmoorrffoollooggííaa ddee llaass ccoolloonniiaass,, ccoolloorr yy oolloorr..

EExxiisstteenn ddiiffeerreenntteess ttééccnniiccaass ddee aaiissllaammiieennttoo yy ssiieemmbbrraa ddee mmiiccrroooorrggaanniissmmooss eennttrree llaass qquuee tteenneemmooss::

11.. AAiissllaammiieennttoo ppoorr eexxtteennssiióónn eenn ssuuppeerrffiicciiee ccoonn ccaayyaaddoo.. 22.. AAiissllaammiieennttoo ppoorr eessttrrííaa mmúúllttiippllee oo ssiieemmbbrraa ppoorr aaggoottaammiieennttoo.. 33.. AAiissllaammiieennttoo ppoorr DDiilluucciióónn eenn mmaassaa.. 44.. SSiieemmbbrraa eenn ccuullttiivvoo lliiqquuiiddoo ccoonn aassaa yy ppiippeettaa.. 55.. SSiieemmbbrraa eenn ttuubboo ccoonn aaggaarr iinncclliinnaaddoo yy nnoo iinncclliinnaaddoo sseemmiissóólliiddoo..

11.. AAIISSLLAAMMIIEENNTTOO PPOORR EEXXTTEENNSSIIÓÓNN EENN SSUUPPEERRFFIICCIIEE CCOONN CCAAYYAADDOO

TTeeccnniiccaa:: OObbsseerrvvaarr ffiigguurraa 11..

11.. RReeaalliiccee ddiilluucciioonneess ddee llaa mmuueessttrraa oo eell ccuullttiivvoo ccoommoo ssee iinnddiiccaa eenn eell ggrraaffiiccoo.. 22.. DDeeppoossiittee ssoobbrree llaa ppllaaccaa ccoonn aaggaarr 00..11 mmll ddee llaa ddiilluucciióónn ccoorrrreessppoonnddiieennttee ccoonn

ppiippeettaa eesstteerriill.. 33.. RReeaalliiccee llaa eexxtteennssiióónn ddee llaa mmuueessttrraa aa ttrraavvééss ddee uunn ccaayyaaddoo ddee vviiddrriioo eessttéérriill eenn

ttooddaass llaass ddiirreecccciioonneess hhaassttaa qquuee eessttee ccoommpplleettaammeennttee sseeccoo.. 44.. IInnccuubbee llaa ppllaaccaa aa 3377ooCC ddee 2244 aa 4488 hhoorraass.. CCoollooqquuee llaa ccaajjaa eenn ppoossiicciióónn iinnvveerrttiiddaa.. 55.. RReeaalliiccee eell ccoonntteeoo ddee ccoolloonniiaass..

22.. AAIISSLLAAMMIIEENNTTOO PPOORR EESSTTRRÍÍAA MMÚÚLLTTIIPPLLEE OO SSIIEEMMBBRRAA PPOORR AAGGOOTTAAMMIIEENNTTOO..

TTeeccnniiccaa:: oobbsseerrvvaarr ffiigguurraa 22..

11.. PPoonnggaa eell aassaa ccuurrvvaa eenn llaa llllaammaa ddeell mmeecchheerroo,, hhaassttaa oobbsseerrvvaarr qquuee ssee ppoonnee rroojjaa,, rreettiirree ddee llaa llllaammaa yy ddeejjee eennffrriiaarr,, oo eennffrriiéé ddiirreeccttaammeennttee eenn eell mmeeddiioo (( ppeeddiirr iinnddiiccaacciioonneess aall pprrooffeessoorr))..

22.. TToommee eell iinnooccuulloo ccoonn eell aassaa,, eenn ppooccaa ccaannttiiddaadd ((EEll iinnooccuulloo ccoorrrreessppoonnddee aa llaa ppeeqquueeññaa mmuueessttrraa qquuee uusstteedd ttoommaa))..

33.. LLeevvaannttee llaa ttaappaa ddee llaa ccaajjaa ddee ppeettrrii yy eexxttiieennddaa ééll iinnooccuulloo eenn ffoorrmmaa ddee eessttrrííaass mmuuyy jjuunnttaass,, eenn uunnaa ppeeqquueeññaa áárreeaa ddee llaa ssuuppeerrffiicciiee ddee llaa ppllaaccaa ddee aaggaarr,, tteenniieennddoo ccuuiiddaaddoo ddee nnoo rreeaalliizzaarr mmuucchhaa pprreessiióónn ppaarraa eevviittaarr ddaaññooss eenn eell aaggaarr..

44.. RReeaalliiccee nnuueevvaammeennttee eell ppaassoo nnúúmmeerroo 11.. 55.. RRoottee llaa ccaajjaa ddee ppeettrrii ddee ttaall ffoorrmmaa qquuee uunn eexxttrreemmoo ddee llaa ssiieemmbbrraa aanntteerriioorr qquueeddee

ffáácciillmmeennttee aacccceessiibbllee ppaarraa sseerr ttooccaaddoo ppoorr eell aassaa eenn llaa pprróóxxiimmaa eexxtteennssiióónn..

DDiilluucciioonneess sseerriiaaddaass ddee llaa mmuueessttrraa..

1100-1-1 1100-2-2 1100-3-3 1100-4-4 1100-5-5

00..11 mmll

CCaayyaaddoo

eexxtteennssiióónn

66.. TTooqquuee ccoonn eell aassaa ppaarrttee ddee llaa ssiieemmbbrraa rreeaalliizzaaddaa pprreevviiaammeennttee yy eexxttiieennddaa ddee nnuueevvoo hhaacciieennddoo eessttrrííaass (( NNOOTTAA:: ddeessppuuééss ddee ttooccaarr ccoonn eell aassaa llaa pprriimmeerr ssiieemmbbrraa rreeaalliizzaaddaa,, ssiiggaa rreeaalliizzaannddoo llaass eessttrrííaass,, ssiinn qquuee eessttaass ttooqquueenn llaa pprriimmeerr ssiieemmbbrraa nnuueevvaammeennttee))..

77.. RReeppiittaa llooss ppaassooss 55 yy 66 hhaassttaa qquuee hhaayyaa ddaaddoo ttooddoo eell ggiirroo aa llaa ccaajjaa ddee ppeettrrii.. 88.. IInnccuubbee ddee 2244 aa 4488 hhoorraass aa 3377ooCC.. CCoollooqquuee llaa ccaajjaa eenn ppoossiicciióónn iinnvveerrttiiddaa..

33.. AAIISSLLAAMMIIEENNTTOO PPOORR DDIILLUUCCIIÓÓNN EENN MMAASSAA.. EEssttee ttiippoo ddee ttééccnniiccaa ssee uuttiilliizzaa ppaarraa rreeaalliizzaarr rreeccuueennttoo ddee mmiiccrroooorrggaanniissmmooss vviivvooss eenn aannáálliissiiss ddee aalliimmeennttooss.. TTeeccnniiccaa:: OObbsseerrvvaarr ffiigguurraa 44..

11.. HHaaggaa 44 ddiilluucciioonneess ddee llaa mmuueessttrraa oo eell ccuullttiivvoo ccoommoo ssee iinnddiiccaa eenn llaa ffiigguurraa 11.. 22.. TToommee 44 ccaajjaass ddee ppeettrrii eesstteerriill yy mmaarrqquuee ccaaddaa uunnaa ccoonn uunnaa ddiilluucciióónn,, 33.. AAddiicciioonnee 00..11 mmll ddee llaa ddiilluucciióónn eenn llaa ccaajjaa ddee ppeettrrii eesstteerriill ccoorrrreessppoonnddiieennttee.. 44.. AAggrreegguuee ++//--1155mmll ddee aaggaarr LL..BB.. lliiqquuiiddoo aatteemmppeerraaddoo aa ++//-- 4455 ooCC.. (( PPaarraa ssaabbeerr

qquuee eell mmeeddiioo eessttaa aa uunnaa tteemmppeerraattuurraa aapprrooxxiimmaaddaa ddee 4455 ooCC,, ttoommee eell EErrlleenn--mmeeyyeerr qquuee ccoonnttiieennee eell mmeeddiioo ddee ccuullttiivvoo yy aarrrríímmeesseelloo aa llaa ppiieell,, ssii eess ccaappaazz ddee ssooppoorrttaarr eell ccaalloorr,, eess ppoorr qquuee yyaa eessttaa aa uunnaa tteemmppeerraattuurraa aaddeeccuuaaddaa ppaarraa ssee aaddiicciioonnaaddoo))..

55.. MMeezzccllee llaass ccaajjaass ccoonn mmoovviimmiieennttooss ccuuiiddaaddoossooss,, ccoommoo ssiigguuee::

MMoovviieennddoo llaa ccaajjaa ddee aarrrriibbaa hhaacciiaa aabbaajjoo.. RRoottaannddoo llaa ccaajjaa hhaacciieennddoo ccíírrccuullooss 55 vveecceess eenn eell sseennttiiddoo ddee llaass aagguujjaass ddeell

rreelloojj.. MMoovviieennddoo llaa ccaajjaa 55 vveecceess hhaacciieennddoo áánngguullooss rreeccttooss.. RRoottaannddoo llaa ccaajjaa hhaacciieennddoo ccíírrccuullooss 55 vveecceess eenn sseennttiiddoo ccoonnttrraarriioo ddee llaass

aagguujjaass ddeell rreelloojj.. 66.. DDeejjee ssoolliiddiiffiiccaarr eell aaggaarr yy aaggrreegguuee uunnaa ccaappaa aaddiicciioonnaall ddee aaggaarr.. DDeejjee ssoolliiddiiffiiccaarr.. 77.. IInnvviieerrttaa llaass ccaajjaass ee iinnccuubbee aa 3377 ooCC dduurraannttee 2244 aa 4488 hhoorraass yy CCoollooqquuee uunnaa ccaajjaa

ccoonn mmeeddiioo ssiinn iinnooccuullaarr ee iinnccuubbeellaa ccoonn llaass ddeemmááss..

FFiigguurraa 44..

55.. SSIIEEMMBBRRAA EENN CCUULLTTIIVVOO LLIIQQUUIIDDOO CCOONN AASSAA YY PPIIPPEETTAA.. AA)).. TTééccnniiccaa ssiieemmbbrraa ccoonn aassaa:: FFiigguurraa 55.. 11.. PPoonnggaa eell aassaa ccuurrvvaa eenn llaa llllaammaa ddeell mmeecchheerroo,, hhaassttaa oobbsseerrvvaarr qquuee ssee ppoonnee rroojjaa,,

rreettiirree ddee llaa llllaammaa yy ddeejjee eennffrriiaarr,, oo eennffrriiéé ddiirreeccttaammeennttee eenn eell mmeeddiioo 22.. TToommee eell ttuubboo qquuee ccoonnttiieennee llaa mmuueessttrraa ee iinnttrroodduuzzccaa eell aassaa ccuurrvvaa hhaassttaa 11//33 ppaarrttee,,

ssááqquueellaa yy vveerriiffiiqquuee qquuee eell aassaa ccoonnttiieennee uunnaa ggoottaa ddee mmuueessttrraa eenn llaa ppuunnttaa.. 33.. SSuummeerrjjaa eell aassaa ccoonn llaa ggoottaa ddee mmuueessttrraa eenn llaa ppuunnttaa,, eenn uunn ttuubboo qquuee ccoonnttiieennee 55mmll

ddee mmeeddiioo LL..BB.. eessttéérriill 44.. AAggiittee eell aassaa ddeennttrroo ddeell mmeeddiioo ppaarraa ppeerrmmiittiirr eell ddeesspprreennddiimmiieennttoo ddee llaa mmuueessttrraa yy llaa

ddiilluucciióónn ddee llaa mmiissmmaa.. 55.. IInnccuubbee ddee 2244 aa 4488 hhoorraass aa 3377ooCC.. CCoollooqquuee llaa ccaajjaa eenn ppoossiicciióónn iinnvveerrttiiddaa.. 66.. OObbsseerrvvee llaa ttuurrbbiiddeezz ddeell mmeeddiioo aall ccaabboo ddee llaa iinnccuubbaacciióónn..

FFiigguurraa 55..

DDiilluucciióónn ddee llaa mmuueessttrraa

00..11 mmll

1155 mmll ddee mmeeddiioo aatteemmppeerraaddoo

FFLLAAMMEEAARR FFLLAAMMEEAARR

MMUUEESSTTRRAA IINNOOCCUULLAACCIIÓÓNN IINNCCUUBBAACCIIÓÓNN

RROOTTAARR

BB.. TTééccnniiccaa ssiieemmbbrraa ccoonn ppiippeettaa::

11.. TToommee eell ttuubboo qquuee ccoonnttiieennee llaa mmuueessttrraa ee iinnttrroodduuzzccaa llaa ppiippeettaa ggrraadduuaaddaa yy aassppiirree ccoonn ppiippeetteeaaddoorr ddee sseegguurriiddaadd eell vvoolluummeenn qquuee nneecceessiittaa..

22.. TTrraannssffiieerraa llaa ppiippeettaa ccoonn llaa mmuueessttrraa eenn uunn ttuubboo qquuee ccoonnttiieennee 55mmll ddee mmeeddiioo

LL..BB.. eessttéérriill yy ddeeppoossiittee aallllíí llaa mmuueessttrraa.. 33.. MMeezzccllee ccoonn llaa mmiissmmaa ppiippeettaa aassppiirraannddoo yy ssoollttaannddoo 55 vveecceess llaa mmuueessttrraa yy eell

ccuullttiivvoo.. 44.. IInnccuubbee aa 3377 ooCC ddee 2244 aa 4488 hhoorraass.. 55.. OObbsseerrvvee llaa ttuurrbbiiddeezz ddeell mmeeddiioo aall ccaabboo ddee llaa iinnccuubbaacciióónn..

66.. SSIIEEMMBBRRAA EENN TTUUBBOO CCOONN AAGGAARR IINNCCLLIINNAADDOO YY NNOO IINNCCLLIINNAADDOO SSEEMMIISSÓÓLLIIDDOO..

AAggaarr sseemmiissóólliiddoo:: EEss aaqquueell aaggaarr qquuee ccoonnttiieennee uunnaa mmeennoorr ccoonncceennttrraacciióónn ddee aaggaarr--aaggaarr.. llaass ssiieemmbbrraass eenn aaggaarr iinncclliinnaaddoo yy nnoo iinncclliinnaaddoo ppuueeddeenn rreeaalliizzaarrssee aa ttrraavvééss ddeell aassaa ccuurrvvaa oo rreeccttaa,, ccoonn eell aassaa ccuurrvvaa ssee rreeaalliizzaa ssiieemmbbrraa eenn llaa ssuuppeerrffiicciiee ddeell aaggaarr ggeenneerraallmmeennttee eenn zziigg--zzaagg.. YY ccoonn eell aassaa rreeccttaa ssee rreeaalliizzaa llaa ssiieemmbbrraa ppoorr ppuunncciióónn.. AA)).. SSiieemmbbrraa eenn ttuubboo ccoonn aaggaarr iinncclliinnaaddoo sseemmiissoolliiddoo:: ffiigguurraa 66..

11.. PPoonnggaa eell aassaa ccuurrvvaa eenn llaa llllaammaa ddeell mmeecchheerroo,, hhaassttaa oobbsseerrvvaarr qquuee ssee ppoonnee rroojjaa,, rreettiirree ddee llaa llllaammaa yy ddeejjee eennffrriiaarr,, oo eennffrriiéé ddiirreeccttaammeennttee eenn eell mmeeddiioo..

22.. TToommee eell ttuubboo qquuee ccoonnttiieennee llaa mmuueessttrraa ee iinnttrroodduuzzccaa eell aassaa ccuurrvvaa hhaassttaa 11//33 ppaarrttee,,

ssááqquueellaa yy vveerriiffiiqquuee qquuee eell aassaa ccoonnttiieennee uunnaa ggoottaa ddee mmuueessttrraa eenn llaa ppuunnttaa.. 33.. SSiieemmbbrree llaa mmuueessttrraa qquuee ccoonnttiieennee eell aassaa,, eenn ffoorrmmaa ddee zziigg--zzaagg ssoobbrree llaa ssuuppeerrffiicciiee

iinncclliinnaaddaa ddeell ttuubboo;; eell pprroocceessoo ssee iinniicciiaa eenn eell ffoonnddoo yy ssee vvaa aavvaannzzaannddoo hhaacciiaa aarrrriibbaa ppoorr eell áárreeaa iinncclliinnaaddaa..

44.. IInnccuubbee aa 3377 ooCC ddee 2244 aa4488 hhoorraass..

FFiigguurraa 66..

BB)).. SSiieemmbbrraa eenn ttuubboo ccoonn aaggaarr nnoo iinncclliinnaaddoo sseemmiissoolliiddoo:: ffiigguurraa 77.. 11.. PPoonnggaa eell aassaa rreeccttaa eenn llaa llllaammaa ddeell mmeecchheerroo,, hhaassttaa oobbsseerrvvaarr qquuee ssee ppoonnee rroojjaa,,

rreettiirree ddee llaa llllaammaa yy ddeejjee eennffrriiaarr,, oo eennffrriiéé ddiirreeccttaammeennttee eenn eell mmeeddiioo..

22.. TToommee ccoonn llaa ppuunnttaa ddeell aassaa uunnaa ppeeqquueeññaa ccaannttiiddaadd ddee llaa ccoolloonniiaa aa sseemmbbrraarr..

33.. iinnttrroodduuzzccaa eell aassaa rreeccttaa ccoonn llaa mmuueessttrraa aa ttrraavvééss ddeell aaggaarr hhaassttaa eell ffoonnddoo ddeell ttuubboo ssiinn mmoovveerrlloo ppaarraa llooss llaaddooss..

44.. RReettiirree eell aassaa ppoorr llaa mmiissmmaa ttrraayyeeccttoorriiaa ppoorr ddoonnddee llaa iinnttrroodduujjoo,, ddee ttaall mmaanneerraa

qquuee qquueeddee uunnaa ssoollaa ppuunncciióónn eenn eell aaggaarr..

55.. IInnccuubbee aa 3377 ooCC ddee 2244 aa4488 hhoorraass..

FFiigguurraa 77..

PPrreegguunnttaass..

11.. ¿¿IInnvveessttiigguuee aa qquuee hhaaccee rreeffeerreenncciiaa ssiieemmbbrraa ppoorr aaggoottaammiieennttoo yy ccuuaall eess ssuu uuttiilliiddaadd??..

22.. ¿¿ EEnn qquuee ccaassooss ssee uuttiilliizzaa llaa ssiieemmbbrraa eenn ccuullttiivvoo lliiqquuiiddoo yy aaggaarr sseemmiissóólliiddoo,, eexxpplliiqquuee??..

33.. ¿¿CCuuaall eess llaa uuttiilliiddaadd ddee hhaacceerr rreeccuueennttoo ddee ccoolloonniiaass ppoorr eell mmééttooddoo ddee ddiilluucciióónn eenn mmaassaa??..

44.. UUsstteedd eess uunn ddiirreeccttoorr ddee ccoonnttrrooll ddee ccaalliiddaadd eenn uunnaa eemmpprreessaa ddee aalliimmeennttooss,, ssuu ddiirreeccttoorr llee ppiiddee qquuee ttiieennee qquuee hhaacceerr uunn rreeccuueennttoo ddee mmiiccrroooorrggaanniissmmooss eenn llooss aalliimmeennttooss::

¿¿QQuuee mmééttooddooss ppooddrrííaa uuttiilliizzaarr ppaarraa hhaacceerr eessttee rreeccuueennttoo?? EEnnuummeerree ccoommoo mmíínniimmoo 22 ..

EExxpplliiqquuee ccuuaall eess eell ffuunnddaammeennttoo ddee ccaaddaa uunnoo ddee llooss mmééttooddooss eessccooggiiddooss..

PPrraaccttiiccaa ddee llaabboorraattoorriioo NNoo 44..

MMEEDDIIDDAA DDEELL CCRREECCIIMMIIEENNTTOO DDEE UUNNAA PPOOBBLLAACCIIÓÓNN MMIICCRROOBBIIAANNAA..

FFIISSIIÓÓNN BBIINNAARRIIAA EEss uunn pprroocceessoo eenn eell ccuuaall ddee llaa ddiivviissiióónn ddee uunnaa ccéélluullaa rreessuullttaann ddooss ((22)) ccéélluullaass,, uussuuaallmmeennttee aammbbaass ccéélluullaass hhiijjaass ttiieenneenn eell mmiissmmoo ttaammaaññoo yy ffoorrmmaa.. EEssttee eess eell pprroocceessoo mmááss ccoommúúnn yy ssiinn dduuddaa eell mmááss iimmppoorrttaannttee eenn eell cciicclloo ddee ccrreecciimmiieennttoo ddee llaass ppoobbllaacciioonneess bbaacctteerriiaannaass.. EEnn uunn ccuullttiivvoo eenn ccrreecciimmiieennttoo llaa ccéélluullaa bbaacctteerriiaannaa aauummeennttaa ddee ttaammaaññoo,, rreepplliiccaa ssuu AADDNN yy llaa ppaarreedd cceelluullaarr yy llaa mmeemmbbrraannaa cciittooppllaassmmááttiiccaa ccoommiieennzzaann aa ccrreecceerr hhaacciiaa aaddeennttrroo aa ppaarrttiirr ddee ddiirreecccciioonneess ooppuueessttaass ffoorrmmaannddoo uunnaa ppaarrttiicciióónn ccoonnoocciiddaa ccoommoo sseeppttoo.. AA ccaaddaa llaaddoo ddeell sseeppttoo ssee uubbiiccaa uunnaa ccooppiiaa ddeell ccrroommoossoommaa bbaacctteerriiaannoo yy llooss oottrrooss ccoonnssttiittuuyyeenntteess cceelluullaarreess qquuee llee ppeerrmmiittaann aa ccaaddaa ccéélluullaa hhiijjaa vviivviirr ccoommoo ccéélluullaa iinnddeeppeennddiieennttee.. LLuueeggoo ssee sseeppaarraann ccoommoo ddooss ccéélluullaass hhiijjaass rreessuullttaanntteess ddee llaa ddiivviissiióónn ddee llaa ccéélluullaa mmaaddrree oorriiggiinnaall.. CCrreecciimmiieennttoo SSee ddeeffiinnee ccrreecciimmiieennttoo ccoommoo uunn aauummeennttoo eenn llaa ccaannttiiddaadd ddee ccoonnssttiittuuyyeenntteess yy eessttrruuccttuurraass cceelluullaarreess,, ccuuaannddoo hhaayy ccrreecciimmiieennttoo eenn aauusseenncciiaa ddee ddiivviissiióónn cceelluullaarr hhaayy aauummeennttoo eenn eell ttaammaaññoo yy ppeessoo ddee llaa ccéélluullaa.. MMiieennttrraass qquuee ccuuaannddoo eell ccrreecciimmiieennttoo eess sseegguuiiddoo ddee ddiivviissiióónn cceelluullaarr hhaayy uunn aauummeennttoo eenn eell nnúúmmeerroo ddee ccéélluullaass.. EEss iimmppoorrttaannttee ddiissttiinngguuiirr eennttrree eell ccrreecciimmiieennttoo ddee ccéélluullaass iinnddiivviidduuaalleess yy eell ccrreecciimmiieennttoo ddee ppoobbllaacciioonneess,, yyaa qquuee eenn llooss mmiiccrroooorrggaanniissmmooss ddeebbiiddoo aa ssuu ppeeqquueeññoo ttaammaaññoo nnoo ssee hhaacceenn eessttuuddiiooss ddee ccrreecciimmiieennttoo iinnddiivviidduuaall ssiinnoo eessttuuddiiooss ddee ccrreecciimmiieennttoo ddee ppoobbllaacciioonneess.. EEll ccrreecciimmiieennttoo ddee uunnaa ppoobbllaacciióónn eess eell aauummeennttoo ddeell nnúúmmeerroo ddee ccéélluullaass ccoommoo ccoonnsseeccuueenncciiaa ddee uunn ccrreecciimmiieennttoo iinnddiivviidduuaall yy ppoosstteerriioorr ddiivviissiióónn.. EEll ccrreecciimmiieennttoo ddee uunnaa ppoobbllaacciióónn ooccuurrrree ddee uunnaa mmaanneerraa eexxppoonneenncciiaall.. EEll ccrreecciimmiieennttoo eexxppoonneenncciiaall eess uunnaa ccoonnsseeccuueenncciiaa ddeell hheecchhoo ddee qquuee ccaaddaa ccéélluullaa ssee ddiivviiddee ddaannddoo ddooss ((22)) ccéélluullaass hhiijjaass,, llaass ccuuaalleess aall ddiivviiddiirrssee ddaarráánn ccaaddaa uunnaa ddooss ccéélluullaass hhiijjaass,, aassíí eess qquuee eenn ccaaddaa ppeerrííooddoo ddee ddiivviissiióónn llaa ppoobbllaacciióónn ssee dduupplliiccaa.. LLaa vveelloocciiddaadd ddee ccrreecciimmiieennttoo eexxppoonneenncciiaall ssee eexxpprreessaa ccoommoo ttiieemmppoo ddee ggeenneerraacciióónn ((GG)) yy eessttee ssee ddeeffiinnee ccoommoo eell ttiieemmppoo qquuee ttaarrddaa uunnaa ppoobbllaacciióónn eenn dduupplliiccaarrssee.. LLooss ttiieemmppooss ddee ggeenneerraacciióónn vvaarrííaann aammpplliiaammeennttee eennttrree llooss mmiiccrroooorrggaanniissmmooss,, aallgguunnooss ccrreecceenn rrááppiiddaammeennttee yy pprreesseennttaann ttiieemmppooss ddee ggeenneerraacciióónn ddee uunnooss 3300 mmiinnuuttooss yy oottrrooss ttiieenneenn ttiieemmppooss ddee ggeenneerraacciióónn ddee vvaarriiaass hhoorraass oo iinncclluussoo ddííaass.. EExxiisstteenn vvaarriiooss mmééttooddooss ppaarraa mmeeddiirr eell ccrreecciimmiieennttoo mmiiccrroobbiiaannoo::

MMééttooddooss ddiirreeccttooss.. SSoonn aaqquueellllooss eenn llooss qquuee ssee ccuueennttaa eell nnºº ttoottaall ddee ccéélluullaass eenn uunn vvoolluummeenn ccoonnoocciiddoo yy aassíí ssee eessttiimmaa eell nnºº ttoottaall eenn llaa ppoobbllaacciióónn.. EEnnttrree eellllooss::

aa.. RReeccuueennttoo ddiirreeccttoo ddeell nnºº ddee ccéélluullaass aall mmiiccrroossccooppiioo.. SSee uuttiilliizzaann ppoorrttaass eessppeecciiaallmmeennttee ddiisseeññaaddooss ppaarraa eell rreeccuueennttoo cceelluullaarr yy ddeennoommiinnaaddooss ccáámmaarraass ddee rreeccuueennttoo.. EExxiisstteenn vvaarriiooss ttiippooss ddee ccáámmaarraass ddee rreeccuueennttoo,, uunnaa ddee eellllaass eess llaa ccáámmaarraa TThhoommaa EEssttee mmééttooddoo ttiieennee eell iinnccoonnvveenniieennttee ddee qquuee nnoo ddiiffeerreenncciiaa eennttrree ccéélluullaass vviiaabblleess yy nnoo vviiaabblleess.. EEss ppooccoo pprreecciissoo.. bb.. CCoonnttaaddoorreess eelleeccttrróónniiccooss.. LLaass ccéélluullaass ssoonn ssuussppeennddiiddaass eenn uunn fflluuiiddoo ccoonndduuccttoorr qquuee ppaassaa lleennttaammeennttee aa ttrraavvééss ddee uunnaa aabbeerrttuurraa ffiinnaa ppoorr llaa qquuee ppaassaa uunnaa ccoorrrriieennttee eellééccttrriiccaa.. CCaaddaa ccéélluullaa qquuee ppaassaa pprroodduuccee uunn ccaammbbiioo eenn llaa ccoonndduuccttiivviiddaadd yy eessttooss ccaammbbiiooss oo ppuullssooss ccoonnvveenniieenntteemmeennttee aammpplliiffiiccaaddooss ssoonn rreeggiissttrraaddooss eelleeccttrróónniiccaammeennttee ddaannddoo uunnaa mmeeddiiddaa ddiirreeccttaa ddeell nnºº ddee ccéélluullaass eenn eell mmeeddiioo.. NNoo ddiiffeerreenncciiaa eennttrree ccéélluullaass vviiaabblleess yy nnoo vviiaabblleess nnii eennttrree ccéélluullaass oo ppaarrttííccuullaass iinneerrtteess..

cc.. RReeccuueennttoo ddee ccéélluullaass vviiaabblleess.. HHaacciieennddoo ddiilluucciioonneess aapprrooppiiaaddaass sseegguuiiddaass ddee ssiieemmbbrraa ssoobbrree ppllaaccaass PPeettrrii ppooddeemmooss oobbtteenneerr ccrreecciimmiieennttoo ddee ccoolloonniiaass aaiissllaaddaass pprroocceeddeenntteess ccaaddaa uunnaa ddee uunnaa úúnniiccaa ccéélluullaa.. SSii ssee mmuullttiipplliiccaa ppoorr eell ffaaccttoorr ddee ddiilluucciióónn tteennddrreemmooss eell nnºº ddee ccéélluullaass eenn ccuullttiivvoo.. SSóólloo ddeetteeccttaa vviiaabblleess ppeerroo eess uunn mmééttooddoo lleennttoo yy ccaarroo ppoorr eell eelleevvaaddoo nnúúmmeerroo ddee ppllaaccaass qquuee hhaayy qquuee uuttiilliizzaarr ppaarraa qquuee llooss rreessuullttaaddooss sseeaann ssiiggnniiffiiccaattiivvooss..

MMééttooddooss iinnddiirreeccttooss.. SSoonn aaqquueellllooss qquuee uuttiilliizzaann ppaarráámmeettrrooss ddiissttiinnttooss ddeell nnºº ddee ccéélluullaass,, ppeerroo qquuee ppuueeddeenn rreellaacciioonnaarrssee ddee ffoorrmmaa ddiirreeccttaa ccoonn ééssttee ((mmaassaa cceelluullaarr,, aaccttiivviiddaadd mmeettaabbóólliiccaa,, eettcc....)).. EElllloo eess ppoossiibbllee ppoorrqquuee dduurraannttee eell ccrreecciimmiieennttoo ddee uunn ccuullttiivvoo hhaayy uunn aauummeennttoo oorrddeennaaddoo ddee ttooddooss llooss ccoonnssttiittuuyyeenntteess cceelluullaarreess yy aassíí llaa vveelloocciiddaadd ddee ccrreecciimmiieennttoo ddee llaa ppoobbllaacciióónn ppuueeddee eessttiimmaarrssee ppoorr llaa vveelloocciiddaadd ddeell iinnccrreemmeennttoo ddee ccuuaallqquuiieerraa ddee eessttooss ppaarráámmeettrrooss..

EEnnttrree llooss mmééttooddooss iinnddiirreeccttooss ssee eennccuueennttrraann:: aa.. DDeetteerrmmiinnaacciióónn ddeell ppeessoo sseeccoo.. SSee ttrraattaa ddee mmeeddiirr llaa mmaassaa cceelluullaarr pprreesseennttee eenn uunn ccuullttiivvoo yy eessttiimmaarr eell nnºº ddee ccéélluullaass pprrooppoorrcciioonnaall aa ééssttaa.. bb.. DDeetteerrmmiinnaacciióónn ddeell nniittrróóggeennoo cceelluullaarr.. MMeeddiirr eell ccoonntteenniiddoo pprrootteeííccoo ddeell ccuullttiivvoo.. cc.. DDeetteerrmmiinnaacciióónn ddeell DDNNAA dd.. DDeetteerrmmiinnaacciióónn ddee uunnaa aaccttiivviiddaadd mmeettaabbóólliiccaa sseeggúúnn eell ttiippoo ddee mmiiccrroooorrggaanniissmmoo:: ccoonnssuummoo ddee ooxxííggeennoo ((eenn aaeerroobbiiooss)),, lliibbeerraacciióónn ddee CCOO22 uu oottrroo pprroodduuccttoo ddee ffeerrmmeennttaacciióónn,, aauummeennttoo ddee llaa ccoonncceennttrraacciióónn ddee aallgguunnaa eennzziimmaa ccoonnssttiittuuttiivvaa,, iinnccoorrppoorraacciióónn eenn llaa ccéélluullaa ddee aallggúúnn mmaatteerriiaall rraaddiiaaccttiivvoo,, eettcc.. ee.. MMeeddiiddaa ddee llaa ttuurrbbiiddeezz ddeell ccuullttiivvoo.. SSee bbaassaa eenn llaa ccaappaacciiddaadd ddee llaass ccéélluullaass yy ppaarrttííccuullaass eenn ggeenneerraall ddee aabbssoorrbbeerr yy//oo ddiissppeerrssaarr llaa lluuzz qquuee iinncciiddee ssoobbrree eellllaass.. UUnn ccuullttiivvoo cceelluullaarr aappaarreeccee ttuurrbbiioo ppoorrqquuee llaass ccéélluullaass ddiissppeerrssaann llaa lluuzz qquuee aattrraavviieessaa llaa ssuussppeennssiióónn.. LLaa ttuurrbbiiddeezz eess pprrooppoorrcciioonnaall aall nnúúmmeerroo ddee ccéélluullaass yy ppuueeddee mmeeddiirrssee uuttiilliizzaannddoo uunn eessppeeccttrrooffoottóómmeettrroo.. EEll eessppeeccttrrooffoottóómmeettrroo eess uunn aappaarraattoo qquuee hhaaccee ppaassaarr llaa lluuzz aa ttrraavvééss ddee uunnaa ssuussppeennssiióónn cceelluullaarr yy ddeetteeccttaa llaa lluuzz nnoo ddiissppeerrssaaddaa..(( ffiigguurraa 11)).. FFiigguurraa 11.. PPaarrtteess ddee uunn eessppeeccttrrooffoottóómmeettrroo..

EEssttee iinnssttrruummeennttoo mmiiddee llaa rreellaacciióónn ddee iinntteennssiiddaadd ddee LLuuzz iinncciiddeennttee ccoonn llaa iinntteennssiiddaadd ddeell rraayyoo lluummiinnoossoo qquuee ssaallee ddeessppuuééss ddee aattrraavveessaarr llaa mmuueessttrraa.. CCuuaannttoo mmaayyoorr sseeaa eell nnºº ddee ccéélluullaass mmaayyoorr eess llaa ttuurrbbiiddeezz eell ccuullttiivvoo,, ppoorr lloo ttaannttoo hhaayy uunn aauummeennttoo eenn llaa rreetteenncciióónn ddee llaa lluuzz oo ddeennssiiddaadd óóppttiiccaa ((DD..OO..)) yy mmeennoorr llaa ccaannttiiddaadd ddee lluuzz qquuee ppaassaa hhaacciiaa eell ddeetteeccttoorr (( lluuzz nnoo ddiissppeerrssaaddaa)).. LLaa DD..OO.. ddeell ccuullttiivvoo eess ppuueess pprrooppoorrcciioonnaall aa llaa ddeennssiiddaadd cceelluullaarr.. EEssttoo eess aassíí ddeennttrroo ddee cciieerrttooss llíímmiitteess ppuueessttoo qquuee aa eelleevvaaddaass ccoonncceennttrraacciioonneess ppuueeddeenn ffoorrmmaarrssee aaggrreeggaaddooss cceelluullaarreess oo pprroodduucciirrssee uunn eeffeeccttoo ""ppaannttaallllaa"" ddee uunnaass ccéélluullaass ssoobbrree oottrraass

CCUURRVVAA DDEE CCRREECCIIMMIIEENNTTOO BBAACCTTEERRIIAANNOO.. FFiigguurraa 22.. FFaassee ddee llaatteenncciiaa CCuuaannddoo uunnaa ppoobbllaacciióónn bbaacctteerriiaannaa eess iinnooccuullaaddaa eenn mmeeddiioo ffrreessccoo,, eell ccrreecciimmiieennttoo uussuuaallmmeennttee nnoo ccoommiieennzzaa ddee iinnmmeeddiiaattoo ssiinnoo ddeessppuuééss ddee uunn ttiieemmppoo llllaammaaddoo ddee llaatteenncciiaa,, qquuee ppuueeddee sseerr ccoorrttoo oo llaarrggoo ddeeppeennddiieennddoo ddee llaass ccoonnddiicciioonneess.. LLaa ffaassee ddee llaatteenncciiaa rreepprreesseennttaa uunn ppeerriiooddoo ddee ttrraannssiicciióónn ppaarraa llooss mmiiccrroooorrggaanniissmmooss ccuuaannddoo ssoonn ttrraannssffeerriiddooss aa uunnaa nnuueevvaa ccoonnddiicciióónn.. EEnn eessttaa ffaassee ssee pprroodduucceenn llaass eennzziimmaass nneecceessaarriiaass ppaarraa qquuee eellllooss ppuueeddaann ccrreecceerr eenn uunn nnuueevvoo mmeeddiioo aammbbiieennttee.. EEnn eessttaa ffaassee nnoo hhaayy iinnccrreemmeennttoo eenn eell nnúúmmeerroo ddee ccéélluullaass,, ppeerroo hhaayy ggrraann aaccttiivviiddaadd mmeettaabbóólliiccaa,, aauummeennttoo eenn eell ttaammaaññoo iinnddiivviidduuaall ddee llaass ccéélluullaass,, eenn eell ccoonntteenniiddoo pprrootteeiiccoo,, AADDNN yy ppeessoo sseeccoo ddee llaass ccéélluullaass.. SSii uunn ccuullttiivvoo qquuee eessttáá ccrreecciieennddoo eenn ffaassee eexxppoonneenncciiaall eess iinnooccuullaaddoo aall mmiissmmoo mmeeddiioo ddee ccuullttiivvoo bbaajjoo llaass mmiissmmaass ccoonnddiicciioonneess ddee ccrreecciimmiieennttoo,, nnoo ssee oobbsseerrvvaa ffaassee ddee llaatteenncciiaa yy eell ccrreecciimmiieennttoo eexxppoonneenncciiaall ssiigguuee aa llaa mmiissmmaa vveelloocciiddaadd.. SSii eell iinnooccuulloo ssee ttoommaa ddee uunn ccuullttiivvoo vviieejjoo ((ffaassee eessttaacciioonnaarriiaa)) yy ssee iinnooccuullaa eenn eell mmiissmmoo mmeeddiioo,, ggeenneerraallmmeennttee ssee pprreesseennttaa llaa ffaassee ddee llaatteenncciiaa eessttoo ssee ddeebbee aa qquuee llaass ccéélluullaass ggeenneerraallmmeennttee aaggoottaann uunnaa sseerriiee ddee ccooeennzziimmaass eesseenncciiaalleess uu oottrrooss ccoonnssttiittuuyyeenntteess cceelluullaarreess yy ssee rreeqquuiieerree cciieerrttoo ttiieemmppoo ppaarraa ssuu ssíínntteessiiss.. TTaammbbiiéénn ssee oobbsseerrvvaa llaatteenncciiaa ccuuaannddoo eell iinnóóccuulloo eessttáá ffoorrmmaaddoo ppoorr ccéélluullaass qquuee hhaann ssiiddoo ddaaññaaddaass ppeerroo nnoo mmuueerrttaass,, bbiieenn sseeaa ppoorr ttrraattaammiieennttoo ccoonn ccaalloorr,, rraaddiiaacciioonneess oo ssuussttaanncciiaass qquuíímmiiccaass,, ppuueessttoo qquuee rreeqquuiieerreenn rreeppaarraarr ddiicchhoo ddaaññoo.. EEnn eell ccaassoo ddee qquuee uunnaa ppoobbllaacciióónn ssee ttrraannssffiieerraa ddee uunn mmeeddiioo ddee ccuullttiivvoo rriiccoo aa uunn mmeeddiioo ppoobbrree,, ssee oobbsseerrvvaa llaatteenncciiaa ppuueessttoo qquuee eess nneecceessaarriioo qquuee llaass ccéélluullaass ppaarraa ppooddeerr sseegguuiirr ccrreecciieennddoo tteennggaann uunnaa sseerriiee ddee eennzziimmaass ppaarraa ppooddeerr ssiinntteettiizzaarr aallgguunnooss mmeettaabboolliittooss eesseenncciiaalleess qquuee nnoo eessttáánn pprreesseenntteess eenn eell mmeeddiioo.. FFaassee eexxppoonneenncciiaall oo ffaassee llooggaarrííttmmiiccaa EEss eell ppeerrííooddoo ddee llaa ccuurrvvaass ddee ccrreecciimmiieennttoo eenn eell ccuuaall eell mmiiccrroooorrggaanniissmmoo ccrreeccee eexxppoonneenncciiaallmmeennttee,, eess ddeecciirr qquuee ccaaddaa vveezz qquuee ppaassaa uunn ttiieemmppoo ddee ggeenneerraacciióónn llaa ppoobbllaacciióónn ssee dduupplliiccaa.. BBaajjoo ccoonnddiicciioonneess aapprrooppiiaaddaass llaa vveelloocciiddaadd ddee ccrreecciimmiieennttoo eess mmááxxiimmaa.. LLaass ccoonnddiicciioonneess aammbbiieennttaalleess ((tteemmppeerraattuurraa,, ccoommppoossiicciióónn ddeell mmeeddiioo ddee ccuullttiivvoo,, eettcc..)) aaffeeccttaann aa llaa vveelloocciiddaadd ddee ccrreecciimmiieennttoo eexxppoonneenncciiaall.. FFaassee eessttaacciioonnaarriiaa EEnn ccuullttiivvooss eenn rreecciippiieenntteess cceerrrraaddooss uunnaa ppoobbllaacciióónn nnoo ppuueeddee ccrreecceerr iinnddeeffiinniiddaammeennttee eenn ffoorrmmaa eexxppoonneenncciiaall.. LLaass lliimmiittaacciioonneess ddeell ccrreecciimmiieennttoo ooccuurrrreenn yyaa sseeaa ppoorr aaggoottaammiieennttoo ddee aallggúúnn nnuuttrriieennttee eesseenncciiaall,, ppoorr aaccuummuullaacciióónn ddee pprroodduuccttooss ttóóxxiiccooss,, ppoorrqquuee ssee aallccaannccee uunn nnúúmmeerroo ddee ccéélluullaass eelleevvaaddoo ppaarraa eell eessppaacciioo ddiissppoonniibbllee oo ppoorr uunnaa ccoommbbiinnaacciióónn ddee llaass ccaauussaass aanntteerriioorreess.. EEssttee ppeerriiooddoo dduurraannttee eell ccuuaall cceessaa eell ccrreecciimmiieennttoo ssee ccoonnooccee ccoommoo ffaassee eessttaacciioonnaarriiaa.. FFaassee ddee mmuueerrttee SSii llaa iinnccuubbaacciióónn ccoonnttiinnúúaa ddeessppuuééss ddee qquuee uunnaa ppoobbllaacciióónn mmiiccrroobbiiaannaa aallccaannzzaa llaa ffaassee eessttaacciioonnaarriiaa,, llaass ccéélluullaass ppuueeddeenn sseegguuiirr vviivvaass yy ccoonnttiinnuuaarr mmeettaabboolliizzaannddoo,, ppeerroo vvaa aa ccoommeennzzaarr uunnaa ddiissmmiinnuucciióónn pprrooggrreessiivvaa eenn eell nnúúmmeerroo ddee ccéélluullaass vviiaabblleess yy ccuuaannddoo eessttoo ooccuurrrree ssee ddiiccee qquuee llaa ppoobbllaacciióónn hhaa eennttrraaddoo eenn ffaassee ddee mmuueerrttee..

FFiigguurraa22.. RReepprreesseennttaacciióónn ggrraaffiiccaa ddee uunnaa ccuurrvvaa ddee ccrreecciimmiieennttoo bbaacctteerriiaannoo..

OObbjjeettiivvooss::

MMeeddiirr eell ccrreecciimmiieennttoo ddee uunnaa ppoobbllaacciióónn mmiiccrroobbiiaannaa.. MMeeddiirr ddee llaa ttuurrbbiiddeezz ddeell ccuullttiivvoo ((mmééttooddoo iinnddiirreeccttoo)) MMeeddiirr llaa vviiaabbiilliiddaadd bbaacctteerriiaannaa aa llaa tteemmppeerraattuurraa..

11.. PPrreeppaarraacciióónn ddee llaa eessccaallaa ddee MMcc FFaarrllaanndd:: EEssccaallaa ddee MMcc ffaarrllaann 11%% ddee BBaaCCll22 ((mmll)).. 11%% HH22SSOO44 ddee ((mmll)).. ## bbaacctteerriiaass//

mmiilllloonneess ppoorr mmll.. TTuubboo ## 11 00..11 99..99 330000 TTuubboo ## 22 00..22 99..88 660000 TTuubboo ## 33 00..33 99..77 990000 TTuubboo ## 44 00..44 99..66 11220000 TTuubboo ## 55 00..55 99..55 11550000 TTuubboo ## 66 00..66 99..44 11880000 TTuubboo ## 77 00..77 99..33 22110000 TTuubboo ## 88 00..88 99..22 22440000 TTuubboo ## 99 00..99 99..11 22770000 TTuubboo ## 1100 11..00 99..00 33000000 TToottaall 66..00 mmll.. 110000 mmll.. ---------- RReeaalliiccee llaa lleeccttuurraa ddee ccaaddaa uunnoo ddee llooss 1100 ttuubbooss eenn uunn eessppeeccttrrooffoottóómmeettrroo aa 661155 nnmm,, uuttiilliizzaannddoo ccoommoo bbllaannccoo uunnaa aagguuaa ddeessttiillaaddaa.. 22.. DDeetteerrmmiinnaacciióónn ddee llaa ccuurrvvaa ddee ccrreecciimmiieennttoo::

IInnooccuullaarreemmooss eell ttuubboo ddee eennssaayyoo qquuee ccoonnttiieennee eell mmeeddiioo ddee ccuullttiivvoo lliiqquuiiddoo ccoonn llaass bbaacctteerriiaass nneecceessaarriiaass ppaarraa oobbtteenneerr uunnaa ttuurrbbiiddeezz sseemmeejjaannttee aall pprriimmeerr ttuubboo ddeell nneeffeellóómmeettrroo.. MMeeddiirreemmooss llaa DD..OO.. aa 661155nnmm yy ttoommaarreemmooss eessttaa ccoommoo llaa DD..OO.. iinniicciiaall ((ttoo)).. UUttiilliiccee ccoommoo bbllaannccoo aagguuaa ddeessttiillaaddaa..

SSeegguuiirreemmooss llaa eevvoolluucciióónn ddee llaa ttuurrbbiiddeezz ddeell ccuullttiivvoo mmiiddiieennddoo llaa DD..OO.. aa ddiiffeerreenntteess ttiieemmppooss dduurraannttee uunnaass 22 hhoorraass.. TToommaarreemmooss mmuueessttrraass aa 00,, 2200,, 4400,, 6600,,8800..110000 yy 112200 mmiinnuuttooss..

RReepprreesseennttaarreemmooss eenn uunnaa ggrrááffiiccaa llooss vvaalloorreess ddee DD..OO (( eejjee XX )),, vveerrssuuss ddeell ttiieemmppoo ((eejjee YY )).. LLaa ccuurrvvaa oobbtteenniiddaa sseerráá llaa ccuurrvvaa ddee ccrreecciimmiieennttoo ddeell ccuullttiivvoo..

33.. EEffeeccttoo ddee llaa tteemmppeerraattuurraa ssoobbrree eell ccrreecciimmiieennttoo bbaacctteerriiaannoo..

11.. TToommee uunn ttuubboo ccoonn 66 mmll ddee mmeeddiioo ddee ccuullttiivvoo yy aaddiicciioonnee bbaacctteerriiaass hhaassttaa qquuee aallccaannccee uunnaa ttuurrbbiiddeezz ssiimmiillaarr aall ttuubboo 11 ddee llaa eessccaallaa ddee MMcc FFaarrllaann..

22.. HHaaggaa uunnaa ddiilluucciioonneess sseerriiaaddaass hhaassttaa 1100-4-4 ((ttoommaannddoo 00..99mmll ddee mmeeddiioo yy aaddiicciioonnaallddoo 00..11 ddee llaass bbaacctteerriiaass yy aassíí ssuucceessiivvaammeennttee hhaassttaa lllleeggaarr aall ttuubboo aall ttuubboo 1100–4–4))..

33.. SSiieemmbbrree llaa ddiilluucciióónn 1100-4-4 aa ttrraavvééss ddeell mmééttooddoo ddee ddiilluucciióónn eenn ppllaaccaa.. 44.. TToommee eell ttuubboo ee iinnccúúbbeelloo ppoorr 33 mmiinnuuttooss eenn aagguuaa hhiirrvviieennddoo.. 55.. rreeppiittaa ppaassoo ## 22 66.. rreeppiittaa eell ppaassoo ## 33.. 77.. RReeppiittaa eell ppaassoo ## 44,, ppeerroo iinnccuubbee ppoorr 66 mmiinnuuttooss yy rreeppiittaa eell pprroocceessoo ddeell ppaassoo ## 22 yy

33.. 88.. IInnccuubbee llaass ccaajjaass aa 3377 ooCC ppoorr 2244 hhoorraass aall ccaabboo ddeell ccuuaall sséé hhaarráá rreeccuueennttoo ddee

ccoolloonniiaass eenn llaa ccaajjaa.. PPrreegguunnttaass::

11.. IInnvveessttiigguuee eell ffuunnddaammeennttoo ddee llaa eessppeeccttrrooffoottoommeettrrííaa.. 22.. IInnvveessttiigguuee eell eessppeeccttrroo eelleeccttrroommaaggnnééttiiccoo.. 33.. IInnvveessttiigguuee qquuee ssoonn ccuullttiivvooss ccoonnttiinnuuooss.. 44.. IInnvveessttiigguuee eell ffuunnddaammeennttoo ddee llaa ttuurrbbiiddiimmeettrrííaa yy llaa nneeffeelloommeettrrííaa..

PPrraaccttiiccaa ddee llaabboorraattoorriioo NNo o 55..

RREECCUUEENNTTOO DDEE MMEESSOOFFIILLOOSS AAEERROOBBIIOOSS..

IInnttrroodduucccciióónn:: TTaammbbiiéénn ccoonnoocciiddoo ccoommoo rreeccuueennttoo EEssttaannddaarr,, SSPPCC oo RReeccuueennttoo TToottaall ddee bbaacctteerriiaass,, eess eell iinnddiiccaaddoorr ddeell ggrraaddoo ddee ccoonnttaammiinnaacciióónn gglloobbaall ddeell aalliimmeennttoo ssiinn ppooddeerr ddeeffiinniirr ssuu oorriiggeenn.. EEss ddee uuttiilliiddaadd eenn pprroodduuccttooss ffrreessccoo--eennffrriiaaddooss,, ccoonnggeellaaddooss,, pprreeccoocciiddooss oo aalliimmeennttooss pprreeppaarraaddooss.. AAllllíí ssee ccuuaannttiiffiiccaann llooss ttiippooss ddee bbaacctteerriiaass qquuee ppuueeddeenn ccrreecceerr aa 3300 -- 3355 ºº CC eenn ccoonnddiicciioonneess aaeerroobbiiaass yyaa sseeaann pprroovveenniieenntteess ddee llaa ppiieell ddee llaass hheecceess,, mmaannooss,, eeqquuiippooss,, ssuueelloo,, aagguuaa eettcc.. EEll rreessuullttaaddoo ddee eessttee rreeccuueennttoo,, ccoommoo eenn ttooddooss llooss rreeccuueennttooss vviiaabblleess,, ssee eexxpprreessaa eenn UUnniiddaaddeess FFoorrmmaaddoorraass ddee CCoolloonniiaa ((UUFFCC)) ddoonnddee uunnaa ccéélluullaa bbaacctteerriiaannaa oo uunn ggrruuppoo ddee eellllaass ttiieenneenn llaa hhaabbiilliiddaadd ppaarraa oorriiggiinnaarr uunnaa ccoolloonniiaa.. NNoorrmmaallmmeennttee eell nnúúmmeerroo eennccoonnttrraaddoo eess iinnffeerriioorr aall qquuee ssee oobbttiieennee eenn llooss ssiisstteemmaass ddee ccuuaannttiiffiiccaacciióónn eelleeccttrróónniiccooss,, ddoonnddee ssee ccuueennttaann ccéélluullaass bbaacctteerriiaannaass ssiinn ddiiffeerreenncciiaarr ssii eessttáánn vviivvaass oo mmuueerrttaass oo ssii ccrreecceenn aa tteemmppeerraattuurraass eessppeeccííffiiccaass.. PPoorr sseerr uunn rreeccuueennttoo ddee ttaann aammpplliiaa ccoobbeerrttuurraa,, eess eell iinnddiiccaaddoorr mmaass uussaaddoo ppaarraa ddeeffiinniirr llaa ccaalliiddaadd bbaacctteerriioollóóggiiccaa ggeenneerraall ddee llooss aalliimmeennttooss yy eennttrree mmaass bbaajjoo iinnddiiccaarráá mmeejjoorr hhiiggiieennee ddeell aalliimmeennttoo.. OObbjjeettiivvooss:: 11.. CCoonnoocceerr llaa ttééccnniiccaa ppaarraa hhaacceerr rreeccuueennttoo ddee mmeessooffiillooss aaeerroobbiiooss.. 22.. EEssttuuddiiaarr llaa iimmppoorrttaanncciiaa ddee eessttee rreeccuueennttoo ccoommoo iinnddiiccaaddoorr ddee llaa ccoonnttaammiinnaacciióónn ddee llooss

aalliimmeennttoo.. 33.. PPrraaccttiiccaarr ddiilluucciioonneess,, ssiieemmbbrraass yy rreeccuueennttoo ddee mmiiccrroooorrggaanniissmmooss.. PPrriinncciippiioo bbaassee ddeell mmééttooddoo.. EEll mmééttooddoo ssee bbaassaa eenn iinnccuubbaarr eenn aaggaarr ddee rreeccuueennttoo eenn ppllaaccaa,, aa 3355ººCC yy dduurraannttee 4488 hhrrss..,, vvoollúúmmeenneess mmeeddiiddooss ddee ddiiffeerreenntteess ddiilluucciioonneess ddee llaa mmuueessttrraa,, yy ccoonnttaarr eell nnúúmmeerroo ddee ccoolloonniiaass pprroodduucciiddaass ppaarraa ddeetteerrmmiinnaarr eell nnúúmmeerroo ddee ggéérrmmeenneess vviiaabblleess oo uunniiddaaddeess ffoorrmmaaddoorraass ddee ccoolloonniiaass ppoorr ggrraammoo ddee mmuueessttrraa.. PPrroocceeddiimmiieennttoo PPrreeppaarraacciióónn ddee llaa mmuueessttrraa.. 11.. AAssééppttiiccaammeennttee ppeessaarr 1100 gg.. ddee mmuueessttrraa yy ddiilluuíírr eenn 9900 mmll.. ddee aagguuaa ppeeppttoonnaaddaa,, ssii ssee ttrraattaa ddee

mmuueessttrraass lliiqquuiiddaass,, ttoommaarr 1100 mmll ddee llaa mmuueessttrraa yy ddiilluuiirrllaa eenn 9900 mmll ddee aagguuaa ppeeppttoonnaaddaa.. 22.. HHoommooggeenniizzaarr llaa mmeezzccaall ppoorr ttrriittuurraacciióónn eenn uunn vvaassoo eesstteerriilliizzaaddoo ddee lliiccuuaaddoorraa aa uunnaa vveelloocciiddaadd

aapprrooxxiimmaaddaa ddee 1144..000000 rrppmm yy eenn uunn ttiieemmppoo mmeeddiioo ddee 6600--9900 sseegguunnddooss..((EEssttaa ttééccnniiccaa ssee rreeaalliizzaa ccuuaannddoo eessttaammooss ttrraabbaajjaannddoo ccoonn mmuueessttrraass ssóólliiddaass))..

NNOOTTAA:: PPaarraa eell pprroocceessoo ddee aapprreennddiizzaajjee,, eenn eessttee llaabboorraattoorriioo llaa ddiilluucciióónn ddee llaass mmuueessttrraass ssee hhaarraa,, ttoommaannddoo 11mmll ddee llaa mmuueessttrraa,, pprreevviiaammeennttee mmeezzccllaaddaa,, yy ssee aaddiicciioonnaarraa aa eell ttuubboo qquuee ccoonnttiieennee 99 mmll ddee aagguuaa ppeeppttoonnaaddaa.. Diluciones.Diluciones. SSeeggúúnn eell nnúúmmeerroo ddee ggéérrmmeenneess eessppeerraaddoo yy ssoobbrree llaa bbaassee ddee llaa ssoolluucciióónn iinniicciiaall ddee 1100 gg.. OO 1100mmll eenn 9900 mmll.. ((ddiilluucciióónn 1100-1-1)),, pprreeppaarraarr ddiilluucciioonneess ddeecciimmaalleess ddee 1100-2-2,, 1100-3-3,, 1100-4-4,, uussaannddoo ppiippeettaass eessttéérriilleess ppaarraa ccaaddaa ddiilluucciióónn,, ttoommaannddoo 11 mmll.. ddee llaa ssoolluucciióónn aanntteerriioorr eenn 99 mmll.. ddee aagguuaa ppeeppttoonnaaddaa eevviittaannddoo ssee ffoorrmmee eessppuummaa.. MMeezzccllaarr mmaannuuaallmmeennttee ccaaddaa ddiilluucciióónn aaggiittáánnddoollaa 2255 vveecceess eenn 77

sseegguunnddooss ccoonn mmoovviimmiieennttooss aasscceennddeenntteess yy ddeesscceennddeenntteess ffoorrmmaannddoo uunn áánngguulloo ddee aabbeerrttuurraa aapprrooxxiimmaaddoo ddee 6600ºº eennttrree bbrraazzoo yy aanntteebbrraazzoo.. TTééccnniiccaa.. 11.. AAssééppttiiccaammeennttee ppiippeetteeaarr 11 mmll.. ddee ccaaddaa ddiilluucciióónn yy sseemmbbrraarr ppoorr dduupplliiccaaddoo eenn ccaajjaa ddee PPeettrrii

pprreevviiaammeennttee iiddeennttiiffiiccaaddaa.. VVoollvveerr aa mmeezzccllaarr llaa ddiilluucciióónn aa uussaarr,, ssii ééssttaa hhaa ppeerrmmaanneecciiddoo mmááss ddee 33 mmiinnuuttooss ssiinn aaggiittaarr..

22.. AAggrreeggaarr aa ccaaddaa uunnaa ddee llaass ccaajjaass 1122--1155 mmll.. ddee aaggaarr ddee rreeccuueennttoo eenn ppllaaccaa pprreevviiaammeennttee ffuunnddiiddoo aa bbaaññoo mmaarrííaa yy eennffrriiaaddoo aa 4444--4466ººCC (( ttoommaarr eell aaggaarr yy ppoonneerrlloo eenn llaa ppiieell,, ccuuaannddoo sseeaa ccaappaazz ddee rreessiissttiirr eell ccaalloorr ddeell aaggaarr ssoobbrree llaa ppiieell,, eess llaa tteemmppeerraattuurraa iiddeeaall)) NNoo ddeebbeerráá ttrraannssccuurrrriirr uunn ttiieemmppoo mmaayyoorr ddee 1155 mmiinnuuttooss eennttrree llaa ddiilluucciióónn ddee llaa mmuueessttrraa yy llaa ssiieemmbbrraa eenn ppllaaccaass..

33.. IInnmmeeddiiaattaammeennttee mmeezzccllaarr llaa mmuueessttrraa ddiilluuiiddaa yy eell aaggaarr mmeeddiiaannttee aaggiittaacciióónn,, ccoommoo ssee aapprreennddiióó eenn llaa pprraaccttiiccaa ddee ssiieemmbbrraass ((mmoovviimmiieennttooss cciirrccuullaarreess yy ffoorrmmaannddoo áánngguullooss ddee 9900 ggrraaddooss)).. DDuurraannttee uunn llaappssoo iigguuaall oo ssuuppeerriioorr aa uunn mmiinnuuttoo,, eevviittaannddoo mmoojjaarr llooss bboorrddeess ddee llaa ppllaaccaa;; ddeejjaarr eennffrriiaarr ssoobbrree uunnaa ssuuppeerrffiicciiee ppllaannaa yy hhoorriizzoonnttaall.. DDeejjee ssoolliiddiiffiiccaarr eell aaggaarr..

44.. UUnnaa vveezz ssoolliiddiiffiiccaaddoo eell aaggaarr,, aaddiicciioonnee uunnaa ccaappaa mmaass ddee aaggaarr,, ddeejjee ssoolliiddiiffiiccaarr nnuueevvaammeennttee.. SSeellllee llaass ccaajjaass ccoonn cciinnttaa,, iinnvviieerrttaa llaass ccaajjaass ddee PPeettrrii ee iinnccuubbaarr aa 3355ººCC ppoorr 4488 ±± 22 hhrr..

55.. PPaarraa rreeaalliizzaarr eell ccoonntteeoo ddee llaass ccoolloonniiaass,, eessccoojjaa llaass ccaajjaass qquuee pprreesseenntteenn eennttrree 3300 yy 330000 ccoolloonniiaass..

66.. ppaarraa rreeaalliizzaarr eell ccoonntteeoo ddee ccoolloonniiaass eenn aammbbaass ccaajjaass.. DDiivviiddaa llaa ccaajjaa eenn 44 ccuuaaddrraanntteess ccoonn mmaarrccaaddoorr oo llaappiizz ddee cceerraa,, ccuueennttee llaass ccoolloonniiaass qquuee ssee oobbsseerrvvaann ccoommoo ppuunnttooss bbllaannccooss oo ccrreemmaass eenn ccaaddaa ccuuaaddrraannttee yy ssuummee llooss 44 ccuuaaddrraanntteess ppaarraa ddaarr eell rreeccuueennttoo ttoottaall ddee llaa ccaajjaa,, hhaaggaa eell mmiissmmoo pprroocceeddiimmiieennttoo eenn llaa oottrraa ccaajjaa.. (( NNoo oollvviiddaarr qquuee ssee sseemmbbrróó ppoorr dduupplliiccaaddoo))..

77.. EEll ccáállccuulloo ddeell vvaappoorr pprroommeeddiioo ddeell nnúúmmeerroo ddee uunniiddaaddeess ffoorrmmaaddoorraass ddee ccoolloonniiaass ppoorr ggrraammoo ddee mmuueessttrraa ssee eeffeeccttúúaa mmuullttiipplliiccaannddoo eell nnúúmmeerroo ddee ccoolloonniiaass ccoonnttaaddaass eenn ccaaddaa ddiilluucciióónn ddee llaass ppllaaccaass sseelleecccciioonnaaddaass ((vvaalloorr CC)),, ppoorr eell ffaaccttoorr ddee ddiilluucciióónn ccoorrrreessppoonnddiieennttee ((vvaalloorr DD))..

88.. LLaa ddiiffeerreenncciiaa eennttrree llooss rreessuullttaaddooss eexxttrreemmooss ddee llaa ddeetteerrmmiinnaacciióónn eeffeeccttuuaaddaa ppoorr dduupplliiccaaddoo,, nnoo ddeebbeerráá eexxcceeddeerr ddeell 1100%% ddee llaa mmeeddiiaa aarriittmmééttiiccaa ddee llooss 22 rreessuullttaaddooss;; eenn ccaassoo ccoonnttrraarriioo,, ddeebbee rreeppeettiirrssee eell eexxaammeenn..

99.. OObbtteenneerr eell vvaalloorr ddeell rreeccuueennttoo ttoottaall ddee ggéérrmmeenneess eexxpprreessaaddoo ddee llaa ssiigguuiieennttee mmaanneerraa:: N= C X D ddoonnddee:: NN== UUnniiddaaddeess ffoorrmmaaddoorraass ddee ccoolloonniiaa ppoorr ggrraammoo ddee mmuueessttrraa.. CC== PPrroommeeddiioo ddeell NNúúmmeerroo ddee ccoolloonniiaass eenn aammbbaass ccaajjaass ddee llaa mmiissmmaa ddiilluucciióónn.. DD== FFaaccttoorr ddee ddiilluucciióónn.. AANNEEXXOOSS AAggaarr RReeccuueennttoo eenn PPllaaccaa ((ccoommppoossiicciióónn)) TTrriippttoonnaa 55,,00 gg EExxttrraaccttoo ddee LLeevvaadduurraa 22,,55 gg GGlluuccoossaa 11,,00 gg AAggaarr 1155,,00 gg AAgguuaa ddeessttiillaaddaa 11 lltt DDiissoollvveerr llooss iinnggrreeddiieenntteess eenn aagguuaa yy hheerrvviirr.. PPoonneerr eenn ttuubbooss oo ffrraassccooss.. AAuuttooccllaavvee ppoorr 1155 mmiinnuuttooss aa 112211ººCC.. EEll ppHH ffiinnaall ddeebbee sseerr 77..00 ±± 00..11.. AAgguuaa PPeeppttoonnaaddaa ppaarraa DDiilluucciióónn:: PPeeppttoonnaa 11 gg AAgguuaa ddeessttiillaaddaa 11 lltt DDiissoollvveerr llaa ppeeppttoonnaa eenn uunn lliittrroo ddee aagguuaa ddeessttiillaaddaa aajjuussttaannddoo eell ppHH aa 66..88 ±± 00..11 yy eesstteerriilliizzaarr eenn aauuttooccllaavvee aa 112211ººCC ppoorr 1155 aa 2200 mmiinnuuttooss.. NNoottaa:: eell mmeeddiioo PPllaattee CCoouunntt,, vviieennee lliissttoo ppaarraa uussoo,, ddee aaccuueerrddoo aa llaass iinnddiiccaacciioonneess ddeell ffaabbrriiccaannttee,, ppeessee llaa ccaannttiiddaadd ddee mmeeddiioo nneecceessaarriioo yy ddiissuueellvvaa eenn aagguuaa ddeessttiillaaddaa,, ddeessppuuééss aauuttooccllaavvee..

CCuuaaddrroo gguuííaa ddee ttrraabbaajjoo.. PPrreegguunnttaass:: 11.. IInnvveessttiigguuee CCuuaall eess llaa ccaannttiiddaadd ppeerrmmiittiiddaa ddee mmeessooffiillooss aaeerroobbiiooss eenn llaa lleecchhee.. 22.. SSii uusstteedd vvaa aa rreeaalliizzaarr uunn rreeccuueennttoo ddee bbaacctteerriiaass tteerrmmooffiillaass ¿¿qquuee pprroocceeddiimmiieennttooss

uuttiilliizzaarrííaa??.. 33.. SSii uunn aalliimmeennttoo pprreesseennttaa uunn rreeccuueennttoo ddee mmeessooffiillooss aaeerroobbiiooss mmuuyy aallttoo,, ¿¿qquuee ccrreeee uusstteedd

qquuee eessttoo iinnddiiqquuee??..EExxpplliiqquuee.. 44.. SSii uunn aalliimmeennttoo pprreesseennttaa uunn rreeccuueennttoo ddee mmeessooffiillooss aaeerroobbiiooss mmuuyy aallttoo,, ¿¿ccoommoo ccrreeee

uusstteedd qquuee aaffeeccttaarraa eell aalliimmeennttoo??..EExxpplliiqquuee..

1100 gg oo 1100 mmll ddee mmuueessttrraa 9900 mmll ddee aagguuaa ppeeppttoonnaaddaa oo

11mmll ddee mmuueettrraa ++ 99mmll ddee aagguuaa ppeeppttoonnaaddaa..

HHaacceerr 44 ddiilluucciioonneess yy aaggrreeggaarr 11 mmll ddee llaa ddiilluucciióónn eelleeggiiddaa eenn llaass PPllaaccaass

PPeettrrii

AAggrreeggaarr 2200 mmll ddee AAggaarr PPllaattee CCoouunntt MMeezzccllaarr ccoonn mmoovviimmiieennttooss rroottaattoorriiooss ddee iizzqquuiieerrddaa aa ddeerreecchhaa yy

ddee 9900 ggrraaddooss dduurraannttee 11 mmiinnuuttoo IInnccuubbaarr aa 3300--3355°°CC ppoorr 4488 hhrrss..

IInnffoorrmmaarr ccoommoo:: UUFFCC//gg == CC xx DD

PPrraaccttiiccaa ddee llaabboorraattoorriioo NNo o 66..

RReeccuueennttoo ddee ccoolliiffoorrmmeess ttoottaalleess ppoorr llaa ttééccnniiccaa ddee nnúúmmeerroo mmaass

pprroobbaabbllee..

IInnttrroodduucccciióónn:: eessttee ggrruuppoo ddee mmiiccrroooorrggaanniissmmooss ccrreeccee eennttrree 1155 yy 4455 ºº CC,, ccoommpprreennddee vvaarriiooss ggéénneerrooss ddee llaa ffaammiilliiaa EEnntteerroobbaacctteerriiaacceeaaee,, eessttaa aammpplliiaammeennttee ddiissttrriibbuuiiddaa eenn llaa nnaattuurraalleezzaa,, aagguuaa yy ssuueellooss pprroo ttaammbbiiéénn eess hhaabbiittaannttee nnoorrmmaall ddee llooss ttrraaccttooss iinntteessttiinnaalleess ddee llooss aanniimmaalleess yy ddeell hhuummaannoo yy ppoorr eennddee eessttaarráá pprreesseennttee eenn ttooddooss llooss mmeeddiiooss qquuee tteennggaann oo hhaayyaann tteenniiddoo ccoonnttaaccttoo ccoonn mmaatteerriiaa ffeeccaall ccoommoo ssuueelloo,, aagguuaa,, llaass mmaannooss yy eeqquuiippooss eenn ggeenneerraall.. LLooss ccoolliiffoorrmmeess ttoottaalleess ssoonn eell mmeejjoorr iinnddiiccaaddoorr ddee llaa ccaalliiddaadd hhiiggiiéénniiccaa eenn eell mmaanneejjoo ddee llooss aalliimmeennttooss.. OObbjjeettiivvooss:: CCoonnoocceerr llaa ttééccnniiccaa ppaarraa hhaacceerr rreeccuueennttoo ddee NNMMPP ddee ccoonniiffoorrmmeess ttoottaalleess.. EEssttuuddiiaarr llaa iimmppoorrttaanncciiaa ddee eessttee rreeccuueennttoo ccoommoo iinnddiiccaaddoorr ddee llaa ccoonnttaammiinnaacciióónn ddee llooss aalliimmeennttoo.. 44.. PPrraaccttiiccaarr ddiilluucciioonneess,, ssiieemmbbrraass yy rreeccuueennttoo ddee mmiiccrroooorrggaanniissmmooss.. PPrriinncciippiioo ddeell mmééttooddoo.. EEll mmééttooddoo ssee bbaassaa eenn ddeetteerrmmiinnaarr eell nnuummeerroo mmaass pprroobbaabbllee ddee ccoolliiffoorrmmeess ttoottaalleess eenn uunnaa mmuueessttrraa,, aall ccoommppaarraarr eell nnuummeerroo ddee ttuubbooss ppoossiittiivvooss ((pprreesseenncciiaa ddee ggaass eenn llooss ttuubbooss ddee hheemmóólliissiiss)) ffrreennttee aa llaa ttaabbllaa.. LLaa pprroodduucccciióónn ddee ggaass eess eell iinnddiiccaaddoorr ddee llaa pprreesseenncciiaa ddee llooss ccoolliiffoorrmmeess ddeebbiiddoo aa qquuee rreeaalliizzaann ffeerrmmeennttaacciióónn ddee llooss aazzuuccaarreess qquuee pprreesseennttaa eell ccaallddoo.. PPrreeppaarraacciióónn ddee llaa mmuueessttrraa.. 33.. AAssééppttiiccaammeennttee ppeessaarr 1100 gg.. ddee mmuueessttrraa yy ddiilluuíírr eenn 9900 mmll.. ddee aagguuaa ppeeppttoonnaaddaa,, ssii ssee ttrraattaa ddee

mmuueessttrraass lliiqquuiiddaass,, ttoommaarr 1100 mmll ddee llaa mmuueessttrraa yy ddiilluuiirrllaa eenn 9900 mmll ddee aagguuaa ppeeppttoonnaaddaa.. 44.. HHoommooggeenniizzaarr llaa mmeezzccaall ppoorr ttrriittuurraacciióónn eenn uunn vvaassoo eesstteerriilliizzaaddoo ddee lliiccuuaaddoorraa aa uunnaa vveelloocciiddaadd

aapprrooxxiimmaaddaa ddee 1144..000000 rrppmm yy eenn uunn ttiieemmppoo mmeeddiioo ddee 6600--9900 sseegguunnddooss..((EEssttaa ttééccnniiccaa ssee rreeaalliizzaa ccuuaannddoo eessttaammooss ttrraabbaajjaannddoo ccoonn mmuueessttrraass ssóólliiddaass))..

NNOOTTAA:: PPaarraa eell pprroocceessoo ddee aapprreennddiizzaajjee,, eenn eessttee llaabboorraattoorriioo llaa ddiilluucciióónn ddee llaass mmuueessttrraass ssee hhaarráá,, ttoommaannddoo 11mmll ddee llaa mmuueessttrraa,, pprreevviiaammeennttee mmeezzccllaaddaa,, yy ssee aaddiicciioonnaarraa aa eell ttuubboo qquuee ccoonnttiieennee 99 mmll ddee aagguuaa ppeeppttoonnaaddaa.. DDiilluucciioonneess.. SSoobbrree llaa bbaassee ddee llaa ssoolluucciióónn iinniicciiaall ddee 1100 gg.. OO 1100mmll eenn 9900 mmll.. ((ddiilluucciióónn 1100-1-1)),, (( eenn llaa pprraaccttiiccaa 11mmll ddee mmuueessttrraa ++ 99 mmll ddee aagguuaa ppeeppttoonnaaddaa,, pprreeppaarraarr ddiilluucciioonneess ddeecciimmaalleess ddee 1100-2 -2 yy 1100-3-3.. uussaannddoo ppiippeettaass eessttéérriilleess ppaarraa ccaaddaa ddiilluucciióónn,, ttoommaannddoo 11 mmll.. ddee llaa ssoolluucciióónn aanntteerriioorr eenn 99 mmll.. ddee aagguuaa ppeeppttoonnaaddaa eevviittaannddoo ssee ffoorrmmee eessppuummaa.. MMeezzccllaarr mmaannuuaallmmeennttee ccaaddaa ddiilluucciióónn aaggiittáánnddoollaa 2255 vveecceess eenn 77 sseegguunnddooss ccoonn mmoovviimmiieennttooss aasscceennddeenntteess yy ddeesscceennddeenntteess ffoorrmmaannddoo uunn áánngguulloo ddee aabbeerrttuurraa aapprrooxxiimmaaddoo ddee 6600ºº eennttrree bbrraazzoo yy aanntteebbrraazzoo..

TTééccnniiccaa.. 1100.. AAddiicciioonnaarr aassééppttiiccaammeennttee aa 33 ttuubbooss qquuee ccoonntteennggaann 1100 mmll ddee mmeeddiioo BBiilliiss vveerrddee bbrriillllaannttee,, 11 mmll

ddee llaa ddiilluucciióónn 1100-1-1 yy mmaarrccaarrllooss ccoonn llaa ddiilluucciióónn ccoorrrreessppoonnddiieennttee.. 1111.. AAddiicciioonnaarr aassééppttiiccaammeennttee aa 33 ttuubbooss qquuee ccoonntteennggaann 1100 mmll ddee mmeeddiioo BBiilliiss vveerrddee bbrriillllaannttee,, 11 mmll

ddee llaa ddiilluucciióónn 1100-2-2 yy mmaarrccaarrllooss ccoonn llaa ddiilluucciióónn ccoorrrreessppoonnddiieennttee.. 1122.. AAddiicciioonnaarr aassééppttiiccaammeennttee aa 33 ttuubbooss qquuee ccoonntteennggaann 1100 mmll ddee mmeeddiioo BBiilliiss vveerrddee bbrriillllaannttee,, 11 mmll

ddee llaa ddiilluucciióónn 1100-3-3 yy mmaarrccaarrllooss ccoonn llaa ddiilluucciióónn ccoorrrreessppoonnddiieennttee.. 1133.. IInnccuubbee aa 3355ººCC ddee 2244 aa 4488 ±± 22 hhrr.. 1144.. OObbsseerrvvee llooss ttuubbooss qquuee pprreesseennttaarroonn pprroodduucccciióónn ddee ggaass.. 1155.. DDeetteerrmmiinnee llaa ccaannttiiddaadd ddee ccoolliiffoorrmmeess ttoottaalleess ddee aaccuueerrddoo aa llaa ttaabbllaa aanneexxaa.. AAnneexxooss:: AAgguuaa PPeeppttoonnaaddaa ppaarraa DDiilluucciióónn:: PPeeppttoonnaa 11 gg AAgguuaa ddeessttiillaaddaa 11 lltt DDiissoollvveerr llaa ppeeppttoonnaa eenn uunn lliittrroo ddee aagguuaa ddeessttiillaaddaa aajjuussttaannddoo eell ppHH aa 66..88 ±± 00..11 yy eesstteerriilliizzaarr eenn aauuttooccllaavvee aa 112211ººCC ppoorr 1155 aa 2200 mmiinnuuttooss.. NNoottaa:: eell CCaallddoo BBiilliiss vveerrddee bbrriillllaannttee,, vviieennee lliissttoo ppaarraa uussoo,, ddee aaccuueerrddoo aa llaass iinnddiiccaacciioonneess ddeell ffaabbrriiccaannttee,, ppeessee llaa ccaannttiiddaadd ddee mmeeddiioo nneecceessaarriioo yy ddiissuueellvvaa eenn aagguuaa ddeessttiillaaddaa,, ddeessppuuééss aauuttooccllaavvee..

CCuuaaddrroo gguuííaa ddee ttrraabbaajjoo..

1100 gg oo 1100 mmll ddee mmuueessttrraa 9900 mmll ddee aagguuaa ppeeppttoonnaaddaa oo

11mmll ddee mmuueettrraa ++ 99mmll ddee aagguuaa ppeeppttoonnaaddaa..

HHaacceerr 33 ddiilluucciioonneess yy aaggrreeggaarr 11 mmll ddee llaa ddiilluucciióónn eelleeggiiddaa eenn llaass 33 ttuubboossqquuee ccoonntteennggaa 1100 mmll ddee ccaallddoo BBiilliiss

vveerrddee bbrriillllaannttee

IInnccuubbaarr aa 3355°°CC ppoorr 2244 aa 4488 hhrrss..

PPrreegguunnttaass:: 55.. IInnvveessttiigguuee CCuuaall eess llaa ccaannttiiddaadd ppeerrmmiittiiddaa ddee ccoolliiffoorrmmeess ttoottaalleess eenn llaa lleecchhee yy jjuuggooss.. 66.. DDeessccrriibbaa 22 mmééttooddooss aa ttrraavvééss ddeell ccuuaall uusstteedd ppuueeddee hhaacceerr uunn rreeccuueennttoo ddee CCoolliiffoorrmmeess

ttoottaalleess.. 77.. SSii uunn aalliimmeennttoo pprreesseennttaa uunn rreeccuueennttoo ddee ccoolliiffoorrmmeess ttoottaalleess mmuuyy aallttoo,, ¿¿qquuee ccrreeee uusstteedd

qquuee eessttoo iinnddiiqquuee??..EExxpplliiqquuee.. 88.. IInnvveessttiigguuee qquuee mmeettooddooss ssee uuttiilliizzaann ppaarraa hhaacceerr rreeccuueennttoo ddee ccoonniiffoorrmmeess eenn aagguuaa

ppoottaabbllee..

PPrraaccttiiccaa ddee llaabboorraattoorriioo NNoo 77

PPRRUUEEBBAASS BBIIOOQQUUÍÍMMIICCAASS LLaa uuttiilliizzaacciióónn ddee mmeeddiiooss sseelleeccttiivvooss yy ddiiffeerreenncciiaalleess,, llaass ttiinncciioonneess ddee GGrraamm,, ccaarraacctteerrííssttiiccaass ddee llaass ccoolloonniiaass yy mmoottiilliiddaadd eenn eell eessttuuddiioo ddee uunnaa ddeetteerrmmiinnaaddaa bbaacctteerriiaa nnooss bbrriinnddaa uunnaa ggrraann iinnffoorrmmaacciióónn ssoobbrree eell ggéénneerroo bbaacctteerriiaannoo ccoonn eell qquuee ssee eessttáá ttrraabbaajjaannddoo.. UUnnaa vveezz aaiissllaaddaa uunnaa bbaacctteerriiaa ddeetteerrmmiinnaaddaa,, ssee llee ppuueeddeenn rreeaalliizzaarr uunnaa sseerriiee ddee pprruueebbaass qquuee eevvaallúúaann ssuu aaccttiivviiddaadd bbiiooqquuíímmiiccaa.. EEssttoo ppeerrmmiittee hhaacceerr uunnaa iiddeennttiiffiiccaacciióónn ffiinnaall ddee llaa eessppeecciiee eenn ccuueessttiióónn,, eess ddeecciirr ssee eessttuuddiiaann cciieerrttooss ssiisstteemmaass eennzziimmááttiiccooss qquuee ssoonn úúnniiccooss ddee ccaaddaa eessppeecciiee yy qquuee ssiirrvveenn ccoommoo mmaarrccaaddoorreess ddee iiddeennttiiffiiccaacciióónn.. EEnn eell llaabboorraattoorriioo,, eessooss ssiisstteemmaass eennzziimmááttiiccooss ssee ddeetteeccttaann iinnooccuullaannddoo llaa ccoolloonniiaa bbaacctteerriiaannaa bbiieenn aaiissllaaddaa yy ffrreessccaa ((2244--4488 hhss ddee ccrreecciimmiieennttoo)) eenn uunnaa sseerriiee ddee mmeeddiiooss ddee ccuullttiivvoo qquuee ccoonnttiieenneenn ssuussttrraattooss eessppeeccííffiiccooss ee iinnddiiccaaddoorreess qquuíímmiiccooss ppaarraa ddeetteeccttaarr ccaammbbiiooss ddee ppHH oo pprreesseenncciiaa ddee ssuubbpprroodduuccttooss eessppeeccííffiiccooss.. OObbjjeettiivvooss:: IIddeennttiiffiiccaarr eessppeecciieess ppeerrtteenneecciieenntteess aa llaa ffaammiilliiaa EEnntteerroobbaacctteerriiaacceeaaee.. PPrroocceeddiimmiieennttoo:: SSee ssoommeetteerráánn ccuullttiivvooss ((ddee 2244--4488 hhss)),, ccoonn ccoolloonniiaass aaiissllaaddaass aa ddiissttiinnttaass pprruueebbaass bbiiooqquuíímmiiccaass.. 11)) PPrruueebbaa ddeell aaggaarr ttrriippllee aazzúúccaarr hhiieerrrroo.. PPeerrmmiittee ddeetteerrmmiinnaarr llaa ccaappaacciiddaadd ddee uunn mmiiccrroooorrggaanniissmmoo ddee mmeettaabboolliizzaarr hhiiddrraattooss ddee ccaarrbboonnoo eessppeeccííffiiccoo iinnccoorrppoorraaddoo aa uunn mmeeddiioo ddee ccrreecciimmiieennttoo bbáássiiccoo aassíí ccoommoo llaa pprroodduucccciióónn ddee ggaass yy áácciiddoo ssuullffhhííddrriiccoo.. SSee ssuueellee uuttiilliizzaarr ppaarraa llaa iiddeennttiiffiiccaacciióónn ddee ddiissttiinnttaass eessppeecciieess ddee llaa ffaammiilliiaa EEnntteerroobbaacctteerriiaacceeaaee.. MMeettooddoollooggííaa:: 11-- IInnooccuullaarr ccaaddaa uunnoo ddee llooss mmiiccrroooorrggaanniissmmooss aaiissllaaddooss ppoorr ppuunncciióónn ccoonn aassaa rreeccttaa hhaassttaa eell ffoonnddoo ddeell ttuubboo yy ppoorr eessttrrííaa eenn llaa ssuuppeerrffiicciiee iinncclliinnaaddaa ddeell mmiissmmoo ttuubboo ddee aaggaarr TTSSII.. 22-- IInnccuubbaarr aa 3377ººCC dduurraannttee 1188--2244 hh 33-- OObbsseerrvvaarr eennttrree llaass 1188 hh yy llaass 2244 hh ddee ccuullttiivvoo ((nnii aanntteess nnii ddeessppuuééss)) RReessuullttaaddooss:: EEll uussoo ddee uunn hhiiddrraattoo ddee ccaarrbboonnoo iimmpplliiccaa llaa lliibbeerraacciióónn aall mmeeddiioo ddee pprroodduuccttooss áácciiddooss ccaappaacceess ddee sseerr ddeetteeccttaaddooss ppoorr uunn iinnddiiccaaddoorr ddee ppHH.. SSii eell mmiiccrroooorrggaanniissmmoo eenn ccuueessttiióónn eess iinnccaappaazz ddee uussaarr eell hhiiddrraattoo ddee ccaarrbboonnoo,, ccoonnssuummee eennttoonncceess llaass ppeeppttoonnaass ddeell mmeeddiioo lliibbeerraannddoo pprroodduuccttooss qquuee aallccaalliinniizzaann eell mmiissmmoo.. AAll iinntteerrpprreettaarr llooss ddaattooss ddee llaa pprruueebbaa ddeebbee tteenneerrssee eenn ccuueennttaa llooss ssiigguuiieenntteess aassppeeccttooss:: AA)) UUttiilliizzaacciióónn ddeell hhiiddrraattoo ddee ccaarrbboonnoo:: **SSii eell mmiiccrroooorrggaanniissmmoo eenn eessttuuddiioo ssoolloo ffeerrmmeennttaa gglluuccoossaa ii)) eenn ssuuppeerrffiicciiee:: rreeaacccciióónn aallccaalliinnaa,, ccoolloorr rroojjoo iiii)) eenn pprrooffuunnddiiddaadd:: rreeaacccciióónn áácciiddaa,, ccoolloorr aammaarriilllloo **SSii eell mmiiccrroooorrggaanniissmmoo eess ccaappaazz ddee ffeerrmmeennttaarr ttaannttoo gglluuccoossaa ccoommoo llaaccttoossaa:: ii)) eenn ssuuppeerrffiicciiee:: rreeaacccciióónn áácciiddaa,, ccoolloorr aammaarriilllloo iiii)) eenn pprrooffuunnddiiddaadd:: rreeaacccciióónn áácciiddaa,, ccoolloorr aammaarriilllloo..

**SSii eell mmiiccrroooorrggaanniissmmoo nnoo eess ccaappaazz ddee ffeerrmmeennttaarr gglluuccoossaa nnii llaaccttoossaa ((nnoo eenntteerriiccoo)) ii)) eenn ssuuppeerrffiicciiee:: rreeaacccciióónn aallccaalliinnaa,, ccoolloorr rroojjoo iiii)) eenn pprrooffuunnddiiddaadd:: ssii eess aaeerroobbiioo eennttoonncceess nnoo hhaayy ccrreecciimmiieennttoo nnii ccaammbbiioo ddee ccoolloorr;; ssii eess ffaaccuullttaattiivvoo eennttoonncceess hhaayy rreeaacccciióónn aallccaalliinnaa yy ccoolloorr rroojjoo ** SSii eell mmiiccrroooorrggaanniissmmoo nnoo eess ccaappaazz ddee ffeerrmmeennttaarr llaaccttoossaa ppeerroo ssii ddee ooxxiiddaarrllaa ii)) eenn ssuuppeerrffiicciiee:: rreeaacccciióónn áácciiddaa eenn ttiieemmppooss ccoorrttooss ((ccoolloorr aammaarriilllloo)) lluueeggoo rreeaacccciióónn AAllccaalliinnaa yy ccoolloorr rroojjoo.. iiii)) eenn pprrooffuunnddiiddaadd:: nnoo hhaayy ccrreecciimmiieennttoo nnii ccaammbbiioo ddee ccoolloorr.. BB)) PPrroodduucccciióónn ddee ggaass •• SSii eell mmiiccrroooorrggaanniissmmoo eenn eessttuuddiioo eess aaeerroobbiioo,, llaa pprroodduucccciióónn ddee HH22 yy CCOO22 ssee

mmaanniiffiieessttaann ppoorr llaa ffoorrmmaacciióónn ddee bbuurrbbuujjaass yy//oo eell ddeesspprreennddiimmiieennttoo ddee ddeell aaggaarr ddeell ffoonnddoo ddeell ttuubboo,, ddeejjaannddoo uunn áárreeaa ccllaarraa

•• SSii eell mmiiccrroooorrggaanniissmmoo eenn aannaaeerroobbiioo,, eennttoonncceess nnoo hhaayy lliibbeerraacciióónn ddee ggaasseess.. CC)) PPrroodduucccciioonn ddee SSHH22:: •• SSii eell mmiiccrroooorrggaanniissmmoo pprroodduuccee eessttee áácciiddoo,, eell mmiissmmoo rreeaacccciioonnaarraa ccoonn eell hhiieerrrroo FFoorrmmaannddoo uunn pprreecciippiittaaddoo ddee SSFFee iinnssoolluubbllee ((ccoolloorr nneeggrroo)) •• SSii nnoo pprroodduuccee eell áácciiddoo nnoo hhaabbrráá rreeaacccciióónn.. 22)) PPrruueebbaass ddeell SSIIMM ((SSUULLFFUURROO--IINNDDOOLL--MMOOTTIILLIIDDAADD)) EEssttaass ccuuaattrroo pprruueebbaass ssoonn mmuuyy úúttiilleess ppaarraa ddiissttiinngguuiirr bbaacctteerriiaass ccoolliiffoorrmmeess eennttrree ssii.. PPrroodduucccciióónn ddee IINNDDOOLL MMiiddee llaa ccaappaacciiddaadd ddeell mmiiccrroooorrggaanniissmmoo ddee pprroodduucciirr iinnddooll aa ppaarrttiirr ddee ttrriippttooffaannoo ppoorr aacccciióónn ddee llaa eennzziimmaa ttrriippttooffaannaassaa.. MMeettooddoollooggííaa:: 11)) IInnooccuullaarr uunn ppooccoo ddee llaa ccoolloonniiaa aaiissllaaddaa ppoorr ppuunncciióónn eenn pprrooffuunnddiiddaadd eenn uunn ttuubboo ddee aaggaarr SSIIMM.. DDeejjaarr uunn ttuubboo ssiinn iinnooccuullaarr ccoommoo tteessttiiggoo.. 22)) IInnccuubbaarr aa 3377 ppoorr 4488 hh.. 33)) CCoollooccaarr ssoobbrree eell ttuubboo uunnaass ggoottaass ddee rreeaaccttiivvoo ddee KKoovvaaccss ((aallccoohhooll aammíílliiccoo,, ppaarraaddiibbeennzzaallddeehhiiddoo áácciiddoo)).. DDeejjaarr rreeppoossaarr ppoorr uunnooss mmiinnuuttooss.. PPrruueebbaa ppoossiittiivvaa:: ffoorrmmaacciióónn ddee aanniilllloo rroojjoo eenn llaa ssuuppeerrffiicciiee ((ccoommppuueessttoo qquuiinnóónniiccoo ddeerriivvaaddoo ddeell iinnddooll)) PPrruueebbaa nneeggaattiivvaa:: aanniilllloo aammaarriilllloo eenn ssuuppeerrffiicciiee.. MMoottiilliiddaadd:: PPeerrmmiittee ddeetteerrmmiinnaarr llaa pprreesseenncciiaa ddee mmoovviimmiieennttoo eenn llaass bbaacctteerriiaass qquuee ppoosseeeenn ffllaaggeellooss ddee llooccoommoocciióónn PPoossiittiivvaa:: OObbsseerrvvaarr ooppaacciiddaadd aallrreeddeeddoorr ddee llaa ppuunncciióónn ddee iinnooccuullaacciióónn ddeell ttuubboo ddee SSIIMM.. NNeeggaattiivvaa:: nnoo ssee oobbsseerrvvaa ooppaacciiddaadd aallrreeddeeddoorr ddee llaa ppuunncciióónn ddee iinnooccuullaacciióónn ddeell ttuubboo ddee SSIIMM.. 33)).. VVooggeess PPrroosskkaauueerr yy rroojjoo ddee MMeettiilloo EEssttaass ddooss pprruueebbaass ppeerrmmiitteenn ddeetteeccttaarr eell ttiippoo ddee ffeerrmmeennttaacciióónn ((bbuuttiilleenngglliiccóólliiccaa oo aacciiddoo mmiixxttaa)) qquuee rreeaalliizzaa eell mmiiccrroooorrggaanniissmmoo.. LLaa pprruueebbaa ddee VVooggeess--PPrroosskkaauueerr ssiirrvvee ppaarraa ccoommpprroobbaarr llaa ccaappaacciiddaadd ddee aallgguunnooss oorrggaanniissmmooss ddee pprroodduucciirr aacceettiillmmeettiillccaarrbbiinnooll ((aacceettooíínnaa)) aa ppaarrttiirr ddee llaa ffeerrmmeennttaacciióónn bbuuttiilleenngglliiccóólliiccaa ddee llaa gglluuccoossaa.. KKlleebbssiieellllaa ppnneeuummoonniiaaee yy EEnntteerroobbaacctteerr ((++)).. EEsscchheerriicchhiiaa ccoollii yy oottrraass eessppeecciieess ddee KKlleebbssiieellllaa ((--)).. LLaa pprruueebbaa ddeell RRoojjoo MMeettiilloo ssiirrvvee ppaarraa ccoommpprroobbaarr llaa ccaappaacciiddaadd ddee uunn oorrggaanniissmmoo ddee pprroodduucciirr

yy mmaanntteenneerr eessttaabblleess llooss pprroodduuccttooss tteerrmmiinnaalleess áácciiddooss ddee llaa ffeerrmmeennttaacciióónn ((áácciiddoo mmiixxttaa)) ddee llaa gglluuccoossaa.. EEsscchheerriicchhiiaa ccoollii ((++)) yy KKlleebbssiieellllaa,, EEnntteerroobbaacctteerr ((--)).. MMeettooddoollooggííaa:: 11-- IInnooccuullaarr eell ttuubboo ddeell ccaallddoo MMRR--VVPP ccoonn uunnaa aassaa ccuurrvvaa,, ccoonn ccuullttiivvoo ffrreessccoo.. 22-- IInnccuubbaarr aa 3377 ppoorr 4488 hh 33-- DDiivviiddiirr eell ccoonntteenniiddoo ddeell ttuubboo eenn ddooss ppaarrtteess iigguuaalleess 44-- PPaarraa ddeetteerrmmiinnaarr pprreesseenncciiaa ddee aacceettooíínnaa ((VVooggeess)) aaggrreeggaarr aa 11 mmll ddee ccuullttiivvoo 00..66 mmll ddee RReeaaccttiivvoo ddee BBaarrrriitt yy 00,,22 mmll ddee KKOOHH aall 4400%%.. 55-- AAggiittaarr ssuuaavveemmeennttee yy ddeejjaarr rreeppoossaarr 55--1100 mmiinn.. PPrruueebbaa ppoossiittiivvaa:: ccoolloorr rroossaaddoo--rroojjoo eenn llaa ssuuppeerrffiicciiee qquuee ssee iinntteennssiiffiiccaarráá aall ccaabboo ddee uunnaass hhoorraass ((pprreesseenncciiaa ddee aacceettooíínnaa)).. PPrruueebbaa nneeggaattiivvaa:: ssiinn ccaammbbiioo ddee ccoolloorr ((aammaarriilllloo)) eenn llaa ssuuppeerrffiicciiee.. 66--PPaarraa ddeettrreemmiinnaarr RRoojjoo MMeettiilloo,, aaggrreeggaarr aall sseegguunnddoo ttuubboo uunnaass 55 ggoottaass ddee iinnddiiccaaddoorr rroojjoo ddee mmeettiilloo aall 00,,11%%.. PPrruueebbaa ppoossiittiivvaa:: ssii eell ccuullttiivvoo ccoonnttiinnuuaa ssiieennddoo ddee ccoolloorr rroojjoo,, eennttoonncceess eell ppHH eessttaa ppoorr ddeebbaajjoo ddee 44,,44.. HHaayy ffeerrmmeennttaacciióónn áácciiddoo--mmiixxttaa.. PPrruueebbaa nneeggaattiivvaa:: ccoolloorr aammaarriilllloo eenn llaa ssuuppeerrffiicciiee,, ppHH==66.. 44)).. AApprroovveecchhaammiieennttoo ddee CCiittrraattoo ((MMeeddiioo CCiittrraattoo ddee SSiimmmmoonnss)) EEssttaa pprruueebbaa ppeerrmmiittee ddeetteerrmmiinnaarr llaa ccaappaacciiddaadd ddeell mmiiccrroooorrggaanniissmmoo ppaarraa uuttiilliizzaarr cciittrraattoo ccoommoo úúnniiccaa ffuueennttee ddee ccaarrbboonnoo.. SSaallmmoonneellllaa,, AArriizzoonnaa,, CCiittrroobbaacctteerr,,KKlleebbssiieellllaa yy EEnntteerroobbaacctteerr ((++)),, EE.. ccoollii,, SShhiiggeellllaa,, EEddwwaarrssiieellllaa,, YYeerrssiinniiaa,, AAccttiinnoobbaacciilllluuss ((--)).. MMeettooddoollooggííaa:: 11--IInnooccuullaarr uunn ttuubboo ppoorr ppuunncciióónn yy eenn ssuuppeerrffiicciiee ddeell aaggaarr cciittrraattoo ddee SSiimmmmoonnss ccoonn uunnaa aannssaaddaa ddee ccuullttiivvoo ffrreessccoo.. 22--IInnccuubbaarr aa 3377ººCC ppoorr 4488 hh PPrruueebbaa ppoossiittiivvaa:: vviirraajjee ddee ccoolloorr aa aazzuull.. PPrruueebbaa nneeggaattiivvaa:: nnoo hhaayy ccaammbbiioo ddee ccoolloorr.. 55)).. AAggaarr hhiieerrrroo lliissiinnaa ((LLIIAA)).. SSee uuttiilliizzaa ppaarraa ddiiffeerreenncciiaarr mmiiccrroooorrggaanniissmmooss eenntteerriiccooss ssoobbrree llaa bbaassee ddee ssuu ccaappaacciiddaadd ddee ddeessccaarrbbooxxiillaarr oo ddeessaammiinnaarr llaa lliissiinnaa YY ffoorrmmaarr HH22SS.. MMeettooddoollooggííaa:: 11--IInnooccuullaarr uunn ttuubboo ppoorr ppuunncciióónn yy eenn ssuuppeerrffiicciiee ddeell aaggaarr LLIIAA ccoonn uunnaa aannssaaddaa ddee ccuullttiivvoo ffrreessccoo.. 22--IInnccuubbaarr aa 3377ººCC ppoorr 4488 hh.. PPrruueebbaa ppoossiittiivvaa ppaarraa ddeessccaarrbbooxxiillaacciióónn:: pprroodduucccciióónn ddee ccoolloorr ppuurrppuurraa((aallccaalliinnoo)) eenn eell ffoonnddoo ddeell ttuubboo.. PPrruueebbaa nneeggaattiivvaa ppaarraa ddeessccaarrbbooxxiillaacciióónn:: nnoo hhaayy ccaammbbiioo ddee ccoolloorr.. PPrruueebbaa ppoossiittiivvaa ppaarraa ddeessaammiinnaacciióónn:: pprroodduucccciióónn ddee ccoolloorr rroojjoo eenn llaa ssuuppeerrffiicciiee iinncclliinnaaddaa yy ccoolloorr aammaarriilllloo eenn eell ffoonnddoo ddeell ttuubboo.. PPrruueebbaa nneeggaattiivvaa ppaarraa ddeessccaarrbbooxxiillaacciióónn:: nnoo hhaayy ccaammbbiioo ddee ccoolloorr.. PPrruueebbaa ppoossiittiivvaa ppaarraa pprroodduucccciióónn ddee HH22SS:: eennnneeggrreecciimmiieennttoo ddeell mmeeddiioo..

BBiibblliiooggrraaffííaa:: DDiiaaggnnoossttiiccoo mmiiccrroobbiioollóóggiiccoo ddee kkoonneemmaann qquuiinnttaa eeddiicciióónn.. IInnssttiittuuttoo ddee IInnvveessttiiggaacciioonneess BBiiootteeccnnoollóóggiiccaass,, UUnniivveerrssiiddaadd NNaacciioonnaall ddee GGeenneerraall SSaann MMaarrttíínn.. GGuuiiaa ddee TTrraabbaajjooss PPrrááccttiiccooss.. 22000055.. PPDDFF.. PPrreegguunnttaass ddee iinnvveessttiiggaacciióónn::

11.. IInnvveessttiigguuee llooss pprriinncciippiiooss,, ccoommoo ssee rreeaalliizzaann yy ppaarraa qquuee mmiiccrroooorrggaanniissmmooss ssee uuttiilliizzaann llaass ssiigguuiieenntteess pprruueebbaass bbiiooqquuíímmiiccaass:: CCooaagguullaassaa,, OOxxiiddaassaa,, CCaattaallaassaa,, uurreeaa,, ..

22.. iinnvveessttiigguuee ccoommoo ssee rreeaalliizzaa uunn aannttiibbiiooggrraammaa ppoorr ccoonncceennttrraacciióónn mmíínniimmaa iinnhhiibbiittoorriiaa yy ddiiffuussiióónn eenn ddiissccoo..

PPrraaccttiiccaa ddee llaabboorraattoorriioo 88.. PPRREEPPEERRAACCIIÓÓNN DDEE AAGGAARR PPDDAA (( PPAAPPAA,,DDEEXXTTRROOSSAA AAGGAARR)).. IInnttrroodduucccciióónn:: LLooss hhoonnggooss ssoonn oorrggaanniissmmooss eeuuccaarriioottaass qquuee ssee eennccuueennttrraann eenn ccaassii ttooddooss llooss aammbbiieenntteess,, ccrreecceenn ffáácciillmmeennttee eenn llaa ggrraann mmaayyoorrííaa ddee llooss mmeeddiiooss yy ccuuaallqquuiieerr ttiippoo ddee mmaatteerriiaa oorrggáánniiccaa,, rreeqquuiieerreenn ppaarraa ssuu ccrreecciimmiieennttoo ddee ggrraann ccaannttiiddaadd ddee hhuummeeddaadd yy ssee aaddaappttaann ffáácciillmmeennttee aa ccuuaallqquuiieerr aammbbiieennttee.. EEll aaggaarr PPDDAA eess uunn mmeeddiioo ddee ffáácciill pprreeppaarraacciióónn yy eeccoonnóómmiiccoo ppaarraa eell ccuullttiivvoo ddee hhoonnggooss,, ggeenneerraallmmeennttee ppeerrmmiittee eessttiimmuullaarr llaa eessppoorruullaacciióónn.. SSee ppuueeddee ccoommpprraarr ccoommeerrcciiaallmmeennttee,, ppeerroo ppoorr ssuu ffáácciill pprreeppaarraacciióónn eess mmeejjoorr hhaacceerrlloo eenn eell llaabboorraattoorriioo.. FFoorrmmuullaa:: PPaappaa 225500 ggrr.. GGlluuccoossaa 2200ggrr.. AAggaarr aaggaarr 2200ggrr.. AAgguuaa ddeessttiillaaddaa 11LLtt.. PPrreeppaarraacciióónn::

11.. PPeellaarr llaass ppaappaass yy ppaarrttiirrllaass eenn rrooddaajjaass.. 22.. AAggrreeggaarr 110000 mmll ddee aagguuaa ddeessttiillaaddaa yy ddeejjaarr hheerrvviirr ppoorr 2200 mmiinnuuttooss.. 33.. FFiillttrraarr mmeeddiiaannttee uunnaa ggaassaa.. 44.. AAññaaddiirr aall ffiillttrraaddoo llaa gglluuccoossaa yy eell aaggaarr.. 55.. CCoommpplleettaarr aa uunn lliittrroo ccoonn aagguuaa ddeessttiillaaddaa.. 66.. ddeejjaarr hheerrvviirr hhaassttaa qquuee ssee ddiissuueellvvaa ccoommpplleettaammeennttee eell aaggaarr.. 77.. AAuuttooccllaavvaarr aa 112200ººCC ppoorr 2200 mmiinnuuttooss.. 88.. AAddiicciioonnaarr 2200 mmll ddeell aaggaarr aauuttooccllaavvddoo ppoorr ccaajjaass ddee ppeettrrii,, ddeejjaarr ssoolliiddiiffiiccaarr.. 99.. IInnccuubbaarr uunnaa ccaajjaa aa 3377ººCC ppoorr 2244 hhoorraass..

CCuullttiivvoo ddee hhoonnggooss ddeell aammbbiieennttee:: 11.. TToommee uunnaa ccaajjaa ddee aaggaarr PPDDAA,, ddeessttááppeellaa yy eexxppóónnggaallaa aall aammbbiieennttee ppoorr 2200 mmiinnuuttooss,, aall ccaabboo ddee eessttee ttiieemmppoo,, ttaappee llaa ccaajjaa ee iinnccúúbbeellaa aa tteemmppeerraattuurraa aammbbiieennttee ppoorr 88 ddiiaass.. PPrreegguunnttaa ddee iinnvveessttiiggaacciióónn::

11.. IInnvveessttiigguuee ccoommoo ssee ccuullttiivvaann ddee ffoorrmmaa aarrtteessaannaall ee iinndduussttrriiaall llooss cchhaammppiiññoonneess yy ccuuaall eess eell pprroocceessoo hhaassttaa lllleevvaarr eessttee pprroodduuccttoo aa llooss ssuuppeerrmmeerrccaaddooss..

PPrraaccttiiccaa ddee llaabboorraattoorriioo NNoo 99..

Identificación de hongos y miiccrrooccuullttiivvoo..

OObbjjeettiivvoo:: CCoonnoocceerr llaass ttééccnniiccaass ddee iiddeennttiiffiiccaacciióónn ddee llooss hhoonnggooss yy eell mmiiccrrooccuullttiivvoo ccoommoo hheerrrraammiieennttaa nneecceessaarriiaa ppaarraa llaa iiddeennttiiffiiccaacciióónn ddee llooss hhoonnggooss.. IInnttrroodduucccciióónn:: LLooss hhoonnggooss ssee eessttuuddiiaann yy ccllaassiiffiiccaann aa ttrraavvééss ddee llaass ddiiffeerreenncciiaass eenn ssuu mmoorrffoollooggííaa yy ffoorrmmaa ddee rreepprroodduucciirrssee.. AAll eexxaammiinnaarr llooss hhoonnggooss uuttiilliizzaammooss llaass ddiiffeerreenncciiaass ddee llaa ccoolloonniiaa,, eell mmiicceelliioo vveeggeettaattiivvoo yy llaass eessttrruuccttuurraass rreepprroodduuccttoorraass,, ttaannttoo sseexxuuaalleess ccoommoo aasseexxuuaalleess.. LLaass ccoolloonniiaass ddiiffiieerreenn eenn ttaammaaññoo,, aassppeeccttoo ddee ssuu ssuuppeerrffiicciiee yy ccoolloorr.. SSoobbrree llaa bbaassee ddee ssuu rreepprroodduucccciióónn sseexxuuaall llooss mmoohhooss ppuueeddeenn aaggrruuppaarrssee eenn ccuuaattrroo ccllaasseess::

aa.. LLooss ffiiccoommiicceettooss.. bb.. LLooss aassccoommiicceettooss.. cc.. LLooss bbaacciiddiioommiicceettooss.. dd.. LLooss ddeeuutteerroommiicceettooss..

LLaass lleevvaadduurraass ssoonn hhoonnggooss uunniicceelluullaarreess,, llaa mmaayyoorriiaa hhaacceenn ppaarrttee ddee llooss aassccoommiicceettooss.. NNoorrmmaallmmeennttee ssoonn ccéélluullaass oovvaalleess oo cciillíínnddrriiccaass yy hhaabbiittuuaallmmeennttee ssee ddiivviiddeenn ppoorr ggeemmaacciióónn.. DDuurraannttee eell pprroocceessoo ddee ggeemmaacciióónn ssee oorriiggiinnaa uunnaa ppeeqquueeññaa ccéélluullaa qquuee aauummeennttaa ddee ttaammaaññoo ggrraadduuaallmmeennttee yy ssee sseeppaarraa ddee llaa ccéélluullaa mmaaddrree.. LLaass lleevvaadduurraass nnoorrmmaallmmeennttee nnoo ddeessaarrrroollllaann uunn mmiicceelliioo,, ssiinnoo qquuee ppeerrmmaanneecceenn eenn eessttaaddoo uunniicceelluullaarr dduurraannttee ttooddoo eell cciicclloo ddee ccrreecciimmiieennttoo.. EExxiisstteenn ccaassooss ccoommoo eell ddee llaa ccaannddiiddaa aallbbiiccaannss uunnaa lleevvaadduurraa ppootteenncciiaallmmeennttee ppaattóóggeennaa qquuee ccaauussaa iinnffeecccciioonneess vvaaggiinnaalleess,, ddee ppuullmmoonneess ee iinncclluussoo ssiissttéémmiiccaa.. LLooss hhoonnggooss ppaattóóggeennooss ppuueeddeenn pprroodduucciirr ddiivveerrssaass ccllaasseess ddee mmiiccoossiiss yy ssee ssuubbddiivviiddeenn eenn ttrreess ccaatteeggoorrííaass..

EEnnffeerrmmeeddaadd AAggeennttee eettiioollóóggiiccoo PPrriinncciippaalleess zzoonnaass aaffeeccttaaddaass

MMiiccoossiiss ssuuppeerrffiicciiaalleess TTiiññaa MMiiccrroossppoorruumm CCuueerroo ccaabbeelllluuddoo PPiiee ddee aattlleettaa EEpphhyyddeerrmmooppiittoonn,, TTrriicchhooppyyttoonn EEnnttrree llooss ddeeddooss ddee llooss ppiieess TTiiññaa ccrruuvvaall oo iinnggiinnaall EEpphhyyddeerrmmooppiittoonn,, TTrriicchhooppyyttoonn RReeggiióónn ggeenniittaall

MMiiccoossiiss ssuubbccuuttaanneeaass EEssppoorroottrriiccoossiiss SSppeeoorrootthhrriixx sscchheenncckkiiii BBrraazzoo,, MMaannooss CCrroommoobbllaassttoommiiccoossiiss VVaarriiooss ggéénneerrooss ddee hhoonnggooss PPiieerrnnaass,, ppiieess..

MMiiccoossiiss ssiissttéémmiiccaass CCrriippttooccooccoossiiss CCrriippttooccooccccuuss nneeooffoorrmmaannss PPuullmmoonneess,, mmeenniinnggeess CCoocccciiddiioommiiccoossiiss CCoocccciiddiiooiiddeess iimmmmiittiiss PPuullmmoonneess.. HHiissttooppllaassmmoossiiss HHiissttooppllaassmmaa ccaappssuullaattuumm PPuullmmoonneess.. BBllaassttoommiiccoossiiss BBllaassttoommyycceess ddeerrmmaattiittiiddeess PPuullmmoonneess CCaannddiiddiiaassiiss CCaannddiiddaa aallbbiiccaannss CCaavviiddaadd oorraall,, ttrraaccttoo

iinntteessttiinnaall

PPrroocceeddiimmiieennttooss Preparación en fresco SSee rreeaalliizzaa eemmpplleeaannddoo eell pprroocceeddiimmiieennttoo ddeessccrriittoo aa ccoonnttiinnuuaacciióónn:: 11.. SSeelleecccciioonnaarr uunnaa ccoolloonniiaa aaiissllaaddaa.. 22.. CCaalleennttaarr aa llaa llllaammaa eell aallaammbbrree ddee uunn aassaa ddee ssiieemmbbrraa,, yy ddoobbllaarr.. 33.. CCoonn llaa aayyuuddaa ddeell aassaa,, eexxttrraaeerr uunn ffrraaggmmeennttoo ddee llaa ccoolloonniiaa.. 44.. DDeeppoossiittaarr eell ffrraaggmmeennttoo eexxttrraaííddoo ssoobbrree uunn ppoorrttaaoobbjjeettooss eenn eell ccuuaall,, pprreevviiaammeennttee,, ssee hhaa ddeeppoossiittaaddoo uunnaa ggoottaa ddee aazzuull ddee llaaccttooffeennooll.. 55.. CCuubbrriirr ccoonn uunn ccuubbrreeoobbjjeettooss yy pprreessiioonnaarr ssuuaavveemmeennttee ppaarraa ddiissppeerrssaarr llaa ccoolloonniiaa;; ddee eessttaa ffoorrmmaa,, llaa mmuueessttrraa eessttáá ddiissppoonniibbllee ppaarraa ssuu oobbsseerrvvaacciióónn aall mmiiccrroossccooppiioo.. EEssttee pprroocceeddiimmiieennttoo eess eell qquuee uuttiilliizzaann llaa mmaayyoorrííaa ddee llooss llaabboorraattoorriiooss,, yyaa qquuee llaass mmuueessttrraass ssee pprreeppaarraann ccoonn ffaacciilliiddaadd yy rraappiiddeezz yy aaddeemmááss ppeerrmmiittee iiddeennttiiffiiccaarr mmuucchhaass ddee llaass eessppeecciieess ddee hhoonnggooss mmááss hhaabbiittuuaalleess.. EEll mmaayyoorr iinnccoonnvveenniieennttee ddee llaa oobbsseerrvvaacciióónn eenn ffrreessccoo eess qquuee ssee ppuueeddee aalltteerraarr eell oorrddeennaammiieennttoo ccaarraacctteerrííssttiiccoo ddee llaass eessppoorraass aall pprreessiioonnaarr ccoonn eell ccuubbrreeoobbjjeettooss.. DDee iigguuaall ffoorrmmaa eessttee pprroocceeddiimmiieennttoo ssee uuttiilliizzaa ppaarraa eell rreeccoonnoocciimmiieennttoo ddee hhoonnggooss ddee mmuueessttrraass ddiirreeccttaass,, ppaarraa lloo ccuuaall ssee rraassppaa ccoonn uunnaa llaanncceettaa oo ppoorrttaaoobbjjeettoo eell áárreeaa aaffeeccttaaddaa,, ssoobbrree uunnaa ccaajjaa ddee ppeettrrii eessttéérriill,, ppoosstteerriioorrmmeennttee ssee ppoonnee llaa mmuueessttrraa eenn uunn ppoorrttaaoobbjjeettoo ssee aaddiicciioonnaa uunnaa ggoottaa ddee aazzuull ddee llaaccttooffeennooll,, ssee ppoonnee uunn ccuubbrreeoobbjjeettoo eenncciimmaa.. LLuueeggoo ppoonnee eenn ccáámmaarraa hhúúmmeeddaa dduurraannttee vvaarriiaass hhoorraass yy ppoosstteerriioorrmmeennttee ssee oobbsseerrvvaa aall mmiiccrroossccooppiioo.. Preparación con cinta de celofán adhesiva EEll pprroocceeddiimmiieennttoo ssee lllleevvaa aa ccaabboo ccoommoo ssiigguuee:: 11.. AAppooyyaarr eell llaaddoo eennggoommaaddoo ddee uunn ttrroozzoo ddee cciinnttaa aaddhheessiivvaa ttrraannssppaarreennttee ssoobbrree llaa ssuuppeerrffiicciiee ddee uunnaa ccoolloonniiaa.. 22.. CCoollooccaarr llaa cciinnttaa bbiieenn eexxtteennddiiddaa ssoobbrree uunnaa ggoottaa ddee aazzuull ddee llaaccttooffeennooll oo aazzuull ddee aanniilliinnaa ccoollooccaaddaa,, aa ssuu vveezz,, ssoobbrree uunn ppoorrttaaoobbjjeettooss.. 33.. OObbsseerrvvaarr aall mmiiccrroossccooppiioo ppaarraa ccoonnoocceerr llaa ffoorrmmaa yy oorrddeennaammiieennttoo ccaarraacctteerrííssttiiccoo ddee llaass eessppoorraass.. EEssttee mmééttooddoo ppuueeddee ccoonnssiiddeerraarrssee ccoommoo eell mmááss ssiimmppllee,, eeccoonnóómmiiccoo yy aaddeeccuuaaddoo ppaarraa llaa iiddeennttiiffiiccaacciióónn ddee hhoonnggooss,, rreeccoommeennddaabbllee ppaarraa llooss llaabboorraattoorriiooss mmiiccrroobbiioollóóggiiccooss ddee ccuuaallqquuiieerr nniivveell.. LLaa pprreeppaarraacciióónn ddee llaa cciinnttaa ttrraannssppaarreennttee ppeerrmmiittee oobbsseerrvvaarr aall mmiiccrroossccooppiioo ccoommoo ssee ddeessaarrrroollllaa eell mmiiccrroooorrggaanniissmmoo eenn eell ccuullttiivvoo.. GGeenneerraallmmeennttee llaass eessppoorraass ssee mmaannttiieenneenn iinnttaaccttaass yy llaa iiddeennttiiffiiccaacciióónn ssee rreeaalliizzaa ccoonn ffaacciilliiddaadd.. UUnnaa ddee llaass ddeessvveennttaajjaass ddee eessttee mmééttooddoo eess qquuee ssii llaa cciinnttaa ttrraannssppaarreennttee nnoo ssee pprreessiioonnaa ccoonn ssuuffiicciieennttee ffiirrmmeezzaa ssoobbrree llaa ssuuppeerrffiicciiee ddee llaa ccoolloonniiaa,, llaa mmuueessttrraa nnoo eess aaddeeccuuaaddaa,, yyaa qquuee aall nnoo qquueeddaarr bbiieenn aaddhheerriiddaa llaa cciinnttaa,, llaass eessppoorraass oo llaass hhiiffaass nnoo ssee ppuueeddeenn iiddeennttiiffiiccaarr.. EEnn llooss ccaassooss eenn qquuee mmeeddiiaannttee eessttee mmééttooddoo nnoo ssee oobbsseerrvveenn eessppoorraass ddeebbeerráá rreeaalliizzaarrssee llaa pprreeppaarraacciióónn eenn ffrreessccoo..

Microcultivo SSee rreeaalliizzaa eemmpplleeaannddoo eell pprroocceeddiimmiieennttoo ddeessccrriittoo aa ccoonnttiinnuuaacciióónn:: 11.. CCoollooqquuee ssoobbrree uunnaa ccaajjaa ddee ppeettrrii eessttéérriill uunn ppaappeell ffiillttrroo hhúúmmeeddoo yy ssoobbrree eessttee 22 ppaalliillllooss.. SSoobbrree llooss ppaalliillllooss,, ppoonneerr uunnaa llaammiinnaa ppoorrttaaoobbjjeettoo eessttéérriill.. 22.. CCoorrttaarr uunn bbllooqquuee ppeeqquueeññoo ddee uunn mmeeddiioo ssóólliiddoo aaddeeccuuaaddoo ((aaggaarr)),, qquuee hhaa ssiiddoo vveerrttiiddoo eenn uunnaa ccaajjaa ddee PPeettrrii,, hhaassttaa uunnaa aallttuurraa ddee 22 ccmm.. EEll bbllooqquuee ppuueeddee ccoorrttaarrssee ccoonn llaa aayyuuddaa ddee uunn bbiissttuurríí eessttéérriill oo ccoonn uunn ttuubboo ddee eennssaayyoo eessttéérriill ssiinn rreebboorrddee ((lloo qquuee ppeerrmmiittee oobbtteenneerr uunn ttaaccoo rreeddoonnddoo)).. 33.. CCoollooccaarr eell bbllooqquuee ddee aaggaarr ssoobbrree eell ppoorrttaaoobbjjeettooss.. 44.. CCoonn uunnaa aassaa ddee ssiieemmbbrraa ccuuyyoo aallaammbbrree hhaa ssiiddoo ddoobbllaaddoo eenn áánngguulloo rreeccttoo,, iinnooccuullaarr llooss ccuuaattrroo ccuuaaddrraanntteess ddeell bbllooqquuee ddee aaggaarr ccoonn eell mmiiccrroooorrggaanniissmmoo aa iiddeennttiiffiiccaarr.. 55.. CCoollooccaarr uunn ccuubbrreeoobbjjeettooss eessttéérriill ssoobbrree llaa ssuuppeerrffiicciiee ddeell bbllooqquuee ddee aaggaarr sseemmbbrraaddoo.. 66.. TTaappaarr llaa ccaajjaa ddee PPeettrrii yy sseellllaarrllaa ccoonn cciinnttaa,, iinnccuubbaarr aa 3300oo CC xx 88 aa 1155 ddiiaass.. 77.. FFiinnaalliizzaaddoo eell ppeerrííooddoo ddee iinnccuubbaacciióónn,, rreettiirraarr eell ccuubbrreeoobbjjeettooss ((eessttee pprroocceessoo ddeebbee rreeaalliizzaarrssee eenn uunnaa ccaabbiinnaa ddee sseegguurriiddaadd bbiioollóóggiiccaa)),, yy ccoollooccaarrlloo eenn uunn ppoorrttaaoobbjjeettooss qquuee ccoonntteennggaa aazzuull ddee llaaccttooffeennooll oo aazzuull ddee aanniilliinnaa.. LLaa oobbsseerrvvaacciióónn aall mmiiccrroossccooppiioo ppeerrmmiittee ddiissttiinngguuiirr llaa ffoorrmmaa yy ddiissppoossiicciióónn ddee llaass eessppoorraass.. EEssttee mmééttooddoo ppeerrmmiittee llaa oobbsseerrvvaacciióónn mmiiccrroossccóóppiiccaa ddeell hhoonnggoo mmiieennttrraass ssee ddeessaarrrroollllaa ddiirreeccttaammeennttee ddeebbaajjoo ddeell ccuubbrreeoobbjjeettooss,, ddee ffoorrmmaa qquuee llaass ccaarraacctteerrííssttiiccaass mmiiccrroossccóóppiiccaass ssee ddiissttiinngguueenn ccoonn ffaacciilliiddaadd,, llaass eessttrruuccttuurraass ssee mmaannttiieenneenn iinnttaaccttaass yy ppuueeddee oobbsseerrvvaarrssee uunn ggrraann nnúúmmeerroo ddee áárreeaass rreepprreesseennttaattiivvaass.. NNoo ddeebbeenn rreeaalliizzaarrssee ccuullttiivvooss eenn ppoorrttaaoobbjjeettooss ddee hhoonnggooss ddee ccrreecciimmiieennttoo lleennttoo qquuee ppuueeddeenn sseerr ppaattóóggeennooss ddiimmoorrffooss,, ccoommoo HHiissttooppllaassmmaa ccaappssuullaattuumm,, BBllaassttoommyycceess ddeerrmmaattiittiiddiiss,, CCoocccciiddiiooiiddeess iimmmmiittiiss,, PPaarraaccoocccciiddiiooiiddeess bbrraassiilliieennssiiss oo SSppoorrootthhrriixx sscchheenncckkiiii.. Prueba del tubo germinativo SSee rreeaalliizzaa ddee aaccuueerrddoo ccoonn eell ssiigguuiieennttee pprroocceeddiimmiieennttoo:: 11.. SSuussppeennddeerr uunn iinnóóccuulloo mmuuyy ppeeqquueeññoo ddee ccéélluullaass ddee llaa lleevvaadduurraa oobbtteenniiddaass aa ppaarrttiirr ddee uunnaa ccoolloonniiaa aaiissllaaddaa eenn 00,,55 mmll ddee ssuueerroo ddee oovveejjaa ((oo ddee ssuueerroo hhuummaannoo,, pprroocceeddeennttee ddee uunn iinnddiivviidduuoo ssaannoo)).. 22.. IInnccuubbaarr llooss ttuubbooss aa 3355--3377oo CC,, nnoo ssuuppeerraannddoo llaass 33 hhoorraass.. 33.. DDeessppuuééss ddee llaa iinnccuubbaacciióónn,, ttoommaarr uunnaa ggoottaa ddee llaa ssuussppeennssiióónn yy ccoollooccaarrllaa ssoobbrree uunn ppoorrttaaoobbjjeettooss.. 44.. OObbsseerrvvaarr ccoonn eell mmiiccrroossccooppiioo aa ppooccoo aauummeennttoo llaa pprreesseenncciiaa ddee ttuubbooss ggeerrmmiinnaattiivvooss.. 55.. UUnn ttuubboo ggeerrmmiinnaattiivvoo ssee ddeeffiinnee ccoommoo uunn aappéénnddiiccee ccoonn llaa mmiittaadd ddee aanncchhoo yy 33 aa 44 vveecceess eell llaarrggoo ddee llaa ccéélluullaa ddee llaa ccuuaall eemmeerrggee.. EEnn llaa mmaayyoorr ppaarrttee ddee llooss ccaassooss nnoo eexxiissttee ccoonnssttrriicccciióónn eenn eell oorriiggeenn ddeell ttuubboo ggeerrmmiinnaattiivvoo.. PPrreegguunnttaass ddee iinnvveessttiiggaacciióónn::

11.. IInnvveessttiigguuee qquuee ssoonn llaass ddeerrmmaattoommiiccoossiiss yy ccuuaalleess ssoonn llooss pprriinncciippaalleess hhoonnggooss iimmpplliiccaaddooss eenn eessttaass eennffeerrmmeeddaaddeess..

22.. IInnvveessttiigguuee eell uussoo ddee llooss hhoonnggooss eenn eell ccoonnttrrooll bbiioollóóggiiccoo yy ccuuaall eess ssuu mmooddoo ddee aacccciióónn.. ((ttoommee ccoommoo eejjeemmpplloo llaa bbrrooccaa ddeell ccaafféé,, ppeerroo iinnvveessttiigguuee oottrraass))..

PPrraaccttiiccaa ddee llaabboorraattoorriioo NNo o 1100..

AAnnáálliissiiss mmiiccrroobbiioollóóggiiccoo ddeell aammbbiieennttee..

IInnttrroodduucccciióónn:: LLooss mmiiccrroooorrggaanniissmmooss,, ttiieennee llaa ccaappaacciiddaadd ddee uubbiiccaarrssee eenn ttooddooss llooss aammbbiieenntteess yy ssiittiiooss.. EEssttoo ssee ddeennoommiinnaa uubbiiccuuiiddaadd.. EEss ppoorr eessttoo qquuee eenn pprroocceessooss iinndduussttrriiaalleess eess ddee vviittaall iimmppoorrttaanncciiaa eell ccoonnoocciimmiieennttoo ddee llaa uubbiiccaacciióónn yy llaa ccaarrggaa mmiiccrroobbiioollóóggiiccaa ddee llaass ppeerrssoonnaass yy ddeell mmeeddiioo ddoonnddee ssee ttrraabbaajjaa.. PPaarraa eell ttrraabbaajjoo bbiiootteeccnnoollóóggiiccoo aa nniivveell iinndduussttrriiaall eess iinnddiissppeennssaabbllee ppooddeerr ccoonnoocceerr eenn llaa mmeeddiiddaa ddee lloo ppoossiibbllee ccuuaall eess llaa ppoobbllaacciióónn yy//oo ppoobbllaacciioonneess mmiiccrroobbiiaannaass qquuee hhaacceenn ppaarrttee ddeell eeccoossiisstteemmaa ddee llaa ffaabbrriiccaa.. EEll oobbjjeettiivvoo qquuee ssee bbuussccaa eess ppooddeerr ttoommaarr mmeeddiiddaass ddee ccoonnttrrooll,, eenn eell ccaassoo qquuee llooss mmiiccrroooorrggaanniissmmooss eennccoonnttrraaddooss ccoommoo ccoonnttaammiinnaanntteess ddeell aammbbiieennttee sseeaann ppaattóóggeennooss,, oo ssiimmpplleemmeennttee ssaabbeerr ccoonn qquuee ttiippoo ddee mmiiccrroooorrggaanniissmmooss ccoonnttaammooss eenn nnuueessttrroo aammbbiieennttee ((mmoohhooss,, lleevvaadduurraass,, bbaacctteerriiaass))..

OObbjjeettiivvooss::

11.. CCoonnoocceerr llaass ttééccnniiccaa ppaarraa hhaacceerr aannáálliissiiss ddee aammbbiieenntteess.... 22.. EEssttuuddiiaarr llaa iimmppoorrttaanncciiaa ddee eessttaass ttééccnniiccaass,, eenn eell ccoonnoocciimmiieennttoo ddee llooss eeccoossiisstteemmaass

ddeennttrroo ddee llaass iinndduussttrriiaass.. 33.. CCoonnoocceerr llaa iimmppoorrttaanncciiaa ddee llaa ddeessiinnffeecccciióónn eenn llooss pprroocceessooss ddee aalliimmeennttooss..

PPrriinncciippiioo ddeell mmééttooddoo.. EEll mmééttooddoo ssee bbaassaa eenn ddeetteerrmmiinnaarr qquuee ttiippoo ddee mmiiccrroooorrggaanniissmmooss ssee eennccuueennttrraann eenn eell aammbbiieennttee ddee ttrraabbaajjoo,, eessttoo aa ttrraavvééss ddee llaa ssiieemmbbrraa eenn ddiiffeerreenntteess mmeeddiiooss ddee ccuullttiivvoo ppaarraa eell aaiissllaammiieennttoo ddee hhoonnggooss yy bbaacctteerriiaass.. NNoottaa ssee hhaarráánn ddiiffeerreenntteess ssiieemmbbrraass ddee aammbbiieenntteess::

11-- SSiieemmbbrraa ddee ssuuppeerrffiicciiee.. 22-- SSiieemmbbrraa ddee mmaannooss.. 33-- SSiieemmbbrraa ddee aammbbiieennttee.. 44-- SSiieemmbbrraa ddee rreessppiirraacciióónn yy ttooss..

11.. SSiieemmbbrraa ddee ssuuppeerrffiicciieess.. 11.. SSaaqquuee uunnaa ttoorruunnddaa eessttéérriill yy mmóójjeellaa eenn aagguuaa ppeeppttoonnaaddaa,, eessccuurrrraa eell eexxcceessoo ddee ppeeppttoonnaa,, pprreessiioonnaannddoo ccoonnttrraa llaass ppaarreeddeess ddeell ttuubboo.. 22.. TToommaannddoo uunnaa ppllaannttiillllaa ddee ccaarrttuulliinnaa qquuee ccoonntteennggaa uunn áárreeaa ddee 2200ccmm22,, ppóónnggaallaa ssoobbrree eell áárreeaa ddee ttrraabbaajjoo aa llaa ccuuaall llee ddeesseeaa rreeaalliizzaarr eell ccoonnttrrooll mmiiccrroobbiioollóóggiiccoo yy ffrroottee llaa ttoorruunnddaa mmoojjaaddaa eenn llaa ppeeppttoonnaa ttrreess vveecceess eenn ddiicchhaa áárreeaa,, rreettrroocceeddiieennddoo eennttrree llooss ttrraazzooss ssuucceessiivvooss.. 33.. IInnsseerrttee llaa ttoorruunnddaa eenn eell ttuubboo qquuee ccoonnttiieennee llaa ppeeppttoonnaa,, mmoovveerr llaa ttoorruunnddaa ddeennttrroo ddee eessttee ppaarraa qquuee ssee ddeesspprreennddaann llooss mmiiccrroooorrggaanniissmmooss.. 44.. RReeaalliiccee eessttee mmiissmmoo pprroocceeddiimmiieennttoo ((ppaassooss 11,,22 yy 33)).. eenn 44 ppaarrtteess mmaass ddeell áárreeaa ddee ttrraabbaajjoo.. 55.. MMeezzccllee llaass mmuueessttrraass ccoonnttrraa llaa ppaallmmaa ddee llaa mmaannoo.. 66.. SSiieemmbbrree 11mmll yy 00..11 mmll eenn ccaajjaass ddee ppeettrrii yy aaggrreegguuee 2200 mmll ddee mmeeddiioo ppllaattee ccoouunntt ppaarraa bbaacctteerriiaass yy 2200 mmll ddee mmeeddiioo ssaabboorreeaauu ppaarraa hhoonnggooss,, mmeezzccllee ccoommoo ssee aapprreennddiióó eenn llaa ssiieemmbbrraa ddee ddiilluucciióónn eenn mmaassaa.. 77.. TToommee ddooss ccaajjaass ddee ppeettrrii ccoonn aaggaarr ssaabboorreeaauu yy ssiieemmbbrree eenn llaa ssuuppeerrffiicciiee 00..55 yy 00..11 mmll ddee llaa mmuueessttrraa.. CCoonn uunn aassaa ccuurrvvaa eexxttiieennddaa llaa mmuueessttrraa ssoobbrree ttooddaa llaa ccaajjaa.. 88.. IInnccuubbee 4488 hhoorraass aa 3377ooCC llaass ccaajjaass ddee aaggaarr nnuuttrriittiivvoo yy rreeaalliiccee eell rreeccuueennttoo ddee llooss mmiiccrroooorrggaanniissmmooss ee iinnffoorrmmee eell nnuummeerroo ddee UUFFCC eenn 2200ccmm22 ddee áárreeaa..

99.. LLaa ccaajjaass ddee aaggaarr ssaabboorreeaauu qquuee ssee sseemmbbrraarroonn ppoorr ssuuppeerrffiicciiee ssee ddeejjaarraann aa tteemmppeerraattuurraa aammbbiieennttee ppoorr 88 ddííaass.. 1100.. LLaass ccaajjaass ddee aaggaarr ssaabboorreeaauu qquuee ssee sseemmbbrraarroonn ppoorr ddiilluucciióónn eenn mmaassaa ssee iinnccuubbaarraann aa 3377 ooCC xx 88 ddiiaass.. NNoottaa:: DDeessppuuééss ddee rreeaalliizzaarr llaa ssiieemmbbrraa aanntteerriioorr,, ttoommee uunnaa ttooaallllaa yy hhuummeeddéézzccaallaa eenn uunnaa ssoolluucciióónn ddee hhiippoocclloorriittoo aall 33%% eenn aagguuaa,, lliimmppiiee eell áárreeaa ddee ttrraabbaajjoo,, lliimmppiiee eell llíímmppiiddoo ccoonn uunnaa ttooaallllaa ccoonn aagguuaa yy ddeejjee sseeccaarr.. RReeaalliiccee nnuueevvaammeennttee eell pprroocceeddiimmiieennttoo ddee ssiieemmbbrraa ddee ssuuppeerrffiicciieess ppoosstteerriioorr aa llaa lliimmppiieezzaa ccoonn eell hhiippoocclloorriittoo.. 22.. SSiieemmbbrraa ddee mmaannooss.. 11..TToommee 11 ccaajjaass ddee ppeettrrii ccoonn mmeeddiioo aaggaarr nnuuttrriittiivvoo,, ddiivviiddaa llaa ccaajjaa eenn ddooss ccoonn uunn aassaa ccuurrvvaa.. 22.. MMaarrqquuee ccaaddaa ppaarrttee ddee llaa ccaajjaa ccoonn ddeerreecchhaa ee iizzqquuiieerrddaa.. 33.. HHaaggaa pprreessiióónn ccoonn llooss ddeeddooss ee iinnttrroodduuzzccaa uunn ppooccoo llaass uuññaass ddeennttrroo ddeell aaggaarr.. 44.. IInnccuubbee llaass ccaajjaass ppoorr 4488 hhoorraass aa 3377ooCC.. 33.. SSiieemmbbrraa ddeell aammbbiieennttee.. 11.. TToommee uunnaa ccaajjaa ddee aaggaarr nnuuttrriittiivvoo yy oottrraa ddee aaggaarr ssaabboorreeaauu.. 22.. EExxppoonnggaa llaa ccaajjaa ddeessttaappaaddaa aall aammbbiieennttee ppoorr 2200 mmiinnuuttooss.. 33.. IInnccuubbee llaa ccaajjaa ddee aaggaarr nnuuttrriittiivvoo aa 3377ooCC ppoorr 4488 hhoorraass.. 44.. LLaa ccaajjaa ddee aaggaarr ssaabboorreeaauu ddee ddeejjaarraa aa tteemmppeerraattuurraa aammbbiieennttee ppoorr 88 ddííaass.. 44.. SSiieemmbbrraa ddee RReessppiirraacciióónn yy ttooss.. 11.. TToommee uunnaa ccaajjaa ddee ppeettrrii ccoonn mmeeddiioo aaggaarr nnuuttrriittiivvoo.. 22.. TToossaa oo eessttoorrnnuuddee ssoobbrree llaa ccaajjaa 44 vveecceess.. 33.. IInnccuubbee llaass ccaajjaass ppoorr 4488 hhoorraass aa 3377ooCC.. AAnneexxooss:: AAgguuaa PPeeppttoonnaaddaa ppaarraa DDiilluucciióónn:: PPeeppttoonnaa 11 gg AAgguuaa ddeessttiillaaddaa 11 lltt DDiissoollvveerr llaa ppeeppttoonnaa eenn uunn lliittrroo ddee aagguuaa ddeessttiillaaddaa aajjuussttaannddoo eell ppHH aa 66..88 ±± 00..11 yy eesstteerriilliizzaarr eenn aauuttooccllaavvee aa 112211ººCC ppoorr 1155 aa 2200 mmiinnuuttooss.. NNoottaa:: eell aaggaarr nnuuttrriittiivvoo yy eell ppllaattee ccoouuttnn,, vviieennee lliissttoo ppaarraa uussoo,, ddee aaccuueerrddoo aa llaass iinnddiiccaacciioonneess ddeell ffaabbrriiccaannttee,, ppeessee llaa ccaannttiiddaadd ddee mmeeddiioo nneecceessaarriioo yy ddiissuueellvvaa eenn aagguuaa ddeessttiillaaddaa,, ddeessppuuééss aauuttooccllaavvee.. PPrreegguunnttaass ddee iinnvveessttiiggaacciióónn::

11.. IInnvveessttiigguuee ccuuaall eess llaa fflloorraa nnoorrmmaall ddeell ccuueerrppoo hhuummaannoo.. 22.. IInnvveessttiigguuee ccuuaall eess llaa iimmppoorrttaanncciiaa ddee ccoonnoocceerr qquuee ttiippoo ddee mmiiccrroooorrggaanniissmmooss hhaabbiittaann eenn eell

eeccoossiisstteemmaa ddee uunnaa iinndduussttrriiaa.. 33.. UUsstteedd ccoommoo qquuíímmiiccoo ttiieennee llaa ppoossiibbiilliiddaadd ddee ccrreeaarr uunnaa iinndduussttrriiaa ddee pprroodduuccttooss

ddeessiinnffeeccttaanntteess,, IInnvveessttiigguuee ccoommoo ssee eevvaallúúaa llaa eeffiicciieenncciiaa ddee uunn ddeessiinnffeeccttaannttee.. DDeessddee eell ppuunnttoo ddee vviissttaa mmiiccrroobbiioollóóggiiccoo..

NNoottaa AAccllaarraattoorriiaa:: mmuucchhaass ddee llooss ttééccnniiccaass pprreesseenntteess eenn eessttee mmiinnii--mmaannuuaall ssee hhaann ttoommaaddoo ddee ppáággiinnaass ddee IInntteerrnneett,, mmaannuuaalleess ddee mmiiccrroobbiioollooggííaa,, lliibbrrooss yy oottrraass pprreessttaaddaass ppoorr aallgguunnooss aammiiggooss;; ssee hhaann rreeaalliizzaaddoo aallgguunnooss ccaammbbiiooss eenn llaass mmiissmmaass yy ssee hhaann aaddaappttaaddoo ppaarraa eell ggrruuppoo ddee mmiiccrroobbiioollooggííaa eenn qquuíímmiiccaa.. EEnn nniinnggúúnn mmoommeennttoo ssee bbuussccaa ppllaaggiiaarr llaa iinnffoorrmmaacciióónn aaqquuíí ccoonntteenniiddaa,, ppeerroo ssíí ssee bbuussccaa ppooddeerr ddaarr uunnaa iinnffoorrmmaacciióónn aaddeeccuuaaddaa ppaarraa llooss eessttuuddiiaanntteess.. LLEEOONNAARRDDOO PPAADDIILLLLAA SSAANNAABBRRIIAA.. BBaacctteerriióóllooggoo MMSScc.. BBiibblliiooggrraaffííaa:: IInntteerrnneett.. DDiiaaggnnoossttiiccoo mmiiccrroobbiioollóóggiiccoo KKoonneemmaann,, qquuiinnttaa eeddiicciióónn.. EEddiittoorriiaall ppaannaammeerriiccaannaa.. MMaannuuaall ddee pprrááccttiiccaass:: CCoonnttrrooll mmiiccrroobbiioollóóggiiccoo eenn llaa iinndduussttrriiaa.. PPUUJJ.. BBllaannccaa CCeecciilliiaa GGaavviirriiaa.. MMaannuuaall ddee mmiiccrroobbiioollooggííaa iinndduussttrriiaall.. PPUUJJ.. AAnnnnaabbeellllaa GGaaiittaann HHeerrrreerraa.. MMaannuuaall ddee mmiiccoollooggííaa.. IINNSS.. MMiiccrroobbiioollooggííaa aalliimmeennttaarrííaa.. SSeegguunnddaa eeddiicciióónn.. EEddiittoorriiaall ddiiaazz ddee ssaannttooss..