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NeuMoDx™ CTNG Test Strip GEBRAUCHSANWEISUNG

200300

NeuMoDx Molecular, Inc. VERTRAULICH Teilenr. 40600135-DE_Rev D Januar 2019

S. 1 von 15 Nur für den Vertrieb in Europa

200300 NeuMoDx™ CTNG Test Strip Rx only ACHTUNG: Nicht verfügbar für den gewerblichen Verkauf in den USA.

Zur Verwendung mit dem NeuMoDx™ 288 Molecular System und dem NeuMoDx™ 96

Molecular System in der In-vitro-Diagnostik vorgesehen

Detaillierte Anleitungen sind dem Benutzerhandbuch für das NeuMoDx™ 288 Molecular System, Teilenr. 40600226 zu entnehmen. Detaillierte Anleitungen sind dem Benutzerhandbuch für das NeuMoDx™ 96 Molecular System Teilenr. 40600224 zu entnehmen.

VERWENDUNGSZWECK

Der NeuMoDx™ CTNG Test Strip ist für die Durchführung auf dem NeuMoDx™ 288 Molecular System und dem NeuMoDx™ 96 Molecular System (NeuMoDx™ System(s)) vorgesehen und enthält die PCR-Reagenzien, die für die Durchführung des qualitativen In-vitro-Diagnosetests für den direkten Nachweis und die Differenzierung von DNA von Chlamydia trachomatis (CT) und Neisseria gonorrhoeae (NG) erforderlich sind. Der NeuMoDx™ CTNG Assay kann in Kombination mit dem NeuMoDx System verwendet werden, um unverdünnte Urinproben von männlichen und weiblichen Personen zu testen. Der Test umfasst die automatisierte DNA-Extraktion zur Isolierung von Nukleinsäuren aus der Probe und eine Polymerase-Kettenreaktion (polymerase chain reaction, PCR) in Echtzeit. Nachgewiesen werden sollen zwei verschiedene Regionen in Chlamydia trachomatis (eine im Chromosom, das das putativen Porinprotein codiert, und eine im kryptischen Plasmid, das das DNA-Helikase codiert) und das in mehreren Kopien vorliegende Opazitätsgen im Chromosom von Neisseria gonorrhoeae. Die Ergebnisse aus dem NeuMoDx CTNG Assay können als Hilfsmittel bei der Diagnose von Chlamydien- und/oder Gonokokkenerkrankungen verwendet werden.

ZUSAMMENFASSUNG UND ERLÄUTERUNG

Der NeuMoDx CTNG Assay erfordert eine in einem Standardurinprobenbecher gesammelte Probe ohne Konservierungs- oder Zusatzstoffe. Zur Vorbereitung des Tests wird ein Aliquot des Urins in ein mit dem NeuMoDx System kompatibles untergeordnetes Röhrchen dispensiert und in betreffenden Probenträgern in das NeuMoDx System geladen, um mit der Verarbeitung zu beginnen. Für jede Probe werden 550 µl Urin-Aliquot mit dem NeuMoDx™ Lysis Buffer 2 vermischt, und das NeuMoDx System führt automatisch alle Schritte durch, die erforderlich sind, um die Zielnukleinsäure zu extrahieren, die isolierte DNA für die Echtzeit-PCR-Amplifikation vorzubereiten und die Amplifikationsprodukte (Abschnitte der Ziel-Gensequenz der CT- und NG-Chromosomen und -Plasmide), falls vorhanden, zu amplifizieren. Der NeuMoDx CTNG Assay enthält eine DNA-Probenprozesskontrolle (Sample Process Control 1, SPC1). Diese Kontrolle erlaubt, möglicherweise in der Probe vorhandene inhibitorische Substanzen sowie Fehler des NeuMoDx Systems oder von Reagenzien während der Extraktions- und Amplifikationsprozesse zu erkennen.

Chlamydia-trachomatis- und Neisseria-gonorrhoeae-Infektionen sind zwei der weltweit am häufigsten vorkommenden sexuell übertragenen Infektionen. Laut aktuellem Bericht der Centers for Disease Control and Prevention (CDC)1 wurden 2016 in den USA mit über 1,6 Millionen neuen Chlamydia- und 470.000 neuen Gonorrhoe-Fällen neue Höchstzahlen diagnostiziert (CDC, 2017)1.

Chlamydien sind nicht-motile, gramnegative, obligate intrazelluläre Bakterien. Die Spezies der Chlamydia trachomatis umfasst fünfzehn Serovars (A, B, Ba, C, D, E, F, G, H, I, J, K, L1, L2 und L3), die Erkrankungen beim Menschen verursachen können2. Die Serovars D bis K sind die Hauptursache für genitale Chlamydieninfektionen bei Männern und Frauen2. C. trachomatis kann Nicht-Gonokokken-Urethritis, Epididymitis, Proktitis, Zervizitis, akute Salpingitis und entzündliche Beckenerkrankungen (pelvic inflammatory disease, PID) verursachen3,4,5,6. Chlamydieninfektionen sind sowohl bei Männern als auch Frauen häufig asymptomatisch. Kinder infizierter Mütter weisen ein deutlich höheres Risiko der Inklusion von Konjunktivitis und chlamydialer Pneumonie auf7,8. Unbehandelte Infektionen können zu PID führen, eine Hauptursache für Unfruchtbarkeit, ektopische Schwangerschaft und chronische Beckenschmerzen5. Daten aus randomisierten kontrollierten Studien für Chlamydienscreening deuten darauf hin, dass Screeningprogramme zu einer Reduktion des Auftretens von PID führen können9,10,11,12. Wie bei anderen entzündlichen STD kann die Chlamydieninfektion die Übertragung der HIV-Infektion erleichtern13. Darüber hinaus können mit Chlamydien infizierte Frauen die Infektion bei der Entbindung auf ihr Kind übertragen, was potenziell zu Ophthalmia neonatorum führt und damit Erblindung und Pneumonie verursac hen kann. Aufgrund der großen Last der mit Infektionen einhergehenden Erkrankungen und Risiken empfiehlt das CDC ein jährliches Chlamydienscreening bei allen sexuell aktiven Frauen im Alter von weniger als 25 Jahren und bei Frauen im Alter von ≥ 25 Jahr en mit erhöhtem Infektionsrisiko (z. B. Frauen mit einem neuen oder mehreren Sexualpartnern)14.

Neisseria gonorrhoeae ist der Erreger gonorrhoischer Erkrankungen. N. gonorrhoeae sind nicht-motile, gramnegative Diplokokken. Das häufigste Zentrum der N.-gonorrhoeae-Infektion ist der Urogenitaltrakt. NG-Infektionen neigen dazu, eine stärkere entzündliche Reaktion als C. trachomatis hervorzurufen, sind bei Frauen bis zur Entwicklung von Komplikationen wie PID jedoch in der Regel asymptomatisch15. PID können zu tubaler Unfruchtbarkeit, ektopischer Schwangerschaft und chronischen Beckenschmerzen führen. Bei Männern verursachen die meisten Harnröhreninfektionen Urethritis mit schmerzhaftem Urinieren oder Dysurie mit penilem Ausfluss (gewöhnlich symptomatisch) und, weniger häufig, Epididymitis oder disseminierte Gonokokkeninfektionen15. Darüber hinaus bieten epidemiologische und biologische Studien einen starken Beleg dafür, dass Gonokokkeninfektionen die Übertragung der HIV-Infektion erleichtern13.

Historisch war die Kultur für C. trachomatis und N. gonorrhoeae der „goldene Standard“ für den CTNG-Nachweis. Kulturmethoden erfordern jedoch, die Lebensfähigkeit der Organismen während des Transports und der Lagerung aufrechtzuerhalten. Kulturmethoden für CT sind schwer zu standardisieren, technisch anspruchsvoll, teuer, arbeitsaufwändig und relativ unempfindlich. Kulturmethoden für die konventionelle Diagnose von NG-Infektionen können eine gute klinische Sensitivität aufweisen, erfordern jedoch die Isolierung des Organismus auf s elektiven Medien und sind sehr stark von der sachgemäßen Probenhandhabung abhängig. Die unsachgemäße Lagerung und der unsachgemäße Transport der Proben können zum Verlust der Lebensfähigkeit des Organismus führen und falsche negative Ergebnisse ergeben.

https://www.cdc.gov/std/stats16/chlamydia.htm#foot-2


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Darüber hinaus können schlechte Probennahmetechniken, toxische Probennahmematerialien und die Inhibition des Wachstums durch Komponenten von Körpersekretionen ebenfalls zu falschen negativen Ergebnissen führen. Diese Nachteile machen Kulturmethoden weniger ideal für die Implementierung als routinemäßige Screeningtests. Es wurden mehrere Nicht-Kultur-Labortests, einschließlich Nukleinsäureamplifikationstests (nucleic acid amplification test, NAAT), für den Nachweis von Chlamydien und Gonorrhö entwickelt. Seit 2002 haben Verbesserungen bei den NAAT-Technologien zusammen mit der Verwendung einer weniger invasiven Probennahme eine bedeutende Anpassung der NAATs bei der CT- und NG-Diagnose ermöglicht. Nukleinsäureamplifikationstests sind nunmehr seit 2014 bei den Nicht-Kultur-Methoden die vom CDC einzige empfohlene Methode für die routinemäßige Laborverwendung bei CTNG-Tests16 .

PRINZIPIEN DES VERFAHRENS Beim NeuMoDx CTNG Assay werden Technologien zur Extraktion und zur Amplifikation/Detektion von DNA durch Echtzeit-PCR miteinander kombiniert. Die Proben werden in herkömmlichen Urinprobenbechern gesammelt. Ein Aliquot der in das untergeordnete Probenröhrchen transferierten Urinprobe wird in das NeuMoDx System geladen. Das NeuMoDx System vermischt ein Aliquot der Urinprobe mit dem NeuMoDx Lysis Buffer 2 und den Extraktionsreagenzien, um mit der Verarbeitung zu beginnen. Das NeuMoDx System automatisiert und integriert die DNA-Extraktion und -Konzentration, die Reagenzvorbereitung und Nukleinsäure-Amplifikation und den Nachweis der Zielsequenz mittels Echtzeit-PCR. Die enthaltene Probenprozesskontrolle (SPC1) unterstützt die Überwachung auf das Vorhandensein potenzieller inhibitorischer Substanzen sowie auf Fehler des Systems, der Prozesse oder Reagenzien. Es ist kein Bedienereingriff erforderlich, sobald die Probe in das NeuMoDx System geladen ist. Im NeuMoDx System sorgt eine Kombination aus Wärme, lytischem Enzym und Extraktionsreagenzien für die Lyse der Zellen, Extraktion der DNA und Entfernung der Inhibitoren. Die freigesetzten Nukleinsäuren werden durch paramagnetische Affinitätsmikrosphären aufgenommen. Die Mikrosphären werden dann zusammen mit den gebundenen Nukleinsäuren in die NeuMoDx™ Cartridge geladen, wo die ungebundenen Nicht-DNA-Komponenten mithilfe der NeuMoDx™ WASH Solution weiter ausgewaschen werden. Zuletzt wird die gebundene DNA mit NeuMoDx™ RELEASE Solution eluiert. Das NeuMoDx System verwendet die freigesetzte DNA anschließend, um getrocknete Testreagenzien, die alle für die Amplifikation der CT- und NG-Ziele erforderlichen Elemente enthalten, zu rehydrieren. Die getrockneten PCR-Reagenzien enthalten auch die Komponenten, die zur Amplifikation eines Sequenzabschnitts der Probenprozesskontrolle benötigt werden, um gleichzeitig die Amplifikation und den Nachweis von (beiden) Ziel- und Kontroll-DNA-Sequenzen zu ermöglichen Nach der Rekonstruktion der PCR-Reagenzien dispensiert das NeuMoDx System die vorbereitete PCR-fertige Mischung in eine PCR-Kammer (pro Probe) der NeuMoDx Cartridge. Die Amplifikation und Detektion der Kontroll- und Ziel-DNA-Sequenzen erfolgen (wenn vorhanden) in der PCR-Kammer. Die NeuMoDx Cartridge, einschließlich PCR-Kammer, ist dafür konzipiert, das Amplifikat nach Echtzeit-PCR zu enthalten und damit im Wesentlichen das Kontaminationsrisiko nach Amplifikation zu beseitigen.

Die amplifizierten Ziele werden in Echtzeit anhand von Hydrolysesonden-Chemie (oft als TaqMan® Chemie bezeichnet) nachgewiesen. Fluorogene Oligonukleotidsondenmoleküle erkennen dabei spezifisch die Amplifikate der jeweiligen Zielmoleküle.

TaqMan® Sonden bestehen aus einem Fluorophor, der kovalent an das 5’-Ende der Oligonukleotidsonde gebunden ist, und einem Quencher am 3’-Ende (Abbildung 1). Bei intakter Sonde führt die Nähe des Fluorophors zum Quencher dazu, dass das Quencher-Molekül die Fluoreszenz des Fluorophors durch Förster-Resonanzenergietransfer (Förster Resonance Energy Transfer, FRET) unterdrückt.

TaqMan® Sonden sind dafür konzipiert, sich in einer durch einen bestimmten Satz an Primern amplifizierten DNA-Region anzulagern. Während die Taq-DNA-Polymerase den Primer verlängert und den neuen Strang synthetisiert, baut die 5' bis 3' Exonuklease-Aktivität der Taq-DNA-Polymerase die Sonde ab, die sich an das Template angelagert hat. Durch Abbau der Sonde wird der Fluorophor freigesetzt, und der Abstand zwischen Fluorophor und Quencher vergrößert sich. Dadurch verschwindet der Löscheffekt durch FRET und die Fluoreszenz erhöht sich.

Die TaqMan® Sonde ist am 5’-Ende mit einem Fluorophor (Anregung: 490 nm und Emission: 521 nm) und am 3’-Ende mit einem dunklen Quencher markiert, um die NG-DNA nachzuweisen. Eine TaqMan® Sonde ist am 5’-Ende mit dem Fluorophor (Anregung: 590 nm und Emission: 610 nm) und am 3’-Ende mit einem dunklen Quencher markiert, um CT-DNA nachzuweisen. Für die Detektion der Probenprozesskontrolle wird die TaqMan® Sonde mit einem alternativen Fluoreszenzfarbstoff (Anregung: 535 nm und Emission: 556 nm) am 5’-Ende und einem dunklen Quencher am 3’-Ende gekennzeichnet. Das NeuMoDx System überwacht das von den TaqMan® Sonden am Ende jedes Amplifikationszyklus abgegebene Fluoreszenzsignal. Nach Abschluss der Amplifikation analysiert das NeuMoDx System die Daten und meldet ein qualitatives Endergebnis (POSITIVE (POSITIV)/NEGATIVE (NEGATIV)/INDETERMINATE UNBESTIMMT/UNRESOLVED (OFFEN)).

Abbildung 1: Wirkmechanismus der TaqMan® Chemie

Fluoreszenz

Sondenverschiebung und Spaltung

Fluoreszenz

PCR-Produkte Spaltungsprodukte

Ergebnis

Forward-PCR-Primer

Fluorophor Quencher

Polymerisation

Amplifikations-Assay

Reverse-PCR-Primer

TaqMan-Sonde

https://en.wikipedia.org/wiki/Covalent_bond

https://en.wikipedia.org/wiki/Oligonucleotide

https://en.wikipedia.org/wiki/Förster_resonance_energy_transfer

https://en.wikipedia.org/wiki/Förster_resonance_energy_transfer

https://en.wikipedia.org/wiki/Taq_polymerase

https://en.wikipedia.org/wiki/Taq_polymerase

https://en.wikipedia.org/wiki/Primer_(molecular_biology)

https://en.wikipedia.org/wiki/Exonuclease


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REAGENZIEN/VERBRAUCHSMATERIALIEN

Bereitgestelltes Material

REF Inhalt Tests pro Einheit Tests pro Karton

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NeuMoDx™ CTNG Test Strip Getrocknete Echtzeit-PCR-Reagenzien, die die CTNG-spezifischen TaqMan® Sonden und Primer zusammen mit der für die Probenprozesskontrolle spezifischen TaqMan® Sonden und Primer enthalten.

16 96

Benötigte aber nicht im Lieferumfang enthaltene NeuMoDx™ Reagenzien und Verbrauchsmaterialien

REF Inhalt

100200 NeuMoDx™ Extraction Plate Getrocknete paramagnetische Affinitätsmikrosphären, lytisches Enzym und Probenprozesskontrollen

400500 NeuMoDx™ Lysis Buffer 2

400100 NeuMoDx™ WASH Solution

400200 NeuMoDx™ RELEASE Solution

100100 NeuMoDx™ Cartridge

235903 Hamilton CO-RE Spitzen (300 µl) mit Filtern (erhältlich bei NeuMoDx oder Hamilton)

235905 Hamilton CO-RE Spitzen (1000 µl) mit Filtern (erhältlich bei NeuMoDx oder Hamilton)

Sonstige erforderliche, jedoch nicht bereitgestellte Ausrüstung und Verbrauchsmaterialien

NeuMoDx™ 288 Molecular System [REF 500100] oder NeuMoDx™ 96 Molecular System [REF 500200]

WARNHINWEISE UND VORSICHTSMASSNAHMEN

• Dieser Test ist ausschließlich zur Verwendung in der In-vitro-Diagnostik mit NeuMoDx Systems bestimmt.

• Verbrauchsmaterialien oder Reagenzien nach dem aufgelisteten Verfallsdatum nicht mehr verwenden.

• Reagenzien nicht verwenden, wenn das Sicherheitssiegel aufgebrochen oder die Verpackung bei Ankunft beschädigt ist.

• Verbrauchsmaterialien oder Reagenzien nicht verwenden, wenn der Schutzbeutel bei der Ankunft geöffnet oder beschädigt ist.

• In Behältern, die Konservierungsstoffe enthalten, gesammelten Urin nicht verwenden. Der NeuMoDx CTNG Assay wurde nicht für di e Verwendung mit Konservierungsstoffen validiert.

• Das Mindestprobenvolumen beträgt 1 ml unverdünnter Urin; Mengen von weniger als 1 ml können zu einem Fehler „Menge nicht ausreichend“ führen.

• Die Durchführung eines CTNG-Tests mit Urinproben, die älter als 7 Tage sind, kann bei der Verwendung mit dem NeuMoDx CTNG Test Strip zu ungültigen oder fehlerhaften Ergebnissen führen.

• Mikrobielle und Desoxyribonuklease-(DNase-)Kontaminierung der Reagenzien vermeiden. Es wird die Verwendung steriler DNase-freier Einwegtransferpipetten empfohlen. Für jede Probe eine neue Pipette verwenden.

• Zur Vermeidung von Kontaminierung NeuMoDx Cartridge nach der Amplifikation weder handhaben noch beschädigen. NeuMoDx Cartridges unter keinen Umständen aus Behältern für biogefährlichen Abfall nehmen. Die NeuMoDx Cartridge ist dafür konzipiert , Kontaminierung zu verhindern.

• Falls PCR-Tests mit offenen Röhrchen ebenfalls vom Labor durchgeführt werden, muss sorgfältig darauf geachtet werden, dass der NeuMoDx CTNG Test Strip, die für die Tests erforderlichen zusätzlichen Verbrauchsmaterialien und Reagenzien, persönliche Schutzausrüstung wie Handschuhe und Laborkittel sowie das NeuMoDx System nicht kontaminiert werden.

• Bei der Handhabung von NeuMoDx Reagenzien und Verbrauchsmaterialien sollten puderfreie Nitrilhandschuhe getragen werden. Es sollte sorgfältig darauf geachtet werden, dass die obere Fläche der NeuMoDx Cartridge, die mit Folie versiegelte Oberfläche des NeuMoDx CTNG Test Strip oder die NeuMoDx Extraction Plate oder die obere Fläche des NeuMoDx Lysis Buffer 2 nicht berührt wird; bei der Handhabung von Verbrauchsmaterialien und Reagenzien sollten nur die Seitenflächen berührt werden.

• Nach der Durchführung des Tests Hände gründlich waschen.

• Nicht mit dem Mund pipettieren. In Bereichen, in denen Proben oder Kit-Reagenzien verarbeitet werden, nicht rauchen, trinken oder essen.

• Proben sind immer wie infektiöses Material und entsprechend den sicheren Laborverfahren zu behandeln (beschrieben in Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories17 und im CLSI-Dokument M29-A3).

• Nicht verwendete Reagenzien und Abfall entsprechend den nationalen, bundesstaatlichen, regionalen, kommunalen und lokalen Vorschriften entsorgen.


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LAGERUNG, HANDHABUNG UND STABILITÄT VON PRODUKTEN

• Für jedes Reagenz werden Sicherheitsdatenblätter (Safety Data Sheets, SDS) bereitgestellt.

• Der NeuMoDx CTNG Test Strip wurde nur mit weiblichen und männlichen unverdünnten Urinproben getestet. Die Leistung wurde mit

anderen Proben als den unter Entnahme und Lagerung von Proben angegebenen Proben nicht bewertet.

• Entnommene Proben sollten während des Transports bei 2 bis 30 °C gehalten werden.

• Urinproben sollten vor den Tests zwischen 2 und 8 °C nicht länger als 7 Tage und bei Raumtemperatur maximal 24 Stunden lang g elagert werden.

• Die NeuMoDx CTNG Test Strips sind in der Primärverpackung bei Lagerung zwischen 18 und 23 °C bis zum angegebenen Verfallsdatum stabil.

• Verbrauchsmaterialien und Reagenzien nach dem angegebenen Verfallsdatum nicht mehr verwenden.

• Testprodukte nicht verwenden, wenn die primäre oder sekundäre Verpackung visuell sichtbar beeinträchtigt wurde.

• Ein neuer, in das NeuMoDx System geladener NeuMoDx CTNG Test Strip ist 14 Tage lang stabil; die NeuMoDx System Software fordert zur Entfernung der Teststreifen auf, die im Instrument länger als der zulässige Systemstabilitätszeitraum für die Verwendung geöffnet waren, und es müssen neue NeuMoDx CTNG Test Strips geöffnet und in das NeuMoDx System geladen werden.

GEBRAUCHSANWEISUNG

Probennahme/Transport

1. Der Urin der ersten Entnahme (empfohlen von den CDC16) sollte in einem Urinprobenbecher ohne Konservierungsstoffe gesammelt werden. Wenn möglich sollte der Patient mindestens 1 Stunde vor der Probennahme nicht urinieren.

2. Wenn Proben nicht innerhalb von 24 Stunden getestet werden, können Sie vor den Tests zwischen 2 und 8 °C bis zu 7 Tage lang g elagert werden.

Testvorbereitung

1. Proben-Barcodeetikett auf einem mit dem NeuMoDx System kompatiblen Probenröhrchen anbringen.

2. Urinprobe im Elternbehälter vorsichtig wirbeln, um eine gleichmäßige Verteilung zu erreichen.

3. Mit einer Transferpipette ≥ 1 ml Urin in das mit Barcode versehene, mit dem NeuMoDx System kompatible Probenr öhrchen transferieren. Für jede Probe eine andere Transferpipette verwenden. Das Tochterprobenröhrchen muss auf der Grundlage des für die Verarbeitung verwendeten Probenröhrchenträgers den folgenden, mit dem NeuMoDx System kompatiblen Spezifikationen entsprechen.

• 32-Röhrchenträger: Durchmesser zwischen 11 mm und 14 mm und Höhe zwischen 60 mm und 120 mm

• 24-Röhrchenträger: Durchmesser zwischen 14,5 mm und 18 mm und Höhe zwischen 60 mm und 120 mm

Betrieb von NeuMoDx System Detaillierte Anleitungen sind den Benutzerhandbüchern für das NeuMoDx™ 288 und 96 Molecular System, Teilenr. 40600226 bzw. 40600224 zu entnehmen.

1. Einen oder mehrere NeuMoDx-Teststreifenträger mit NeuMoDx CTNG Test Strip(s) auffüllen und Touchscreen verwenden, um den (die) Teststreifenträger in das NeuMoDx System zu laden.

2. Wenn die NeuMoDx System Software dazu auffordert, die erforderlichen Verbrauchsmaterialien in die Verbrauchsmaterialträger des NeuMoDx System setzen, und den Touchscreen verwenden, um die Träger in das NeuMoDx System zu laden.

3. Wenn die NeuMoDx System Software dazu auffordert, NeuMoDx WASH Solution und NeuMoDx RELEASE Solution ersetzen, sowie Priming-Abfallbehälter bzw. Behälter für biogefährlichen Abfall leeren.

4. Probenröhrchen in einen Standard-32-Röhrchen- oder 24-Röhrchenträger laden und sicherstellen, dass die Kappen von allen Probenröhrchen entfernt sind.

5. Probenröhrchenträger auf das Autoloader-Regal legen und Touchscreen verwenden, um die Träger in das NeuMoDx System zu laden. Dadurch wird die Verarbeitung der für die Tests geladenen Probe(n) eingeleitet.

ANWENDUNGSEINSCHRÄNKUNGEN

1. Der NeuMoDx CTNG Test Strip kann nur in NeuMoDx Systems verwendet werden.

2. Die Leistung des NeuMoDx CTNG Test Strip wurde mit männlichen und weiblichen Urinproben festgestellt.

3. Die Verwendung des NeuMoDx CTNG Test Strip mit anderen klinischen Quellen wurde nicht bewertet und die Leistungsmerkmale dieses Tests sind für andere Probentypen unbekannt.

4. Da der CT- und NG-Nachweis von der Anzahl der in der Probe vorhandenen Organismen abhängig ist, hängen zuverlässige Ergebnisse von der sachgemäßen Entnahme, Handhabung und Lagerung der Probe ab.


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5. Eine unsachgemäße Probennahme, Handhabung, Lagerung, technische Fehler oder eine Verwechslung von Proben könnte zu fehlerhaften Testergebnissen führen. Darüber hinaus können falsch negative Ergebnisse auftreten, weil die Anzahl der Organismen in der Pro be unter der analytischen Sensitivität des Tests liegt.

6. Tests dürfen ausschließlich von Personal durchgeführt werden, das in der Anwendung des NeuMoDx System geschult ist.

7. Wenn die Probenprozesskontrolle nicht amplifiziert und das Ergebnis des NeuMoDx CTNG Assay Negative (Negativ) ist, wird ein ungültiges Ergebnis (Indeterminate (Unbestimmt) oder Unresolved (Offen) gemeldet, und der Test sollte wiederholt werden.

8. Ein positives Testergebnis gibt nicht unbedingt das Vorhandensein lebensfähiger Organismen an. Es lässt jedoch die Vermutung des Vorhandenseins von CT- und/oder NG-DNA zu.

9. Auch wenn keine NG-Stämme/-Isolate ohne Opazitätsgene bekannt sind, kann das Auftreten eines Stamms dieser Art bei Verwendung des NeuMoDx CTNG Test Strip zu einem fehlerhaften Ergebnis führen.

10. Der NeuMoDx CTNG Test enthält sowohl ein Genom- als auch Plasmidziel (kryptisches Plasmid) für CT, um die genaue Detektion aller Stämme sicherzustellen. Es kann jedoch ein fehlerhaftes Ergebnis auftreten, wenn die CT-Stämme/-Isolate kein kryptisches Plasmid und Porinprotein-Gen im Genom aufweisen.

11. Mutationen in Primer-/Sondenbindungsregionen können den Nachweis mit dem NeuMoDx CTNG Assay beeinträchtigen.

12. Die Ergebnisse aus dem NeuMoDx CTNG Assay sollten als Ergänzung zu den klinischen Feststellungen und sonstigen, dem Arzt verfügbaren Informationen verwendet werden. Der Test dient nicht dazu, Träger des CT- und/oder NG-DNA von den Trägern mit Chlamydien- und/oder Gonokokkenerkrankung zu differenzieren.

13. Die Testergebnisse können durch eine gleichzeitige antibiotische Therapie beeinträchtigt werden, da die CT- und NG-DNA nach einer antimikrobiellen Therapie möglicherweise weiterhin nachgewiesen wird.

14. Um die Kontaminierung von Proben zu vermeiden, werden die guten Laborpraktiken, einschließlich Wechseln der Handschuhe zwischen der Handhabung von Patientenproben, empfohlen.

ERGEBNISSE

NeuMoDx Molecular Systems Die verfügbaren Ergebnisse können in der Registerkarte „Results“ (Ergebnisse) im Fenster Results (Ergebnisse) auf dem Touchscreen des NeuMoDx System angezeigt oder ausgedruckt werden. Ein Testergebnis wird auf der Grundlage des Amplifikationsstatus des Ziels und der Probenprozesskontrolle (SPC1) Positive (Positiv), Negative (Negativ), Indeterminate (IND) (Unbestimmt) oder Unresolved (UNR) (Offen) genannt.

Die Kriterien für ein positives oder negatives Ergebnis sind in der NeuMoDx System CTNG Assay-Definitionsdatei (Assay Definition File, ADF), wie auf dem System von NeuMoDx installiert, angegeben. Die Ct-Untergrenze ist erforderlich, um die Gültigkeit der Verarbeitungsparameter der Ergebniss e sicherzustellen.

Tabelle 1. Testalgorithmus des NeuMoDx CTNG Assay

ERGEBNIS CT- und NG-ZIELE PROZESSKONTROLLE (SPC1)

Positive (Positiv) [2 ≤ Ct < 9 AND (UND) EPR ≥ 2 AND (UND) EP ≥ 1000]

OR (ODER) [9 ≤ Ct ≤ 42 AND (UND) EP ≥ 1000]

k. A.

Negative (Negativ)

k. A. OR (ODER) [2 ≤ Ct < 9 AND (UND) EPR < 2] OR (ODER)

[9 ≤ Ct ≤ 42 AND (UND) EP < 1000] OR (ODER) Ct > 42

Gültig

[28 ≤ Ct ≤ 34 AND (UND) EP ≥ 2000]

Indeterminate (Unbestimmt)

Not Amplified AND System Errors Noted (Nicht amplifiziert UND Systemfehler festgestellt)

Unresolved (Offen) Not Amplified AND No System Errors Noted (Nicht amplifiziert UND keine Systemfehler festgestellt)

EP = End Point Fluorescence (Endpunktfluoreszenz) (nach Basislinien-Korrektur); EPR = End Point Fluorescence Ratio

(Endpunktfluoreszenzverhältnis); Ct = Cycle threshold (Zyklusschwellenwert)

Ungültige Ergebnisse Wenn ein im NeuMoDx System durchgeführter NeuMoDx CTNG Assay kein gültiges Ergebnis erzeugt, wird dies auf der Grundlage der Art des aufgetretenen Fehlers entweder als Indeterminate (Unbestimmt) oder als Unresolved (Offen) gemeldet. Der Test sollte wiederholt werden, um ein gültiges Ergebnis zu erzielen.

Ein Ergebnis Indeterminate (Unbestimmt) wird gemeldet, wenn während der Probenverarbeitung ein NeuMoDx-Systemfehler erkannt wird.

Ein Unresolved (Offenes) Ergebnis wird gemeldet, wenn kein Ziel nachgewiesen wird und keine Amplifikation der Probenproz esskontrolle besteht, was einen möglichen Reagenzfehler oder das Vorhandensein von Inhibitoren angibt.


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Qualitätskontrolle Die lokalen Vorschriften legen in der Regel fest, dass das Labor für die Kontrollverfahren verantwortlich ist, die die Richti gkeit und Präzision des kompletten Analyseprozesses überwachen, und unter Verwendung bestätigter Leistungsspezifikationen für ein unverändertes, zugelassenes Testsystem Anzahl, Typ und Häufigkeit der Testkontrollmaterialien feststellen muss.

1. Externe Kontrollmaterialien (Assay) werden von NeuMoDx Molecular, Inc. nicht bereitgestellt. Vom Labor müssen geeignete Kontr ollen ausgewählt und validiert werden.

Empfohlen: 10 µL AcroMetrix™ CTNG Positive Control (Thermo Fisher Scientific REF 967146) verdünnt in 1 ml CTNG -negativem Urin oder eine im Handel erhältliche Urinchemiekontrolle.

2. Wenn externe Kontrollen erforderlich sind, Röhrchen mit den folgenden Barcodes etikettieren (1 PC und 1 NC per System):

Probe Barcode-ID

Positive Assaykontrolle (Positive Assay Control, PC) ST1PC

Negative Assaykontrolle (Negative Assay Control, NC) ST1NC

3. Zu den einzelnen Kontrollröhrchen ST1PC und ST1NC 1 ml negativen Urin oder Urinkontrolle hinzufügen.

4. AcroMetrix™ CT/NG Control vorsichtig vortexen und 10 µL zum Positivkontrollröhrchen (ST1PC) hinzufügen. HINWEIS: Kein Ziel zum Röhrchen mit dem Etikett ST1NC hinzufügen.

5. Die etikettierten Kontrollen in einen Probenröhrchenträger einfügen und Touchscreen verwenden, um den Träger vom Autoloader-Regal in das NeuMoDx System zu laden. Das NeuMoDx System erkennt die Barcodes und startet die Verarbeitung der Kontrollen, sofern für die Tests erforderliche, adäquate Reagenzien oder Verbrauchsmaterialien verfügbar sind.

6. Die für die Probenprozesskontrolle 1 (SPC1) spezifischen Primer und Sonden sind in jedem NeuMoDx CTNG Test Strip enthalten. Diese Probenprozesskontrolle ermöglicht dem NeuMoDx System, die Effizienz des DNA-Extraktions- und PCR-Amplifikationsprozesses zu überwachen.

7. Wird ein Testergebnis für eine Negativkontrollprobe als „Positive“ (Positiv) gemeldet, ist dies ein Hinweis auf ein Problem m it Probenkontaminierung. Siehe Tipps zur Fehlerbehebung im Benutzerhandbuch für das NeuMoDx™ 288/96 Molecular System.

8. Ein für eine Positivkontrollprobe gemeldetes negatives Ergebnis kann angeben, dass ein Problem im Zusammenhang mit dem Reagenz oder dem NeuMoDx System besteht. Siehe Tipps zur Fehlerbehebung im Benutzerhandbuch für das NeuMoDx™ 288/96 Molecular System.

LEISTUNGSMERKMALE

Klinische Leistung Die klinischen Leistungsmerkmale des NeuMoDx CTNG Assay wurden im Rahmen einer Vergleichsstudie mit einer internen retrospektiven Methode mit Resturinproben von drei (3) geografisch unterschiedlichen Laborstandorten bestimmt.

Die Resturinproben wurden von klinischen Labors anonymisiert und erhielten eine eindeutige ID-Nummer, wodurch eine vertrauliche Liste erstellt wurde, die die Patienten-ID mit den zu Studienzwecken getesteten anonymisierten Proben verknüpfte. Es wurden 388 von drei klinischen Labors bereitgestellte, vorab gescreente Proben getestet. Von den 388 Proben waren von den klinischen Labors 90 Proben als CT -positiv und 53 Proben als NG-positiv identifiziert. Einige Proben wurden für sowohl CT als auch NG positiv getestet, was eine duale oder Ko-Infektion angibt. Der Teststatus dieser Proben wurde vom Betreiber zurückgehalten, um eine „einfach verblindete Studie“ zu implementieren. Die von den spezifischen, FDA- und CE-zugelassenen, rechtmäßig vermarkteten und von den Labors für Tests im Rahmen der standardmäßigen Behandlung verwendeten Molekulargeräten (Roche cobas® 4800 CT/NG Test und Hologic® Aptima Combo 2® Assay für CT/NG) gemeldeten Ergebnisse wurden ver wendet, um die Methodenvergleichsanalyse durchzuführen.

Die Ergebnisse des NeuMoDx CTNG Assay boten eine klinische Sensitivität von 96,7 % beim CT-Ziel und von 98,1 % beim NG-Ziel, wobei beide bei 95%-KI gemeldet wurden. Die klinische Spezifität aus der Studie wurde bei sowohl CT als auch NG als 99,7 % bestimmt, a uch hier unter Verwendung des 95%-KI. Die in den nachstehenden Tabellen 2A und 2B gezeigte untere und obere Grenze des 95%-Konfidenzintervalls (KI) wurde unter Verwendung des Wilson-Verfahrens mit Kontinuitätskorrektur berechnet.


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Tabelle 2A: Zusammenfassung der klinischen Leistung – Nachweis von C. trachomatis mit dem NeuMoDx 288 System und dem NeuMoDx CTNG Test Strip

CT

FDA-/-CE-zugelassenes Referenztestergebnis

POS NEG Insgesamt

NeuMoDx

CTNG Assay

POS 87 1 88

NEG 3 297 300

Insgesamt 90 298 388

Klinische Sensitivität (CT) = 96,7 % (89,9–99,1)

Klinische Spezifität (CT) = 99,7 % (97,8–99,9)

Tabelle 2B: Zusammenfassung der klinischen Leistung – Nachweis von N. gonorrhoeae mit dem NeuMoDx 288 System und dem NeuMoDx CTNG Test Strip

NG

FDA-/-CE-zugelassenes Referenztestergebnis

POS NEG Insgesamt

NeuMoDx

CTNG Assay

POS 51 1 52

NEG 1 335 336

Insgesamt 52 336 388

Klinische Sensitivität (NG) = 98,1% (88,4–99,9)

Klinische Spezifität (NG) = 99,7 % (98,1–99,9)

Mit einer kleineren Zahl an klinischen Resturinproben wurden zusätzliche Tests auf dem NeuMoDx 96 Molecular System durchgeführt. Wie bei den Ergebnissen mit dem NeuMoDx 288 Molecular System wurden die Ergebnisse des NeuMoDx 96 Molecular System mit Ergebnissen von Tests mit FDA-Zulassung und CE-Kennzeichnung verglichen. Diese Tests werden von Quelllabors im Rahmen der medizinischen Standardversorgung verwendet. Die 208 gültigen Ergebnisse mit 95%-Konfidenzintervallen werden in Tabelle 2C weiter unten zusammengefasst.

Tabelle 2C: Zusammenfassung der klinischen Leistung – NeuMoDx 96

Nachweis von C. trachomatis und N. gonorrhoeae mit NeuMoDx CTNG Test Strips

Zusammenfassung der Leistungen (Ergebnisse des NeuMoDx CTNG Assays auf dem NeuMoDx 96 Molecular System im Vergleich zu den Ergebnissen von

FDA-/CE-zugelassenen Tests)

CT NG

Sensitivität: 92,8 % (83,2–97,3) Sensitivität: 92,8 % (83,2–97,3)

Spezifität: 99,3 % (95,4–99,9) Spezifität: 99,3 % (95,4–99,9)

Auf Grundlage der Population und der NeuMoDx CTNG Assay Leistung auf dem NeuMoDx 288 Molecular System und der reduzierten Anzahl der getesteten klinischen Proben auf dem NeuMoDx 96 Molecular System sollte die erwartete klinische Sensitivität innerhalb des zweiseitigen 95%-KI von 86,9 %–100 % für CT bzw. 90,6 %–100 % für NG liegen. Die erwartete klinische Spezifität liegt bei beiden Zielen bei einem Wert innerhalb des zweiseitigen 95%-KI von 98,6 %–100 %. Die klinische Leistung des NeuMoDx CTNG Assay bei den zusätzlichen Tests auf dem NeuMoDx 96 Molecular System lag innerhalb der erwarteten/vorhergesagten Werte (siehe Zusammenfassung in der Tabelle weiter oben).

Analytische Sensitivität Die Nachweisgrenze (LoD) des NeuMoDx CTNG Assay wurde mit klinisch negativem Urin bestimmt, der entweder mit Acrometrix™ CT Kontrolle (Serovar D) oder AcroMetrix™ NG Kontrolle in den in den nachfolgenden Tabellen angegebenen Konzentrationen versetzt wurde. Die Tests wurden mit 10 Replikaten bei jeder Höhe an drei Tagen in zwei NeuMoDx 288 Molecular Systems unter Verwendung von 3 Reagenzienlosen (20 Replikate/Los und insgesamt 60) durchgeführt. Die Nachweisraten sind in Tabelle 3A und 3B dargestellt. Die CT-Nachweisgrenze wurde auf der Grundlage einer Probit-Analyse als 4,5 EB/ml festgestellt und NG-LoD betrug 0,22 Zellen/ml. Mit einer kleineren Zahl an klinischen Resturinproben wurden zusätzliche Tests auf dem NeuMoDx 96 Molecular System durchgeführt. Die Probit-Analyse ergab eine LoD von 7 EB/ml (CT) bzw. 0,3 Zellen/ml (NG).

Laut Interferenzstudie, die weiter unten dargestellt wird, liegt die Nachweisgrenze des NeuMoDx CTNG Assay bei 6 EB/ml (CT) bzw. 5 Zellen/ml (NG).


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Tabelle 3A. Positivnachweisrate für CT mit NeuMoDx CTNG Test Strips im Rahmen der LoD-Studie

CT (EB/ml)

EB/ml

n # Positiv % Positiv

LoD (Probit)

32 60 60 100 %

4,5 EB/ml

16 60 60 100 %

8 60 60 100 %

4 59 54 91,5 %

2 60 38 63,3 %

0 60 0 0 %

Die Daten in den obigen Tabellen wurden einer Probitanalyse unterzogen, um die LoD des CT-Ziels als 4,5 EB/ml und die LoD des NG-Ziels als 0,22 Zellen/ml zu bestimmen.

Abbildung 2: Probit-Analyse zur Bestimmung der LoD des NeuMoDx CTNG Assay bei Verwendung von NeuMoDx CTNG Test Strips.

Nachweis von Varianten Die analytische Sensitivität des NeuMoDx CTNG Assay wurde mit 14 verschiedenen CT-Serovars und 11 klinischen NG-Isolaten weitergehend bestätigt [Tabelle 4]. Mit dem NeuMoDx CTNG Assay können alle CT-Serovars und NG-Isolate bei ~1X oder ~2X LoD nachgewiesen werden. Nahe der LoD wurden mindestens 95 % Detektion erreicht und bei sowohl CT- als auch NG-Varianten wurden nahe von 2 X LoD 100 % Detektion festgestellt, was keinen signifikanten Unterschied bei der Detektion der entsprechenden CT-Serovars und einen repräsentativen Satz von NG-Isolaten angibt.

Tabelle 3B Positivnachweisrate für NG mit NeuMoDx

CTNG Test Strips im Rahmen der LoD-Studie

NG (Zellen/ml)

n # Positiv

% Positiv

LoD (Probit)

10 58 58 100 %

0,22 Zellen/ml

5 60 60 100 %

1 60 60 100 %

0,3 59 58 98,3 %

0,1 59 37 63,8 %

0 59 0 0 %

LoD = 4,5 EB/ml [95%-KI: 3,8-5,2 EB/ml] LoD = 0,22 Zellen/ml [95%-KI: 0,22-0,22 Zellen/ml]

Kurvenanpassung Kurvenanpassung

Experimental Serie 2

Berechneter LoD Berechneter LoD

Log[KONZ/ml] Log[KONZ/ml]

SEN

SITI

VIT

ÄT

SEN

SITI

VIT

ÄT

1,2

0,8

0,6

0,4

0,2

-2,5 -1,5 -0,5 0,5 1,5 -2,5 -1,5 -0,5 0,5 1,5

1,2

0,8

0,6

0,4

0,2

LoD CT-CEIVD LoD NG-CEIVD


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Tabelle 4. Getestete CTNG-Serotypen

CT-Serotyp Detektionsrate (%) Klinisches NG-Isolat

[ATCC-Nr.] Detektionsrate (%)

6 EB/ml 12 EB/ml 0,25 Zellen/ml 0,5 Zellen/ml

A

k. A.

100 49981 100 100

B 100 31426 100 100

Ba 100 31407 100 100

C 100 27633

k. A.

100

LGV I 100 9793 100

LGV II 100 43070 100

LGV III 100 51109 100

E 100 100 35542 100

F 95 100 35541 100

G 95 100 49498 100

H 100 100 49926 100

I 95 100

J 100 100

K 100 100

Analytische Spezifität Es wurden insgesamt 113 Kulturisolate oder DNA aus Organismen, die mit CT oder NG potenziell kohabitieren oder CT oder NG phylogenetisch potenziell ähneln, auf mögliche Kreuzreaktivität bei Tests mit dem NeuMoDx CTNG Test Strip bewertet. Die Organismen wurden in Pools mit jeweils 5 bis 6 Organismen vorbereitet und bei hoher Konzentration getestet. Die meisten Organismen waren, außer einigen Organismen aus kommerziellen Quellen, bei denen eine hohe DNA-Kopienanzahl (10 ng/ml) in CTNG-negativem Urin versetzt waren, mit etwa 1E6 CFU/ml in CTNG-negativem Urin versetzt. Es wurde keine Kreuzreaktivität mit den in dieser Studie getesteten Pathogenen festgestellt. Die Liste der getesteten Organismen ist in Tabelle 5 auf der folgenden Seite enthalten.


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Tabelle 5. Liste der zur Demonstration der analytischen Spezifität verwendeten Pathogene

Bakterien Bakterien Bakterien Achromobacter xerosis Fusobacterium nucleatum Peptostreptococcus anaerobius

Acinetobacter baumannii Gardnerella vaginalis Peptostreptococcus productus

Acinetobacter calcoaceticus Gemella haemolysans Plesiomonas shigelloides

Acinetobacter Iwoffii Haemophilus ducreyi Propionibacterium acnes

Actinomyces israelii Haemophilus influenzae Proteus mirabilis

Aerococcus viridans Kingella dentrificans Proteus vulgaris

Aeromonas hydrophila Kingella kingae Providencia stuartii

Alcaligenes faecalis Klebsiella oxytoca Pseudomonoas aeruginosa

Arcanobacterium pyogenes Klebsiella pneumoniae Pseudomonas fluorescens

Bacillus subtilis Lactobacillus acidophilus Pseudomonas putida

Bacteroides fragilis Lactobacillus brevis Rahnella aquatilis

Bacteroides ureolyticus Lactobacillus jensenii Rhodospirillum rubrum

Bifidobacterium adolescentis Lactobacillus lactis Saccharomyces cerevisiae

Bifidobacterium breve Legionella pneumophila Salmonella minnesota

Brevibacterium linens Listeria monocytogenes Salmonella typhimurium

Campylobacter jejuni Micrococcus luteus Serratia marcescens

Candida albicans Moraxella catarrhalis Staphylococcus saprophyticus

Candida glabrata Moraxella lacunata Staphylococcus aureus

Candida parapsilosis Moraxella osloensis Staphylococcus epidermidis

Candida tropicalis Morganella morganii Streptococcus agalactiae

Chlamydia pneumoniae Mycobacterium smegmatis Streptococcus bovis

Chromobacterium violaceum Mycoplasma genitalium Streptococcus mitis

Citrobacter freundii Mycoplasma hominis Streptococcus mutans, Serogroup A

Clostridium perfringens Neisseria meningitidis, Serogroup A Streptococcus pneumoniae

Corynebacterium genitalium Neisseria meningitidis, Serogroup B Streptococcus pyogenes

Corynebacterium xerosis Neisseria meningitidis, Serogroup C Streptococcus salivarius

Cryptococcus neoformans Neisseria meningitidis, Serogroup D Streptococcus sanguinis

Deinococcus radiodurans Neisseria meningitidis, Serogroup Y Streptomyces griseus

Derxia gummosa Neisseria meningitidis, Serogroup W135 Trichomonas vaginalis

Eikenella corrodens Neisseria cinerea Ureaplasma urealyticum

Elizabethkingia miricola Neisseria elongata Vibrio parahaemolyticus

Enterobacter aerogenes Neisseria flavescens Weissella paramesenteroides

Enterobacter cloacae Neisseria lactamica Yersinia enterocolitica

Enterococcus avium Neisseria mucosa Viren Enterococcus faecalis Neisseria sicca Cytomegalovirus

Entercoccus faecium Neisseria subflava Herpes-simplex-Virus I

Erwinia herbicola Neisseria perflava Herpes-simplex-Virus II

Escherichia coli Neisseria polysaccharea Humanes Papillomvirus 16

Störsubstanzen - kommensale Organismen Der NeuMoDx CTNG Test Strip wurde auf Störungen bei Vorhandensein von Nicht-Ziel-Organismen (im Urogenitaltrakt kohabitierend) getestet, indem die Leistung des NeuMoDx CTNG Assay im NeuMoDx 288 Molecular System bei geringen CT- und NG-Konzentrationen bewertet wurde. Für diese Studie wurde das gleiche Panel mit 113 Organismen [Tabelle 5] verwendet, das für die Bewertung der Kreuzreaktivität verwendet wurde. Die Organismen wurden in Gruppen mit 5–6 in CTNG-negativen Urinproben gepoolt und mit 18 EB/ml CT-gereinigten Elementarkörpern und 0,75 Zellen/ml NG-Zellkontrolle versetzt. Mit Ausnahme der Detektion von NG-Zielen in geringer Höhe (3 X LoD), die bei Vorhandensein von CT-Ziel in großer Höhe (> 1,0 x 10E6 EB/ml) beeinträchtigt wurden, wurden keine Wechselwirkungen mit kommensalen Organismen festgestellt. In diesem Fall beeinträchtigte ein hoher CT-Wert die NG-Detektion bei Konzentrationen unter 20 X LoD (~5 Zellen/ml) und daher würde die Nachweisgrenze bei Vorhandensein eines hohen CT-Zielhintergrundwerts 5 Zellen/ml betragen. Störsubstanzen - endogene und exogene Substanzen in klinischen CTNG-Proben Die folgenden, potenziell störenden Anteile wurden einzeln in Urinproben versetzt [Tabelle 6]: Blut (7 %), Urinanalyten, Prot ein, Glukose, Urobilinogen, pH 4 (sauer), pH 9 (alkalisch), Leukozyten (1,0 x 10E6 Zellen/ml). Alle wurden auf eine potenzielle Störung bei Nichtvorhandensein und Vorhandensein von CT und NG (bei 3 X und 10 X LoD) getestet. Es wurde keine Wechselwirkung mit den getesteten Substanzen festgestellt.


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Tabelle 6. Getestete exogene und endogene Störwirkstoffe

Störsubstanz

End

oge

n

Bilirubin, ~ 10 mg/dL

Glukose, 1000 mg/dL

pH 4

pH 9

Protein (Albumin), 50 mg/ml

Blut, 7 %

Leukozyten (PBMC), 1E6 Zellen/ml

Exo

gen

*Talkumpuder, 0,1 %

* Zunächst haben 2 der 3 bei 3 x LoD getesteten NG-Proben bei Vorhandensein von Talkumpuder nicht amplifiziert, beim erneuten Test

jedoch wie erwartet funktioniert. Laborinterne Präzision Die laborinterne Präzision des NeuMoDx CTNG Assays wurde durch Befolgung eines kontrollierten Testplans über 12 nicht aufeinander folgende Tage mit drei verschiedenen Instrumenten und mehreren Anwendern geprüft. Jedes Instrument (NeuMoDx™ 288 Molecular System) führte zwei Probensets pro Tag durch, wobei zwischen Bedienern und zwei verschiedenen Reagenzienlosen, die von allen Instrumenten gemeinsam genutzt wurden, gewechselt wurde. Ein Probenset war definiert als drei Replikate, die auf alle der fünf verschiedenen Werte (True Negative (Tatsächlich-Negativ), Low Negative (Niedrig-Negativ), Moderate Negative (Moderat-Negativ), Low Positive (Niedrig-Positiv) und Moderate Positive (Moderat-Positiv)) mit insgesamt 15 Proben pro Set pro System getestet wurden. Die Proben wurden unter Verwendung von gepoolten und gescreenten Urinproben gesunder Spender (mit negativem Screening gemäß WKI-3122) vorbereitet. In dieser Studie wurden insgesamt 72 Probensets (1080 Tests) ausgeführt. Die Ergebnisse sind in Tabelle 7–9 dargestellt.

Tabelle 7. Zusammenfassung Laborinterne Präzision

Probe

Getestete Höhe

Replikate/ Satz

Proben/Tag (über 3 Systeme)

Summe Proben/12 Tage

Chlamydia trachomatis

EB/ml

Neisseria gonorrhoeae

Zellen/ml

True/Blank Negativ (TN) (Tatsächlich/Leer negativ) 0 Ziel

0 0 3 18 216

Low Negative (LN) (Niedrig-Negativ) 1:100-Verdünnung von 1 X LoD

0,06 0,0025 3 18 216

Moderate Negative (MN) (Moderat-Negativ) 1:10-Verdünnung von 1 X LoD

0,6 0,025 3 18 216

Low Positive (LP) (Niedrig-Positiv) 2,5 X LoD

15 0,625 3 18 216

Moderate Positive (MP) (Moderat-Positiv) 8 X LoD

48 2,0 3 18 216

Summe getesteter Proben 90 1080


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Tabelle 8A. CT-Ziel: Qualitative Ergebnisse aus der Studie zur laborinternen Präzision (alle Instrumente)

Probe Instrument 1 Instrument 2 Instrument 3 Gesamt

Prozent positiv Prozent positiv Prozent positiv Prozent positiv

MP 100 % (72/72) 100 % (72/72) 100 % (72/72) 100 % (216/216)

LP 100 % (72/72) 100 % (72/72) 100 % (72/72) 100 % (216/216)

MN 19,4 % (14/72) 25 % (18/72) 26,4 % (19/72) 23,6 % (51/216)

LN 1,4 % (1/72) 1,4 % (1/72) 1,4 % (1/72) 1,4 % (3/216)

TN 0 % (0/72) 0 % (0/72) 0 % (0/72) 0 % (0/216)

Tabelle 8B. NG-Ziel: Qualitative Ergebnisse aus der Studie zur laborinternen Präzision (alle Instrumente)

Probe Instrument 1 Instrument 2 Instrument 3 Gesamt

Prozent positiv Prozent positiv Prozent positiv Prozent positiv

MP 100 % (72/72) 100 % (72/72) 100 % (72/72) 100 % (216/216)

LP 100 % (72/72) 100 % (72/72) 98,6 % (71/72) 100 % (216/216)

MN 20,8 % (15/72) 23,6 % (17/72) 16,7 % (12/72) 20,3 % (44/216)

LN 0 % (0/72) 2,8 % (2/72) 0 % (0/72) 0,9 % (2/216)

TN 0 % (0/72) 0 % (0/72) 0 % (0/72) 0 % (0/216)

Tabelle 9A. CT-Ziel: Quantitative Parameteranalyse aus der laborinternen Präzision (alle Instrumente)

Probe

Instrument 1 Instrument 2 Instrument 3 Gesamt

Durchschn. Ct

Std.-Abw.

% VK*

Durchschn. Ct

Std.-Abw.

% VK

Durchschn. Ct

Std.-Abw.

% VK

Durchschn. Ct

Std.-Abw.

% VK*

MP 31,23 0,67 2,1% 31,34 0,44 1,4% 31,28 0,69 2,2%

31,28 0,61 2,0%

LP 32,52 0,62 1,9% 32,34 0,53 1,6% 32,52 0,68 2,1%

32,46 0,62 1,9%

MN

k. A. LN

TN

Tabelle 9B NG-Ziel: Quantitative Parameteranalyse aus der laborinternen Präzision (alle Instrumente)

Probe

Instrument 1 Instrument 2 Instrument 3 Gesamt

Durchschn. Ct

Std.-Abw.

% VK*

Durchschn. Ct

Std.-Abw.

% VK

Durchschn. Ct

Std.-Abw.

% VK Durchschn.

Ct Std.-Abw.

% VK*

MP 30,76 0,31 1,0% 30,83 0,3 1,0% 30,91 0,31 1,0% 30,83 0,31 1,0%

LP 31,86 0,42 1,3% 31,85 0,43 1,4% 31,95 0,65 2,0% 31,89 0,51 1,6%

MN

k. A. LN

TN


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Verschleppung und Kreuzkontamination Potenzielle Verschleppungen und Kreuzkontamination im NeuMoDx 288 Molecular System mit dem NeuMoDx CTNG Test Strip wurden im Rahmen einer Studie beurteilt. Die zweiteilige Studie bewertete zunächst die Auswirkungen auf CT- und NG-Negativproben, die mit Proben durchsetzt waren, die einen hohen Anteil an CT- und NG-Ziel enthielten. Die Positiv- und Negativproben wurden so in das NeuMoDx System geladen, dass jede Negativprobe an eine hoch positive Probe angrenzte. Im zweiten Teil dieser Studie wurden alle Negativproben sofort nach einem Lauf, bei dem alle Proben mit hoher CT- und NG-Konzentration verarbeitet worden waren, analysiert. Weder in negativen Proben, die nach Proben mit hoher Konzentration getestet wurden, noch in negativen Proben, die den Proben mit hoher CT- und NG-Konzentration direkt folgten, wurde eine Kontamination festgestellt. Dies belegt die Abwesenheit von jeglichen Verschleppungen und/oder Kreuzkontamination. Es wurden zusätzliche Tests auf dem NeuMoDx 96 Molecular System durchgeführt. Die Ergebnisse belegen die Abwesenheit jeglicher Hinweise auf Verschleppung bzw. Kreuzkontamination. Kontrolleffektivität Beim NeuMoDx 288 Molecular System wurde die Effektivität der im NeuMoDx CTNG Test Strip enthaltenen Probenprozesskontrolle ermittelt. Die Prozesskontrolle soll Fehler oder eine Hemmung von Prozessschritten aufdecken, die sich auf die Leistung des NeuMoDx CTNG Assay auswirken. Die getesteten Bedingungen sind repräsentativ für kritische Fehlschläge von Prozessschritten, die potenziell bei der Probenverarbeitung auftreten und von den Sensoren im Gerät, die die Leistung des NeuMoDx System überwachen, nicht unbedingt erkannt werden. Die Effektivität der Kontrolle wurde durch Simulation von Ausfällen verschiedener Schritte des Probenprozessflows bewertet, indem ein potenzieller Systemfehler imitiert wurde und Proben mit einem bekannten Inhibitor versetzt wurden, um die Wirkung der Minderung des ineffizienten Inhibitors auf die Detektion der Probenprozesskontrolle zu beobachten (siehe Tabelle 10). In den Fällen, in denen die Verarbeitungsfehler sich nicht negativ auf die Leistung der Probenprozesskontrolle auswirkten (NO WASH/NO WASH BLOWOUT (KEINE WASCHUNG/KEIN WASCH-BLOWOUT)), wurde der Test mit Proben mit geringem GT- und NG-Gehalt (nahe LoD) wiederholt, um zu bestätigen, dass der Prozessfehler auf die Detektion des CT- oder NG-Ziels ebenfalls KEINE negativen Auswirkungen hatte. In Tabelle 10 sind die Ergebnisse des Tests zur Prüfung der Effizienz der Kontrolle zusammengefasst.

Tabelle 10. Zusammenfassung Effektivität der Kontrolldaten

Bedingung Erwartetes Ergebnis Festgestelltes Ergebnis

Normal Processing (Normale Verarbeitung)

Negative (Negativ) Negative (Negativ)

Normal Processing + Inhibitor (Normale Verarbeitung + Inhibitor)

Unresolved (Offen) Unresolved (Offen)

No Wash Solution (Keine Waschlösung)

Unresolved (Offen) oder Negative (Negativ)

Negative (Negativ)

No Wash Blowout (Kein Wasch-Blowout)

Unresolved (Offen) oder Negative (Negativ)

Negative (Negativ)

No Release Solution (Keine Freisetzungslösung)



No PCR Master Mix Reagents (Keine PCR-Master-Mix-Reagenzien)



Probenstabilität im Gerät Die CT- und NG-Negativurinprobe wurde mit 2 verschiedenen Mengen CT- und NG-Ziel versetzt und zusammen mit einer gleichen Anzahl an Negativproben mit dem NeuMoDx CTNG Assay analysiert. Am Ende der Verarbeitung verblieben alle Positiv- und Negativprobenröhrchen insgesamt 24 Stunden lang auf der Systemarbeitsplattform Bei diesen in der Systemarbeitsplattform verbliebenen Probenröhrchen wurden 4 Stunden, 8 Stunden und 24 Stunden nach dem Zeitpunkt der ersten Tests zusätzliche Tests durchgeführt. Das erwartete Ergebnis war bei allen mit CT- oder NG-Ziel versetzten Urinproben zu allen Zeitpunkten POSITIVE (POSITIV) (für das entsprechende Ziel) und NEGATIVE (NEGATIV) (für beide Ziele) in den nicht mit Ziel versetzten Urinproben. Es wurde zu allen Zeitpunkten, einschließlich des 24-Stunden-Zeitpunkts, 100 % Übereinstimmung mit dem erwarteten Ergebnis festgestellt, was anzeigt, dass eine Stabilität von 24 Stunden im Gerät für Tests mit dem NeuMoDx CTNG Test Strip belegt wurde. Die Ergebnisse sind in Tabelle 11 unten zusammengefasst.

Tabelle 11. Zusammenfassung der Daten zur Probenstabilität im Gerät

Probenstabilität im Gerät

T0 4 Std. 8 Std. 24 Std.

% Übereinstimmung

% Übereinstimmung

% Übereinstimmung

% Übereinstimmung

NG-positiv ATCC-31426

10 Zellen/ml

100 % 100 % 100 % 100 %

20 Zellen/ml

100 % 100 % 100 % 100 %

CT-positiv ATCC_VR-879

10 EB/ml 100 % 100 % 100 % 100 %

20 EB/ml 100 % 100 % 100 % 100 %

Negative (Negativ) 100 % 100 % 100 % 100 %


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MARKENNAMEN

NeuMoDx™ ist ein Warenzeichen von NeuMoDx Molecular, Inc.

TaqMan® ist ein eingetragenes Warenzeichen von Roche Molecular Systems, Inc.

AcroMetrix™ ist ein Warenzeichen von Thermo Fisher Scientific.

cobas® ist eine eingetragenes Warenzeichen von Roche Diagnostics Operations, Inc.

Hologic® und Aptima Combo 2® sind eingetragene Warenzeichen von Hologic, Inc. und/oder ihrer Tochtergesellschaften.

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https://www.cdc.gov/std/tg2015/default.htm

https://www.cdc.gov/std/tg2015/screening-recommendations.htm


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Biologische Risiken (potenziell biogefährliches Material)

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Patent: www.neumodx.com/patents

Emergo Europe B.V. Prinsessegracht 20 2514 AP, The Hague The Netherlands

2797

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