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OFICINA DE CENTROS DE DIAGNOSTICO Y PRODUCCION

Unidad del Centro de Diagnóstico de Sanidad Animal

PRO-UCDSA/Pat-03

PROCEDIMIENTO: NECROPSIA DE ANIMALES DE LABORATORIO

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1. OBJETIVO.

Asegurar una eficiente evaluación de la presencia de lesiones anátomo patológicos compatibles con alguna enfermedad a través de la descripción del procedimiento para examinar cadáveres de animales de laboratorio tomando como modelo la necropsia del ratón.

2. ALCANCE.

Aplica a las actividades correspondientes a la necropsia de animales de laboratorio realizadas por el personal del laboratorio de Patología Animal de la UCDSA.

3. REFERENCIAS

Guide to the necropsy of the mouse (http://www.eulep.org/Necropsy_of_the Mouse/printable.php )

ITR-UCDSA/Pat –02: Registro de lecturas

REG-UCDSA/Pat-03: Cuaderno de lectura disponible

PRO-UCDSA/Pat-05: Protocolo de Necropsia. 4. DEFINICIONES.

No Aplica 5. DESCRIPCION.

http://www.eulep.org/Necropsy_of_the



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Recepción de Animal

Solicitud de Servicio / Historia

Clínica

Animal Vivo/ muerto

Método Eutanasia/pesado/Necropsia

Pesado/necropsia

Informe de Ensayo

Entrega de Resultado

5.1. Principio del método

La necropsia es el estudio sistemático de un cadáver y que se realiza para determinar la causa de muerte. El examen cuidadoso y la toma de muestras para análisis de laboratorio ayudan para determinar la causa de muerte.

5.2. Materiales

- Cartón para disección - Pinzas de disección - Pinzas de dientes de ratón - Tijeras de puntas agudas - Alfileres - Fiajador: formol bufferada

5.3. Equipos.

- Mesa de Necropsia - Cabina de bioseguridad - Equipo de aspersión



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- Balanza electrónica

5.4. Procedimiento

5.4.1. Preparación del espécimen. 5.4.1.1. El cadáver para la necropsia es registrado en el cuaderno de ingreso Nº

1 REG-UCDSA/Pat-02 indicando el estado de conservación. 5.4.1.2. Los recipientes que contengan el cadáver son abiertos en la cabina de

bioseguridad. 5.4.1.3. Se revisa la historia clínica y se determinan las horas transcurridas

entre la muerte del animal y el inicio de la necropsia.

5.4.1.4. Se realiza examen de apariencia general del cadáver.

5.4.1.5. se procede a la apertura del cadáver.

5.4.1.6. Se remueve la pared abdominal y examina in situ los órganos.

5.4.1.7. Se remueve la pared torácica y examina in situ los órganos.

5.4.1.8. Se extrae la lengua, traquea, esófago, pulmones y corazón. En la mesa de observación de órganos realice el examen de éstos.

5.4.1.9. Se realiza el examen de órganos de la cavidad abdominal (aparato digestivo).

5.4.1.10. Se examina los órganos del aparato urogenital.

5.4.1.11. Se extrae el cerebro y examína. 5.4.2. Descripción de la técnica.

5.4.2.1. Examen externo: se examina los ojos, boca y región ano-genital

5.4.2.2. Se palpa el cuerpo si tuviera protuberancias a tener en cuenta en Fig 1 cortes de piel

la apertura de la cavidad corporal. 5.4.2.3. Se examinan por signos de

deshidratación tomando un pliegue de la piel y haciendo presión: en animales normales toma pocos

segundos recobrar su posición normal.

5.4.2.4. Con la pinza se sostiene la piel anterior al orificio uretral y con la tijera



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cortar a lo largo de la línea media ventral de la ingle a la quijada. 5.4.2.5. Partiendo del inicio de la primera incisión se corta la piel hasta cerca de

la articulación de la rodilla a ambos lados (ver diagrama de corte en Fig 1) 5.4.2.6. Se diseca y refleja la piel a los lados. Si el animal es macho se diseca la

glándula prepucial. 5.4.2.7. Se examina de los nódulos linfáticos superficiales (Fig 2), glándulas

mamarias (Fig 3) y de los músculos esqueléticos. Fig 2. Nódulos linfático, bazo y timo (Detalle 6.4.2.8) 5.4.2.8. En la Fig 2 puede observarse

los nódulos linfáticos (nl), bazo y timo. 1: nl cervical superficial; 2: nl cervical profundo; 3 nl mediastínico; 4 nl axilar; 5 nl braquial; A timo; B bazo; 6 nl pancreático; 7 nl renal; 8 nl mesentérico; 9 nl mesentérico; 9 nl ingüinal; 10 nl lumbar; 11 nl lumbar; 11 nl sacro; 12 nl ciático.

5.4.2.9. En la Fig 3 puede observarse

los cinco pares de glándulas mamarias: cervicales (1-6) torácicas (2-3-7-8), abdominales (4-9) e ingüinales (5-10)

Fig 3 Glándulas mamarias (Detalle 6.4.2.9)

5.4.2.10. Siguiendo el primer corte de piel, se corta la pared del músculo

abdominal. Se refleja la capa muscular o cortarlos Fig 4, en donde se observa 1, glándula salival; 2 caja torácica; 3 diafragma; 4 hígado; 5 intestinos; 6 glándula bulbouretral; 7 testículo y epidídimo)

5.4.2.11. Se examinan los órganos teniendo en cuenta posición, tamaño, color y

presencia de líquidos. 5.4.2.12. Se extrae el bazo y el páncreas debido su conexión estrecha. 5.4.2.13. Se examina el sistema digestivo: esófago, estómago e intestinos. Se

empieza la extracción del todo el intestino y estómago con un corte a nivel del recto. Se sostiene con una pinza y se levanta y cortar de caudal a craneal con la tijera la inserción del mesenterio con la columna vertebral hasta el estómago. Haciendo un corte en el esófago a nivel del esfínter cardial el procedimiento se completa.



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5.4.2.14. Fig 4: 1 glándula salival; 2 caja torácica; 3 diafragma; 4 hígado; 5

intestino; 6 glándula bulbouretral; 7 testículo y epidídimo. 5.4.2.15. Apertura del estómago e intestino: Se hace un corte longitudinal del

intestino empezando del recto hasta el estómago. El corte es hecho cerca de la inserción del mesenterio.

5.4.2.16. Para remover el hígado se corta con tijera los ligamentos que lo unen al

diafragma. Se examina el hígado que tiene 4 lóbulos unidos en la región dorsal alrededor del ilium. Su peso es de 1.34 g en un ratón de 3 meses de edad. La vesícula biliar es visible en la superficie inferior del hígado.

5.4.2.17. Para extraer los riñones

y uréteres se sujeta con una pinza la parte inferior del uréter cerca de su apertura y se levanta. Se separa el uréter de sus inserciones a la pared dorsal del cuerpo hasta la pelvis renal, en donde se cortan los vasos. El riñón derecho pesa aproximadamente 210 mg y el izquierdo 200 mg. En el polo anterior se encuentra la glándula adrenal de un tamaño que no excede la cabeza de un alfiler. Fig 4 (detalle 6.4.2.14

5.4.2.17.1. Para remover y examinar la vejiga se sujeta con una pinza la parte más

alta de la vejiga y se hace un corte pequeño con la tijera. El líquido presente en la cavidad debe absorberse con una pipeta. Una vez vacío,

se hace un corte en la parte más baja que debe remover también la próstata.

5.4.2.18. El útero está formado por una parte media tubular (cuerpo) y dos

formaciones laterales (cuernos). La parte caudal del útero se llama cuello. El útero se encuentra anterior a la vejiga urinaria. Los ovarios se encuentra cerca al polo inferior de los riñones. Los oviductos que conectan los ovarios a los cuernos son tubos delgados enrollados alrededor de los mismos como una madeja. Finalmente la vagina es un tubo corto que empieza en el cuello del útero y termina externamente debajo del ano.



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5.4.2.19. Para retirar el tracto genital femenino se hace un corte en el útero cerca al cuello y se continúa hacia arriba, el ligamento del mesometrio hasta el mesovario.

5.4.2.20. El aparato genital del macho incluye los testículos, receptáculo seminal,

el epidídimo, el pene y la glándula prepucial. El peso promedio del testículo derecho es de 103 mg y el izquierdo de 101 mg. Los receptáculos seminales son dos estructuras que se encuentran a ambos lados de la vejiga y están en comunicación con la uretra. Las glándulas prepuciales están incluídas en el tejido conectivo, tienen forma de hoja y están encima del pene.

Foto 5 (detalle 6.4.2.23)

5.4.2.21. Al abrir la cavidad abdominal los testículos se encuentran fuera del

escroto a ambos lados de la vejiga. 5.4.2.22. Se procede a abrir la cavidad torácica empezando por la última costilla

y cortando los cartílagos costales en su unión con el hueso. Se continúa el corte a ambos lados hasta alcanzar la articulación del esternón con las costillas. La parte inferior del esternón se levanta con una pinza y las inserciones con el diafragma se corta. Se mantiene levantada la placa del esternón se separan las inserciones de su cara interna con la pleura parietal y el pericardio.

5.4.2.23. Fig 5: 1, esófago; 2, tiroides; 3 tráquea; 4 nódulos linfáticos

mediastínicos; 5 timo; 6 corazón; 7 pulmón derecho; 8 pulmón izquierdo. 5.4.2.24. El primer órgano que se extrae de la cavidad torácica es el timo, que en

el ratón tiene 2 lóbulos y se encuentra en la línea media de la columna vertebral, cerca de la base del corazón, siendo el lóbulo derecho más grande que el izquierdo. Su peso promedio a los 3 meses de edad es de 30 mg y con la edad se atrofia.

5.4.2.25. Se remueve todos los órganos torácicos en forma simultánea (Fig 6).

Se corta primero el esófago, vena cava y aorta torácica a nivel del diafragma. Luego, jalando anteriormente se remueve las inserciones de la aorta a la columna vertebral, así como de la tráquea y el esófago. Para completar la extracción hacer un corte al nivel de la laringe y la tiroides.

5.4.2.26. Fig. 6: 1 laringe: 2 tiroides; 3

tráquea; 4 lóbulo apical; 5 lóbulo azygo; 6 lóbulo cardiaco; 7 lóbulo diafragmático;

5.4.2.27. Alternativamente se puede

proceder a la separación del corazón de los pulmones dejando la tráquea, bronquios y tiroides in situ.



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5.4.2.28. La tiroides consiste en dos lóbulos pequeños alargados de forma oval adherido a las superficies laterales y dorsal de la tráquea (Fig 5)

5.4.2.29. Se completa la necropsia abriendo el cráneo.

Fig 6 (ver detalle 6.4.2.26) 5.4.2.30. Se remueve todo exceso de tejido o músculo del cráneo. Con una tijera

se corta a lo largo de las suturas naturales sagitales, cuidando que las puntas de la tijera no dañen el cerebro. Se retira el hueso al cortar entre los ojos (Fig 7)

5.4.2.31. Con una pinza y mucho cuidado se coge las meninges y removerla. Se

voltea la cabeza hacia abajo y con una pinza ayudar para que el cerebro salga del cráneo. Se fija que dos estructuras alargadas anclan el cerbero en su cara ventral, son los nervios ópticos que deben cortarse con la misma pinza.

5.5. Condiciones de conservación y eliminación de muestra

5.5.1. Conservación.

Todas las muestras obtenidas se almacenan en frascos con medio de conservación o fijación (formol bufferado al 10%) a temperatura ambiente o en refrigeración a 4°C.

5.5.2. Procedimiento de almacenamiento.

Para almacenar el material biológico se usa siempre frascos de vidrio o plástico de buena calidad y con tapas de rosca, se aplica una cinta selladora sobrepuesta que asegure el cierre hermético y antes de almacenarlos se procede a la identificación del material.

5.5.3. Eliminación.

5.5.3.1. Las muestras se manejan como material biológico infectivo. Una vez terminada la necropsia, el cadáver es introducido en bolsas plásticas estériles y sellado para su disposición final mediante el cremado del mismo.



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5.5.3.2. Una vez dispuesto el

cadáver, todo el material utilizado en la necropsia es sumergido en un recipiente con solución desinfectante, donde permanece por un tiempo mínimo de 1 hora. El resultante es trasladado a un basurero de desechos si ningún otro medio de eliminación es disponible.

5.5.3.3. La sala de necropsia es

desinfectada con el desinfectante de uso para su posterior lavado con detergente y agua a presión por aspersión.

5.6. Cálculo y expresión de resultados

5.6.1. Lectura.

La lectura de lesiones se hace por observación y descripción directa del estado de los órganos y líquidos corporales. Se recogen los datos generados durante la ejecución del procedimiento en el cuaderno de anotación de lectura (REG-UCDSA/Pat-03) Fig 7 El resumen de resultados finales se registra en el REG-UCDSA/Pat-05: Protocolo de Necropsia.

5.6.2. Criterios de aceptación.

Se Confirma que los cuadros observados presentan las características tipo de una lesión determinada y la reacción que ésta genera en el organismo.



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6. REGISTROS

. REG-UCDSA/Pat-02: Cuaderno de ingreso Nº REG-UCDSA/Pat-03: Cuaderno de lectura REG-UCDSA/Pat-05: Protocolo de necropsia

7. ANEXOS.

ANEXO 1: SOLUCION DESINFECTANTE

ANEXO 2: FORMOL BUFFERADO AL 10%



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REG-UCDSA/Pat-02: Cuaderno de Registro de Ingreso Nº ……

Nº hoja de control……

Nº Correlativos

Nº Ingreso Apoyo Investigación

Nº Solicitud Diagnostico

Cantidad de especie y muestras (especimenes, órganos, sangre etc)

Procedencia

Fecha de Ingreso al Lab. (hr)

Cantidad Tacos y Laminas

Fecha de inclusión y coloración

Tipo de Coloración

Dx. Presuntivo Definitivo

Observación y firma



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REG-UCDSA/Pat-03: Cuaderno de Anotación de Lecturas

Solicitud de Servicio N° Tipo de ensayo y/o procedimiento

Fecha:

Ejecutor:

Anotaciones

Conclusión Final

Firma



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REG-UCDSA/Pat-05: PROTOCOLO DE NECROPSIA

Nº de ingreso : Fecha y hora de recepción : Prueba Solicitada: Necropsia

PROTOCOLO DE NECROPSIA

DATOS GENERALES

Identificación Especie : Raza Sexo : Edad Peso corporal: Método de eutanasia: Fecha y hora: Nº de animales: Adultos Jóvenes Animales enfermos Adultos Jóvenes Revisado por MV: Diagnóstico clínico:

DATOS DEL REMITENTE

Propietario: Dirección: Teléfono, e-mail: OBS:

HISTORIA CLÍNICA (alimentación, cambios en el hato, o lugar, animales nuevos, vacunaciones, tratamientos, inicio de la enfermedad)

Instrucciones foto museo zoonosis otros

HALLAZGOS MACROSCÓPICOS

1. EXTERNO

2. INTERNO Piel

S. respiratorio (cavidad nasal, senos, faringe, tráquea, bronquios, pleura, pulmón)

S. cardiovascular (pericardio, aurículas y ventrículos, válvulas, vasos)

S. urinario (riñón, uréter, vejiga, uretra)

S. endocrino (adrenales, tiroides, paratiroides, hipófisis, timo y páncreas)

S. digestivo (dientes, lengua, boca, glándulas, salivales, esófago, estómago,



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intestino delgado, i. grueso, ano y sacos anales, hígado, conductos biliares y vesícula biliar, páncreas, peritoneo)

S. nervioso (cerebro, cerebelo, médula espinal, nervios)

S. linforreticular. Bazo, timo, linfonódulos, vasos linfáticos, tonsilas faríngeas-cecales, médula ósea.

S. genital (ovario, oviducto, útero, feto, placenta, cérvix, vulva, glándula mamaria,

escroto, testículo, cordón espermático, pene

Diagnóstico: Foto Histo Bact Virol Parasit Toxic Congel

Fecha: Otros

Patólogo MV

Firma



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ANEXO 1: SOLUCION DESINFECTANTE

Agua de caño 1 Litro Vanodine 5 ml

ANEXO 2: FORMOL BUFFERADO AL 10% Formol comercial al 37- 40% 100 ml Agua destilada 900 ml Fosfato sódico monobásico NaH2P04.H20 4.0 gm

Fosfato sódico dibásico (anhidro) Na2HPO4 6.5 gm

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