PEI 和 PEG 对细胞毒害作用的探究展示者：李苏 3070701016

同组成员：王诗豪 3070701056

实验目的和要求 MTT 法测定聚乙烯亚胺（ PEI ）的细胞毒性 MTT 法测定 PEG 的细胞毒性

“细胞毒性” 在学术文献中的定义 根据欧洲标准化组织CEN1992 年 30 号文件的定义 ,细胞毒性是指由产品、材料及其浸渍物所造成的细胞死亡、细胞溶解和细胞生长抑制。

外来化学物质外来化学物质进入机体进入机体

实验原理实验原理

N N

NN

SN

Br

溴化噻唑蓝四氮唑溴化噻唑蓝四氮唑MTTMTT

细胞内线粒体酶作用

DMSO

570nm 测定吸光度吸光度值与细胞数量呈正相关

细胞毒性检测主要是根据细胞膜通透性发生改变来进行的检测，常用以下几种方法：MTT、 XTT（一种线粒体脱氢酶的作用底物）法： 利用线粒体内部酶的活性，可以将特定的四唑盐类进行转化，然后通过酶标仪进行检测。LDH（乳酸脱氢酶）的方法： 通过检测细胞培养上清中 LDH的酶活性，来检测细胞毒性。其它酶方法： 如检测上清中碱性磷酸酶、酸性磷酸酶的活性等。

实验步骤实验步骤 1 、细胞接种，将 293T 细胞接种到 96 孔板上，每孔

约 5000 个细胞。 2 、细胞培养，将培养板放入 CO2 孵箱，在

37℃ 、 5% CO2 及饱和湿度条件下，培养至实验所需的细胞数量（一般为 16 小时）。 3 、吸去培养液，用 PBS 清洗细胞，加入无血清培养液，在细胞孔中分别加入 PEI 溶液和 PEG 溶液，加入 PEI的试样使得每孔中 PEI 的浓度分别为0 ， 5 ， 10 ， 25 ， 50 ， 100 ， 200µg/mL ，加

入 PEG 的试样使得每孔中 PEG 的浓度分别为0 ， 0.16 ， 0.8 ， 4 ， 20 ， 100 ， 500mg/mL ，每孔液体的总体积在 200µL 。（注意每种浓度都为三复孔，并要有不加任何 PEI 的对照孔至少 3 孔） 4 、分别孵育 0.5 ， 1 ， 2 ， 3 小时。

5 、吸去培养液，每孔加入 90 l 无血清培养液和 10 l 的 5mg/mL MTT 溶液， 37℃ 孵育 2－ 3 小时。6 、翻板法弃去液体，每孔加入 100 l DMSO ，在震荡器上震荡 10 分钟。7 、在酶标仪上 570nm 波长测 OD 值。8 、统计数据。

0.5 小时PEI 浓度（ ug/ml ） 1 2 3 平均值 标准偏差 存活率

0 0.154 0.099 0.092 0.115 0.034 15 0.105 0.136 0.133 0.125 0.017 1.087609

10 0.121 0.075 0.091 0.096 0.023 0.83446325 0.067 0.056 0.123 0.082 0.036 0.71248850 0.112 0.056 0.093 0.087 0.029 0.756534

100 0.101 0.080 0.100 0.094 0.012 0.816554200 0.090 0.095 0.072 0.086 0.012 0.745402

实验结果

1 小时PEI 浓度（ ug/ml ） 1 2 3 平均值 标准偏差 存活率

0 0.154 0.099 0.092 0.115 0.034 1.000 5 0.105 0.100 0.133 0.113 0.018 0.981

10 0.084 0.119 0.078 0.094 0.022 0.815 25 0.070 0.123 0.089 0.094 0.027 0.819 50 0.092 0.054 0.051 0.066 0.023 0.573

100 0.034 0.070 0.038 0.048 0.020 0.414 200 0.042 0.060 0.047 0.050 0.009 0.434

2 小时PEI 浓度（ ug/ml ） 1 2 3 平均值 标准偏差 存活率

0 0.154 0.099 0.092 0.115 0.034 1.000 5 0.089 0.066 0.086 0.080 0.012 0.700

10 0.077 0.052 0.091 0.074 0.020 0.641 25 0.043 0.056 0.026 0.042 0.015 0.364 50 0.022 0.025 0.026 0.024 0.002 0.213

100 0.031 0.024 0.007 0.021 0.012 0.179 200 0.027 0.012 0.018 0.019 0.008 0.165

3 小时PEI 浓度（ ug/ml ） 1 2 3 平均值 标准偏差 存活率

0 0.154 0.099 0.092 0.115 0.034 1.000 5 0.055 0.058 0.086 0.067 0.017 0.579

10 0.078 0.051 0.060 0.063 0.014 0.550 25 0.044 0.058 0.037 0.046 0.011 0.404 50 0.014 0.041 0.046 0.034 0.017 0.294

100 0.035 0.024 0.041 0.033 0.009 0.289 200 0.027 -0.012 0.038 0.018 0.026 0.155

0.5 小时PEG 浓度（ mg/ml ） 1 2 3 平均值 标准偏差 存活率

0 0.122 0.097 0.092 0.104 0.016 1.000 0.16 0.128 0.086 0.107 0.107 0.021 1.032

0.8 0.124 0.104 0.096 0.108 0.014 1.042 4 0.118 0.097 0.062 0.092 0.028 0.891

20 0.136 0.069 0.093 0.099 0.034 0.958 100 0.110 0.097 0.086 0.098 0.012 0.942 500 0.000 0.004 0.003 0.002 0.002 0.023

1 小时PEG 浓度（ mg/ml ） 1 2 3 平均值 标准偏差 存活率

0 0.122 0.097 0.092 0.104 0.016 1.000 0.16 0.110 0.08 0.072 0.087 0.020 0.842

0.8 0.090 0.104 0.063 0.086 0.021 0.826 4 0.118 0.073 0.062 0.084 0.030 0.814

20 0.102 0.064 0.086 0.084 0.019 0.810 100 0.064 0.051 0.086 0.067 0.018 0.646 500 0.000 0.004 -0.002 0.001 0.003 0.006

2 小时PEG 浓度（ mg/ml ） 1 2 3 平均值 标准偏差 存活率

0 0.122 0.097 0.092 0.104 0.016 1.000 0.16 0.098 0.082 0.072 0.084 0.013 0.810

0.8 0.092 0.104 0.074 0.090 0.015 0.868 4 0.092 0.042 0.068 0.067 0.025 0.650

20 0.046 0.042 0.050 0.046 0.004 0.444 100 0.046 0.036 0.016 0.033 0.015 0.315 500 -0.007 0.004 -0.009 -0.004 0.007 -0.039

3 小时PEG 浓度（ mg/ml ） 1 2 3 平均值 标准偏差 存活率

0 0.122 0.097 0.092 0.104 0.016 1.000 0.16 0.096 0.078 0.094 0.089 0.010 0.862

0.8 0.090 0.092 0.074 0.085 0.010 0.823 4 0.058 0.042 0.068 0.056 0.013 0.540

20 0.046 0.048 0.063 0.052 0.009 0.505 100 0.038 0.039 0.023 0.033 0.009 0.322 500 -0.007 -0.011 -0.009 -0.009 0.002 -0.087

心得、体会1 在这个实验中，针对不同时间梯度要注意控制不同的时间，以达到实验预期。2 实验中一定要设置空白对照。3 本实验的主要目的一是熟练原来曾经学过的操作，二是对于科学研究有一个初步的认识。对于科学研究有一个较为明了的认识。