practica n° 5 procedimiento
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procedimiento para cuantificar vitamina c por espectrofotometríaTRANSCRIPT
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PROCEDIMIENTO
A. PREPARACIÓN DE UNA SOLUCIÓN ÁCIDO OXÁLICO AL 0.4 %
B. PREPARACIÓN DE SOLUCIÓN ESTÁNDAR (MADRE) DE ÁCIDO ASCÓRBICO 0.1% EN UNA SOLUCIÓN DE ÁCIDO OXÁLICO 0.4%.
Agregar 4 g. de Ácido Oxálico en un litro de Agua destilada.
Pesar 100 mg de A. Ascórbico y agregar en una fiola añadiendo 100 ml de una solución de A. Oxálico 0.4 %
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1. PREPARACIÓN DE LA CURVA ESTÁNDAR DE VITAMINA C
I. 10 ml de Agua Destilada. (Blanco).
II. 1 ml de A. Oxálico 0.4% + 9 ml de Solución coloreada. (L1).
III. 1 ml de E.T + 9 ml de Agua Destilada. (Blanco).
IV. 1 ml de E.T + 9 ml de solución coloreada. (L2).
2. ANÁLISIS DE VITAMINA C EN MANDARINA
a) Preparar los estándares de trabajo (E.T): Tomar alícuotas de 1,2, 3, 4 y 5 ml de ácido ascórbico (solución madre) y aforar en 100 ml de A. Oxálico al 0.4 %.
b) Preparar 4 tubos de ensayo prueba para cada alícuota (N° 1, N° 2, N° 3, N°
4, N° 5). Y se agrega lo siguiente:
c) Hacer las lecturas de absorbancia en un espectrofotómetro a una longitud de onda de 520nm, siguiendo el siguiente proceso:
Ajustar a cero la ab sorbancia en I.
Leer la absorbancia en tubo II (L1).
Ajustar a cero la absorbancia con la solución del tubo III.
Leer la absorbancia del tubo IV (L2).
Calcular L2-L1 de cada E.T y obtener la gráfica de la curva patrón de ácido
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I. 10 ml de Agua Destilada. (Blanco).
II. 1 ml de A. Oxálico 0.4% + 9 ml de Solución coloreada. (L1).
III. 1 ml de Sol. De muestra + 9 ml de Agua Destilada. (Blanco).
Agregar 30 ml de zumo de mandarina en 210 ml de A. Oxálico.
Extraer 1 ml de la solución anterior y aforar en 100 ml de A. Oxálico.3. Preparar 4 tubos de ensayo prueba para cada alícuota (N° 1, N° 2, N° 3, N°
4, N° 5). Y se agrega lo siguiente:
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IV. 1 ml de Sol. De muestra + 9 ml de solución coloreada. (L2).
4. Hacer las lecturas de absorbancia en un espectrofotómetro a una longitud de onda de 520nm, siguiendo el siguiente proceso:
Ajustar a cero la ab sorbancia en I.
Leer la absorbancia en tubo II (L1).
Ajustar a cero la absorbancia con la solución del tubo III.
Leer la absorbancia del tubo IV (L2).
5. Calcular L2-L1 y obtener la concentración de ácido ascórbico a partir de la curva estándar.