第31章朊粒蛋白发现疯牛病的病原体完全不同于人类以往

所知的一切病原体，它不具DNA和RNA，在电子显微镜下也看不见病毒颗粒，只能看到浆质膜，见不到衣壳和髓核，这种病原体和病毒感染有显著区别，如潜伏期长，无炎症反应,定名为“糖蛋白侵染子”，是一类新的病原

生物。

疯牛病学名为“牛海绵状脑病（BSE） ”由于牛食用了含有羊瘙痒病致病因子的内脏

所致。1986年在英国首先发现，1993年达发病高峰，达到37020头。 BSE主要通过消化道感染。进入血循环系统，感染血细胞或淋巴细胞，再进一步感染大脑神经系统；致病因子感染外周神经系统，如胃肠中的神经末梢，进入外周神经，通过逆行传递，沿着外周神经系统感染至中枢神经系统。

疯牛病

疯牛病PrPsc可导致人类患变异性克雅氏病(nvCJD),几乎可以肯定就是“人类疯牛病”。朊粒蛋白的发现也是艾滋病后对人类提出的又一巨大挑战，做好海绵状脑病（TSE）的诊断、预防及治疗是必需的。

人类疯牛病

Prusiner 等应用化学方法提纯瘙痒病原因子，分离得到了具有高度感染性的组分— 一种分子量为 27-30kd 的特殊糖蛋白，将其定名为“糖蛋白侵染子”（缩写为 prion ）过去的中文译名为朊病毒，现译为朊粒，其对应的单体称为“朊粒蛋白”（ PrP ）。

朊粒蛋白（ PrP ）

分子量为 27-30kd 的 单 体 , 称 为“朊粒蛋白”（ PrP ） 。 PrPC 含 四个 α- 螺 旋 ， 几 乎没有 β- 折叠。而 PrPSC 链上有变构，转 换 成 四 个 β- 折叠。

朊粒蛋白的增殖模式图1.PrPC固定在磷脂酰肌醇多聚糖细胞膜上

2. PrPSC与PrPC结合3.导致PrPC释放, PrPC转变为PrPSC

4.细胞又合成新的PrPC,开始下一个循环

5. PrPSC被神经细胞摄入6. PrPSC聚积,使细胞出现海绵状

微生物检验 1. 标本采集 以检测蛋白酶抗性的 PrPRES 为诊断 标志，取脑脊液和病变组织等标本， 应立即检测或冻存待用，非固定标 本用做免疫印迹，固定标本用作染 色镜检，或做免疫组化检测。

标本直接检查

1 ．电子显微镜检查 羊瘙痒病相关 纤维 (SAF) 是朊粒感染的标志之一。 有两种存在形式： I 型纤维直径为 11 ～ 14nm ，Ⅱ型纤维直径为 27 ～ 3

4nm 。

2 ．目前诊断朊粒感染的依据主要依 赖神经病理学检查，海绵状病变稀 疏地分布整个大脑皮层，神经元消 失，星状细胞增生，典型病变为融 合性海绵状空泡，空泡周围有大量 淀粉样斑块，用 HE 和 PAS 染色清晰 可见。 PrP 淀粉斑也是朊粒的特异标 志， CJD 病人中约有 10 ％阳性。

3 ．快速简易的免疫学方法

prp ＳＣ是人朊粒感染的特异标志，用病人的脑组织经蛋白酶有限消化去除正常细胞的 PrP Ｃ，然后用斑点免疫或蛋白质免疫印迹检测 PrP ＳＣ。

4 ． PrP 基因检测取病变神经组织细胞或外周血白细胞测定第 20 号染色体短臂上的 PrP 基因序列，可诊断遗传型朊粒感染性疾病。用 PCR扩增出 PrP全基因，用位点特

异性的寡核苷酸探针杂交，筛选出突变基因，再进行序列分析，找出 PrP 基因突变的位点。

5.朊粒的分离可用猴、羊、豹、猫及豚鼠等动物进行感染试验，但用动物分离人朊粒成功率较低，最近制备的含有人 PrP 基因的转基因小鼠对人朊粒敏感，但用动物分离朊粒的时间的较长，一般需200天以上，不适于实验室检查。目前仍以病理检查作为诊断朊粒感染的手段。