Práctica 1. VDRL y Rosa de Bengala

                 VDRL - USRAntígeno de cardiolipina para investigar reaginas de la sífilis en Suero sin inactivar, en

Plasma y L. C. R. (no requiere reconstitución)Agente de Diagnóstico

IntroducciónTreponema pallidum, la bacteria que causa la sífilis, una enfermedad que generalmente se transmite por vía sexual.

Su diagnóstico puede ser serológico, con lo que se pueden determinar dos clases de anticuerpos:

1.    Tipo “cardiolipina”.- No treponema e inespecíficos2.    Antitreponemas específicos

La prueba realizada Venereal Disease Research Laboratoy VDRL se le conoce como una prueba para sífilis no-treponemica. Es parte de la exploración inicial de la sífilis e iniciar un tratamiento. Con el método cualitativo empleando la placa presenta floculación, si se presenta el caso se lleva acabo el método cuantitativo con el o los sueros positivos.También se emplea en el cuidado prenatal del embarazo, así como parte de los estudios de laboratorio prenatales.

Desarrollo

Material  Placa cóncava  Puntillas  Aguja No. 21 sin bisel  Cronómetro

Equipo  Pipeta semiautomática  Microscopio

Muestra  Suero

(Obtener 3 ml. de sangre por punción venosa, centrifugar y separar el suero)

Reactivo  Antígeno VDRL y los Sueros de Controles (almacenados 2-8°C)

 Resultado e interpretaciónMétodo cualitativo

1. Depositar 0.05 ml. de suero problema en un anillo de la placa cóncava.2. En otro anillo colocar una gota de suero control positivo y en el anillo siguiente una gota de suero control negativo, extendiendo dentro de los mismos.3.Añadir una gota del antígeno en suspensión previamente resuspendido en cada muestra con la aguja N.214. Colocar la placa sobre un agitador mecánico a 180 rpm durante 4 min. (Nota: lo realizamos de forma manual a falta de agitador). Las pruebas que se realizan en un clima extremadamente seco pueden evaporarse, por lo tanto la paca se cubre con la tapa de una caja Petri humedecida.

Valores de referencia

Paciente 1 NegativoCONTROL POSITIVO

Presencia de floculación mediana o grande

Paciente 2 NegativoCONTROL NEGATIVO

Ausencia de floculación

En este caso ambos resultados son negativos lo que indica que ningún paciente tiene sífilis.

El examen con resultado positivo puede indicar que usted tiene sífilis. Si el examen es positivo, el siguiente paso es confirmar los resultados con examen FTA-ABS, que es un examen más específico para la sífilis.La capacidad del examen VDRL para detectar sífilis depende de la etapa de la enfermedad. La sensibilidad del examen para detectar la sífilis se acerca al 100%

durante las etapas intermedias y es menos sensible durante las etapas más tempranas y tardías.Las siguientes afecciones pueden provocar un examen falso positivo, como:

  VIH  Enfermedad de Lyme  Ciertos tipos de neumonía  Malaria  Lupus eritematoso sistémico

El siguiente método lo incluí sin embargo por falta de sueros problema positivos en el método cualitativo no se realizó.

Método cuantitativo

1.Seleccionar los sueros positivos obtenidos en la prueba cualitativa.2.Colocar en una gradilla 6 tubos y numerarlos.3.Agregar a cada uno 0.5 ml. de solución salina al 9%.4.Depositar 0.5 ml. de suero al tubo 1 y mezclar.5.Pasar 0.5 ml. del tubo 1 al tubo 2 mezclar.6.Pasar 0.5 ml. del tubo 2 al tubo 3 mezclar7.Continuar con este proceso hasta el tubo 6.8.Depositar 0.05 ml. de cada una de las diluciones sobre los diferentes anillos de la

placa cóncava.

9.Añadir una gota del antígeno en suspensión estabilizado (VDRL) utilizando la aguja No.21 sin bisel a cada dilución.10. Colocar la placa sobre un agitador mecánico a 180 rpm. Durante 4 min.11. Leer al microscopio con objetivo seco débil 10x.

Resultados e interpretaciónEl título del suero problema será la última dilución que presente un resultado positivo. Ejemplo:Si se presenta floculación hasta el tubo 3 – dilución 1:8, por lo tanto el título será 1:8.Nota: 1.Sueros extremadamente turbios o hemolizados son insatisfactorios para la prueba.2.Sueros débiles positivos y fuertes evidencias clínicas de la enfermedad es conveniente efectuar la prueba cuantitativa, ya que ocasionalmente pueden presentar el fenómeno de prozona.

3. Si la lectura del resultado no se realiza inmediatamente después de los 4 min. puede secarse la reacción y dificultad en la interpretación.4.El antígeno en suspensión debe estar a temperatura ambiente antes de ser utilizado.

ConclusionesEsta prueba cualitativa VDRL nos permite identificar a los pacientes con sífilis, enfermedad producida por la bacteria Treponema pallidum; se trata de una prueba rápida y certera que permite el inicio de un tratamiento eficaz evitando que avance y pueda ser controlada satisfactoriamente. En caso de que los resultados sean positivos es necesario comprobar con la Prueba Rápida de Regina (RPR) y examen FTA-ABS, que son aun más exactas.

ReferenciasPrueba proporcionada por LICON. Laboratorios Licon, S. A., reactivo.http://www.clinicadam.com/salud/5/003515.htmlhttp://www.ferato.com/wiki/index.php/VDRL

ROSA DE BENGALAAntígeno Brucelar Amortiguado para el

Diagnóstico de Brucelosis

IntroducciónEs una prueba, basada en la aglutinación como respuesta a la presencia de alguna de las aglutininas de Brucella (abortus, mellitensis y suis). Bacterias causantes de la Brucelosis, organismos virulentos e infecciosos para el hombre que adquiere generalmente por vía mucocutánea, por consumir carne contaminada con la bacteria, abrasiones o cortes en la piel, inhalación de aerosol o contaminación de la conjuntiva; invadiendo el sistema linfático y puede alcanzar a diversos órganos.Por ello se realiza la prueba de Rosa de Bengala por ser una prueba sensible y rápida que permite una aproximación diagnóstica inmediata.se empela sobre todo en las zonas no endémicas, como método de "despistaje". Emplea como antígeno una suspensión bacteriana a la que se ha añadido el colorante rosa de bengala, enfrentándola al suero sin diluir del enfermo.

Desarrollo

 Material

  Placa cóncava  Puntillas  Cronómetro

Equipo

  Pipeta semiautomática  Microscopio

Muestra  Suero

(Obtener 3 ml. de sangre por punción venosa, centrifugar y separar el suero)

Reactivo  Antígeno Rosa de Bengala  Control Positivo de Brucella  Control Negativo de Brucella

 Procedimiento1. Llevar a temperatura ambiente el reactivo, controles y muestras de suero.2. Utilizando la pipeta automática adicione 30 μL de la muestra del paciente en un círculo de la placa.3. Mezcle suavemente el Antígeno Rosa de Bengala hasta que se encuentre totalmente homogéneo, después coloque 30 μL en la placa de prueba, en el mismo circulo donde se coloco la muestra del paciente, mezcle ambas con un aplicador. (Usar un aplicador diferente para cada muestra). Repita este paso para cada muestra de paciente y controles.4. Agitar la placa con movimientos rotatorios por 4 minutos.5. Con la ayuda de una fuente de luz directa lea el resultado. Nota : Después de este tiempo(4 min.) la lectura ya no es válida.

Resultado e interpretación

La lectura debe llevarse a cabo exactamente a los 4 minutos tomados a partir de que se comenzó a mezclarEs el tiempo límite óptimo para la observación de ciertas aglutininas que se revelan lentamente puesto que se pueden presentar reacciones no específicas.

Valores de referencia

Paciente 1 Negativo

CONTROL POSITIVOPresencia de aglutinación indica la

existencia de anticuerpos específicos.

Paciente 2 NegativoCONTROL NEGATIVO

Ausencia de aglutinación.

Ambos resultados fueron negativos lo que indica que los pacientes no tienes Brucelosis o no han estado en contacto con la bacteria indicada.

Se pueden presentar falsos negativos, que se limitan a enfermos con procesos de pocos días de evolución y a algunos casos de enfermedad de curso muy prolongado.

NOTA: El aislamiento del agente etiológico mediante hemocultivos es de suma importancia.

Conclusiones

Esta prueba cualitativa de Rosa de Bengala es un método considerado eficaz en el diagnóstico de brucelosis, que permite dar al paciente un tratamiento en caso de que sea positivo el resultado, sin embargo por tratarse de una prueba cualitativa se debe comprobar con algunas otras como:Aglutinación Lenta Estándar o Aglutinación Lenta en Presencia de 2-Mercaptoetanol.

V.D.R.L.(Venereal Disease Research Laboratory)

Fundamento: Es una prueba serológica realizada en medicina con sensibilidad y especificidad para complementar el diagnóstico de sifilis.

Cualquier enfermedad por treponemas causa un VDRL positivo: sífilis, frambesiapinta, bejel, fiebre recurrente, leptospirosis,enfermedad de Lyme y otrasborreliosis. Resultados reactivos también resultan con otras enfermedades infecciosas, comotuberculosis, lepra,neumococo, endocarditis infecciosa,mononucleosis infecciosa, neumonías virales, sarampión, varicela, paludismo ytripanosomiasis.

Este examen mide sustancias, llamadas anticuerpos, que se pueden producir en rep uesta al Treponema pallidum, la

bacteria  que causa la sífilis.

El examen es similar al examen de reagina plasmática rápida (RPR) más nuevo.

Introducción:

La sífilis es una enfermedad venérea causada p

or Treponema pallidum,espiroqueta estrechamente enrollada, de unos 8 a 15um de largo. La enfermedad sin tratar pasa por tres etapas que se pueden prolongar durante muchos años.

La sífilis pocas veces se diagnostica mediante la demostración de organismos en una lesión primaria o secundaria. La fase terciaria que sobreviene después, es

el resultado de la hipersensibilidad tisular de los antígenos treponémicos, no de la

presencia de importantes microorganismos viables. Las pruebas serológicas son importantes para la demostración del Treponema pallidum, cuyo diagnósticobacteriológico es muy difícil.

Procedimiento:

Material:

 Placa excavada

 Pipeta semiautomática

 Puntilla

 Reactivo de VDRL

 Muestra de suero

1) Separar el suero, y posteriormente agregar una gota de suero y una de suero control positivo. (en excavaciones diferentes)

2) Añadir una gota de la suspensión del antígeno V.D.R.L. previamente

agitado.

3) Mezclar durante 4 min. (tiempo exacto). Puede dar un falso positivo

si se deja reposando o se mezcla mas tiempo

4) Observar al microscopio con el objetivo 10x

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS.

A) Agregados grandes y medianos - Suero positivo.

B) Agregados finos y dispersos - Suero débilmente positivo.

C) No se observan agregados - Suero no positivo.

Se pueden producir falsas reacciones positivas en individuos con cuadrospatológicos diversos como hepatitis, influenza, brucelosis, asma, lepra, malaria, tuberculosis, cancer, diabetes y enfermedades autoinmunes.

ROSA DE BENGALA

Fundamento: Prueba

de aglutinación rápida en placa para la detección temprana de aglutininas específicas

deBrucella (Brucella melitensis, abortus y suis).

La brucelosis es una enfermedad infecciosa producida por el génerobrucella. Es una clásica

zoonosis (antropozoonosis) transmisible ocasionalmente al hombre a partir de animales

infectados, los cuales eliminan gran número de bacterias a través de los genitales, la

leche y las heces.

La brucelosis humana, su denominación técnica, es una de las enfermedades bacterianas más

comunes del planeta. Se llama así en honor de Davis Bruce, médico militar que en 1887 aisló el

agente patógeno del bazo de soldados británicos acuartelados en la isla de Malta. La bacteria

recibió el epíteto del nombre latino de la isla: Microccocus melitensis (hoy, Brucella melitensis).

TRANSMICION

Introduccion:

Aglutinación.

En sus diferentes modalidades, es la prueba más utilizada debido a su rapidez y sensibilidad

Rosa de Bengala: Es la prueba mas empleada por permitir una aproximación diagnóstica

inmediata. De especial utilidad en zonas no endémicas, en las que se realiza como método de

"despistaje". Utiliza como antígeno una suspensión bacteriana a la que se ha añadido el colorante

rosa de bengala, enfrentándola al suero sin diluir del enfermo. Proporciona una aproximación

diagnóstica en pocos minutos con una sensibilidad y especificidad muy altas. Presenta elevado

grado de correlación con la seroaglutinación y, por su simplicidad, es muy útil como

prueba de despistaje inicial o screening. Sus falsos negativos se limitan a enfermos con

procesos de pocos días de evolución y a algunos casos de enfermedad de curso muy

prolongado.

PROCEDIMIENTO:

Material:

 Suero (sangre)

 Reactivo de rosa de bengala

 Placa excavada

 Pipeta semiautomática

1. Llevar a temperatura ambiente el reactivo, controles y muestras de suero.

2. Utilizando la pipeta automática adicione 30 µL de la muestra del paciente en un

círculo de la placa.

3. Mezcle suavemente el Antígeno Rosa de Bengala hasta que se encuentre

totalmente homogéneo, después coloque 30 µL en la placa de prueba, en

el mismo circulo donde se coloco la muestra del paciente, mezcle ambas con un

aplicador. (usar un aplicador diferente para cada muestra). Repita este paso para

cada muestra de paciente y controles.

4. Agitar la placa con movimientos rotatorios por 4 minutos.

5. Con la ayuda de una fuente de luz directa lea el resultado.

Importante: Después de este tiempo la lectura ya no es válida. La lectura debe

llevarse a cabo exactamente a los 4 minutos tomados a partir de que se comenzó

a mezclar. Este es un tiempo límite óptimo en el que se da un espacio para la

observación de ciertas aglutininas que se revelan lentamente y que de otra

manera se pueden omitir, además de que se pueden presentar reacciones no

específicas.