Bank Komórek Eukariotycznych

Transfer Technologii do Centrum BioMoBiL

25-29 / 10 / 2004

Konrad Kleszczyński

Jolanta Grzenkowicz – Wydra

Skąd ?ADVANCELL

• biotechnologiczna firma wdrożeniowa wykonująca usługi dla przemysłu w oparciu o ludzkie linie komórkowe (toksykologia, onkologia, dermatologia, choroby degeneracyjne mózgu)

• bankowanie komórek (156 linii)

• tworzenie i namnażanie nowych linii dla potrzeb lokalnego środowiska naukowego i ich dystrybucja

• kontrola jakości otrzymywanych linii komórkowych

Pracownia SOP Bazy danych Bankowanie Kontrola Jakości

Sprzęt niezbędny do pracowni komórkowej:

• komora laminarna klasy II

• inkubator CO2

• mikroskop świetlny z odwróconą optyką

• lodówka oraz zamrażarki: - 20 ÷ -30OC

- 80OC

• system oczyszczania wody • wirówki• inny sprzęt

Pracownia SOP Bazy danych Bankowanie Kontrola Jakości

Sprzęt niezbędny do przechowywania komórek (zbiornik Dewara):

• zbiornik na ciekły azot (3600 ampułek o pojemności 2 ml, poj. zbiornika 116 L, parowanie 0,6 L / dobę)

• zbiornik magazynowy na ciekły azot

(poj. zbiornika 34 L, parowanie 0,25 L / dobę)

Pracownia SOP Bazy danych Bankowanie Kontrola Jakości

Standardowe Procedury OperacyjneStandard Operating Procedures

Zbiór szczegółowych instrukcji zapewniających

jakość i spójność postępowania z komórkami.

SOP obejmują:• pobranie i przechowywanie próbek • aparatura: obsługa, sprawdzenie działania,

kalibracja• odczynniki: potwierdzenie odbioru,

oznakowanie, przepisy wykonania roztworu• monitorowanie i rejestrowanie wszystkich

czynności laboratoryjnych

Pracownia SOP Bazy danych Bankowanie Kontrola Jakości

Pracownia SOP Bazy danych Bankowanie Kontrola Jakości

• bazy danych służą do organizacji i zarządzania przechowywanymi próbkami

• pełen dostęp do bazy danych ma administrator, który wskazuje miejsce złożenia bądź pobrania próbki

• dostęp pracownika do bazy danych ogranicza się do wypełnienia formularza określonego przez SOP dostępnego w lokalnej sieci

• codziennie wszystkie operacje są archiwizowane

Pracownia SOP Bazy danych Bankowanie Kontrola Jakości

Pracownia SOP Bazy danych Bankowanie Kontrola Jakości

Usługi oferowane przez Bank Linii Komórkowych

• Udostępnianie i sprzedaż linii komórkowych

• Bezpieczny depozyt, krótko- i długoterminowy

• Identyfikacja i kontrola jakości linii komórkowych

• Usuwanie zanieczyszczeń Mycoplasma z hodowli komórkowej

Pracownia SOP Bazy danych Bankowanie Kontrola Jakości

Przechowywanie linii komórkowych oraz ich dystrybucja

Original Bank (OB)

do 5 krioampułek

Master Bank (MB)

10 - 15 krioampułek

Distribution Bank (DB)

15 - 30 krioampułek

106 komórek / ml

Pracownia SOP Bazy danych Bankowanie Kontrola Jakości

• Do podstawowych testów kontroli jakości należą: test immunocytochemiczny, test na obecność bakterii i test na obecność Mycoplasmy

• Metoda detekcji mykoplazmy oparta jest na amplifikacji PCR z użyciem komercyjnego zestawu

• Większość zanieczyszczeń hodowli komórkowych spowodowana jest przez następujące gatunki: M. arginini, M. fermentans, M. hyorhinis, M. orale, Acholeplasma laidlawii

• Zanieczyszczoną hodowlę traktuje się antybiotykami będącymi pochodnymi tetracykliny (minocyklina, BM-cyklina) lub ciprofloksacyną

Pracownia SOP Bazy danych Bankowanie Kontrola Jakości

Elektroforeza w 2% żelu agarozowym produktów amplifikacji DNA

C+ kontrola pozytywna

C- kontrola negatywna

M wzorzec masowy DNA

1-7 badane próbki

hodowla zainfekowana zdrowa hodowla Mycoplasmą

C+ C- M 1 2 3 4 5 6 7

Barwienie wykonane wg Hoechst 33258

Pracownia SOP Bazy danych Bankowanie Kontrola Jakości