المختبر التاسع علم الفيروسات العملي - كلية

العلوم للبنات

) ( الحقيقي الوقت المتسلسل البلمرة تفاعل Real-Time PCR

) ( الحقيقي الوقت المتسلسل البلمرة تفاعل

قطع نسخ اعداد في وتزايد تضاعف تفاعل او DNAهو كاميرا وجود مع الهدف ) مفصل) تقرير اعطاء ألجل العمليات هذه ويرصد يدون المشعة الصبغات كاشف

. الهدف الجين لنسخ وتضخم تزايد من ومايقابلها الدورات عدد عن

الـ تضاعف ورصد متابعة خاللها من نستطيع التي الطرق من العديد هناكDNA( المشعة المعلمات تستعمل اذ العينة (fluorescent markerفي

مع اشرطة DNAلالرتباط زادت وكلما زاد DNAالمتضاعف المنسوخةبسبب . جدا مفيد التقنية هذه استعمال تعتبر لذلك المشعة الصبغة استعمالال ترحيل عملية عن واالستغناء التضاعف عمليات مشاهدة على القدرة

DNA. االكاروز في

الـ تضخم رصد في تساعدنا التي الطرق :-DNAاهم

المضيئة )-1 :-( Fluorescent dyesالصبغاتتقنية في المشعة الصبغة استعمال االرخص RT-PCRان يعتبر

مع يتزايد الصبغة هذه ارتباط ان حيث التضاعف لرصد واالبسطاشرطة في , DNAتزايد مفيد الغير لكن حديثا المنسوخة المزدوجة

الشرطة تضاعف اي مع ترتبط الصبغة ان هو الطريقة DNAهذهتخصص ) ..specificityبدون المطلوب( للجين

المشع )-2 ( :-Fluorescent probesالبروبال من قطعة هو المشع المطلوب DNAالبروب للجين متممة

. المشعة بالصبغة معلمة تكون حيث وتكاثره تضخيمه( التاكمان من( Taqmanيعد قطعه من يتكون حيث شيوعا واالكثر االبسط البروب

جزيئة )DNAال على وجزيئة( )Reportedتحتوي االطراف احد في مشعquencher ( )الجزيئة من المنبعثة االشعة تمتص االخر طرفها في لالشعاع ماصة

لالشعاع ) او( Reportedالباعثة واطئ يكون البروب من المنبعث االشعاع فان لذلك , ال اشرطة وتبدأ بالعمل الجهاز يبدئ عندما الطبيعية الظروف في DNAضعيف

ينشطر ما سرعان لكن المطلوب الجين مع باالرتباط البروب يبدأ بالتضاعف( البوليميريز انزيم بفعل )Polymeraseوينفلق ال( فان )Reportedلذلك وال(

المختبر التاسع علم الفيروسات العملي - كلية

العلوم للبنات

quencher )ابتعاد بسبب االشعاع انبعاث سيتزايد ثم فيزيائيا ينفصالن سوفquencher عنReported. طبيعية بصورة باالشعاع االخير يبدأ حيث

A-normal probe

B- probe binding with specific gene

C-probe cleavage by polymerase

المختبر التاسع علم الفيروسات العملي - كلية

العلوم للبنات

A-normal probe

B- probe binding with specific gene

C-probe cleavage by polymerase