ВСТУП

1. Мета дисципліни – сформувати систему здатностей та вмінь з методів діагностики,ідентифікації, виділення, накопичення, очищення вірусів, методів молекулярно-біологічних тасерологічних досліджень вірусів, а також методів культивування культур тваринних тарослинних клітин та їх практичного використання у вірусологічних дослідженнях, длядіагностики, вивчення цитопатичної дії вірусів.

2. Попередні вимоги до опанування або вибору навчальної дисципліни:1. Успішне опанування науково-теоретичним та практичним матеріалом навчальних

дисциплін, які викладаються студентам 1-3 курсів освітнього рівня «Бакалавр».2. Знання теоретичних основ вірусології, біохімії, мікробіології, генетики, цитології та

гістології, фізіології, зоології, біофізики тощо.3. Володіти елементарними навичками планування та проведення експериментального

дослідження у певній галузі біології з метою вирішення конкретної науково-практичної задачі.

4. Володіти елементарними навичками проведення аналітичної оцінки результатівдосліджень, що проводяться у галузях біології та вірусології для вирішенняконкретної науково-практичної задачі.

5. Вміння застосовувати профільне лабораторне обладнання та/або реагенти дляпроведення експериментального дослідження у певній галузі біології з метоювирішення конкретної науково-практичної задачі.

3. Анотація навчальної дисципліни:Навчальна дисципліна «Лабораторний практикум з вірусології» є складовою освітньої

програми професійної підготовки фахівців освітнього рівня «Бакалавр». Дисципліна є дисципліною вільного вибору студента, що висвітлює питання розвиткусучасних методів біологічних досліджень, покликана окреслити коло методів та методичнихприйомів досліджень, що проводяться у галузі вірусології для вирішення конкретної науково-практичної задачі, та які можуть застосовуватися при постановці дослідів у суміжних наукахта в рамках міждисциплінарних проектів, та які вимагають глибоких знань з даноїдисципліни. Дисципліна покликана сформувати систему здатностей та вмінь з методів діагностики,ідентифікації, виділення, накопичення, очищення вірусів, методів молекулярно-біологічних тасерологічних досліджень вірусів, а також методів культивування культур тваринних тарослинних клітин та їх практичного використання у вірусологічних дослідженнях, длядіагностики, вивчення цитопатичної дії вірусів.

4. Завдання (навчальні цілі)- сформувати уявлення про модельні системи, які використовуються в медичній

вірусології, фітовірусології;- сформувати у студента сучасні уявлення про різноманітність форм і типів взаємодії

вірусів та клітин для визначення особливостей цитопатичних змін при вірусній інфекції;- забезпечити досягнення такої компетентності як здатність застосовувати сучасні

серологічні, молекулярно-біологічні, електронно-мікроскопічні та біотехнологічні методианалізу при діагностиці вірусних інфекцій;

- сформувати у студента сучасні уявлення про методи отримання діагностичнихсироваток, підходи до їх стандартизації та сертифікації;- навчити планувати вірусологічнийексперимент, використовувати відповідні методи для досягнення поставленої мети;

- опанувати методи отримання та культивування основних типів культур тваринних тарослинних клітин, їх практичного використання у вірусологічних дослідженнях длядіагностики, накопичення вірусів та вивчення їх цитопатичної дії.

Згідно з вимогами стандарту дисципліна забезпечує набуття студентамикомпетентностей:

інтегральна: Здатність розв’язувати складні задачі і проблеми в галузі біологічних наук і на межі

предметних галузей, що передбачає проведення досліджень та/або здійснення інновацій тахарактеризується невизначеністю умов і вимог.

загальні:1. Здатність до пошуку та аналізу інформації з використанням різних джерел, у т.ч.результатів власних досліджень.2. Здатність виконувати професійні функції і проводити дослідження на відповідномурівні у галузі біологічних наук і на межі предметних галузей.3. Здатність до прийняття рішень у складних і непередбачуваних умовах, що потребуєзастосування нових підходів та прогнозування.4. Здатність до абстрактного мислення, аналізу і синтезу інформації в галузі біології і намежі предметних галузей.5. Здатність користуватися сучасними інформаційними технологіями та аналізуватиінформацію в галузі біології і на межі предметних галузей.

спеціальні:1. Здатність до поглиблення теоретичних та методологічних знань у галузі біологічнихнаук і на межі предметних галузей. 2. Здатність використовувати знання й практичні навички в галузі біологічних наук та намежі предметних галузей для виконання професійних завдань, у т.ч. для дослідження різнихрівнів організації живих організмів, біологічних явищ і процесів 3. Здатність на основі розуміння сучасних наукових фактів, концепцій, теорій, принципіві методів приймати рішення з важливих проблем біології і на межі предметних галузей.4. Здатність виконувати роботу з дотриманням правил біологічної етики, біобезпеки,біозахисту. 5. Здатність планувати і проводити наукові дослідження в галузі біології і на межіпредметних галузей, здійснювати їх інформаційне, методичне, матеріальне забезпечення,інтерпретувати дані і робити висновки, готувати результати наукових робіт до оприлюднення.

5. Результати навчання за дисципліною:

Результат навчання(1. знати; 2. вміти; 3. комунікація;) Форми (та/або

методи і технології)викладання і

навчання

Методиоцінювання та

пороговийкритерій

оцінювання (занеобхідності)

Відсоток упідсумковій

оцінці здисципліни

Код Результат навчання

1.1 Знати - механізми передачі вірусів рослин татварин в природних умовах та в лабораторії;- типові симптоми при вірусних інфекціяхлюдини, тварин, рослин та їххарактеристики;- вплив вірусної інфекції на ріст і розвитокрослин.

Лабораторні роботи,самостійна робота

Тест, задача,контрольна ізвідкритимивідповідями,реферат, звіт полабораторнійроботі

30

1.2 Знати- основні методи виявлення та ідентифікаціївірусів у культурі клітин;- методологічні підходи до діагностикивірусних інфекцій рослин та тварин.

Лабораторні роботи,самостійна робота

--//-- 20

2.2 Вміти Лабораторні роботи, Тест, задача, 40

- виділяти віруси з рослинного матеріалу тапроводити концентрування вірусів різнимиметодами;- отримувати первинні культури клітин тапасирувувати клітинні культури;- інокулювати культури клітин вірусами таза морфологічними змінами клітин культуривизначити тип цитопатичної дії вірусу;- за електронно-мікроскопічнимзображенням вірусу, використовуючисистему морфологічних ознак, визначитиморфотип віріону;- отримувати імунні сироватки до віруснихантигенів;- в умовах лабораторії ідентифікувати віруста визначити титр вірусу або специфічноїсироватки.

Самостійна робота контрольна ізвідкритимивідповідями,реферат, звіт полабораторнійроботі

3.1 Вміти працювати у групі, організовувати роботу для проведення експерименту

Лабораторні роботи,Самостійна робота

Тест, задача,контрольна ізвідкритимивідповідями,реферат, звіт полабораторнійроботі

10

6. Співвідношення результатів навчання дисципліни із програмними результатами навчанняРезультати навчання дисципліни Програмні результати навчання 1.1 1.2 2.1 2.2 3.1

Знати і аналізувати принципи структурно-функціональноїорганізації, механізмів регуляції та адаптації організмів.

+ + + +

Вміти моделювати основні процеси дослідження з метоювибору методів дослідження, апаратурного забезпеченняабо створення нових методик.

+ + + +

Знаходити шляхи швидкого і ефективного розв’язкупоставленого завдання, генерування ідей, використовуючиотримані знання та навички.

+ + + +

Застосовувати набуті знання за спеціалізацією длявирішення конкретних практичних завдань.

+ + +

Знати принципи розробки алгоритму та проведеннядослідно-пошукової діяльності за спеціалізацією.

+ +

Використовувати бібліотеки, інформаційні бази даних,інтернет ресурси для пошуку необхідної інформації.

+ + +

Використовувати інноваційні підходи для розв’язанняконкретних біологічних завдань.

+ + + +

Представляти результати наукової роботи письмово (увигляді звіту, наукових публікацій тощо) та усно (у формідоповідей та захисту звіту) з використанням сучаснихтехнологій, коректно вести дискусію.

+ + +

7. Схема формування оцінки.

7.1 Форми оцінювання студентів:

- семестрове оцінювання: 1. Контрольна робота з 1-ї частини: РН 1.1, 1.2, 2.2, 3.1 – 30 балів/15 балів2. Контрольна робота з 2-ї частини: РН 1.1, 1.2, 2.1, 2.2 – 30 балів/15 балів3. Лабораторні роботи (30 робіт): РН 1.2, 2.1, 2.2, 3.1 – 30 балів/15 балів4. Реферат 1 РН 3.1 – 5 балів/2,5 балів5. Реферат 2 РН 3.1 – 5 балів/2,5 балів

- підсумкове оцінювання: у формі залікуПідсумкова оцінка за залік виставляється як сума всіх форм семестрового оцінювання.

Студент отримує залік («зараховано») лише за умови успішного виконання всіх практичнихробіт (по кожній не менше 50% від максимально можливої кількості балів), успішного виконаннязавдань 4-х модульних контрольних робіт (по кожній не менше 50% правильних відповідей).

Залік виставляється як сума балів, отриманих під час семестру.Для отримання позитивної оцінки за залік, студент має набрати не менше ніж 60 балів.

7.2 Організація оцінювання: Оцінювання практичних робіт здійснюється протягомсеместру. Модульні контрольні роботи 1, 2 та 3 проводяться після завершення лекцій зрозділів 1, 2 та 3, відповідно. Оцінка контрольних робіт 1 та 2 проводиться всерединісеместру, контрольної роботи 3 – наприкінці семестру.

7.3 Шкала відповідності оцінокЗараховано / Passed 60-100Не зараховано / Fail 0-59

8. Структура навчальної дисципліни. 8. Структура навчальної дисципліни. Тематичний план лекцій і лабораторних занять

№ п/п Назва лабораторних занятьКількість годин

лекції лабораторні самостійнаробота

Частина 1 Методи діагностики фітовірусних інфекцій

1Методологічні підходи при роботі з фітовірусами 1

2Підготовка рослин для роботи з фітовірусами 1

3Буферні суміші та їх приготування 3

4Відбір рослин для досліджень на території Ботанічного саду ім.О.В. Фоміна 6

5Опрацювання методів візуальної діагностики та методівекспериментального інфікування рослин 6

6Опрацювання серологічних тестів для діагностики рослинногоматеріалу 6

7Діагностика рослинного матеріалу методом подвійноїімунодифузії 6

8Діагностика за допомогою ELISA 6

9Діагностика за допомогою ІФА. 6

10Використання методів люмінесцентної мікроскопії. 6

11Електронна мікроскопія як експрес метод діагностикифітовірусних інфекцій. 6

12Визначення морфології та розмірів фітовірусівелектронномікроскопічними методами. 2

13Осадження фітовірусів за допомогою хімічних та фізичнихметодів. 5

14Виділення та очистка фітовірусів. 5

15Отримання діагностичної та нормальної сироватки. 5

16Оздоровлення вірусінфікованого насіння. 5

17Теми самостійної роботи

Дотримання правил асептики та антисептики з вірусами рослинпотрібно. 3

Типи теплиць, що використовуються при роботі з вірусами рослин. 8Аналіз факторів, що впливають на буферну ємкість. 8Визначення відсотку розповсюдження вірусних інфекцій нарослини глоду на території Ботанічного саду ім. О.В. Фоміна.Виготовлення гербарію з рослин, що уражені вірусами.

8

Аналіз факторів, що впливають на інфекційні титри фітовірусів.Рослини, що використовуються при біологічному тестуванні якіндикатори до ХВК, YBK, SВK,MВK.

8

Перевага та недоліки опрацьованих на лабораторних роботахсерологічних тестів. Одержання специфічних антисорваток довірусів. Адьюванти, їх різновиди, характеристика та склад.

8

Імунодифузійні тести. РПД за Оухтерлоні. Реакція радіальноїіимунодифузії за Манчіні. Визначення тетру та серологічноїспорідненності.

8

Антивидові антитіла при пстановці рекції ELISA. Визначенняконцентрації антигену (кількісне визначення) за допомогою ІФА.

8

Варіанти.Переваги методу люмінесцентної мікроскопії в порівнянні зіншими методами світлової мікроскопії при діагностиціфітовірусних інфекцій.

8

Метод ультратонких зрізів тканин рослин дляелетронномікроскопічних досліджень. Методи одержання. 8

Речовини, що використовуються для осадження фітовірусів.Порівняння схем виділення фітовірусів для отриманнядіагностичної сироватки та для накопичення.

8

Модульна контрольна робота 1 2

Частина2 Тканинні культури, як модельна система для дослідження вірусів людини та тварин

18Організація вірусологічних лабораторій, що працюють з вірусамилюдини і тварин. 3

19Підготовка скляного посуду, гумових предметів і металевихінструментів для роботи з культурами клітин та тканин. 3

20Культивування клітинних організмів в штучних умовах in vitro. 3

21Приготування сольових розчинів – мінеральної основи поживнихсередовищ для культивування тваринних клітин та тканин позаорганізмом.

6

22Харчові потреби та особливості метаболізму клітин в культурі. Рольсироватки при культивуванні клітин in vitro. 6

23

Тканини тварин та їх попередня обробка. Дезінтеграція тканин,приготування первинно-трипсинізованих культур з нирки щура.Одержання первинно-трипсинізованої культури з нирок білогощура.

6

24Одержання первинно-трипсинізованої культури фібробластівкурячих ембріонів. 6

25Класифікація, опис та субкультивування постійних культур клітин. 6

26Культивування вірусів в стабільних клітинних лініях. 6

27Індикація та ідентифікація вірусів за цитопатичною дією (ЦПД). 6

28Титрування вірусних антигенів та противірусних антитіл методомбляшок. 6

29Вплив вірусів на генетичний апарат клітини. 6

30Титрування вірусних антигенів та антитіл методом кольоровоїреакції. 6

31Використання реакції гемадсорбції для титрування вірусів та їхідентифікації. 6

32Теми самостійної роботи

Джерела та причини зараження персоналу у вірусологічнійлабораторії. Шляхи зараження персоналу у вірусологічнійлабораторії.

3

Етапи підготовки нового та ужитого посуду. Методи стерилізаціїпосуду та обладнання.Особливості стерилізації скляного, гумовогота металевого посуду та інструментарію.

8

Потреби клітин у хімічних та фізичних факторах росту. Буфернаємність та аналіз факторів, що її визначають. Особливості вимогтваринних клітин до культивування invitro.

8

Особливості росту клітин в культурі. Крива росту. Ріст первинних таперещеплюваних культур клітин. 8

Органні культури та їх застосування у вірусологічнихдослідженнях. 8

Особливості отримання, культивування первинних культур.Паспорт культури. Приклади. 8

Пасирування культур клітин. Морфологія, фізіологіяперещеплюваних ліній клітин. Поняття «чистої» лінії та штаму.Вимоги до них та отримання. Методи одержання клонів клітиннихштамів за Сенфорда, Пака, Ченка та Уілді.

8

Методи інокуляції культур клітин вірусами. Накопичення вірусів укультурах. Чутливість різних клітинних ліній до вірусів. 8

Метод бляшок, адаптований для кількісного визначення вірусногонавантаження та вмісту антитіл (ефективності імунітету). 8

Механізм дії вірусів на генетичний аппарат клітини. Каріологічнізміни, що виникають під дією аденовірусів. Вплив вірусів групивіспи на хромосоми.Аномальні мітози та клітини з мікроядрамивнаслідок діє вірусу герпесу людинии 1-го типу.

8

Колориметричні методи у кількісній оцінці вірусного навантаженнята противірусних антитіл. 8

Модульна контрольна робота 2 2

Всього 150 170

Загальний обсяг_ 330 год., в тому числі:Лабораторні заняття — 150 год.Самостійна робота – 170 год.Консультацій – 10 год.

9. Рекомендовані джерела:

Посилання на електронні ресурси:https://viralzone.expasy.org/http://www.freebookcentre.net/Biology/Virology-Books.htmlhttp://www.sciencedirect.com/journal/current-opinion-in-virologyОсновна:

1. Ахатов А.К. , Ижевский С.С., Синев С.Ю. Новый вредитель томатов в России. –2011, 25с.

2. Вредители тепличных и оранжерейных растений (морфология, образ жизни,вредоносность, борьба). КМК.М., под .ред. А.К. Ахатова, С.С. Ижеский. 2004.-308с.

3. Мищенко Л.Т. Вірусні хвороби озимої пшениці. – К.Фітосоціоцентр. 2009. -316с.4. Руднева Т.О., Шевченко Т.П., Полищук В.П., Бойко А.Л. Вірусні хвороби томатів

в Україні. Діагностика та методи боротьби. Методичні рекомендації . К.: 2012. –23с.

5. Руднева Т.О., Шевченко Т.П., Полищук В.П., Бойко А.Л. Вірусни хвороби перцюсолодкого в Україні. Методичні рекомендації. К.: 2012. – 22с.

6. Сергеев В.А., Собко Ю.А. Культуры клеток в ветеринарии и биотехнологии.- К:Урожай, 1990.-152 с.

7. Фролов А.Ф., Шевченко Л.Ф., Широбоков В.П. Практическая вирусологія. – К., 1989.8. Comparative Plant Virology, Second Edition, by Roger Hull, Emeritus Fellow

Department of Disease and Stress Biology John Innes Centre Norwich, UK, AcademicPressю-376p.

9. Cell culture basic. Handbook for cell culture. Invitrogen. 64p. 10. Basic Cell Culture Protocols. Pollard, Jeffrey W., Walker, John M. 1997. .-482p.

Додаткова

1. Адамс Р. Методы культуры клеток для биохимиков.- М.: Мир, 1983.-264с.2. Борьба с вирусными болезнями растений. Под ред. Атабекова И.Г.- М.

Агропромиздат –1986. – 379 с.3. Гиббс А., Харрисон Б. Основы вирусологии растений. – М.Мир.- 1978. – 429

с.4. Гирин В.М. Порохицький О.О., Посібник з медичної вірусології.- К., 1995.5. Гнутова Р.В. Таксономия вирусов растений Дальнего Востока России. –

Владивосток: Дальнаука, 2009. – 467 с.6. Голубев Д.Б., Соломина А.А., Медведева М.Н. Руководство по применению

клеточных культур в вирусологии. -Ленинград: Медицина, 1976.-224 с.7. Метьюз Г. Вирусы растений. М. Мир, 1973.-600 с.8. Практикум по общей вирусологии. Под ред. Атабекова И.Г.- М.: Университет,

1980.-191с.9. Міщенко Л.Т., Поліщук В.П., Таран О.П., Гордейчик О.І. Вірусні інфекції

картоплі та їх перебіг за умов моделюваної мікрогравітації. – К.Фітосоцірцентрю 2011. – 142 с.

10. Троценко Н.И., Белоусова Р.В., Преображенская Э.А.Практикум по ветеринарнойвирусологии.-М.: Колос, 200.-272 с.

10. Додаткові ресурси:

Методичні рекомендації до спецпрактикумів. Віруси м/о “Віруси рослин”,“Молекулярна біологія вірусів”, Упорядник Токарчук Л.В., Кондратюк О.А.,Поліщук В.П. – 1997. – 42 с.

Лабораторні роботи

Лабораторне робота 1. Методологічні підходи при роботі з фітовірусами( 1 год.)Організація фітовірусологічних лабораторій (обладнання, матеріали, техніка безпеки прироботі з вірусами рослин, приготування посуду, стерилізація посуди, горшків, землі. Аналізнасіння на схожість.

Лабораторне робота 2. Підготовка рослин для роботи з фітовірусами (1 год.)Висадка рослин-індикаторів, диференціаторів та накопичувачів фітовірусів. Організаціятепличного господарства та його значення при роботі з вірусами рослин. Екскурсія втеплицю.

Лабораторне робота 3. Буферні суміші та їх приготування (3 год.)Приготування буферних розчинів – фосфатний буфер pH 5,8 –6,0, цитратний буфер (0,1 М. pH3,0-4,0), трис-буфер (0,05 М , .pH – 7,2-8,0). ВизначенняpH-буферів за допомогою pH-метра.

Лабораторне робота 4. Відбір рослин для досліджень на території Ботанічного саду ім.Фоміна. (6 год.)Симптоми вірусних захворювань на рослинах в закритому ґрунті та в умовах агроценозу.Відбір зразків рослин з симптомами вірусних інфекцій в теплицях Ботанічного саду ім.Фоміна та в агроценозах.

Лабораторне робота 5. Опрацювання методів візуальної діагностики та методівекспериментального інфікування рослин (6 год.)

Аналіз симптомівна рослинах що відібрані під час екскурсії в Ботанічному саду ім. О.В.Фоміна. Експериментальне інфікування рослин методом механічної інокуляції. Визначенняінфекційних титрів (ВТМ, ХВК, YВК).

Лабораторне робота 6. Відпрацювання серологічних тестів для діагностики рослинногоматеріалу (6 год.)Опрацювання методів (краплинна преципітація, преципітація в пробірці, кільцепреципітації)з метою визначення інфекційного титру фітовірусів у рослинному матеріалі.

Лабораторне робота 7. Діагностика рослинного матеріалу методом подвійної імунодифузії(6 год.)Відпрацювання методу подвійної дифузії за Оухтерлоні з метою діагностики рослинногоматеріалу з симптомами вірусних інфекцій, що відібраний на території Виставкового центру.

Лабораторне робота 8. Діагностика за допомогою непрямого ІФА (6 год.).Опанувати методику постановки непрямого ІФА для визначення наявності вірусних антигенівв стеблах та проростках рослин з симптомами вірусних уражень.

Лабораторне робота 9.Діагностика за допомогою методу ELISA (6 год.).Опанувати методи сучасної діагностики ELISA(твердофазний і гомогенний аналіз) наявностівірусних антигенів в насінні та коренях рослин з симптомами вірусного ураження.

Лабораторне робота 10. Використання методів люмінесцентної мікроскопії ( 6 год.).Аналіз включень, що утворюються в клітині при вірусних інфекціях та їх виявлення задопомогою методу люмінесцентної мікроскопії. Опрацювання методики приготуванняпрепаратів для дослідження в люмінесцентних мікроскопах.

Лабораторне робота 11. Електронна мікроскопія як експрес-метод діагностики фітовіруснихінфекцій (6 год.).Відпрацювання методик приготування препаратів для дослідження в електроннихмікроскопах. Виготовлення препаратів методами: занурення, негативного контрастування,розбавленої суспензії, напилення.

Лабораторне робота 12. Визначення морфології та розмірів фітовірусів (2 год.).Використанняелектронної мікроскопії для вивчення морфології та модальної величинифітовірусів.

Лабораторне робота 13.Осадження фітовірусів за допомогою хімічних та фізичних методів(6 год.).Опрацювати методи осадження фітовірусів в ізоелектричній точці, методу висолювання тадиференційного центрифугування..

Лабораторне робота 14 .Виділення та очистка фітовірусів (5 год.).Опрацювати методику виділення вірусу тютюнової мозаїки (ВТМ) з рослин тютюну -підібрати відповідний буферний розчин, освітлення екстракту органічними розчинниками,концентрування вірусної суспензії.

Лабораторне робота 15. Отримання діагностичної та нормальної сироватки (5 год.).Відпрацювання методики імунізації тварин фітовірусами. Відбір крові у експериментальнихтварин (кролів) та отримання діагностичної антисироватки. Визначення титру антисироватки.Отримання нормальної антисироватки та визначення її титру.

Лабораторне робота 16.Оздоровлення вірусоінфікованого насіння (5 год.).Застосування фізичних методів (термотерапія, рентгенівське опромінення, інфрачервонеопромінення) для оздоровлення насіння, що вражене ВТМ.

Лабораторне робота 17. Організація вірусологічних лабораторій, що працюють з вірусамилюдини і тварин (3 год.).Техніка безпеки при роботі з вірусами тварин та лабораторними тваринами, зонуваннявірусологічної лабораторії, типи лабораторій. Поняття стерильної роботи.

Лабораторне робота 18. Підготовка посуду та інструментів для роботи з культурами клітинта тканин (3 год.).Підготовка скляного посуду, гумових предметів і металевих інструментів для роботи зкультурами клітин та тканин.

Лабораторне робота 19. Культивування клітинних організмів в штучних умовах in vitro (3год).Культивування клітинних організмів в штучних умовах in vitro.Лабораторне робота 20. Приготування сольових розчинів – мінеральної основи поживнихсередовищ для культивування тваринних клітин та тканин поза організмом (6 год.).Приготування сольових розчинів – мінеральної основи поживних середовищ длякультивування тваринних клітин та тканин поза організмом.

Лабораторне робота 21. Природні поживні середовища для культивування тваринних клітинта тканинс(6 год.).Харчові потреби та особливості метаболізму клітин в культурі. Призначення, склад, способиприготування природних поживних середовищ. Переваги та недоліки природних середовищ.Роль сироватки при культивуванні клітин in vitro.

Лабораторне робота 22. Тканини тварин та їх попередня обробка. Дезінтеграція тканин,Одержання первинно-трипсинізованих культур з нирки білого щура (6 год.).Тканини тварин та їх попередня обробка. Дезінтеграція тканин, приготування первинно-трипсинізованих культур з нирки білого щура.

Лабораторне робота 23. Одержання первинно-трипсинізованої культури фібробластівкурячих ембріонів (6 год.).

Лабораторне робота 24. Класифікація, опис та субкультивування постійних культур клітин(6 год.).Культури перещеплюваних клітинних штамів. Методика перещеплення культур клітин.

Лабораторне робота 25. Культивування вірусів в клітинах тканинних культур (6 год.).

Лабораторне робота 26. Індикація, ідентифікація та титрування вірусних антигенів тапротивірусних антитіл за цитопатичною дією (6 год.).

Лабораторне робота 27. Титрування вірусних антигенів та противірусних антитіл методомбляшок (6 год.).

Лабораторне робота 28. Вплив вірусів на генетичний апарат клітини.Підрахунок хромосомлімфоцитів білого щура (6 год.).

Лабораторне робота 29. Титрування вірусних антигенів та антитіл методом кольоровоїреакції (6 год.).

Лабораторне робота 30. Використання реакції гемадсорбції для титрування вірусів та їхідентифікації (6 год).

ЗАВДАННЯ МОДУЛЬНОЇ КОНТРОЛЬНОЇ РОБОТИ1. Як готується ґрунтова суміш для висадки рослин?2. З якою метою використовують у фітовірусології рослини-індикатори?3. Назвіть основні рослини-індикатори.4. Які типи реакцій рослин на ураження їх вірусами Ви знаєте?5. Які шляхи передачі вірусів рослин Вам відомі?6. З якою метою застосовується фосфатний буфер у гомогенізації рослин із симптомами

вірусного враження?7. Які абразиви використовуються при механічній інокуляції та яка їх роль в інфікуванні

рослини?8. Через який час з’являються симптоми на інфікованих рослинах?9. Складіть схему способів передачі для таких вірусів (ВТМ, ВОМ, ВЖКЯ).10. Які віруси можуть передаватись через ґрунт?11. Назвіть найбільш розповсюджені методи імунологічної діагностики фітовірусів.12. У чому полягає суть методу імуноферментного аналізу?13. Які модифікації імуноферментного аналізу вам відомі?14. Як готується розчин антикролячих антитіл?15. Чим відрізняється екстракція вірусів рослин від освітлення вірусного екстракту?16. Для чого використовують рідкий азот при виділенні вірусів рослин?17. Розподільча здатність електронного мікроскопу.18. Методи приготування препаратів.19. В чому принцип реакції кільцепреципітації? 20. Чим обумовлена необхідність контрастування вірусів для досліджень в ЕМ?21. Складіть схему виділення та очистки таких вірусів: ВТМ, ВОМ, ВПЗТ, ВККК.22. Що таке діаліз та з якою метою його використовують в фітовірусології?23. Які чинники можуть впливати на інфекційність вірусу?24. Чим відрізняється екстракція вірусів-рослин від освітлення вірусного екстракту?25. Чому при роботі з вірусами рослин використовують різні буферні суміші?26. Чому для культивування клітин та тканин поза організмом використовують посуд

особливої чистоти, очищений спеціальним способом і простерилізований?27. Які види посуду необхідні для вирощування культур клітин?28. У чому різниця в методах обробки нового посуду і такого, що вже використовувався?29. Описати обробку гумових предметів, які використовують при культивуванні клітин.30. Охарактеризувати методи стерилізації посуду, металевого інструментарію й гумових

предметів.31. Назвати основні фактори, що впливають на ріст клітин в умовах in vіtro?32. Що таке сольовий розчин?33. Охарактеризувати функції сольових розчинів?34. Який індикатор додають в сольові розчини для візуального визначення зміни рН

середовища?35. У чому полягає функція сироватки при культивування клітин?36. Основні компоненти сироватки, що впливають на ріст, розмноження та роз

пластування клітин культури?37. Назвати переваги та недоліки використання без сироваткових середовищ?38. Опишіть типи культур клітин, які використовують у вірусологічних дослідженнях?39. Що таке первинна культура клітин?40. Що таке “клітинна субкультура”, “клітинна лінія” та “клітинний штам”?41. Назвати характерні властивості стабільних (постійних) клітинних ліній.42. Перелічити переваги стабільних клітинних ліній у порівнянні з первинними.

43. Охарактеризувати культивування суспензійних культур.44. Охарактеризувати ролерне культивування клітин.45. Крива росту клітин у культурі. Фази.46. Що таке “хемостат” та “турбідіостат”?47. Переваги використання проточних культур ?48. Від чого залежить питома швидкість росту клітин у проточних культурах?49. Чим визначається час регенерації культури?50. Що таке “запас клітин для посіву” та “запас клітин для розподілення”51. Методи заморожування клітин.52. Назвіть відомі кріопротектори.53. Методи підтвердження виду клітин у процесі визначення якості клітинних ліній після

заморожування. Перелічите.54. Методи визначення життєздатності клітин після заморожування, перелічите.55. Чому необхідно уникати утворення капілярів при запаюванні ампул з КК? 56. Перелічите тести визначення мікробного зараження у культурі.57. Отримання клонів методом Пака, Маркуса та Чиєчура, методом Уілді та Стокера.58. Опишіть метод однократної тривалої трипсинізації. 59. Які методи індикації вірусів у культурі клітин ви знаєте?60. Що таке цитопатогенний вірус?61. Що таке ЦПД?62. Назвіть основні типи ЦПД.63. Зазначите каріологічні зміни, що виникають під дією вірусів.64. Що таке титр вірусу?65. Якими є одиниці виміру кількості вірусу?66. Принцип визначення титру вірусу в БУО?67. У чому принцип визначення титру вірусу в одиницях 50%-ої інфекційної дії?68. З якою метою застосовують реакцію гемадсорбції у вірусологічних дослідженнях?

Питання на залік1. В чому різниця між асептикою та антисептикою?2. У чому різниця в методах обробки нового посуду і такого, що вже використовувався?3. Описати обробку гумових предметів, які використовують при культивуванні клітин.4. Охарактеризувати методи стерилізації посуду, металевого інструментарію й гумових

предметів.5. Як готується насіння для пророщення, та як визначається відсоток схожості?6. Які типи теплиць використовуються при роботі з вірусами рослин ?7. Дайте визначення терміну «рослина-хазяїн».8. Які типи реакцій рослин на ураження їх вірусами Ви знаєте?9. Проаналізувати фактори що впливають на інфекційні титри фітовірусів.10. Назвіть основні рослини-індикатори.11. Яка різниця між рослинами-індикаторами та рослинами-диференціаторами?12. Назвіть рослини, що використовуються при біологічному тестуванні як індикатори до

ХВК, YBK, SВK, MВK.13. Які шляхи передачі вірусів рослин Вам відомі?14. Через який час з’являються симптоми на інфікованих рослинах?15. Складіть схему способів передачі для таких вірусів (ВТМ, ВОМ, ВЖКЯ).16. Які віруси можуть передаватись через ґрунт?17. Назвіть найбільш розповсюджені методи імунологічної діагностики фітовірусів.18. У чому полягає суть методу імуноферментного аналізу? Які модифікації

імуноферментного аналізу вам відомі?19. Чим відрізняється екстракція вірусів рослин від освітлення вірусного екстракту?20. Розподільча здатність електронного мікроскопу.21. Методи приготування препаратів для електронно-мікроскопічних досліджень.22. Чим обумовлена необхідність контрастування вірусів для досліджень в ЕМ?23. Складіть схему виділення та очистки таких вірусів: ВТМ, ВОМ, ВПЗТ, ВККК.24. Що таке діаліз та з якою метою його використовують в фітовірусології?25. Які чинники можуть впливати на інфекційність вірусу?26. Чим відрізняється екстракція вірусів-рослин від освітлення вірусного екстракту?27. Чому при роботі з вірусами рослин використовують різні буферні суміші?28. Чому для культивування клітин та тканин поза організмом використовують посуд

особливої чистоти, очищений спеціальним способом і простерилізований?29. Які види посуду необхідні для вирощування культур клітин?30. Назвати основні фактори, що впливають на ріст клітин в умовах in vіtro?31. Що таке сольовий розчин? Охарактеризувати функції сольових розчинів.32. Який індикатор додають в сольові розчини для візуального визначення зміни рН

середовища?33. У чому полягає функція сироватки при культивування клітин?34. Основні компоненти сироватки, що впливають на ріст, розмноження та роз

пластування клітин культури.35. Назвати переваги та недоліки використання безсироваткових середовищ?36. Опишіть типи культур клітин, які використовують у вірусологічних дослідженнях.37. Що таке первинна культура клітин?38. Що таке “клітинна субкультура”, “клітинна лінія” та “клітинний штам”?39. Назвати характерні властивості стабільних (постійних) клітинних ліній.40. Перелічити переваги стабільних клітинних ліній у порівнянні з первинними.41. Охарактеризувати культивування суспензійних культур.42. Охарактеризувати ролерне культивування клітин.43. Крива росту клітин у культурі. Фази.44. Проточні культури клітин. Переваги використання проточних культур.45. Від чого залежить питома швидкість росту клітин у проточних культурах?

46. Чим визначається час регенерації культури?47. Що таке “запас клітин для посіву” та “запас клітин для розподілення”48. Методи заморожування клітин.49. Назвіть відомі кріопротектори.50. Методи підтвердження виду клітин у процесі визначення якості клітинних ліній після

заморожування. Перелічите.51. Методи визначення життєздатності клітин після заморожування, перелічите.52. Чому необхідно уникати утворення капілярів при запаюванні ампул з КК? 53. Перелічите тести визначення мікробного зараження у культурі.54. Отримання клонів методом Пака, Маркуса та Чиєчура, методом Уілді та Стокера.55. Форми взаємодії вірусів з клітинами.56. Основні типи взаємодії вірусів з клітинами.57. Які методи індикації вірусів у культурі клітин ви знаєте?58. Цитопатична дія вірусів.59. Фактори, що зумовлюють взаємодію вірусів та клітин. Стадії репродукції вірусів у

клітині.60. Що таке цитопатогенний вірус?61. Назвіть основні типи ЦПД.62. Зазначите каріологічні зміни, що виникають під дією вірусів.63. Що таке титр вірусу?64. Якими є одиниці виміру кількості вірусу?65. У чому принцип визначення титру вірусу в одиницях 50%-ої інфекційної дії?