第三章 消毒与灭菌 1. 灭菌（ sterilization ） 指杀灭物体中所有病原微生物和非病

原微生物及其芽胞、霉菌孢子的方法。

2. 消毒（ disinfection ） 指杀灭物体中的病原微生物的方法。消毒只要求达到消除传染性的目的，而对非病原微生物及其芽胞、孢子并不严格要求全部杀死。

3. 防腐（ antisepsis ） 指阻止或抑制微生物生长繁殖的方法。

4. 无菌（ asepsis ）指没有活的微生物的状态。采取防止或杜绝任何微生物进入动物机体或其它物体的方法，称为无菌法。以无菌法进行的操作称为无菌操作。

物理因素对微生物的影响

物理因素

温 度

辐射

干 燥

超声波

微 波

滤过除菌

( 一 ) 低温 大多数微生物对低温具有很强的抵抗力 。低温下，代谢活动降低到最低水平，生长繁殖停止，但仍可长时间保持活力。

意义：保存菌种、毒种、疫苗等

一、温 度

热力灭菌法：干热灭菌 和湿热灭菌两种方法。

二者比较：在同一温度下，后者效力比前者为大。 原因：（ 1 ）湿热中细菌菌体蛋白较易凝固； （ 2 ）湿热的穿透力比干热大；

（ 3 ）湿热的蒸汽有潜热存在。

( 二 ) 高温：高温对微生物具有明显的致死作用 .

(1) 火焰灭菌法 : 火焰直接烧灼，如接种环 。

1. 干热灭菌法

(2) 热空气灭菌法 干热灭菌器适用于高温下不损坏、不变质的物品 ,

如玻璃器皿、瓷器等的灭菌。 灭菌温度需 160℃ 维持 2 h 。

(1) 煮沸灭菌 : 煮沸 10 ～ 20 min 可杀死所有细菌的繁殖 体，芽胞常需煮沸 1 ～ 2 h 才被杀死 。用于饮水、一般器械

如刀剪的消毒。

(2) 巴氏消毒法 : 以较低温度杀灭液态食品中的病原菌或特定微生物，而又不致严重损害其营养成分和风味的消毒方法 .

1. 低温维持巴氏消毒法 63 ～ 65℃30min

2. 高温瞬时巴氏消毒法 71 ～ 72℃15s

3. 超高温巴氏消毒法 132℃1 ～ 2s

2. 湿热灭菌法

（ 3 ）流通蒸汽灭菌法 ：是一种常压蒸汽消毒法，细菌

繁殖体 15-30 分钟可杀灭，但芽孢不全部被杀灭。

(4) 间歇灭菌法 （反复多次流通蒸汽）

100℃ 维持 30min 温箱过夜 100℃ 维持 30min 温

箱过夜 100℃ 维持 30min 温箱过夜 100℃ 维持 30

min 。

此法常用于一些不耐高温的培养基，如鸡蛋培养基、血清

培养基、糖培养基的灭菌 。

高压蒸汽灭菌器： 15磅 /平

方英寸， 121.3℃ 温度下维

持 15 ～ 20min 。

应用此法灭菌，一定要充分

排除灭菌器内原有的冷空气。

用于普通培养基、生理盐水、

耐热药品、手术敷料等。

手提式高压蒸汽灭菌器

（ 5 ）高压蒸汽灭菌法

辐射：能量通过空间传递的一种物理现象。 按辐射对微生物的灭活作用分：

1. 非电离辐射 : 可见光、日光、紫外线2.电离辐射 : 、、 γ 、 χ射线以及高能质子、 中子等

二、辐 射

( 一 ) 非电离辐射 1. 可见光 : 指在红外线和紫外线之间的肉眼可见的光线，

其波长 400 ～ 800nm 。可见光线对微生物一般无多大影响，但长时间作用也能妨碍微生物的新陈代谢与繁殖。

光感作用 : 指可见光具有微弱的杀菌作用，若将某些染料如结晶紫、美蓝、汞溴红、伊红、沙黄等加到培养基或涂在外伤表面，能增强可见光的杀菌作用 。

2.阳光 : 直射日光有强烈的杀菌作用，是天然的

杀菌因素。许多微生物在直射日光的照射下，

半小时到数小时即可死亡。芽胞对日光照射的

抵抗力比繁殖体大得多，往往需经 20h 才死亡。

日光的杀菌效力因地、因时及微生物所处环境

不同而异 。

波长 200-300nm 部分有杀菌作用。实验室常使用的紫外线杀菌灯紫外线波长为 253.7nm 。常用于微生物实验室、无菌室、手术室等的空气消毒，或用于不能用高温或化学药品消毒的物品的表面消毒。还可用于诱变育种。

3.紫外线

杀菌机理：

（ 1 ）损害 DNA构型，影响 DNA复制和转录

（ 2 ） O2 O3 O 杀菌

(1) 射线 :电离辐射强 ， 穿透力差（ 缺乏穿透力，不实用）

(2) 射线 :电离辐射强 ， 穿透力强 (3) 射线 :电离辐射弱， 穿透力强（ 4 ） X射线：杀菌力不如紫外线，穿透力强 用途：忌热物品的灭菌消毒、食品保藏和育种等方面 杀菌机制：射线使水电离为 H＋和 OH－，这些游离基是强烈

的还原剂和氧化剂，可直接作用于细菌本身 。

( 二）电离辐射

微生物在干燥的环境中失去大量水分，新陈代谢便会发生障碍，甚至引起菌体蛋白质变性和由于盐类浓度的增高而逐渐导致死亡。不同种类的微生物对干燥的抵抗力差异很大。主要用于菌种和食品的保藏。

三、干 燥

频率在 20 000 ～ 200 000 Hz 的声波称为超声波 。主要用于裂解细胞，提取细胞组分。

四、超声波

五、微 波

从几百兆赫至几十万兆赫频率的无线电波称为微波。所需时间短、加热均匀。主要用于陶瓷、耐热玻璃容器和塑料器皿，金属器皿忌用。

滤过除菌 : 通过机械阻留作用将液体或空气中的细菌等微生物除去的方法。但滤过除菌常不能除去病毒、霉形体以及细菌 L 型等小颗粒。主要用于不耐高温的营养液、血清、抗菌素、空气等除菌。

六、滤 过

复习重点

1. 灭菌、消毒、防腐、无菌的概念。

2. 物理消毒灭菌方法主要有哪些？如何合理选用这

些消毒方法？