時間 経過時間N30- 3① N30- 3② N30- 3③ 平均

開始 2009/ 8/ 3 17:00 0 10,111 11,964 10,682 10,919計数 2009/ 8/ 4 11:00 18 32,677 39,663 38,423 36,921計数 2009/ 8/ 5 10:00 41 33,930 39,198 33,775 35,635計数 2009/ 8/ 6 13:00 68 58,100 43,846 50,663 50,870計数 2009/ 8/ 7 12:00 91 36,719 48,184 37,959 40,954計数 2009/ 8/ 9 17:00 144 48,494 66,466 37,029 50,663計数 2009/ 8/ 12 17:00 216 52,213 44,621 33,775 43,536計数 2009/ 8/ 17 18:00 337 37,804 42,762 32,536 37,700計数 2009/ 8/ 20 13:00 404 31,142 26,984 25,147 27,758計数 2009/ 8/ 25 10:00 521 37,959 20,451 34,550 30,987計数 2009/ 8/ 30 11:00 642 33,001 30,423 26,984 30,136計数 2009/ 9/ 4 13:00 764 32,395 14,912 19,315 22,208

N30-3

時間 経過時間N512- 6① N512- 6② N512- 6③ 平均

開始 2009/ 8/ 12 17:00 0 9,916 11,620 9,141 10,226計数 2009/ 8/ 17 18:00 121 15,958 15,338 18,592 16,630計数 2009/ 8/ 18 10:00 137 15,374 25,564 22,465 21,134計数 2009/ 8/ 19 10:00 161 17,043 22,001 16,804 18,616計数 2009/ 8/ 20 13:00 188 17,456 14,497 19,418 17,124計数 2009/ 8/ 25 10:00 305 11,620 257,964 17,766 95,783計数 2009/ 8/ 28 11:00 378 17,249 417,855 15,978 150,361計数 2009/ 8/ 31 10:00 449 15,203 526,154 13,221 184,859計数 2009/ 9/ 4 13:00 548 10,555 639,565 14,829 221,650

N512-6

時間 経過時間N611- 1① N611- 1② N611- 1③ 平均

開始 2009/ 8/ 12 17:00 0 8,986 8,676 10,535 9,399計数 2009/ 8/ 17 18:00 121 15,648 24,170 21,691 20,503計数 2009/ 8/ 18 10:00 137 31,142 33,001 32,536 32,226計数 2009/ 8/ 19 10:00 161 46,170 50,353 31,761 42,762計数 2009/ 8/ 20 13:00 188 39,198 61,509 35,790 45,499計数 2009/ 8/ 25 10:00 305 136,651 1,021,011 101,017 419,559計数 2009/ 8/ 28 11:00 378 157,257 712,177 108,298 325,911計数 2009/ 8/ 31 10:00 449 541,492 1,132,253 324,895 666,213計数 2009/ 9/ 4 13:00 548 1,067,181 655,368 431,799 718,116

N611-1

本培養　計数結果

　No． 2

　藍藻 Phormidium tenue の光特性とカビ臭物質の発生機構の解明プロジェクト

Study on optical characteristics and musty odor compound of Phormidium tenue

　 　 　 　 参加登録学生：

　福山朝子 (Fukuyama 　 Asako) 　，劉 顯傑（ Ryu 　 Kenketsu ）

指導担当教員：

浅枝 隆 (Asaeda Takashi)

　学外の連携組織： (財 ) ダム水源地環境整備センター（ WEC)( 株 )環境科学コーポレーション東京都水道局水源管理事務所

はじめに・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ダム湖に発生する藍藻 Phormideium tenueはカビ臭を発生させることが知られている。ここでは、室内実験や野外観測によって、 Phormidiumのカビ臭発生の特性および Phormidium自体の増殖についての分光特性を調べ、カビ臭の発生抑制の方法を理論的に確立する。・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

Introduction・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・It is known that Phormideium tenue generated in the dam lake are generated of the moldy smell. So the spectrum characteristic of the proliferation of the characteristic of the moldy smell generation of Phormidium and Phormidium is examined by the laboratory experiment and the field observation, and the generation control of moldy smell method is established theoretically.・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

背景・目的全国のダム貯水池、自然湖沼で存在が確認されている藍藻 Phormideium tenueは２－MIB（ジメチルイソボルネオール )によるカビ臭を発生させることが知られている。現在 Phormidium tenueは誤同定によって複数種を含んでおり、緑株と茶株の存在が知られている。そこで、今回のプロジェクトではこれまで Phormidiumの代表的な株として、多くの研究で使用されてきた国立環境研究所の 3 種の株を用いて室内実験や野外観測を行い、 Phormidiumのカビ臭発生の特性および Phormidium自体の増殖についての分光特性を調べる。また、カビ臭の発生抑制の方法を理論的に確立することを目的とする。

今後の研究方針本培養では細胞数の増殖スピードが遅く、仮定していた結果を得られなかった。このため、現在培養中のフラスコからまた新たな培地に分注し、同様に計測する。また、現行の光条件を変化させてみることによって、細胞の色に異変が現れるかなど調べる。

Fig5. in incubator

①N/P比を 32に設定した CT培地を使用し、

　培養株3 種類（分譲先：国立環境研究所）を

　植えつける。②落射蛍光顕微鏡を用いて細胞数のカウント

　細胞数 /ｍｌ＝（細胞数 /視野数） × 面積計数 ÷ ろ過量

※少なくとも数百万細胞 /ｍｌまで増殖させる必要がある。③前培養が終了した試料をろ過し、

　光合成色素分析を実施する。

⑥計数によって増殖がとまっていることを確認し、

　試料のろ過、分析試料の準備を行う。

④前培養時と同じ培地を準備し、

　添加株の濃度を確認する。

　培養庫の温度、光、明暗周期の設定を確認する。⑤1 日 1 回程度藻類が固まらないようにフラスコを振倒する。

　また、株の増殖の様子を定期的な計数によって確認し、

　増殖カーブを作成する。

培養実験の流れ

前培養　計数結果

日数 NIES- 30- 1 NIES- 30- 2 NIES- 30- 3 NIES- 512- 4 NIES- 512- 5 NIES- 512- 6NIES- 611- 1NIES- 611- 2 NIES- 611- 30 5,709 77,157 455,039 396,474 269,1193 6,391 12,395 35,441 103,186 673,960 378,347 286,7827 3,994 11,531 127,355 102,256 592,155 481,068 269,11910 72,276 68,326 202,498 50,198 579,606 469,448 224,03416 108,763 224,498 54,382 387,178 371,840 166,86317 1,417,640 283,760 48,107 378,812 314,205 152,45422 16,678 3,497,620 253,548 10,949 437,377 323,501 147,34226 94,122 42,994 619,114 7,437 570,774 574,958 334,65630 515,928 343,952 1,221,494 988,165 783,653 742,750 495,47735 2,484,356 547,800 1,045,800 999,32037 1,042,082 989,094

/細胞数 ｍｌ

0

500000

1000000

1500000

2000000

2500000

3000000

3500000

4000000

0 3 7 10 16 17 22 26 30 35 37経過日数

/細胞数ｍｌ

NIES-30-1NIES-30-2NIES-30-3NIES-512-4NIES-512-5NIES-512-6NIES-611-1NIES-611-2NIES-611-3

前培養　増殖カーブ

0

10000

20000

30000

40000

50000

60000

70000

0 18 41 68 91 144 216 337 404 521 642 764

経過時間（ｈ）

/細胞数ｍｌ

N30-3①N30-3②N30-3③

0

100000

200000

300000

400000

500000

600000

700000

0 121 137 161 188 305 378 449 548

経過時間（ｈ）

/細胞数ｍｌ

N512-6①N512-6②N512-6③

0

200000

400000

600000

800000

1000000

1200000

0 121 137 161 188 305 378 449 548

経過時間（ｈ）

/細胞数ｍｌ

N611-1①N611-1②N611-1③

本培養　増殖カーブ

培養実験　結果

前培養 本培養μ Mol/照度（ ㎡） 75 25

℃温度（ ） 23 25明暗周期（時間） 12 12光条件（色） 白 白、赤、緑

培養条件の比較

前培養　分析結果

照度 光量子 温度 ﾌｨｺｼｱﾆﾝ（ＰＣ）ﾌｨｺｴﾘﾄﾘﾝ（ＰＥ） a Chl-a)ｸﾛﾛﾌｨﾙ （ - MIB２ ｼ ｪ゙ｵ ｽﾐﾝ

Lux μ Mol/ ㎡ ℃ cells/ mL μ g/ L μ g/ L μ g/ L ng/ L ng/ L

NIES- 30 3,400,000 501.9 <0.2 35.7 14 <1

NIES- 611 1,040,000 3.4 <0.2 43.6 11 <1

NIES- 512 980,000 76.6 <0.2 17.5 28,472 <10

252,000 75

本培養前

白

カビ臭物質細胞数

培養条件培養株名

試験区分光条件

光合成色素

NIES－３０（白色光）

NIES－５１２（白色光）

NIES－ 611（白色光）

NIES－ 611（赤色光）

前培養では NIES-30が最も早く本培養開始可能な細胞数に達した。（ 100万細胞 /ｍｌ以上）本培養では、光条件の違いにより細胞の色が変化することが見て取れる。