علم األحياء الدقيقة نمو البكتيريا

7

دكتور يوسف الشريك

البكتيريا تعريف في المستخدمة األسس :هي البكتيريا وتصنيف تعريف في المستخدمة األسس أهم

Macroscopic النظرية الظاهرية الصفات-1

morphology

-القوام – الحجم) البكتيرية للمستعمرة العام الشكل :ومنها

.(البيئة في النمو وطبيعة سرعة -الصبغات

Microscopic المجهرية الظاهرية الصفات -2

morphology

كروية، عصوية،) البكتيرية للخلية العام الشكل - ومنها

(الخ...حلزونية

.جرام صبغة•

.لألحماض مقاومة صبغة•

الجدار سمك األهداب، وموضعها، األسواط وجود الى باإلضافة•

:والفسيولوجية البيوكيميائية الخصائص -3•

:مثل اإلنزيمية الخصائص وتشمل•

السكريات تحليل•

.البروتينات و الكيميائية المركبات بعض تحليل على القدرة•

.(مقاومة حساسة،) الحيوية المضادات لتأثير اإلستجابة•

والغشاء الخلوي الجدار مكونات كتحليل :الكيميائي التحليل -4• .الخلوي

المضادة األجسام بين التفاعل :(السيرولوجي) المصلي التحليل -5•

Antibodies واألنتجين Antigens البكتيرية األنواع لتعريف.

النيوكليوتيدات وترتيب تعاقب دراسة :النووي الحامض تحليل -6• .النووي الحمض في

تقسيم البكتيريا• :الهدف من التقسيم • .لتسهيل الدراسة• .للتعريف والتمييز بين األنواع واألجناس• .منها في المجاالت التطبيقية لإلستفادة•شكل البكتيريا الظاهري، صبغة )...تقسيميوهو مفتاح ( بيرجينظام )تقسيم •

(.الخ....جرام، األهدابالنظام المبني على تقسيم البكتيريا الى مجموعات اعتماداً على مقارنة •

وفي هذا التقسيم فقد تم RNAللحمض النووي النيتروجينيةوترتيب القواعد :ومنها Eubacteriaتقسيم البكتيريا الى احدى عشر فرع مستقل في شجرة

,Bacillus)الموجبة لصبغة جرام الحقيقيةالبكتيريا -أ •Actinomycetes)

(Pseudomonous)السالبة لصبغة جرام الحقيقيةالبكتيريا -ب •البكتيريا التمثيلية المحتوية على صبغة الكلوروفيل أ - جـ •

Cyanobacteria Spirochetesالبكتيريا الحلزونية -د • .المتبرعمةهـ ـ البكتيريا •

الريبوسوميالتقسيم المبني على تحليل الحامض النووي •rRNA حيث تم تقسيم البكتيريا الى ثالث مجموعات هي:

.البكتيريا القادرة على تصنيع الميثان•

.البكتيريا المحبة للملوحة •

.البكتيريا المحبة للحرارة العالية•

البكتيريا وتكاثر نمو•

الخاليا عدد زيادة -:النمو بيئة•

.الضعف إلى البكتيريا الخاليا انقسام زمن - : الجيلي زمن•

االنقسام الثنائي البسيط•

Exponentiallyتبدأ خلية البكتيريا في النمو بالدالة اآلسية •

،(1جدول )

عددددددددددددددددددد

الخاليا

قوة الدالة

اآلسية

عدد الخاليا بدالة اآلسية

1 02 *

2 12 **

4 22 ****

8 32 ********

16 42 ****************

32 52 ********************************

تكاثر الخاليا البكتيرية عن طريق التقسيم الثنائي( 1) جدول

وتنقسم كل خلية بطريقة االنقسام الثنائي البسيط، بمجرد •

نقلها على بيئة مغذية الشكل التالي

مراحل النمو البكتيريا

تنقسم مرحلة نمو البكتيريا إلى أربعة مراحل التالية

مرحلة التأقلم1.

مرحلة النمو2.

مرحلة الثبات أو األزمة3.

مرحلة الموت4.

:ويتميز بـالتالي Lag Phaseمرحلة التأقلم•

األقلمة على الظروف الجديدةمرحلة 1.

بداية التغذية2.

ال يوجد تكاثر الخاليا وإن وجد فهو قليل جدا3.

:مميزاتهاومن أهم Exponential (Log) Phase)النمو مرحلة •

المراحلأنشط •

.توفر الغذاء والبكتيريا متأقلمة على الظروف وفي قمة النشاط والتكاثر•

.تزايديةالمنحنى تصاعدي رأسي بسرعة •

.الميتهبكثير من عدد الخاليا أكثر عدد الخاليا الجديدة •

:بـالتالي ويتميز Stationary Phase مرحلة الثبات•

.عدد الخاليا الجديدة= الميتة عدد الخاليا 1.

الثابتالمنحنى يأخذ الشكل األفقي 2.

:نتيجة تدهور الظروف في المستعمرة 3.

قلة الغذاء نتيجة المنافسة•

انخفاض األكسجين•

االمخلفاتتراكم •

pHتغيير في درجة•

ويتميز Decline (Death) Phaseمرحلة الموت •

: بـالتليهذا الطور

.المنحنى يتجه الى أسفل•

.في المستعمرة الميتهزيادة عدد الخاليا البكتيرية •

.زيادة سوء الظروف وقلة الغذاء•

:النمو منحنى دراسة أهمية•

ومعرف البكتيريا مع التعامل في البكتيري النمو منحنى دراسة تفيد في ذلك يفيد حيث المختلفة نموها وأطوار نشاطها أوج

المكافحة أو /و المقاومة مجاالت1.

المرضية اإلصابات2.

.والتسمم الميكروبي األغذية فساد3.

للموت وعرضه حساسية المراحل أكثر هي النمو مرحلة عامة•

.الكيميائية المواد أو الحرارة بفعل

يمكن حساب عدد خاليا البكتيريا في أي مرحلة من مراحل • :النمو المختلفة باستخدام المعادلة التالية

• (N2)2n=N1

•N1 =العدد الكلي للخاليا في نقطة ما من المنحنى.

•N2 =العدد المبدئي للخاليا البكتيرية.

•n =عدد األجيال

•2n =عدد الخاليا في الجيل الواحد.

الذي بتري طبق في النامية بكتيريا خاليا عدد تقدير :مثال• 4 لمدة الطبق ترك حيث للنمو، مالئمة بيئة على يحتوى

رطوبة حرارة،) مناسبة ظروف في ساعات (240= 60×4) والزمن خاليا 10 هو لها المبدئي العدد وكان للتكاثر (وغيرها .الواحد للجيل دقيقة 20 هو لها الجيلي

2n = 212 = 4096 = ساعات 4 بعد واحدة لخلية الكلي الخاليا عدد•

.خلية

خلية X 4096 = 40960 10 = خاليا للعشر الكلي الخاليا عدد• .بكتيرية

طرق عد البكتيريا

ENUMERATION OF BACTERIA

األساسية الدراسات من للكثير أساسا البكتيري للنمو الكمي التعداد يعتبر

: أهمها ومن والتطبيقية

البكتيرية اللقاحات بتحضير الخاصة1.

بالمجاري اآلبار مياه وصالحية تلوث مدي قياس2.

. البكتيري التلوث من الغذائية المواد وخلو صالحية تقيم3.

البكتيري النمو تعداد يمكن بواسطتها التي الطرق من العديد هناك•

فهناك

في والميتة الحية للبكتيريا الكلي التعداد للبكتيريا الكلي التعداد•

. دراستها المراد العينة علي قدرة لها والتيViable Count فقط الحية البكتيريا تعداد أو•

. والتكاثر االنقسام

:الشرائح التعداد المباشر للخاليا باستخدام •

يمكن تعداد الخاليا البكتيرية بلطخة مصبوغة كما في طريقة بريد •Breed الحليب المستخدمة لتعداد البكتيريا بعينات.

مربع علي سم1مل من العينة في مساحة 0.01يتم فرد 1. شريحة زجاجية

اللطاخةوتصبغ 2.

ويتم تعداد البكتيريا تحت المجهر بناء علي المعادلة 3. :التالية

سم1في المجهريةعدد المجاالت = مل1عدد الخاليا في 4. . x 100متوسط عدد الخاليا في كل مجال xمربع

مل 0.01ألنه تم فرد فقط 100قد تم عملية الضرب في 5. .بالشريحة من العينة

ومن عيوب هذه الطريقة عدم التوزيع المتجانس للخاليا 6. أثناء عملية الفرد والمسح علي الشريحة

البكتيرية اللطخة تحضير طريقة• رقيق غشاء تحضير هو -:اللطخة تحضير من الهدف•

ثم زجاجية، شريحة على النامية البكتيريا من متجانس تحت عليها والكشف لصبغها معينة صباغات إضافة .المجهر

نوعية ولتحديد ،اللون عديمة البكتيريا بأن المعروف ومن• -:التالية الطريقة بأحد صبغها عملية إجراء يجب خالياها،

.البكتيرية اللطخة تحضير•

ناحية من نوعيتها لتحديد اللطخة إلى األصباغ بعض إضافة• .الجرام لصبغة موجبة أو سالبة

التحضير طريقة .وتجفف والصابون، بالماء ، جيدا الزجاجية الشريحة تنظف

قطرها دائرة وترسم طرفيها؛ إحدى من الشريحة تمسك1.

.الشريحة من األسفل الوجه على سم، 1.5

عليها المرسوم الشريحة وجه على الماء من قطرة توضع2.

.بكتيرية لطخه عمل لغرض بداخلها، الدائرة

،على الناقلة اإلبرة نهاية في ، (اللوبي )الحلقية عقدة تعقم3.

10 لمدة االحمرار،وتبرد درجة ،حتىبنزن موقد لهب

.ثواني

.المعقمة اإلبرة بعقدة البكتيرية، البيئة من كشطة تؤخذ4.

.سطح على الدائرة داخل بالماء، الكشطة خلط6.

.أخرى مرة المعدنية، العقدة تعقم ذلك بعد7.

شريحة على السائلة، البيئة من بكتيرية لطخه تعمل8. أخرى،

ثالثة إلى مرتين المعدنية العقدة حجم حجمها يكون بحيث 9. وتنقل ،(وسلكها العقدة تعقيم يجب مرة كل وفي )مرات .جيدا توزيعا فيها توزيعها مع الدائرة، داخل إلى

.أخرى مرة الحلقة تعقم10.

نفخ دون الغرفة، حرارة درجة عند لتجف، اللطخة تترك11. .عليها الهواء إمرار أو

ثالثة أو مرتين اللهب على الشريحة بإمرار اللطخة تثبت12. .مرات

:البكتيرية اللطخة صبغ• تكون أن أما كيميائية، مواد البكتيريا تصبغ التي Dyes الصباغات تعتبر•

وFuchsin -: مثل حامضية 1. ِ Eosin المكونات مع تتفاعل التي سيتوبالزم، -:مثل الخلية في القاعدية

التي Crystal violet البنفسجية البلورات أو سفرانين مثل قاعدية أو2. .الحامضية الخلية مكونات مع تتفاعل

الشكل في موضح هو كما اللطخة تحضير يتم•

.(معدني بملقاط تمسك أو) الصبغ حامل على الشريحة وضع •

.ثانية 60 – 30 لمدة المثيلين، بأزرق اللطخة تغمر•

أنبوب بواسطة الزائدة، الصبغة إلزالة بعناية المقطر، بالماء الشريحة تغسل• .المقطر الماء قنينة

.لتجف وتترك للرطوبة، ماص بورق برفق، اللطخة تجفف•

المجهر تحت اللطخة فحص• عدسة بواسطة المجهر تحت المصبوغة، اللطخة تفحص•

قوتها التي الزيتية بالعدسة تفحص وبعدها ، 10X قوتها100X.

الزيت يوضع ؛(الزيتية) الشيئية بالعدسة الفحص عند• .رقيق زجاجي غطاء دون اللطخة، على مباشرة

يشاهد ما لكل التصوير، أو الرسم مع المالحظات تسجل• .المجهر تحت

.بذلك خاصة بأوراق الشيئية، العدسة من الزيت يجفف•

.له المناسب المكان أو صندوقه، داخل المجهر يرجع•

عليها، من الزيت الموجود ويتخلص جيدا، الشرائح تنظف• .لحفظها المخصص الصندوق في وتحفظ

جرام بصبغة البكتريا صبغ• أن الحظ عندما ،1884 في جرام هانس الطريقة هذه اكتشف•

.منها الزائد من التخلص عند الصبغة، لون تفقد البكتيريا

وتقسيمها البكتيريا، وتصنيف تشخيص في الطريقة هذه وتستعمل• بين الفرق ويرجع .الجرام لصبغة وموجبة ، سالبة مجموعتين، إلى

.البكتيري الخلوي الجدار لمكونات والسالبة، الموجبة الصفتين

-:هي خطوات أربعة على الطريقة هذه وتعتمد1.

جميع لصبغ ،(Crystal violet ) الرئيسية الصبغة استخدام2. .البنفسجي باللون البكتيريا

الصبغة بين األيونية الروابط لزيادة ،Iodine األيودين يستخدم3. .والبكتيريا الرئيسية

بعض من للصبغة مزيلة كمادة األسيتون أو ،األثيلي الكحول يستخدم4. .بلونها منها البعض تحتفظ بينما البكتيريا،

فقدت التي البكتيريا صبغ في ، Safranin السفرانين مادة تستخدم5. .األحمر باللون األسيتون، أو بالكحول صبغتها

:الجرام نظرية آلية صبغة • -:التاليةتعتمد هذه النظرية على النقاط •

.تختلف البكتيريا لتقبلها الصبغة الرئيسية والصبغة الثانوية•

جدار الخلية الموجبة لصبغة الجرام؛ أكثر سمكا من جدار •

، من حيث التركيب الجرام خلية البكتيريا السالبة لصبغة

.الكيميائي

،على طبقة الجرام يحتوي جدار البكتيريا الموجبة لصبغة •

، أكثر سماكًة من جدار البكتيريا بيبتدوجلوكانسميكة من .الجرام السالبة لصبغة

الموجبة أو السالبة الصبغة آلية تفسير يمكن النظرية، على وبناء • -:كالتالي الجرام لصبغة

من سميكة طبقة على الجرام، لصبغة الموجبة البكتيريا جدار يحتوي• يسبب التي ،(البيبتيدات مع مرتبطة السكريات متعدد ) بيبتيدوجلوكان

جدارها، وانكماش إزالة الكحول لها

باللون تصبغ ثم ومن الرئيسية، الصبغة فقد معدل من يخفض بحيث • .البنفسجي األساسي

على الجرام، لصبغة السالبة بكتيريا لجدار الخارجي، الغشاء يحتوي• بعديد مرتبطة ودهون السكريات ومتعدد البروتين، على محتوية طبقات

بغشاء محاطة بيبتيدوجلوكان، من سميكة غير وطبقة السكريات، من يزيد مما الدهون، إذابة أو بإزالة، الكحول يقوم تم ومن خارجي،

، األساسية الصبغة فقد

.(األحمر) الثانوية الصبغة بلون جدارها ويتلون•

طريقة العمل

يجب تحضير اللطخة البكتيرية من بيئة حديثة عمرها أقل •

.ساعة 24من

.تنظف ثالث شرائح تنظيفا جيداً –

يرسم دائرة على السطح السفلي، على كل شريحة من الشرائح –

.الثالثة ،مع كتابة أسماء البيئات على كل منها

.تحضر لطخة لكل من البيئات، بالطريقة التي سبق شرحها–

-:كالتالي وهي الصبغ طريقة•

نصف لمدة وتتركها ،Crystal violet بصبغة اللطخة تغمر• .دقيقة

غير بطريقة ثانية، 2 لمدة المقطر، بالماء بعناية الشريحة تغسل• .(اللطخة على مباشرة الماء تسليط عدم ) اللطخة فوق المباشرة

تغمر الشريحة، تجفيف بدون•

.دقيقة لمدة اليود بمحلول اللطخة•

الشريحة، إلى إثيلي كحول %95 يضاف الشريحة، غسيل بدون•

حين إلى ثانية، 20 -10 بين ما لمدة اللطخة، على لينساب ويترك• بضع بعد غالبا) األساسية الصبغة من كبيرة كميات خروج توقف ،(ثوان

سمك أهمها كثيرة، العوامل على الكحول إزالة مدة وتعتمد • .وصبغها اللطخة تحضير في العملية والخبرة اللطخة،

.تغسل الشريحة مباشرة بالماء المقطر، لمدة دقيقتين•

.ثانية 20تضاف الصبغة الثانوية السفرانين، وتترك لمدة •

ثانية، وتجفف 2تغسل الصبغة الزائدة بالماء المقطر، لمدة • .بورق نشاف

. تترك لتجف •

تفحص الشريحة بالمجهر تحت العدسات المختلفة، وتسجل • المالحظات

صبغة جرام فيديو

مجهرية شرائح باستخدام البكتيرية الخاليا تعداد كذلك يمكن• Petroff Hausser هوسر بتروف شريحة مثل متخصصة

.Helber هلبر شريحة أو

المستخدمة الطرق أدق من يعد الشرائح هذه استخدام • سريعة بأنها وتمتاز , البكتيرية للخاليا الكلي للتعداد الحقل ذو أو المتباينة األطوار ذو المجهر ويستخدم وسهلة المظلم

عملية في الضوئي بالمجهر الضوء نسبة بتخفيف أو • التعداد

مقسم مربع وكل كبير مربع 25 علي الشرائح هذه تحتوي• مربع 16 إلى

ويتم مربع مم 1/400 منها كل مساحة صغيرة هذه• coverslip رقيقة زجاجية بشريحة تغطيتها

حجم يصبح وبالتالي الشريحة سطح من مم 1/50 تبعد • : الواحد المربع

• 1 /400 x 1/50 =1/20000 مكعب مم

.مكعب سم 20000000/ 1=

=العينة مل من 1التعداد الكلي للخاليا في كل •مقلوب عامل x 20000000 xمتوسط عدد الخاليا

.التخفيف

من عيوب هذه الطريقة عدم تمييز الخاليا الحية من •

.الميتة

التعداد البكتيري باستخدام األجهزة اإللكترونية •Electronic Counters : مثل عداد المستعمرات

الذي electronic colony counterاإللكتروني

يقوم بعملية التعداد للمستعمرات البكتيرية بطبق

,االستنبات

لتعداد الخاليا nephlometry نفلومتريوجهاز •

.السائلة البكتيرية بالبيئات

عداد بواسطة البكتيرية المستعمرات عد يتم التعداد لسهولة• . مستعمرة 250 -25 بين ما تنتج التي األطباق في المستعمرات

: Miles and Misra Method وميزرا ميلز بطريقة التعداد • .الطبقي التوزيع طريقة

علي الطريقة هذه افتراضية تعتمد Turbidity التعكير درجة قياس • كثافة انخفاض ) النمو كمية زيادة علي تدل التعكير درجة زيادة أن

. ( النمو تلك خالل النافذة الضوئية األشعة

طيفي ضوئي مقياس باستخدام التعكير درجة وتقاس •spectrophotometer حالة في إتباعها يصعب الطريقة هذه إن إال

. واضحة بدرجة بالبيئة صبغات تفرز التي البكتيرية الخاليا

جداول أو بياني رسم باستخدام التعكير درجة قياس يمكن وكذلك• بالنسبة البكتيريا عدد توضح والتي Browns Standards معينة . التعكير درجات من درجة لكل

والتي : البكتيرية للخاليا الجاف الوزن بتقدير التعداد • غسل فيها ويتم , والدراسات البحوث أغراض في تستخدم وبقايا أثار من كبيرة بكميات النامية البكتيرية الخاليا

تفقد وبذلك وتجفف المعقم المقطر الماء باستخدام المستنبت . الماء وهو الرئيسي المكون

النيتروجين يعتبر حيث : بالخاليا الكلي النيتروجين تقدير • تقدير ولذا النووية واألحماض البروتين مكونات أهم هو

. النمو كمية مع متالزما يكون بالعينة الكلي النيتروجين

البكتيرية للخاليا الجاف الوزن في النيتروجين نسبة متوسط• أنواع باختالف النسبة هذه وتختلف %14 حوالي يتراوح من الواحد للنوع بالنسبة تختلف وكذلك البكتيريا وأجناس . مختلفة استنباتية ظروف تحث البكتيريا

. األبحاث في أيضا الطريقة هذه تستخدم •

طريقة وتعتبر : للبكتيريا الحيوي الكيميائي النشاط قياس •

مثل بالبيئة معين متغير قياس فيها يتم والتي مباشرة غير

بمستنبت معينة بكتيريا بواسطة الجلوكوز سكر تخمر

. معين زمن وفي معين

مع تتناسب الجلوكوز تخمر من تنتج التي الحامض كمية •

. البكتيري النمو كمية

: التخفيفاتبطريقة عينةالحليبعد البكتيريا الكلية في • :طريقة اخذ عينة الحليب• :طريقة العمل•

في البكتيريا توزيع لضمان وذلك) مرة 25 جيدا الحليب عينة ترج1. (العينة

9 على محتوية أنبوبة إلى الحليب عينة من مل 1 معقمة بماصة ينقل2. 10/1 التخفيف فيصبح معقم مقطر ماء مل

مل 1 ينقل جديدة معقمة ماصة وبواسطة جيدا 10/1التخفيف يرج3. ينقل الماصة وبنفس 1 /10التخفيف يمثل معقم بتري طبق 2 إلى مل9 معقم مقطر ماء أنبوبة إلى 10/1 األنبوبة من أخرى مل1

100/1 التخفيف على لنحصل 1 ينقل جديدة معشقة ماصة وبواسطة جيدا 100/1 التخفيف يرج4.

الماصة وبنفس 100/1 التخفيف يمثل معقم بتري طبق 2 إلى مل 9 فيها مقطر ماء أنبوبة إلى 100/1 األنبوبة من أخرى مل 1 ينقل 100/1 التخفيف على لنحصل مل

مل بواسطة ماصة معقمة جديدة 1رج األنبوبة جيدا ثم انقل 5.

طبق بتري معقم لتمثل التخفيف 2إلى 100/1من التخفيف

100/1

المغذي وتترك حتى تتصلب االجارتوزع عينة الحليب في 6.

م37على درجة حرارة الحضانتحضن اإلطباق مقلوبة في 7.

ساعة48لمدة

تعتمد "تحسب عدد المستعمرات في الطبق الواحد لكل تخفيف8.

– 25الخفيفات التي تتراوح عدد المستعمرات فيها مابين مل من 1ومنه احسب عدد الخاليا الحية في " مستعمرة 250

عينة الحليب األصلية، وذلك بضرب متوسط عدد المستعمرات في الطبق في مقلوب التخفيف المستخدم

: التالي القانون يستخدم•

= األصلية المياه عينة من مل1 في الحية الخاليا عدد•

التخفيف مقلوب×الطبق في المستعمرات عدد متوسط المستخدم

-:مثال•

54 = الطبق في المستعمرات عدد•

= 1:10000 التخفيف عامل•

540000 = 10000 × 54 = مل / البكتيريا عدد•

مالحظة

250 مستعمرة 25 بين ما الطبق قي المستعمرة تعد•

250عدد المستعمرات أعلى من

25عدد المستعمرات يقع أقل من

250 - 25عدد المستعمرات يقع ما بين

Turbidity التعكير درجة قياس • تدل التعكير درجة زيادة أن علي الطريقة هذه افتراضية تعتمد •

النافذة الضوئية األشعة كثافة انخفاض ) النمو كمية زيادة علي . ( النمو تلك خالل

طيفي ضوئي مقياس باستخدام التعكير درجة وتقاس •spectrophotometer

البكتيرية الخاليا حالة في إتباعها يصعب الطريقة هذه إن إال• . واضحة بدرجة بالبيئة صبغات تفرز التي

أو بياني رسم باستخدام التعكير درجة قياس يمكن وكذلك • عدد توضح والتي Browns Standards معينة جداول . التعكير درجات من درجة لكل بالنسبة البكتيريا

التعداد بتقدير الوزن الجاف للخاليا البكتيرية •ويتم فيها غسل , والدراسات تستخدم في أغراض البحوث •

الخاليا البكتيرية النامية بكميات كبيرة من أثار وبقايا المستنبت باستخدام الماء المقطر المعقم وتجفف وبذلك تفقد

.الماء المكون الرئيسي وهو

•

: بالخاليا الكلي النيتروجين تقدير• البروتين مكونات أهم هو النيتروجين يعتبر حيث •

بالعينة الكلي النيتروجين تقدير ولذا النووية واألحماض . النمو كمية مع متالزما يكون

للخاليا الجاف الوزن في النيتروجين نسبة متوسط • النسبة هذه وتختلف %14 حوالي يتراوح البكتيرية بالنسبة تختلف وكذلك البكتيريا وأجناس أنواع باختالف

. مختلفة استنباتية ظروف تحث البكتيريا من الواحد للنوع

. األبحاث في أيضا الطريقة هذه تستخدم •

:للبكتيريا قياس النشاط الكيميائي الحيوي •

تعتبر طريقة غير مباشرة والتي يتم فيها قياس متغير معين •

بالبيئة مثل تخمر سكر الجلوكوز بواسطة بكتيريا معينة

.معين بمستنبت معين وفي زمن

كمية الحامض التي تنتج من تخمر الجلوكوز تتناسب مع •

.البكتيري كمية النمو

: للبكتيريا الحيوي الكيميائي النشاط قياس•

معين متغير قياس فيها يتم والتي مباشرة غير طريقة تعتبر•

معينة بكتيريا بواسطة الجلوكوز سكر تخمر مثل بالبيئة

. معين زمن وفي معين بمستنبت

مع تتناسب الجلوكوز تخمر من تنتج التي الحمض كمية •

. البكتيري النمو كمية

التحليل القياسي للمياه•يعتبر الماء من أساسيات الحياة للكائن الحي، ونظراً لتطور •

والقاءالمجتمع اإلنساني أدى إلى تلوثه بالمخلفات الصناعة، ، مما والبحيرات مياه الجاري غير المعاملة في البحار واألنهار

، وخفض كمية األكسجين الحيوي فيه، األمراض سبب انتشار مع طردياً ويستعمل تقدير العدد الكلي للبكتيريا التي يتناسب

.المياهكمية المادة العضوية الموجودة في

وتستعمل بكتيريا القولون للكشف عن مدى تلوث الماء بالمياه • .المجاري

وللكشف عن بكتيريا القولون تجرى ثالثة اختبارات وهي • :كاآلتي

.Presumptive testاالحتمالي • . Confirmed testوالتأكيدي • .Completed testالتكميلي •

-:Presumptive testاختبار االحتمالي •

مل مرق 10تلقح ثالث أنابيب كبيرة تحتوي كل منها على •مل من عينة ماء المجاري، لتحضير ضعف 10الالكتوز

(.ثالثة مجموعات)للبيئة التركيز العادي

بواسطة ماصة أخرى معقمة تلقح ثالث أنابيب كبيرة تحتوي •مل من عينة 1.0 بـمل مرق الالكتوز 10كل منها على

(.ثالثة مجموعات)ماء لبركة، لتحضير تركيز األحادي للبيئة

بواسطة ماصة أخرى معقمة تلقح ثالث أنابيب كبيرة تحتوي •مل من عينة 0.1 بـمل مرق الالكتوز 10كل منها على

ثالثة )ماء الصنبور، لتحضير تركيز الحادي للبيئة (.مجموعات

نوعية تركيز العينة مجموعة نوع الماء

10 -أنابيب ضعف التركيز العادي للبيئدة 3 مياه المجاري( 1)مجموعة

مل

مل 1.0 –للبيئة أنابيب لتركيز األحادي 3

مل 0.1أنابيب مرق الالكتوز 3

مياه البركة( 2)مجموعة

10 -أنابيب ضعف التركيز العادي للبيئدة 3

مل

مل 1.0 –أنابيب لتركيز األحادي للبيئة 3

مل 0.1أنابيب مرق الالكتوز 3

مياه الصنبور( 3)مجموعة

10 -أنابيب ضعف التركيز العادي للبيئدة 3

مل

مل 1.0 –للبيئة أنابيب لتركيز األحادي 3

مل 0.1أنابيب مرق الالكتوز 3

مجموعات عدد كل أنبوبة في كل مجموعة ( )جدول

وتركيز كل عينة

تكتب جميع البيانات المناسبة على كل أنبوبة في جميع • .المجموعات

48م لمدة ° 37تحضن جميع المجموعات عند درجة حرارة • .ساعة

ساعة، يعني 24ساعة في أي أنبوبة بعد 24وجود غاز بعد • .االختبار موجب

ساعة التالية، بعني االختبار مشكوك 24إذا تكون الغاز خالل • .فيه

ساعة، تكون النتيجة سالبة، وأن العينة 48عدم تكون الغاز بعد • (. 89شكل) القولون ال تحتوي على بكتيريا

تختبر جميع األنابيب من حيث تكوين الغاز بتجمع الغاز داخل •من حجم كل األنبوبة % 10بنسبة ال تقل عن درهامأنابيب

.والحامض بتغير لون دليل البيئة .تسجل عدد األنابيب الموجبة لتكون الغاز من كل تركيز•إيجاد العدد األكثر احتماال لبكتيريا القولون إلى جدول الذي •

Most Probable Numberيسمى جدول أكثر احتماال (MPN).

يوضحان نتيجة النهائية لالختبار ( 17) و ( 16) جدول • .العينةالموجبة والسالبة وعدد بكتيريا القولون في

•

مجموعددددددات مددددددن األنابيددددددب عدد األنابيب الموجبة

المحتوية على البيئة المغذية

كميددددة العينددددة المضددددافة إلددددى

البيئة المغذية

5

مل 10

3

مل 1

1

مل 0.1

لتركيزات العينة في ثالثة مجموعات من األنابيب وكل (MPN)نتائج االختبار ( 16) جدول

مجموعة تحتوي على خمسة أنابيب المحتوية على بيئة المغذية السائلة

المتتالية تخفيفاتالعدد األكثر احتماال لخمس أنابيب من ثالثة ( 17) جدول

:االختبار التأكيدي•، لجميع العينات التي أعطت نتائج التأكيدي يجرى االختبار •

، بالخطوات االحتمالي ، أو المشكوك فيها في االختبار موجبة :التالية

أزرق المثيلين من أنبوبة مرق األيوسين آجارتخطط بينة •الالكتوز الموجبة لالختبار االحتمالي ألقل كمية لقاح من عينة

.الماء .ساعة 48م لمدة ° 37تحضن عند •يعتبر االختبار موجباً عند تكوين مستعمرات نموذجية علي •

(. 90الشكل ) التحضينسطح الطبق خالل فترة

:االختبار التكميلي•

) المثيلين أزرق األيوسين آجارتختار مستعمرتان من بيئة •

، وينقل كل منهما على (التي يعتقد أنهما لبكتيريا القولون .مائل، وإلى بيئة مرق الالكتوز آجارسطح

.ساعة 48م لمدة ° 37تحضن عند •

.المائل، وتصبغ بصبغة جرام اآلجارتحضر شرائح من •

.تكون غاز في مرق الالكتوز، وتصبغ بصبغة جرام•