การตรวจสอบจุลินทรีย์ในน้ำนม ...¸ªศ414...
TRANSCRIPT
![Page 1: การตรวจสอบจุลินทรีย์ในน้ำนม ...¸ªศ414 การ... · 2018-02-08 · วธิีการตรวจสอบจุลนิทรีย์ในน้านม](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022041906/5e63b5ac63584032c62d4be2/html5/thumbnails/1.jpg)
การตรวจหาปรมาณจลนทรยในน านม Determination of Microorganism in Milk
![Page 2: การตรวจสอบจุลินทรีย์ในน้ำนม ...¸ªศ414 การ... · 2018-02-08 · วธิีการตรวจสอบจุลนิทรีย์ในน้านม](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022041906/5e63b5ac63584032c62d4be2/html5/thumbnails/2.jpg)
ความส าคญของจลนทรยตอคณภาพน านม
@ น ำนมประกอบดวยสำรอำหำรตำง ๆ เหมำะสมตอกำรเจรญเตบโตของจลนทรยชนด
@ ตองเกบทอณหภมต ำกวำ 10 C
@ จลนทรยทอยในน ำนม เปนแบคทเรย เชน Streptococcus lactis
พวกยสต เชน Sccharomyces, Mycoderma
เชอรำ (mold) Pennicillium
![Page 3: การตรวจสอบจุลินทรีย์ในน้ำนม ...¸ªศ414 การ... · 2018-02-08 · วธิีการตรวจสอบจุลนิทรีย์ในน้านม](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022041906/5e63b5ac63584032c62d4be2/html5/thumbnails/3.jpg)
1. เตานม และผวหนงสวนใกลเคยง 2. น า และอากาศ 3. ผท าการรดนม หรอผลตภณฑจากน านม 4. ตวแมโค 5. เครองมอ และอปกรณ 6. แมลง 7. สวนผสมท าผลตภณฑนม
สาเหตของการปนเปอนจลนทรยในน านม
![Page 4: การตรวจสอบจุลินทรีย์ในน้ำนม ...¸ªศ414 การ... · 2018-02-08 · วธิีการตรวจสอบจุลนิทรีย์ในน้านม](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022041906/5e63b5ac63584032c62d4be2/html5/thumbnails/4.jpg)
ขอก าหนดดานจลนทรยตามมาตรฐานสนคาเกษตรและอาหารแหงชาต มกอช.6003-2548 จ านวนจลนทรยทงหมด (TOTAL BACTERIA)
นมดบตองไมเกน < 600,000 colony/ml. จ านวนแบคทเรยชนดโคลฟอรม (coliform) นมดบตองไมเกน < 10,000 colony/ml. จ านวนแบคทเรยทนรอน นมดบตองไมเกน < 10,000 colony/ml.
![Page 5: การตรวจสอบจุลินทรีย์ในน้ำนม ...¸ªศ414 การ... · 2018-02-08 · วธิีการตรวจสอบจุลนิทรีย์ในน้านม](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022041906/5e63b5ac63584032c62d4be2/html5/thumbnails/5.jpg)
มาตรฐานการรบซอนมดบของกระทรวงเกษตรและสหกรณ:จลนทรย
จ านวนจลนทรยโดยการตรวจนบวธ Direct microscopic count ไมมากกวา 1,500,000 กลมตอ ลบ.ซม.
จ านวนจลนทรยโดยการตรวจนบวธ Standard Plate Count นอยกวา 150,000 colony/ml. เพมขน 0.20 บาท/กก.
150,000-300,000 colony/ml. เพมขน 0.10 บาท/กก.
300,001-500,000 colony/ml. เพมขน 0.00 บาท/กก.
500,001-700,000 colony/ml ลดลง 0.10 บาท/กก.
มากกวา 700,000 colony/ml ลดลง 0.20 บาท/กก.
![Page 6: การตรวจสอบจุลินทรีย์ในน้ำนม ...¸ªศ414 การ... · 2018-02-08 · วธิีการตรวจสอบจุลนิทรีย์ในน้านม](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022041906/5e63b5ac63584032c62d4be2/html5/thumbnails/6.jpg)
วธการตรวจสอบจลนทรยในน านม (Determination of Microorganism in Milk )
การตรวจสอบจลนทรยโดยตรง (direct Method)
กำรนบจลนทรยโดยกลองจลทรรศน (Direct microscopic count, DMC) กำรนบจลนทรยบนจำนเลยงเชอ (Standard plate count, SPC) กำรตรวจแบคทเรยโคลฟอรม (Coliform Test) กำรตรวจหำโซมำตกเซลลโดยวธ California Mastitis Test (CMT )
กำรตรวจสอบจลนทรยโดยกำรประมำณส เมทธลนบลรดกชนเทสต (methylene blue test) การตรวจสอบรซาซรน 1 hr. (resazurine test)
![Page 7: การตรวจสอบจุลินทรีย์ในน้ำนม ...¸ªศ414 การ... · 2018-02-08 · วธิีการตรวจสอบจุลนิทรีย์ในน้านม](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022041906/5e63b5ac63584032c62d4be2/html5/thumbnails/7.jpg)
การตรวจสอบจลนทรยโดยการประมาณส
เปนการประมาณจ านวนแบคทเรยทางออมโดยวด oxiation-reduction potential
แบคทเรยใชออกซเจนในกระบวนการ oxidation-reduction ท าใหออกซเจนลดลง
การลดลงของออกซเจนวดในรปของเวลาทแบคทเรยใชในการเปลยนส
เวลาในการจางสเปนสดสวนผกผนกบจ านวนแบคทเรย
ตวบงชทนยมใชไดแก methylene blue และ resazurine
![Page 8: การตรวจสอบจุลินทรีย์ในน้ำนม ...¸ªศ414 การ... · 2018-02-08 · วธิีการตรวจสอบจุลนิทรีย์ในน้านม](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022041906/5e63b5ac63584032c62d4be2/html5/thumbnails/8.jpg)
การตรวจสอบโดยการเปลยนสของเมทธลน บล (Methylene Blue Reduction Test, MBRT)
@ ใชเมทลนบลเปน (redox indicator) ทดสอบอตราการใชออกซเจนและประมาณจ านวนแบคทเรยในน านม
@ สเมทลนบล จะท าใหน านมมสน าเงน
@ เมอแบคทเรยเจรญเตบโตและใชออกซเจน ท าใหปรมาณออกซเจนในน านมลดลง เมท ลนบลจะถกรดวซเปนลโคเมทลน (leucomethylenr) ท าใหสน านมจางลง
หลกการ
![Page 9: การตรวจสอบจุลินทรีย์ในน้ำนม ...¸ªศ414 การ... · 2018-02-08 · วธิีการตรวจสอบจุลนิทรีย์ในน้านม](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022041906/5e63b5ac63584032c62d4be2/html5/thumbnails/9.jpg)
ขอจ ากดการตรวจสอบโดยการเปลยนสของเมทธลน บล
แบคทเรยบางชนด เชน S. agalactia, B. Subtilis จะเปลยนสไดชา
Somatic cell และเมดโลหตขาวจะฟอกส methylene Blue ได
เมดไขมนคอย ๆ ลอยสผวบนและกวาดเอาแบคทเรยขนสผวดานบน จงท าใหการเปลยนสกนเวลานาน
นมน าเหลอง และนมปลาย lactation ระยะการเปลยนสสนกวาการบงชดวยจ านวยแบคทเรยทมอย
![Page 10: การตรวจสอบจุลินทรีย์ในน้ำนม ...¸ªศ414 การ... · 2018-02-08 · วธิีการตรวจสอบจุลนิทรีย์ในน้านม](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022041906/5e63b5ac63584032c62d4be2/html5/thumbnails/10.jpg)
วธการ (Method)
ไปเปตสารละลายเมธลนบล 1 ml. ลงในหลอดทดลอง
ไปเปตตวอยางน านม 10 ml. ดงกลาว ปดฝาเกลยวใหสนทกลบหลอดไป-มา ใหเปนเนอเดยวกบน านม
น าหลอดเขาบมใน water bath อณหภม 37+5 C บนทกเวลาทเรมบม และสงเกตการเปลยนแปลงสนาท 30 , ชวโมงท 1, 2,… ไปเรอย ๆ จนกวาตวอยางจะเปลยนเปนสขาว
![Page 11: การตรวจสอบจุลินทรีย์ในน้ำนม ...¸ªศ414 การ... · 2018-02-08 · วธิีการตรวจสอบจุลนิทรีย์ในน้านม](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022041906/5e63b5ac63584032c62d4be2/html5/thumbnails/11.jpg)
การวเคราะหผล จ านวนชวโมงการ
เปลยนส เกรด คณภาพ ลงความเหน
มากกวา 6 ชวโมง 1 ดเยยม (Excellent) ผาน
มากกวา 4-6 ชวโมง 2 ด (good) ผาน
มากกวา 3-4 ชวโมง 3 พอใช (Fair) ไมผาน
นอยกวา 3 ชวโมง 4 ไมมคณภาพ (Poor)
ไมผาน
![Page 12: การตรวจสอบจุลินทรีย์ในน้ำนม ...¸ªศ414 การ... · 2018-02-08 · วธิีการตรวจสอบจุลนิทรีย์ในน้านม](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022041906/5e63b5ac63584032c62d4be2/html5/thumbnails/12.jpg)
การตรวจสอบรซาซรน 1 hr (Resazurin Reduction Test, RRT)
หลกการเชนเดยวกบการทดสอบ Methylene Blue Reduction Test การเตมรซาซรนจะท าใหน านมมสน าเงน เมอปรมาณออกซเจนในน านมลดลงรซาซรนจะถก reduce เปลยนสจากมวงเปนชมพ และในทสดจะกลายเปนสขาว ถาทดสอบกบตวอยางน านมดบทแชเยนไดจะใชเวลานานเกนไป เวลาทใชในการจางสจะเปนสดสวนผกผนกบจ านวนแบคทเรย
หลกการ
![Page 13: การตรวจสอบจุลินทรีย์ในน้ำนม ...¸ªศ414 การ... · 2018-02-08 · วธิีการตรวจสอบจุลนิทรีย์ในน้านม](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022041906/5e63b5ac63584032c62d4be2/html5/thumbnails/13.jpg)
ขนตอนของปฏกรยา
ขน 1 Resazurin ----------> Resorufin (สน าเงน) (สชมพ ) ขน 2 Resorufin ----->Hydroresorufin (สชมพ) (ไมมส, ขาว)
![Page 14: การตรวจสอบจุลินทรีย์ในน้ำนม ...¸ªศ414 การ... · 2018-02-08 · วธิีการตรวจสอบจุลนิทรีย์ในน้านม](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022041906/5e63b5ac63584032c62d4be2/html5/thumbnails/14.jpg)
วธการ (Method)
เมอครบเวลา 1 ชวโมง น าตวอยางมาเทยบสกบ lovibond comparation แลวอานผล
ไปเปตรซาซรน 1 ml. ใส test tube แลวไปเปตตวอยางนม 10 ml. ใสลงไปในหลอด ปดฝาเกลยวใหสนท ผสมตวอยางใหเขากน
น าตวอยางเขาบมใน water bath อณหภม 37 C ปดฝาอางน าใหสนท การเตรยมตวอยางควบคม Negative(-) UHTและรซาซรน Positive (-) UHT ไมเตมรซาซรน
![Page 15: การตรวจสอบจุลินทรีย์ในน้ำนม ...¸ªศ414 การ... · 2018-02-08 · วธิีการตรวจสอบจุลนิทรีย์ในน้านม](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022041906/5e63b5ac63584032c62d4be2/html5/thumbnails/15.jpg)
การวเคราะหผล
Quality of Milk Lovibond disc % ลงความเหน
Colour Reading Resazurin Resorufin Dihydro resorufin
ดเยยม (Excellent) น าเงน (Blue) 6 100 0 0 ยอมรบ
ดมาก (Very good) มวง (Lilac) 5 80 20 0 ยอมรบ
ด (Good) มวงสด (Mauve) 4 60 40 0 ยอมรบ
พอใช (Fair) ชมพอมมวง (Pink-purple) 3 40 60 0 ไมรบ
ไมคอยด (Poor) มวงอมชมพ (Purple-Pink) 2 20 80 0 ไมรบ
ไมด (Very poor) ชมพ (Pink) 1 0 100 0 ไมรบ
แย (Bad) ขาว (Colourless) 0 0 0 0 ไมยอมรบ
![Page 16: การตรวจสอบจุลินทรีย์ในน้ำนม ...¸ªศ414 การ... · 2018-02-08 · วธิีการตรวจสอบจุลนิทรีย์ในน้านม](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022041906/5e63b5ac63584032c62d4be2/html5/thumbnails/16.jpg)
การนบจลนทรยบนจานเลยง (Standard Plate Count)
หลกการ
เปนการประเมนหาปรมาณแบคทเรยทงหมดในน านม
น านมทมคณภาพดจะมปรมาณแบคทเรยอยนอย
คาทไดบงชถง
ความสะอาดในการรดนม และอปกรณในการรด
การท าความสะอาดเตานมกอนรด
การเกบรกษาน านม
ปญหาเตานมอกเสบ
![Page 17: การตรวจสอบจุลินทรีย์ในน้ำนม ...¸ªศ414 การ... · 2018-02-08 · วธิีการตรวจสอบจุลนิทรีย์ในน้านม](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022041906/5e63b5ac63584032c62d4be2/html5/thumbnails/17.jpg)
วธการ (Procedure)
1. ท าการเจอจางตวอยางน านมแบบ Ten fold dilution
Sample 1:10 1:100 1:1,000 1:10,000 1:100,000
1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml
![Page 18: การตรวจสอบจุลินทรีย์ในน้ำนม ...¸ªศ414 การ... · 2018-02-08 · วธิีการตรวจสอบจุลนิทรีย์ในน้านม](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022041906/5e63b5ac63584032c62d4be2/html5/thumbnails/18.jpg)
การเลอกใช dilutions กบน านมชนดตาง ๆ
ชนดตวอยางน านม
Dilutions
standard plate count (SPC) Coliform
น านมดบ 1: 1,000 (10 -3 ) 1: 10,000 (10 -4 )
1: 100 (10 -2 ) 1: 1,000 (10 -3)
น านมพาสเจอรไรส
1:10 (10 -1 ) 1: 100 (10 -2 ) 1: 1,000 (10 -3 )
1 1: 10 1: 1,00
นมยเอชท 1 1 : 10 (10 -1 )
1 1 : 10 (10 -1)
![Page 19: การตรวจสอบจุลินทรีย์ในน้ำนม ...¸ªศ414 การ... · 2018-02-08 · วธิีการตรวจสอบจุลนิทรีย์ในน้านม](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022041906/5e63b5ac63584032c62d4be2/html5/thumbnails/19.jpg)
SPC กลม .............
ตวอยางน านมดบ Dilution 1: 10
วน
SPC
กลม ............. Control
วนท
2. การเพาะเชอ
2.1) น าจานทจะใช มาเขยนชอตวอยางน านม
2.2 การหยด Dilution
ใช ไปเปท ลนไฟ กอนดดน านมจาก dilution
จ านวน 1 ml. ลงในจานเลยงเชอ
2.3 การเท Agar
- ตรวจอณหภมโ ด ย ใชหลงมอแตะขวดพอทนได
- ใชไฟตะเกยงลนปากขวดagar กอนเปดฝา - และเท agar ประมาณ 15 ซซ สจานเลยง
-แกวงตวจานในแนวราบบนโตะให agar เขากนด
![Page 20: การตรวจสอบจุลินทรีย์ในน้ำนม ...¸ªศ414 การ... · 2018-02-08 · วธิีการตรวจสอบจุลนิทรีย์ในน้านม](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022041906/5e63b5ac63584032c62d4be2/html5/thumbnails/20.jpg)
2.4 การผสมตวอยางใหเขากน
โยก Plate ขน- ลง 5 ครง ซาย--ขวา 5 ครง วนขวา 5 ครง วนซาย 5 ครง โยก Plate ขน- ลง 5 ครง
2.5 รอจน agar แขงตว น าเขาบมท 32 0C นาน 48 ชวโมง (การวาง ตองกลบดานลางขน)
![Page 21: การตรวจสอบจุลินทรีย์ในน้ำนม ...¸ªศ414 การ... · 2018-02-08 · วธิีการตรวจสอบจุลนิทรีย์ในน้านม](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022041906/5e63b5ac63584032c62d4be2/html5/thumbnails/21.jpg)
การอานผล เลอกนบจากจานทมจ านวนโคโลน 25-250 โคโลน จ านวนแบคทเรยทนบได = จ านวนแบคทเรยทนบได / คา dilute ตวอยางเชน นบจ านวนแบคทเรยได 250 โคโลน ท dilution 10 - 3 (0.001) จะมจ านวนแบคทเรย = 250 / 0.001 = 250,000 cfu/ml หรอ = 250 x 1,000 = 250,000 cfu/ml
*cfu = colony forming unit
![Page 22: การตรวจสอบจุลินทรีย์ในน้ำนม ...¸ªศ414 การ... · 2018-02-08 · วธิีการตรวจสอบจุลนิทรีย์ในน้านม](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022041906/5e63b5ac63584032c62d4be2/html5/thumbnails/22.jpg)
การตรวจสอบแบคทเรย Coliform
หลกการ
เปนการตรวจสอบน านมภายหลงการพาสเจอรไรส
Coliform Group ทตรวจสอบไดแก Escherichia หรอ E.Coli
ความส าคญของแบคทเรยโคลฟอรม
พบไดทวไปในน านมดบ
ไมทนอณหภมพาสเจอรไรส (68 องศาขนไป)
ถาตรวจพบ แสดงวาเกดการปนเปอนจากอจาระ
ขน ทตดมากบแมโค
![Page 23: การตรวจสอบจุลินทรีย์ในน้ำนม ...¸ªศ414 การ... · 2018-02-08 · วธิีการตรวจสอบจุลนิทรีย์ในน้านม](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022041906/5e63b5ac63584032c62d4be2/html5/thumbnails/23.jpg)
วธการ (Method)
ปฏบตเชนเดยวกนกบวธการ Standard Plate Count
แต เมอ Agar แขงตวแลว ใหเท Agar ทบลงไปอกชนหนง
รอให Agar แขงตว จงน าเขาบมทอณหภม 32 0C ท 24 ชวโมง
![Page 24: การตรวจสอบจุลินทรีย์ในน้ำนม ...¸ªศ414 การ... · 2018-02-08 · วธิีการตรวจสอบจุลนิทรีย์ในน้านม](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022041906/5e63b5ac63584032c62d4be2/html5/thumbnails/24.jpg)
ขอแตกตางระหวาง Standard Plate Count และการตรวจสอบแบคทเรยโคลฟอรม
อาหารเลยงเชอ SPC – Nutrient Agar (สทอง) Coliform – Violet Red Bile Agar (สแดง) ชนดของเชอ SPC เพาะเชอทกชนด จงเรยกวา Total Plate Count Coliform – เพาะเฉพาะในกลมโคลฟอรม ระยะเวลาบม SPC - 48 ชวโมง Coliform 24 ชวโมง โคโลน SPC ขนาดเลก สทอง Coliform ขนาดใหญ เสนผานศนยกลาง ประมาณ 0.5 มม. สแดงเขม