diagnóstico laboratorial de vih sida
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Diagnóstico LaboratorialDiagnóstico Laboratorial
VIH - SIDAVIH - SIDA
Blgo. Hernan Daniel Cornejo PacherresBlgo. Hernan Daniel Cornejo Pacherres
Laboratorio Laboratorio Referencial Regional de VIH Referencial Regional de VIH
Dirección de Dirección de Laboratorios de Salud PúblicaLaboratorios de Salud Pública
Direccion Regional de Salud - CajamarcaDireccion Regional de Salud - Cajamarca
RNA
TranscriptasareversaProtesa
Integrasa
gp 40
gp 120
BicapaLipidica
p 17
p 24
p 9
CARGA VIRAL DE VIHCARGA VIRAL DE VIH
RECUENTO DE CD4 / CD8RECUENTO DE CD4 / CD8
PRUEBA DE MONITOREO DE PRUEBA DE MONITOREO DE PACIENTES VIH POSITIVOSPACIENTES VIH POSITIVOS
CARGA VIRAL CARGA VIRAL
DE VIH-1DE VIH-1
Carga Viral VIH-DefinicionesCarga Viral VIH-Definiciones
Cuantificación de copias de RNA viral/ml en el Cuantificación de copias de RNA viral/ml en el plasma de personas infectadas por VIH plasma de personas infectadas por VIH
Cuantificación de virus circulante que se Cuantificación de virus circulante que se encuentra en el plasmaencuentra en el plasma
Número de partículas de VIH libres en el plasma Número de partículas de VIH libres en el plasma de los pacientesde los pacientes
CARGA VIRAL VIH = VIREMIACARGA VIRAL VIH = VIREMIA
UTILIDAD Predecir la progresión clínica de la infección VIH-SIDA. Indicar al médico tratante el momento óptimo para iniciar el tratamiento antirretroviral. Monitorizar el tratamiento con antirretrovirales:
•Tratamiento eficaz (reducción a niveles indetectables)• Fracaso terapeutico (resistencia,adherencia)
Estimar el riesgo de transmisión ,especialmente materno-fetal
PRUEBAS RNA DISPONIBLES
Reacción en Cadena de la Polimerasa ( PCR Polimerasa Chain Reaction.) DNA Ramificado (bDNA, branched Chain DNA assay Amplificación basado en ácidos nucleicos ( NASBA, nucleic acid sequence-based amplification).
Reportado como “número de copias” o copias /ml
RECOMENDACIONESRECOMENDACIONES
Se debe escoger sólo un método de ensayo para Se debe escoger sólo un método de ensayo para carga viral de VIH-1 y debe ser utilizado carga viral de VIH-1 y debe ser utilizado consistentemente en un sólo individuoconsistentemente en un sólo individuo
Ensayos deben realizarse despuès de un mes de Ensayos deben realizarse despuès de un mes de vacunados o de un proceso infeccioso agudo vacunados o de un proceso infeccioso agudo (vacunas contra la gripe, hepatitis provocan (vacunas contra la gripe, hepatitis provocan aumento de carga viral)aumento de carga viral)
OBTENCION DE MUESTRAS Y ESTABILIDAD
Obtención de Sangre en tubos con EDTA o Citrato
Tubos con heparina no son aceptables
Preferiblemente se usan tubos con EDTA
La sangre se diluye un 15% en tubos de citrato
Estabilidad del RNA en la sangre es mejor en EDTA que en Citrato
Separa el plasma antes de 3-6 horas desde la centrifugación
Almacenar y enviar el plasma congelado a 2-8C
HIV RNA es estable en plasma a 2-8C durante 5 dias
HIV RNA es estable en plasma durante 3 ciclos de congelación y descongelación
OBTENCION DE MUESTRAS Y ESTABILIDAD
AMPLICOR HIV MONITOR PREPARACION
•200uL Plasma•Estándar Interno de Cuantificación de RNA
AMPLIFICACION•Simple Transcripción reversa y PCR
DETECCION•Formato similar a los ELISA•Resultado colorimétrico
RESULTADOS•24 tests en 6 horas
¿Qué es Citometría de ¿Qué es Citometría de Flujo?Flujo?
Medición simultánea de múltiples Medición simultánea de múltiples características físicas y químicas de características físicas y químicas de células en suspensión.células en suspensión.
Las mediciones son hechas sobre el Las mediciones son hechas sobre el principio célula-por-célula en un principio célula-por-célula en un promedio rutinario de 500 a 4000 promedio rutinario de 500 a 4000 células por segundo.células por segundo.
¿Qué puede decirnos un ¿Qué puede decirnos un Citómetro de Flujo acerca Citómetro de Flujo acerca
de una célula?de una célula? Su tamaño relativo (Forward Scatter—Su tamaño relativo (Forward Scatter—
FSC)FSC)
Su granularidad relativa o complejidad Su granularidad relativa o complejidad interna (Side Scatter—SSC)interna (Side Scatter—SSC)
Su Intensidad fluorescente relativa Su Intensidad fluorescente relativa (FL1, FL2, FL3, FL4, and FL5)(FL1, FL2, FL3, FL4, and FL5)
FACSCountFACSCountPrincipios del ProcedimientoPrincipios del Procedimiento
Muestra: Sangre Completa no lisadaMuestra: Sangre Completa no lisada Método: IF Directa a 02 colores.Método: IF Directa a 02 colores. El instrumento detecta: dos colores y el tamaño celular.El instrumento detecta: dos colores y el tamaño celular. CD3 fluorescencia roja, CD4/CD8 fluorescencia CD3 fluorescencia roja, CD4/CD8 fluorescencia
amarilla.amarilla. Reactivo o facspet contiene Acs. que ligan al Ag. Reactivo o facspet contiene Acs. que ligan al Ag.
linfocitario respectivo.linfocitario respectivo.
FACSCountFACSCountPrincipios del ProcedimientoPrincipios del Procedimiento
ReactivosReactivos: además de los Acs. Específicos poseen un : además de los Acs. Específicos poseen un
número conocido de Beads o perlas de referencia que número conocido de Beads o perlas de referencia que
funcionan como standard de fluorescencia y funcionan como standard de fluorescencia y
cuantificación para calcular recuentos absolutos de CD4, cuantificación para calcular recuentos absolutos de CD4,
CD8 y CD3.CD8 y CD3.
FijaciónFijación: Realizada antes del análisis para preservar la : Realizada antes del análisis para preservar la
integridad de la unión de Acs.integridad de la unión de Acs.
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