波仕特勝任細胞專刊 · 2017-11-14 · 3 g 特色: 1) 轉型效率高~108 cfu/µg 2)...

20
仕特勝任細胞專刊 仕特勝任細胞專刊

Upload: others

Post on 27-Jul-2020

5 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

Page 1: 波仕特勝任細胞專刊 · 2017-11-14 · 3 g 特色: 1) 轉型效率高~108 cfu/µg 2) 每個反應 (100µL) < $40 3) 在地生產供貨新鮮速度快 4) 每組均附SOC MIT台灣ㄟ尚青~~

波波仕特勝任細胞專刊仕特勝任細胞專刊

Page 2: 波仕特勝任細胞專刊 · 2017-11-14 · 3 g 特色: 1) 轉型效率高~108 cfu/µg 2) 每個反應 (100µL) < $40 3) 在地生產供貨新鮮速度快 4) 每組均附SOC MIT台灣ㄟ尚青~~

2

目錄:

※ 一般 routine cloning

經濟型 DH5 α ……………………………………………………………………………….……… 3

高效能型 E. cloni® 10G………………………………………………………………….………. 4

※ 大片段基因或困難基因 cloning

BAC library 專用……………………………………………………………………………….…… 6

A/T or G/C-rich,>30kb 基因專用……….………………………………………..……….. 7

M13 phagemid 專用……………….………………………………………………….…………. 7

※ Phage Display Library 專用

TG1 competent cells………………………………………………………………….……….….. 8

※ 不穩定基因 cloning (CRISPR)

Endura competent cells…………………………..…………………………..………..…. 10

※ 蛋白質表現專用 competent cells

E. cloni® Express BL21(DE3)……………………………………………………..………….... 12

OverExpress C41(DE3) & C43(DE3)…………………………..…………………....……. 13

※ 低內毒性 (low-endotoxin) competent cells

ClearColi K-12/BL21(DE3)…………………..…………………………………………….…. 15

※ 客製化 competent cells …………………………………………………………………. 17

※ 其他相關產品……………………………………………………………………….……………….... 18

Page 3: 波仕特勝任細胞專刊 · 2017-11-14 · 3 g 特色: 1) 轉型效率高~108 cfu/µg 2) 每個反應 (100µL) < $40 3) 在地生產供貨新鮮速度快 4) 每組均附SOC MIT台灣ㄟ尚青~~

3

Ro

uti

ne C

lon

ing

特色:

1) 轉型效率高~108 cfu/µg

2) 每個反應 (100µL) < $40

3) 在地生產供貨新鮮速度快

4) 每組均附 SOC

MIT台灣ㄟ尚青~~

波仕特自製勝任細胞,產地直送!!!

Fast-Trans ™ Competent E. coli Cells

The Fast-Trans™ 勝任細胞是單次包裝 (100µL) 的高效率 E.coli 轉殖細胞。 波仕特生產的兩種

菌株: DH5 α and XL1 blue 都可達到大於 108cfu/µg 的轉殖效率,不管是使用一般或快速的程序。

主要應用於實驗室一般大小 plasmid 的 cloning,可用藍白篩選正確轉殖成功的 colonies。

產品名稱 產品編號 Size 主要類別或用途

DH5α competent cells PT-FTDH5 15 or 90 rxns 一般 routine cloning 用,藍白篩

XL1 blue competent cells PT-FTXL1 15 or 90 rxns Tetracycline resistant,藍白篩

9cm Petri Dish PT-PD-90 500pcs 細菌培養皿

LB (Miller) 0103 500 g 細菌培養基

DH5α : F-Φ80 lacZ∆M15 ∆(lacZYA-argF) U169 endA1 recA1 hsdR17 (rk-, mk+) phoA supE44 thi-1 gyrA96 relA1

XL1 blue : recA1 endA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 supE44 relA1 lac [F´ proAB lacIq Z∆M15 Tn10 (Tetr )]

Know your genotype:

endA: endonuclease deficient, which greatly improves the quality of mini-prep DNA

recA: recombination deficient, improving insert stability

hsdR: prevents the cleavage of cloned DNA by the EcoK endonuclease system

lacIq Z∆M15 gene on the F´ episome: allows blue-white color screening

快速程序 [Fast Protocol]

1. Pipet 1 to 2 μl ligation mixture into the cells, mix by gently swirl-

ing tip or tapping the tube.

2. Incubate the tube on ice for 5 min.

3. Heat-shock the tube at 42°C for 45 sec. Do not mix or shake.

4. Place on ice for 2 min and add 900 μl SOC .

5. Spread 100 μl onto each plate.

6. Incubate the plates at 37°C overnight .

Page 4: 波仕特勝任細胞專刊 · 2017-11-14 · 3 g 特色: 1) 轉型效率高~108 cfu/µg 2) 每個反應 (100µL) < $40 3) 在地生產供貨新鮮速度快 4) 每組均附SOC MIT台灣ㄟ尚青~~

4

E. cloni® 10G 特色

1) 專為 Cloning 設計,超高效能的勝任細胞

2) 可直接取代常用的 DH5 α,DH10B,TOP10,XL1-Blue...等勝任細胞

3) 由基因合成專家 SGI-DNA 背書,品質有保證

除了常見的 DH5α外, Lucigen 獨家研發的 E. cloni® 10G 勝任細胞, 針對 cloning 外源性 DNA

以及生產高純度的 plasmid DNA 之應用,有多個基因上的優化。外源的 DNA 在 E. coli 中常會被

methylation-dependent restriction systems 破壞及分解。 E. cloni® genotype 中的 mcrA Δ(mrr-hsdRMS

-mcrBC) 代表這些 restriction systems 已被關閉。Genotype 中的 endA1 則是針對會造成 plasmid low

yield/or degradation 的 endonuclease 做突變。而 Genotype 中的 recA1 mutation 則可以抑制 plasmid

recombination 的發生,增加基因的穩定性。

雖然有他牌的細胞也有以上的 mutations,但 Lucigen 獨家優化的製作方法及 reagent 配方,使

得 E. cloni® 10G 可以接受到 20kb 大小的 plasmid,並擁有同級細胞中最高的轉殖效率(up to

4X1010cfu/µg)。而同系列中的 10G BAC-optimized 甚至可接受 ~150kb 的 Bacmid。

~卓越的轉殖效率: (最高可達 4 × 1010 cfu/μg)

E. cloni 10G SUPREME Electrocompetent Cells consistently outperformed “ultra high efficiency” cells from a leading sup-plier. Both strains were transformed with 10 pg of pUC19 (n=16).

Ro

uti

ne C

lon

ing

美國原裝,同級細胞中轉殖率第一

Page 5: 波仕特勝任細胞專刊 · 2017-11-14 · 3 g 特色: 1) 轉型效率高~108 cfu/µg 2) 每個反應 (100µL) < $40 3) 在地生產供貨新鮮速度快 4) 每組均附SOC MIT台灣ㄟ尚青~~

5

高效能的 Electrocompetent 10G 等級細分為:

* SUPREME Cells: 最高的轉殖效率,適合建立複

雜的 libraries,或是棘手的 cloning

* ELITE Cells : 優於其他廠牌”Ultra high efficien-

cy”等級兩倍以上的轉殖效率,適合困難的

cloning。CP 值最高!

* CLASSIC Cells : 便宜又高效的勝任細胞,適合一

般 library 建構和標準的 cloning

COMPONENTS: Competent Cells include Control DNA and Recovery Medium, and

are packaged as SOLOs (1 transformation per tube), DUOs (2 transformations per

tube), FIVERs (5 transformations per tube), SixPacks (6 transformations per tube),

or Subcloning Grade (12 transformations per tube). Recovery Medium is also

available separately.

Ro

uti

ne C

lon

ing

Electro- / Chemical– Competent cells 皆可選

Supreme/ Elite / Classic 三種等級,找到適合您實驗需求的最佳細胞!

Subcloning

試用品發送中...

SGI 合成大廠推薦!

Page 6: 波仕特勝任細胞專刊 · 2017-11-14 · 3 g 特色: 1) 轉型效率高~108 cfu/µg 2) 每個反應 (100µL) < $40 3) 在地生產供貨新鮮速度快 4) 每組均附SOC MIT台灣ㄟ尚青~~

6

Lucigen 出產的這兩種勝任細胞同樣適合用於建立 Bac libraries 或其他大片段基因的 cloning。

BAC-Optimized Replicator ™ v2.0 Electrocompetent cells 是 Lucigen 的 CopyRight Cloning Kit 中附的勝

任細胞,搭配專利的 pSMART® BAC 或 pEZ ™ BAC vectors 來使用。而 E. cloni 10G BAC-Optimized

Electrocompetent cells 是 Lucigen 專為大片段基因 cloning 而研發出的專用細胞。不但可接受 150kb

的 BAC,更可達到 1X 107 cfu/µg 的超高效率 ( 1X 1010 cfu/µg for PUC vector)。

產品名稱 產品編號 Size

BAC-Optimized Replicator v2.0 Electrocompetent Cells

60210-1 12 rxns

60210-2 24 rnxs

E. cloni 10G BAC-Optimized Electrocompetent Cells 60215-1 10 rxns

60215-2 25 rxns

Recovery Medium 80026-1 8 X 12 ml

Large / Diffi

cult G

ene C

lon

ing

For BAC Library Construction ~

BAC-Optimized Replicator™ v2.0 Electrocompetent

& 10G BAC-Optimized Electrocompetent Cells

Page 7: 波仕特勝任細胞專刊 · 2017-11-14 · 3 g 特色: 1) 轉型效率高~108 cfu/µg 2) 每個反應 (100µL) < $40 3) 在地生產供貨新鮮速度快 4) 每組均附SOC MIT台灣ㄟ尚青~~

7

BigEasy®-TSA™ ElectroCompetent cells 需配合 BigEasy v2.0 Linear Cloning System 中的 pJAZZ®

linear vectors 使用。選殖大片段 (~30 kb) 或困難的基因 (e.g. repetitive, or A/T– or G/C-rich se-

quences)時,這種 linear vector 可避免由二級結構而造成的轉殖效果低落。可用一般的 mini-prep kit

純化,使用上也非常便利。

BigEasy®-TSA™ ElectroCompetent Cells

For up to 30kb 或 difficult DNA cloning

產品名稱 產品編號 Size

BigEasy-TSA Electrocompetent Cells

60224-1 6 rxns

60224-2 12 rxns

60224-3 24 rxns

CJ236 Electrocompetent Cells 60701-1 12 rxns

60701-2 24 rxns

Know your genotype:

antA: required for copy number control with pJAZZ vector

telN: required for high efficiency transformation

mcr & mrr: prevents methylated foreign gene deletion or rearrangement

dut & ung: prevent removal of uracil from DNA

CJ236:

CJ236 ElectroCompetent cells 有 dut-1 及 ung-1 基因的 mutations, 可避免 CJ236 cells 將 uracil

從 DNA 上移除, 因此適合產生含有 dUTP 的單股 M13 phagemid。亦可應用於 Kunkel 定點突變

(Kunkel directed mutagenesis) 的實驗中。

CJ236 ElectroCompetent Cells

For M13 phagemid

Large / Diffi

cult G

ene C

lon

ing

Page 8: 波仕特勝任細胞專刊 · 2017-11-14 · 3 g 特色: 1) 轉型效率高~108 cfu/µg 2) 每個反應 (100µL) < $40 3) 在地生產供貨新鮮速度快 4) 每組均附SOC MIT台灣ㄟ尚青~~

8

自 1985 年第一個成功表達外來蛋白於噬菌體表面的案例後, 至今 phage display 技術已經與

yeast two hybrid,並列為原核和真核系統最常用來觀察蛋白質作用的方法。透過基因工程,將外來

蛋白或 peptides 以融合蛋白方式表達於絲狀噬菌體的表面。再搭配上簡易操作的體外篩選技術,利

用分子間彼此之間的交互作用( protein–protein, protein–peptide, or protein–DNA interactions),以淘

金似的篩選過程, 已成為它獨特的技術優勢 (如下圖)。近年來在生物科技產業的應用非常廣泛,舉

凡新藥篩選、酵素設計、疫苗及診斷試劑的研發等需要分子間的辨識,皆可利用此方法進行篩選。

此外近 20 年來更是成為發展抗體製藥的主要技術, 透過與抗體基因的連結,噬菌體抗體資料庫平

台的建立,加速單株抗體藥物的進展。

TG1 Competent cells

為何 phage display 需要高效率的 competent cells?

製備一個好的 phage library,首要的條件是 high efficiency 的 competent cells, 效率越高的

competent cells 所做出的 libraries 其多樣性越高 (higher diversity)。 換言之,在篩選時就會有更多的

機會找到目標蛋白。而 Lucigen 提供了市面上最高轉型效率的 TG1、SS320、ER2738、MC1061F– 等

菌株,使研究者可以得到最多元的 phage libraries。

Phage display cycle

For P

hage D

isplay Lib

rary

Phage Library construction 的必備品!

Page 9: 波仕特勝任細胞專刊 · 2017-11-14 · 3 g 特色: 1) 轉型效率高~108 cfu/µg 2) 每個反應 (100µL) < $40 3) 在地生產供貨新鮮速度快 4) 每組均附SOC MIT台灣ㄟ尚青~~

9

Lucigen的 Phage Display Competent

Cells 勝過競爭廠牌 2-4倍的轉型效率!

High efficiency cells = Higher Diversity = Better phage screening results !!

特色

1) 專為噬菌體表達系統設計的勝任細胞

2) 分成 Amber suppressor and non-amber suppressor strains

3) 市面上最高轉殖效率,以製作更大的資料庫來加速實驗進程

4) 市面上最高效率: >4 × 1010 cfu/µg (TG1/ SS320/ MC1061F-) or 2 × 1010 cfu/µg (ER2738)

For P

hage D

isplay Lib

rary

Page 10: 波仕特勝任細胞專刊 · 2017-11-14 · 3 g 特色: 1) 轉型效率高~108 cfu/µg 2) 每個反應 (100µL) < $40 3) 在地生產供貨新鮮速度快 4) 每組均附SOC MIT台灣ㄟ尚青~~

10

不穩定基因 (unstable DNA) 通指序列中含有同向或逆向的重複性序列,特別常見於 retroviral

genes 中。 這樣的基因送 入常用的 E. coli 中後, 常常因為 E.coli 本身 homologous recombination 的

能力,而產生基因突變。 例如把 ligation 後的 lentivirus plasmid 送入 DH5α後再抽出來的 DNA 常會

發現 size 不對! 且這類基因也同時有不易 PCR 及定序容易亂碼的問題, 導致要確認 clone 入基因

的完整性時,困難重重。而實驗室也常為了 trouble-shoot 這些不穩定 clones 而使實驗停滯不前。

過去 Lentivirus vector 常用於 virus 蛋白表現系統、siRNA gene knockdown,目前更是用於將 type II

CRISPR nuclease system 送到 mammalian cells 中進行 genome editing 的重要步驟。

Lucigen 專業團隊研發的 EnduraTM 勝任細胞, 有 2014 年發表於 Science 的 paper 背書 1,在

Recombination resistant strains 中效率最高, 同時並榮獲 CRISPR/Cas9 KO library 發明者的推薦,寫

入 Lentiviral CRISPR protocol2。 Endura 的 genotype 設計, 可使高度重複性的 CRISPR/Lentiviral 序

列,穩定的轉殖於 E. coli 中,以用來生產高覆蓋性的 Genomic-scale CRISPR Knock Out (GeCKO)

lentivirus library。

Stability of GeCKO libraries in Endura cells. Lines 1 and 2, separate

libraries were prepared in Lucigen Endura cells and grown at 37℃.

Library 1 was re-amplified by growth at 32℃ (Lane 3). Recombination

becomes more pronounced by growth at 37℃ (data not shown). Cour-

tesy Dr. G. Winte, MIT Broad Inst.

可穩定 GeCKO lentivirus libraries

Endura™ 轉型效率優於其他廠牌

CR

ISPR

/ Un

stable G

ene C

lon

ing

不穩定基因專用,CRISPR發明者背書!

Reference:

1: Genome-Scale CRISPR-Cas9 Knockout Screening in Human Cells. Shalem et al. (2014). Science, Vol. 343 no. 6166 pp. 84-87.

2: Lentiviral CRISPR Protocol http://www.addgene.org/static/cms/files/GeCKOv2.0_library_amplification_protocol.pdf

Page 11: 波仕特勝任細胞專刊 · 2017-11-14 · 3 g 特色: 1) 轉型效率高~108 cfu/µg 2) 每個反應 (100µL) < $40 3) 在地生產供貨新鮮速度快 4) 每組均附SOC MIT台灣ㄟ尚青~~

11

EnduraTM 特色

1) 專為不穩定基因 Cloning 設計的勝任細胞

2) 可直接取代昂貴的 Stbl3/Stbl4 (Invitrogen)及 SURE (Agilent) type 勝任細胞

3) 高效率: >1 × 107 cfu/µg (Chemical competent) or 1 × 1010 cfu/µg (Electro-competent)

4) 推薦建構 lentiviral libraries of CRISPR clones

5) 適合 single-guide RNA lentiviral library construction

CR

ISPR

/ Un

stable G

ene C

lon

ing

產品名稱 產品編號 Size

Endura™ Chemically Competent Cells

60240-1 12 rxns (DUO)

60240-2 24 rxns (DUO)

60241-1 12 rxns (SOLO)

60241-2 24 rxns (SOLO)

Endura™ ElectroCompetent Cells 60242-1 12 rxns (DUO)

60242-2 24 rxns (DUO)

Page 12: 波仕特勝任細胞專刊 · 2017-11-14 · 3 g 特色: 1) 轉型效率高~108 cfu/µg 2) 每個反應 (100µL) < $40 3) 在地生產供貨新鮮速度快 4) 每組均附SOC MIT台灣ㄟ尚青~~

12

Lucigen 在 E. cloni®勝任細胞中, 加入了 phage

T7 RNA polymerase gene linked to the IPTG-inducible

promoter. 任何有 T7 promoter 的 plasmids 都可以不

需經過 initial cloning, 直接送入高轉型效率 ( >5X109

cfu/ug) 的 E. cloni® BL21(DE3) cells 中 ,並在 colony

PCR 挑選正確的 colonies 之後,直接進入蛋白質表現

的步驟。

Pro

tein Exp

ression

E. cloni® Express BL21(DE3) Competent cells

一步到位的表現用勝任細胞

E. cloni® BL21(DE3) 特色

1) 專為 E. coli protein expression 設計,超高transformation 效能的勝任細胞。

2) 可直接取代常用的 BL21 勝任細胞。多種選擇, 符合個別實驗上的需求。

3) 有效縮短蛋白質表現實驗所需要的時間。

產品名稱 產品編號 Size

E. cloni EXPRESS BL21(DE3) Chemi-cally Competent Cells (≥1 × 107 cfu/µg)

60401-1 12 rxns

60401-2 24 rxns

60401-3 48 rxns

E. cloni EXPRESS BL21(DE3) Electro-

competent Cells (≥5 × 109 cfu/µg)

60300-1 12 rxns

60300-2 24 rxns

E. cloni® Express BL21(DE3) 有超高 transformation efficiency!

Page 13: 波仕特勝任細胞專刊 · 2017-11-14 · 3 g 特色: 1) 轉型效率高~108 cfu/µg 2) 每個反應 (100µL) < $40 3) 在地生產供貨新鮮速度快 4) 每組均附SOC MIT台灣ㄟ尚青~~

13

專門為表達 toxic (毒蛋白) 和 membrane

proteins (膜蛋白) 而開發的勝任細胞

BL-21(DE3)雖然是目前最常使用來表達的 E.

coli, 但並非所有的蛋白都可以表現。 在挑選蛋白質

表現的 clones 時失敗的原因,常與大量表現的蛋白

質會造成細胞虛弱甚至死亡有關。尤其是膜蛋白、

nucleases 之類的蛋白質。Lucigen 經由大量篩選

mutants 的方法,找到獨家的兩個抗蛋白質毒性的

DE3 strains: C41(DE3) 及 C43(DE3)。其中 C41

(DE3)是由 BL21(DE3) mutants 中選出來的,這一個

strain 包含了至少一個阻止細胞在表現毒蛋白時死

亡的基因突變。

轉型效率 菌株存活率 蛋白表現率

增加毒性蛋白之轉型效率、

存活率和蛋白表現率

Comparison of OverExpress C41(DE3) and C43(DE3)

cells with the parental strain BL21(DE3) in trans-

formation and expression of heterologous proteins.

Pro

tein Exp

ression

The effect of IPTG-induced GFP/RFP overex-

pression on the morphology of C41/BL21/C43

cells.

而 C43(DE3) 則是經由在 C41(DE3)細胞中表

現另外一組不同的有毒性的蛋白質而挑選出來

的。 因此這兩種品系對表達不同種類的毒蛋白

具有抗性,使 E. coli 在表達毒蛋白時不會影響其

存活率或蛋白產量。 目前已有超過 350 篇

papers 見證這兩株 OverExpressTM strains 在表現

毒蛋白及膜蛋白上的有效性。

OverExpress C41(DE3) pLysS and C43(DE3)

pLysS 多了一個表現 T7 Lysozyme 的基因。T7

Lysozyme 可抑制 T7 promoter,因此更可以避免

toxic proteins 在未 IPTG induction 時就有的微量

的表達。

毒蛋白專用勝任細胞

Page 14: 波仕特勝任細胞專刊 · 2017-11-14 · 3 g 特色: 1) 轉型效率高~108 cfu/µg 2) 每個反應 (100µL) < $40 3) 在地生產供貨新鮮速度快 4) 每組均附SOC MIT台灣ㄟ尚青~~

14

OverExpressTM 特色

1) OverExpress 是唯一專門針對表現毒蛋白及膜蛋白而選擇出來的勝任細胞。

2) 兩種 strains 加上有/無 pLysS 共 4 種選擇,Combo Pack 一次擁有。

3) 超過 350 篇表達毒性蛋白之 publications 驗證,成功案例包含來自於 Mammal, Plant, Yeast,

Virus...等各個物種的毒蛋白。

Pro

tein Exp

ression

Which OverExpress cell

strain should I use?

It is difficult to predict

which of the four OverEx-

press will work best for a

given protein. C41(DE3)

and C43(DE3) strains may

perform quite differently

with the same target. Start

with an OverExpress Com-

boPack™ containing all

four strains to quickly find

out which strain works

best for your application.

"Your OverExpress C41(DE3) cells express at least 2x the level of other

engineered BL21s with my minimally toxic proteins, and many fold

higher levels with my more toxic proteins."

- Kevin Glenn, M.D. Assistant Professor of Internal Medicine, University

Iowa

Page 15: 波仕特勝任細胞專刊 · 2017-11-14 · 3 g 特色: 1) 轉型效率高~108 cfu/µg 2) 每個反應 (100µL) < $40 3) 在地生產供貨新鮮速度快 4) 每組均附SOC MIT台灣ㄟ尚青~~

15

內毒素 (endotoxin)為革蘭氏陰性細菌細胞壁上的脂多醣體 (lipopolysaccharide, LPS),主要由脂質

A (lipid A)、多醣類核心 (core polysaccharides)、O-多醣類 (O-polysaccharides) 三種成份所組成,而其

中 O-polysaccharides 和 lipid A 為主要會引起免疫反應的部分。 內毒素在細菌死亡或溶解後, 會被

大量釋放出來,因其熱穩定性甚高,即使在 100°C 下 30 分鐘仍可維持其活性,一旦存在往往需要

花費相當的時間和步驟才能去除。 因此當純化 E. coli 中的 plasmid 和蛋白質並應用在細胞或動物實

驗時,若有 endotoxin 污染可能會引發局部或系統性免疫反應,進而影響實驗的結果。

移除

oligosaccharides

構造

減少 Lipid A 的

Acyl Chains

Low

End

oto

xin

ClearColi® Competent cells

把內毒素從源頭拔除!

Lucigen 獨家販售的 ClearColi® cells 直接對 E. coli 表面的 lipopolysaccharide (LPS) 的 7 個基因進行

突變,將其修飾為 Lipid IVA 且減少 lipid A 的 Acyl Chains,使其無法活化 hTLR4/MD-2 pathway 進而

抑制 NF-kB 路徑及促發炎反應的 cytokines 產生。 在移除了複雜的 LPS 的 ClearColi® 中, 無論是純化

plasmid (ClearColi® K-12 cells) 或是純化蛋白質 (ClearColi® BL-21 cells),都不需要使用昂貴的

Endotoxin-free kits,即可得到幾乎完全無內毒性的 plasmids 及 proteins。因此特別適合應用於人體

免疫和毒性測試、臨床醫用蛋白等的研發及製造 。

Page 16: 波仕特勝任細胞專刊 · 2017-11-14 · 3 g 特色: 1) 轉型效率高~108 cfu/µg 2) 每個反應 (100µL) < $40 3) 在地生產供貨新鮮速度快 4) 每組均附SOC MIT台灣ㄟ尚青~~

16

Clear Coli® 特色

1) 專為需要 endotoxin-free 的需要而設計的勝任細胞。

2) 不在需要昂貴的 endotoxin-free kits,精減實驗步驟。

3) 有純化 endotoxin-free plasmid (K-12) 或 endotoxin-free protein (BL-21) 兩種細胞的選擇。

4) 榮獲 2013 年 The Scientist Magazine 年度 10 大最新創新獎並刊載於 Nature Methods。

Low

End

oto

xin

純化 plasmid 和 protein 時, Clear

Coli® 可從源頭降低 >99% 內毒素

ClearColi K-12 ClearColi BL21(DE3)

Page 17: 波仕特勝任細胞專刊 · 2017-11-14 · 3 g 特色: 1) 轉型效率高~108 cfu/µg 2) 每個反應 (100µL) < $40 3) 在地生產供貨新鮮速度快 4) 每組均附SOC MIT台灣ㄟ尚青~~

17

蝦米!!?勝任細胞也可以客製化!!!

1. 使用 Lucigen’s strains 或是客戶自己提供

2. Chemically or Electro-competent cells

3. 特殊 tubes 或 96-well plate 型式

4. 體積和 formats (Solo, Duo...) 都可客製

快洽波仕特各區業務

應用 產品名稱 產品編號 效率

Routine Cloning E. cloni® 10G ELITE Electrocompetent Cells

60052-0 >2 × 1010 cfu/µg

E. cloni 10G ChemComp 60107-0 >1 × 109 cfu/µg

CRISPR/Lentivirus Endura™ ElectroComp 60242-0 >1 × 1010 cfu/µg

Endura ChemComp 60240-0 >1 × 108 cfu/µg

Phage Display Phage Display ElectroCombo Pack

(4 rxns each of the 3 strains)

60500-0 >2-4 × 1010 cfu/µg

免費試用的原廠 Competent cells 看過來~

製作您專屬的 Competent cells

Cu

stom

Co

mp

etent C

ell

Page 18: 波仕特勝任細胞專刊 · 2017-11-14 · 3 g 特色: 1) 轉型效率高~108 cfu/µg 2) 每個反應 (100µL) < $40 3) 在地生產供貨新鮮速度快 4) 每組均附SOC MIT台灣ㄟ尚青~~

18

產品名稱 產品編號 Size 主要類別或用途

9cm Petri Dish PT-PD-90 500pcs 細菌培養皿

LB (Miller) 0103 500 g 細菌培養基

Turbo Broth™ 0104 500 g 細菌培養基

Superior Broth™ 0105 500 g 細菌培養基

Power Broth™ 0106 500 g 細菌培養基

Hyper Broth™ 0107 500 g 細菌培養基

Glucose M9Y 0108 500 g 細菌培養基

Media Optimization Kit™ 0100 1 kit 細菌培養基

Agar J637 1 Kg 洋菜膠

X-gal 0428 1g, 100G 藍白篩選

IPTG 0487 1g, 10g, 100G 藍白篩選

X-Gal-IPTG solution N714 1.5 ml, 10 ml 藍白篩選

Ampicillin Sodium Salt AM-0339 25g, 100g 細菌培養常用抗生素

Teracycline Hydrochloride AM-0422 25g, 100g 細菌培養常用抗生素

Teracycline Hydrochloride AM-E709 20 ml 細菌培養常用抗生素

Kanamycin Sulfate AM-0408 10g, 25g, 100g 細菌培養常用抗生素

Chloramphenicol AM-0230 100g 細菌培養常用抗生素

Lysis Buffer for Bacterial (Tris ) ABP-PA-

AXBR125T

125 ml, 250 ml 細菌蛋白用 lysis buffer

Protease Inhibitor Cocktail for

bacterial, 20X

AM-M306 5 ml 蛋白酶抑制劑

Si-Pure Monolith His-tag Protein Purification Column

PT-NI-10mL-2 2 columns/box His-tag 蛋白純化管柱

波仕特 Cloning 相關產品

Related

Pro

du

cts

一次買齊超便利!

Page 19: 波仕特勝任細胞專刊 · 2017-11-14 · 3 g 特色: 1) 轉型效率高~108 cfu/µg 2) 每個反應 (100µL) < $40 3) 在地生產供貨新鮮速度快 4) 每組均附SOC MIT台灣ㄟ尚青~~

19

產品名稱 產品編號 Size 主要類別或用途

CloneSmart HCAmp Blunt Cloning

Kit

40041 20 rxns, 40 rxns Ready -To-Use Blunt end cloning, no gap, 無須藍白

篩 CloneSmart HCKan Blunt Cloning Kit 40704 20 rxns, 40 rxns

BigEasy v2.0 Linear Cloning Kit (pJAZZ-OC NotI Vector)

43024 5 rxns, 10 rxns ,20 rxns 大片段 cloning (可達

30kb),GC/AT-rich gene

BigEasy v2.0 Linear Cloning Kit (pJAZZ-OK Blunt Vector)

43036 5 rxns, 10 rxns ,20 rxns

CopyRight® v2.0 BAC Cloning Kits

(pSMART® BAC)

42030

42032

10 rxns , 20 rxns BAC cloning kits: 準確、穩

定又高效率的 BAC cloning

systems CopyRight® v2.0 BAC Cloning Kits

(pEZ™ BAC)

42009 10 rxns , 20 rxns

Expresso® Solubility and Expression

Screening System

49060 24 rxns E. coli 蛋白質表現系統

(inclusion body 蛋白質專

用)

Expresso® T7 Cloning and Expression

System, N/C-His Combo

49000 10 rxns E. coli 蛋白質表現系統 (T7 promoter)

Expresso® Rhamnose Cloning and

Expression System, N/C-His Combo

49010 10 rxns E. coli 蛋白質表現系統 (可

調控 Rhamnose promoter)

Expresso® CMV Cloning and Expres-

sion System

49031 5 rxns, 10 rxns 動物細胞蛋白質表現系統

(CMV promoter)

SelecTEV™ Protease 30810 1,000U, 5,000U 優化後的 TEV 蛋白質脢

Related

Pro

du

cts

Lucigen Cloning Kits

Page 20: 波仕特勝任細胞專刊 · 2017-11-14 · 3 g 特色: 1) 轉型效率高~108 cfu/µg 2) 每個反應 (100µL) < $40 3) 在地生產供貨新鮮速度快 4) 每組均附SOC MIT台灣ㄟ尚青~~

勝任細胞,在微生物學和分子生物學中特別定義為有能力從細胞

以外的環境接納外來 DNA 的一種細胞。換言之在自然外在環境中,

或者在實驗室中藉由人為的處理,使一個細菌細胞有特定的能力可

以勝任外來之 DNA 的存在。

勝任細胞的發現可追朔至 1928 年時,Dr. Frederick Griffith 經由肺炎鏈球菌感染老鼠的一系

列生物學實驗,發現了細菌的轉型作用(Transformation),但依當時的實驗設備尚無法進一步

探討造成此現象的物質,後來才由 Dr. Oswald T. Avery 發現其中這種「轉化因子」是純粹的

DNA,這是第一個 DNA 在細胞中的攜帶遺傳信息的證據,也大大的顛覆了當時認為蛋

白質為遺傳物質的信念,由此奠定了分子生物學的基礎。至今勝任細胞儼然已成為

分子生物不可或缺的基礎研究工具之一。在實驗室裡,透過特殊的處理,令細胞

膜產生些微的變化,使外來的 DNA 能夠容易的進入到細菌中。

成立於美國 Wisconsin 的 Lucigen 生物科技公司提供效率最好的、選擇最多、

最物超所值的勝任細胞, 其品質經 ISO 認證,應用範圍涵蓋 Synthetic biology、phage

display libraries、 Protein expression、CRISPR…等領域。

by Catherine Liu, PhD & Carol Lin, PhD

北區 0800-231-530 竹苗 0800-500-110 中部 0800-555-650 南部 0800-268-266

台北 02-2655-7677 台中 04-2262-4883 高雄 07-342-5707 竹南 037-680-138

波仕特生物科技

Protech Technology Enterprise Co., Ltd.