아미노산과 단백질

생명과학의 기초 생화학

Chapter 2

2장의 개요

2.1 단백질의 구성단위 아미노산

2.2 단백질의 일차구조: 폴리펩타이드

2.3 단백질의 입체구조와 기능의 관계

아미노산과 단백질의 소개

1. 단백질은 건조한 세포 무게의 반을 차지

2. 세포에서 가장 다양하고 중요한 기능

3. 게라두스 뮬더: 동물, 식물에서 단백질 추출

4. 베르첼리우스(스웨덴): “Protein

그리스어로 “protios” 첫째를 차지한다

5. 단백질 달걀흰자의 의미 일본

6. 고분자 분자량 6,000 ~ 수백만

7. 구성성분 아미노산의 공유결합

8. 아미노산의 중합체 폴리펩타이드

9. 아미노산의 순서 염색체의 뉴클레오타이드의 순서

독특한 구조 특수기능

2.1 단백질의 구성단위 아미노산

1. 자연에서 모든 단백질의 아미노산은 L-α-아미노산

2. α-탄소에 아미노그룹(-NH2)과 R그룹

3. 쌍극성 생리적인 pH에서 카복실그룹과아미노그룹의 이온화(Zwitter ion)

4. 두 개의 특징적인 pKa’값

5. 등전점: 하전이 “0”이 되는 pKa값

6. α-탄소가 대칭성을 갖는다. 입체이성 D형

아미노산의 화학적 성질

그림 2-1. α-아미노산의 삼차구조

(1) α-탄소가 카이럴하므로

정사면체가 결합된 모습

(2) (1)의 간단한 표현

그림 2-3. L-알라닌의 두 해리상태의 구조

그림 2-2. 쌍극성 아미노산(쯔비터이온)

그림 2-4. 알라닌의 적정곡선

그림 2-5. α-아미노산의 입체이성 구조

아미노산의 분류

1. 20개 아미노산(자연에 100여 개) 폴리펩타이드에사용

2. 프롤린 하이드록시프롤린 / 세린, 타이로신인산화

3. R-그룹의 특성에 따라 분류: 1. 비극성 아미노산, 2. 방향족 R-그룹 3. 음하전의 극성그룹4. 양하전의 극성그룹 5. 하전이 없는 극성

4. 필수아미노산: 아이소루신, 루신, 발린, 트레오닌, 메싸이오닌, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘, 아르지닌, 라이신

* 히스티딘 유아발육 / 아르지닌 요소회로에서모두 소비

그림 2-6. 아미노산들의 구조

1. 비극성 아미노산

- 글리신: 작은 R-그룹 회전에 최소의 입체장애

밀집된 지역에 들어맞음

- 알라닌: 소수성인 메틸그룹, -CH3을 갖음

- 발린, 루신, 아이소루신: 큰 비극성 R-그룹을 갖음

소수성 상호작용에 관여

- 분해작용 결핍: 단풍나무시럽냄새오줌병

- 공모양의 단백질에서 주로 안쪽에 위치

단백질 안정화에 기여

- 페닐알라닌: 분해결핍 페닐케톤뇨증

비편재화된 π 전자 자외선 흡수, 이차구조 형성의 힘

- 방향족아미노산: 280nm에서 최대흡수

- Beer-Lambert의 법칙

A = εc1 (c: 몰랄농도)

1: 용기의 폭(1cm) ε = 몰흡광계수

A = 흡광도(280nm)

- 흡광도의 측정으로 몰랄농도에서 용액 속의

단백질의 농도 측정

- 트립토판: 식물에서 추출된 약물질의 전구체,

세로토닌(serotonin) 멜라토닌(melatonin)

- 메싸이오닌: 메틸그룹 공여체

(에피네프린, 크레아틴, 멜라토닌 합성시)

2. 산성아미노산

- 아스파트산: pKa’ = 3.86, 중성 pH에서 이온화

단백질 표면에 주로 나타남

- 글루탐산:

· pKa = 4.25

· 두 개의 음하전, 칼슘이온과 강력하게 결합

· 내부 아마이드 유도체 피롤리돈 카복실산

· 면역글로뷸린의 무거운 사슬, 펩타이드의 N-말단

아미노산

그림 2-7. γ-카복실글루탐산

그림 2-8. 글루탐산과 파이로글루탐산의 구조

- 라이신:

· ε-아미노그룹 pKa ‘= 10.53

· ε-아미노그룹 바이오틴, 리포산, 바이타민 A 유도체 레티나 부착

· 콜라젠 δ-탄소 하이드록실화 당이 부착.

· 일레스틴의 ε-탄소 산화되고 아미노그룹 제거 반응성

알데하이드 그룹 신축성 물에 불용성 결합아미노산데스모신과 아이소데스모신

- 히스티딘: · 이미다졸염 완충용액 · 효소의 활성부위 아미노산

· 금속과 결합 · 히스티딘 탈카복실화 히스타민

- 아르지닌: · δ-탄소 구아니디늄그룹

두 개의 아미노그룹 사이의 공명안정

· pKa’=12.48

· 크레아틴 합성에 사용, 요소회로 참여

3. 염기성아미노산

- 세린:

· 일차알콜 + 인산 에스터결합 형성

· 인산화 활성도 조절

· pKa’=13.6

- 트레오닌:

· 네 개의 이성체

· 단백질에 단지 한 개의 L-트레오닌만 존재

· 인산과 반응

4. 중성아미노산

- 시스테인:

· 약산성, pKa‘ = 8.33

· -SH 생리적인 pH에서 해리 안 됨

· 효소와 기능성 단백질의 기능에 필수적

· 납이나 수은은 –SH그룹과 반응 활성의 상실

· -SH 두 개 산화 시스틴, -S-S- 단백질 포개짐

- 타이로신:

· 페놀의 하이드록실 그룹 pKa‘ = 10.0

· 생리적 pH에서 이온화 안 됨.

· 하이드록실 그룹 게스트린, 콜레스토사이토키닌-SO4가 붙는다.

· 단백질 kinase(발암성유전자) 인산화

· 분해능력의 결핍으로 선천성 유전병, 타이로시노시스, 타이로시니미아

· 타이록신, 카테콜아민, 멜라닌 합성의 전구체

- 아스파라진: 당 단백질의 탄수화물 가지사슬과

아마이드 결합

- 글루타민:

· γ-아미노질소 퓨린과 피리미딘 뉴클레오타이드합성에 사용

· 간에서 요소로 바뀌며, 신장에서 암모니아로 배출

· 뇨에서 H+의 중화: 산 염기의 조절에 관여

자연에 나타나는 다른 아미노산

1. 콜라젠: 4-하이드록시프롤린과

5-하이드록시 라이신 포함

2. 우유의 카제인: 인산세린

3. 대장균 단백질 합성에서 N-포밀메싸이오닌

시작단계의 아미노산

4. 자연의 아미노산 중 단백질에 나타나지 않음

호모세린, 오르니틴, β-알라닌, 및 δ-아미노뷰티르산

그림 2-9. 하이드록실화된 프롤린과 라이신

그림 2-10. 인산화된 아미노산

그림 2-11. 포밀화된 아미노산

그림 2-12. 단백질 합성에 사용되지

않은 아미노산들

2.2 단백질의 일차구조: 폴리펩타이드

1. 일차구조(primary structure) 아미노산의 수와 순서

2. 아미노그룹과 카복실그룹 펩타이드결합

이중결합성질 아마이드그룹의 수소와 카보닐그룹의

산소 단단한 평면 위에 놓임

3. α-C원자는 펩타이드결합의 N과 C에 연결되는단일결합(Φ와 Ψ)회전이 자유스럽다

4. 자유스런 회전 α-C원자의 R-그룹

삼차구조형성에 영향

5. 모든 펩타이드결합은 트렌스 모양

6. 프롤린: 피롤리돈의 –NH그룹이 관여되는

펩타이드 결합은 트렌스와 시스의 두 가지 배열로 일어남

펩타이드결합

그림 2-14. 단단한 폴펩타이드의 단위와 펩타이드그룹을연결하는 결합은 큰 각도의 회전 가능성을 가짐

그림 2-15. Cα-N 결합의 Φ 회전각도와 Cα-C결합의 회전각도 Ψ

그림 2-16. 프롤린이 포함된펩타이드결합의

시스와 트렌스 구조

폴리펩타이드

1. 단백질은 한 개 이상의 폴리펩타이드사슬이 포함

2. 단위 아미노산: 아미노산 잔기(residue)

3. N-말단잔기(N-terminal residue)과

C-말단잔기(C-terminal residue)

4. 단백질은 N-말단에서 C-말단으로 합성

5. N-말단은 왼쪽에, C-말단은 오른쪽에 표기

기능성 올리고펩타이드

1. 열 개 이하의 아미노산으로 구성된 펩타이드

2. 홀몬, 항생제, 독소 및 대사중간물질

3. 글루타싸이온: 트라이펩타이드, 적혈구세포의 산화에의한 손상의 방지

4. 난포자극분비홀몬(FSH-RH), 황체형성홀몬분비홀몬(LH-RH) 스테로이드 합성자극

5. 바소프레신(외부혈관 억제 혈압증가) 옥시토신(평활근의 수축)

6. 항생제, 그라마시딘, 타이로시딘, 페니실린

7. 합성 펩타이드-아스파탐(L-아스파틸-페닐알라닐-메틸에스터) 설탕의 200배 단맛

그림 2-17. 글루타싸이온의 구조

그림 2-18. 옥시토신, 바소프레신,

타이로시딘의 구조

그림 2-19. 페니실린의 구조

폴리펩타이드의 아미노산 순서의 결정

1. N-말단과 C-말단 아미노산의 잔기 확인

2. 이황화그룹이 있으면 절단

3. 서로 포개지지 않는 가능한 한 적은 수의조각으로 제한된 절단

4. 이 조각들의 분리

5. 대략 20~30개의 잔기로 연결된 펩타이드에서아미노산의 순서결정

=> 아미노산 순서분석기에 의한 순서분석

1. 아미노산의 N –말단과 C-말단의 확인

- 덴실화된 폴리펩타이드 높은 온도의 산성용액에서

펩타이드 결합 가수분해

- N-말단 잔기 강한 형광을 가지므로 표준물질과 비교

확인 매우 적은 양의 시료 사용

- 한 개의 폴리펩타이드사슬 한 개의 N-말단잔기

폴리펩타이드의 수

- 인슐린: 덴실화된 글리신과 페닐알라닌의

두 개의 펩타이드

그림 2-20. 덴실클로라이드반응

- 이황화결합을 파괴시키는 β-머캅토에탄올을 요소와

구아니듐하이드로클로라이드와 같이 단백질 처리

이황화결합은 시스테인 잔기가 됨

원래의 단백질모양이 파괴됨

- 폴리펩타이드사슬 일직선으로 펼쳐지게 됨

- 자유로운 황화수소그룹이 아이오도아세트산 처리

산소에 의한 재산화로 이황화결합의 재형성 막음

2. 수소결합 및 이황화그룹의 절단

그림 2-21. 머캅토에탄올, 요소, 구아니듐하이드로클로라이드

그림 2-22. 아이오도아세트산을 사용하여설퍼하이드릴그룹의 반응을차단시킴

3. 서로 포개지지 않은 폴리펩타이드의 절단

- 폴리펩타이드내에 제한된 수의 메싸이오닌(2.3%) 포함 사이아노젠브로마이드(CNBr)의 처리 큰조각을얻음 C-말단 쪽의 메싸이오닌

- 트립신 처리: C-말단 쪽의 아르지닌 또는 라이신

- 라이신의 변형: C-말단 쪽의 아르진

- 카이모트립신

그림 2-23. 사이아노젠프로마이드에 의한 절단

4. 가수분해된 폴리펩타이드조각의 분리

- 순수한 상태로 폴리펩타이드 조각들의분리(아미노산의 순서분석기 사용)

- 젤여과 방법(gel filtration), 다공성 고분자(큰분자 먼저, 적은 분자 지연)

- 고성능액체크로마토그래피(HPLC) 사용

그림 2-24. 젤여과크로마토그래피법에 의한 단백질분자의 크기에 따른 분리

5. 전체 펩타이드 순서맞추기

그림 2-25. 성분 펩타이드의 순서의포개짐을 분석하여 전체

펩타이드 아미노산의순서를 얻게 된다.

2.3 단백질의 입체구조와 기능의 관계

- 입체구조(conformation):

1. 어떤 공유결합을 파괴없이 변환 가능한 그룹의 삼차배열

2. 에테인의 가려진 이성체, 비틀어진 이성체

3. 단백질은 무한한 수의 입체구조

생물학적인 조건에서 제한된 수의 안정한 입체구조

4. 원래의 형태 삼차구조의 파괴 변성

- 평면구조(configuration):

1. 원자의 절대적인 배열, 주어진 원자 주위의 공간에서

치환그룹의 배치

2. 이성체는 한 개나 그 이상의 공유결합을 파괴하지

않고 서로 상호변환될 수 없다.

그림 2-26. 에테인 이성체의 구조

단백질의 종류와 기능

1. 섬유상단백질:

· 폴리펩타이드의 횡적인 연결.

∙ α-케라틴(머리카락, 손톱)은 세 개의 오른쪽으로 도는

α-나선의 폴리펩타이드로 구성.

· 피부의 콜라젠, 뼈, 연골은 많은 양의 글리신(25%),

프롤린, 하이드록시프롤린(25%)들 때문에 α-나선이

없음.

∙ 왼쪽으로 도는 세 개의 나선(트로포콜라젠).

2. 구형단백질:

∙ 물에 잘 녹고, 최소 공간을 차지하는 집약된 구조

∙ 효소나 항체처럼 생체계에서 대부분을 차지하는 중요한

생체고분자

그림 2-27. 케라틴에서 세 개의 α-나선 코일의 모형

그림 2-28. 트로포콜라젠의 삼중나선의 모형

이차구조의 형성

1. α-나선(helix)의 구조: 오른쪽으로 도는 수소결합

2. β -병풍구조(β-pleated sheet): 비단

3. β-회전(turn)

4. 무질서코일(random coil): 수소결합지역이잘못되거나 결핍됨.

1. α-나선구조

1. 오른쪽으로 도는 α-나선 시계반대방향

2. 각 펩타이드결합의 -NH, -CO 사이의 수소결합안정화(첫 번째 잔기의 아미노프로톤과 네 번째 잔기의카보닐 산소 사이에서 얻어짐)

3. 한 번 회전에 3.6개 아미노산, 0.54nm

4. 불안정성:

· 비슷한 하전을 띤 R-그룹(Asp. His, Glu, Lys, Arg) 정전기적인 반발

· β-탄소 근처의 잔기들의 큰 치환 때문(Ile, Thr)

· 가지사슬 수소결합이나 이온결합의 형성 때문

그림 2-29. α-나선의 평균크기

2. β-병풍구조

- 잔기 사이의 거리: 0.35nm

- 근처 폴리펩타이드의 사슬의 –NH와 –CO그룹 사이의

수소결합에 의해서 안정화

- 평행과 비평행(실크의 섬유는 비평행의 β-병풍구조)

- 아밀로이도시스(amyloidosis) 주된 구조가 β-병풍구조

- β-파이브릴로시스(β-fibrillosis) 이차구조가 잘못 축적됨

- 아밀로이드(amyloid): 뒤틀린 β-병풍구조의 집합체

- 아밀로이드 퇴적 만성적인 부종, 일종의 암, 뇌의

질병(알츠하이머)

- 실험쥐: 수소결합 붕괴 시약 다이메틸설폭사이드

아밀로이드 감소

그림 2-30. β-병풍구조의 평행과 비평행한 수소결합의 구조

· 다른 잔기와 펩타이드사슬 간의 상호작용 같은정리된 계속적인 모양을 갖지 못하는 경우

3. 무질서한 코일

· 폴리펩타이드 사슬이 집약된 분자로 만들어지게되는 원인(공 또는 타원체 모양의 구형단백질).

· 네 개의 아미노산 잔기 머리핀구조를 형성

4. β-회전

- 이차구조와 삼차구조의 중간구조:

초이차구조 또는 구조의 요소(motif)

- 구형단백질:

α-나선과 β-병풍구조의 다양한 비율과 조합

- 초이차구조:

· βαβ요소 두 β-병풍구조 사이에 α-나선이 들어 있음

· β-머리핀구조 β-병풍구조가 역평행으로

진행함으로써 머리핀모양

· αα-요소 두 개의 α-나선이 비스듬히 반대방향으로 진행

· 그리스 열쇠 요소 네 가닥의 β-머리핀이 역평행으로포개짐

· β-장벽의 요소: 연장된 β-병풍구조가 원통모양 구조

5. 초이차구조의 성분

그림 2-31. 초이차구조의 종류

분자가 스스로 선호하는 낮은 에너지 상태를 탐색한다. 단백질은 일차 아미노산의 순서가 이차 및 삼차구조에영향을 주게 된다.

1. 폴리펩타이드 사슬간의 견인력과 반발력의 힘의 균형

포개짐(folding)

2. 아미노산 가지사슬들 간의 견인력:

공유결합, 이온결합, 수소결합, Van der Waals 견인력, 소수성기의 상호작용

3. 반발력: 정전기적인 반발력, Van der Waals 반발력

삼차구조 및 관련 결합력

그림 2-32. 단백질의 삼차구조를 안정화시키는 공유결합 및여러 가지의 상호 작용

- 공유결합: 펩타이드결합, 이황화결합

배위결합: 두 원자에 의해서 동등하지 않은,

전자쌍의 공여로 만들어지는 화학결합

전이금속, 유기리간드들 사이에서의

상호작용이 중요.

- 이온결합: 반대 하전을 갖는 두 그룹 사이의 정전기적인

견인력에 의해 일어남.

1. 견인력

- 수소결합:

· 두 개의 전기음성적인 원자들 사이의 수소원자의

공여로 일어남

· 단백질에서 공유할 수 있는 수소원자를 갖는 그룹:

-N-H(펩타이드 질소, 이미다졸 및 인돌), –SH(시스테인),

–OH(세린, 트레오닌, 타이로신, 하이드록시프롤린),

-NH2, NH3+(아르지닌, 라이신, 글루타민), -

CONH2(카바미노, 아스파라진, 글루타민)

· 수소원자를 공유할 수 있는 그룹:

-COO-(아스파트산, 글루탐산, α-카복실산),

-S-CH3(메싸이오닌), -S-S-(이황화 그룹),

=C=O(펩타이드와 에스터 연결)

- Van der Waals 견인력

· 한 분자에서 고정된 쌍극자가 다른 분자의 쌍극자를

유발

· 고정된 쌍극자의 양하전의 끝은 전자그룹을

끌어들이려 하고, 한편 음하전의 끝은 서로

밀어내려고 한다.

· 상호작용의 세기 1/r6

· 비극성 가지사슬들 간의 견인력

- 소수성상호작용:

비극성 가지사슬(방향족 고리, 탄화수소그룹)서로

붙게 되는 원인. π전자는 다른 π전자들과 서로

포개지는 능력이 견인력으로 작용.

- 정전기적인 반발력: 이온성 힘의 반발

- Van der Waals 반발력:

서로 매우 짧은 거리의 원자들 사이에서 작동.

전자구름의 상호반발에 의해서 유도된 쌍극자

때문에 나타난다.

2. 반발력

삼차구조의 결정

- 1950년대 X선 결정구조연구:

- 단백질의 α-나선 β-병풍구조, 핵산 DNA

이중나선의 구조

· 마이오글로빈: 죤 켄드류(John Kendrew)

· 헤모글로빈: 막스 페루츠(Max Perutz)

- X-선 조사 굴절의 모양(무거운 원자-더 진한 색)

- 납이나 우라늄 사용, X-선 굴절모양의 비교

- 해상도 6Å 400, 1.4Å 25,000

그림 2-33. 단백질 결정에 X-선을 통과시킨 굴절의 모양

그림 2-34. 마이오글로빈의 X-선 회절의 모양

그림 2-35. 콩 단백질인 콘카나발린 A의 삼차구조 전자밀도 지도

- 근육에서 산소보관, 세포를 통하여 산소를 운반:

153개의 아미노산을 갖는 한 개의 폴리펩타이드사슬과

철을 포함하는 분자인 힘(heme)

- 힘분자의 유기화학 성분인 폴피린: 네 개의 피롤고리

- 여덟 개의 구역의 α-나선, 다섯 개의 비나선구조 구역

존재

- 힘: 분자의 바깥쪽, His F7 힘의 평면

- 가역적인 산소부착 Fe2+ 일 때

- 물 분자 여섯 번째 배위:

· Fe2+ Fe3+(산화)

· 페릭마이오글로빈은 산소결합 불능

1. 마이오글로빈

그림 2-36. 프로토폴피린IX와 철을 포함한 힘(heme) 그룹

그림 2-37. 마이오글로빈의 삼차구조

- 124개의 아미노산, 한 개 폴리펩타이드, 네 개의 이황화결합

- β-머캅토에탄올, 요소, 구아니딘염산염:

효소능력의 상실

- 공기의 노출 설퍼하이드릴그룹의 재산화:

여덟 개의 시스테인잔기가 네 개의 이황화그룹을 만들 수

있는 105가지 다른 분자내부의 이황화그룹을의 형성 가능

- 자발적으로 효소가 생물학적인 활성을 갖도록 재건된다.

유전자코드에 의해서 지정된 라이보뉴클리에이스의

아미노산의 순서는열역학적으로 선호되는 효소의 원래

입체구조를 구성하는 데 필요한 정보를 제공하고 있음을 알

수 있음.

2. 라이보뉴클리에이스

그림 2-38. 라이보뉴클리에이스 A의 일차구조

그림 2-39. 라이보뉴클리에이스 A의 변성 및 재현

- 두 개 이상의 동등한 또는 다른 폴리펩타이드

사슬을 포함하는 기능성 단백질이 갖는 입체구조

- 두 개 이상의 단위체 올리고머(oligmer)

- 여러 단위체 : 촉매활성 조절이 효율적

- 단위체는 비공유성 힘에 의해서 서로 결합

3. 사차구조

단백질의 포개짐

타입 I. 1. 아미노산의 순서에 따라 α-나선과 β-병풍구조의 형성2. 먼 거리의 상호작용으로 α-나선들이 접근하여

초이차구조의 형성3. 완전한 단위체로 전체적인 포개짐

타입 II. 1. 폴리펩타이드의 자발적인 붕괴2. 비극성 잔기의 소수성 상호작용의 조정에 의해 집약된

공모양의 구조를 만들게 됨3. 용융된 공(molten glubule)

1. 포개짐의 원리

분자샤페론(chaperon):

- 부분적으로 포개졌거나 잘못 포개진 폴리펩타이드와 상호

작용

- 정확한 포개짐의 경로를 선택하거나 포개짐이 일어나도록

미세한 환경을 조절하는 기능

- Hsp70, 분자량 70,000 (heat shock protein)

- 소수성 잔기가 많아서 부적절한 응집을 막는 폴리펩타이드

지역에 결합

- 아직 포개지지 않은 폴리펩타이드를 보호하는 기능

- 세포막을 통하여 이동되기 전까지 포개짐을 억제하는 기능.

- 대장균에서 얻은 DnaK(Hsp70) 과 DnaJ(Hsp40)

- 샤페로닌(chaperonin):

대장균에서 GroEL/GroES라 부르는 샤페로닌 체계가 필요

2. 포개짐에 관여하는 효소나 단백질

그림 2-40.

그림 2-41. 단백질 포개짐 과정에서 샤페론의 역할

이성화반응을 촉매하는 두 개의 효소

1. 단백질-이황화-이성화효소(protein disulfide isomerase, PDI)는 이황화결합의 상호교환 및 뒤섞음을 촉매시키는 효소 PDI는 부적절한이황화결합의 횡적인 연결로 얻어지는 포개짐의중간체를 제거하는 반응의 촉매를 수행

2. 펩타이드 프롤린 시스-트렌스 이성화효소(peptide proline cis-trans isomerase, PPI) 프롤린펩타이드결합의 시스와 트렌스 이성체를 서로변화시키는 촉매효소

삼차구조의 파괴로 생물학적인 기능을 상실(온화한

변성은 가역적)하게 된 상태

1. 용해도의 감소

2. 내부구조의 변화 또는 펩타이드사슬의 붕괴와

상관없이 펩타이드사슬의 배열의 변형

3. 대칭성의 감소로 나선 구조의 상실

4. 화학반응성의 증가: 이온화, 설퍼하이드릴그룹

5. 단백질가수분해효소에 의한 가수분해 가능성의 증가

6. 원래의 생물학적인 기능의 상실 또는 감소

7. 결정형성능력의 상실

3. 단백질의 변성

단백질의 분리 및 취급할 때 변성이 되지 않도록주의해야 할 열 가지의 규칙

1. 이온의 세기: 용액의 pH

2. 온도: 수소결합 파괴

3. 용액의 희석: 친수성의 증가

4. 금속이온: 정전기적인 상호작용

5. 수소결합의 형성 촉진제: 요소 또는포름알데하이드

6. 계면활성제: 공기 접촉 시 산화유발

7. 유기용매: 소수성의 상호작용

8. 산화 및 환원제: 시스테인의 이황화결합

9. 물리적인 충격 또는 높은 에너지

10. 반응성 화합물: 아미노산 변형 화합물