editorial - sica
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la diferencia para cada una de las personas que día a día atendemos y que pueden ser parte de las Mil Vidas sobre las cuales hayamos logrado un impacto en su salud física, mental o social. Invitamos a cada uno(a) de ustedes a ser parte de este compromiso, y que compartan con nosotros sus experiencias exitosas en este espacio que es de la región Centroamericana. Licda. Patricia L. Mira Gómez
Directora Laboratorio Regional
de Referencia-VIH/SIDA
Proyecto Regional VIH/SIDA
Cada año en el mes de abril se conmemora el Día Mundial de la Salud, este año la Organización Mundial de la Salud (OMS) conmemoró este día bajo el lema Mil ciudades, Mil vidas, organizándose diferentes eventos en las ciudades alrededor del mundo, durante la semana del 7 al 11 de abril de 2010. La OMS estableció como objetivos mundiales de la campaña los siguientes: Mil ciudades: abrir los espacios públicos a la salud, ya sea para realizar actividades en los parques, reuniones ciudadanas, campañas de limpieza, o cerrar parte de las calles al tránsito de vehículos motorizados. Mil vidas: reunir mil relatos de promotores de la salud urbana que, por sus iniciativas, hayan t e n i d o u n i m p a c t o considerable en la salud de sus ciudades. Para los que somos parte de la gran familia de prestadores de servicios de salud a la población, esta celebración retoma especial importancia, ya que este año nos hace
reflexionar de cómo nuestro trabajo esta impactando en nuestra comunidad, motiván-donos a ser agentes de cambio constantes, comenzando en nuestro núcleo familiar y proyectándonos a la comuni-dad que nos rodea. En el tema de VIH, una de las iniciativas que debería tener impacto en nuestra comunidad y en nuestra familia, es el tomarnos la responsabilidad de educar sobre el tema y mo-tivar los cambios de conducta orientados a la prevención del VIH, y sobre todo a evitar el estigma y discriminación de personas viviendo con VIH, esta es una tarea de todos y u n a r e s p o n s a b i l i d a d compartida si queremos ganarle la batalla al VIH/sida. El equipo de trabajo del LRR-V I H / S I D A e s t a m o s comprometidos a trabajar de la mano con las redes de laboratorio de la región centroamer icana, para brindarles los conocimientos técnicos científicos e intercambiar experiencias que motiven a que cada día brindemos servicios con calidad, efectividad y sobre todo con calidez, que marquen
Editorial
Abril 2010 Volumen 1, nº 2
LRR EN ACCIÓN
Contenido:
SEROTECA… un es-
fuerzo regional
2
Banco de muestras
de referencia para
ADN Proviral de VIH-1:
una herramienta de
laboratorio…….
2
Detección de la acti-
vación inmune celu-
lar mediante la prue-
ba de Neopterina…
3
Control de Calidad
Interno: una respon-
sabilidad de todos los
laboratorios
4
En breve…. 4
Galería fotográfica 5
LRR en acción es publicado por:
Laboratorio Regional de
Referencia de VIH/SIDA para
Centroamérica.
Ciudad de Panamá
(507) 527-4837
http://www.sica.int/lrr/
El Laboratorio Regional de
Referencia para VIH/SIDA (LRR
VIH/SIDA) es una organización
que trabaja en pro de la
Región Centroamericana,
específicamente en el
diagnóstico, monitoreo y
seguimiento de ITS-VIH/SIDA.
A nivel Centroamericano, con
el objetivo de asegurar la
calidad de las pruebas
utilizadas para el diagnóstico
de VIH, se cuenta por primera
vez con un grupo de muestras
biológicas procedentes de
embarazadas, personas con
VIH y donantes de bancos de
sangre. Estas muestras
debidamente evaluadas y
caracterizadas, en conjunto
recibe el nombre de
SEROTECA REGIONAL; la
misma tiene en todo
momento una representación
de cada uno de los países
para asegurar la diversidad al
momento de realizar
actividades tales como
evaluación de reactivos.
Dichas muestras están
almacenadas bajo estrictas
condiciones de bioseguridad
y temperatura en las
instalaciones del LRR VIH/SIDA.
La SEROTECA REGIONAL
requiere ser abastecida
periódicamente ya que las
muestras se terminan en la
medida que se utilizan al
realizar procedimientos; por
tal motivo el LRR se apoya en
diferentes organizaciones,
como son los Laboratorios
Nacionales de los seis países,
organizaciones de personas
con VIH de algunos países y la
REDCA+ (Red Centroamerica-
na de Personas con VIH) con
la intención de enriquecer
este grupo de muestras
biológicas de referencia y así
colaborar para mantener el
aseguramiento de la calidad
en todo lo que a ITS-VIH/SIDA
se refiere dentro de la Región
Centroamericana.
Actualmente se cuenta con
información correspondiente
a aproximadamente 1300
muestras, en las cuales existen
principalmente positivos para
VIH, Hepatitis C y negativas
por dichos agentes; el
manejo, almacenaje y
administración de la seroteca
es responsabilidad del Labora-
torio Regional, pero los
propietarios son los Laborato-
rios Nacionales de la Red
Centroamericana de VIH.
La sociedad científica a nivel
mundial reconoce la
necesidad de muestras
biológicas de referencia para
utilizarlas en los ensayos de
laboratorio. Estas muestras de
referencia son de gran utilidad
en el aseguramiento de la
calidad cuando los ensayos
de laboratorio son
implementados y validados.
Conscientes de esta
necesidad, el Laboratorio
Regional de Referencia de
VIH/SIDA, ha gestionado la
conformación de un banco
de muestras biológicas que
puedan ser usadas de
referencia para los ensayos de
detección de ADN Proviral de
VIH-1. Este banco está
conformado por muestras de
concentrado leucocitario
(también conocido como
Buffy Coat) y sangre seca en
papel filtro, las cuales han sido
analizadas y categorizadas
según los resultados de
laboratorio obtenidos.
Este banco de muestras está
disponible para los
Laboratorios Nacionales de
Referencia de la región
Centroamericana, para ser
usado como muestras de
referencia con resultados
conocidos en la
implementación y/o
verificación del ensayo de
detección de ADN Proviral de
VIH-1 en sus instalaciones. Es
más, este banco de muestras
permite al LRR la
conformación de paneles de
muestras para el Programa de
Evaluación Externa, cuando
los laboratorios así lo solicitan.
SEROTECA…. un esfuerzo regional
Banco de muestras de referencia para ADN Proviral de VIH-1:
una herramienta de laboratorio…….
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LRR EN ACCIÓN
LA SEROTECA REGIONAL
ES UNA REALIDAD
GRACIAS AL ESFUERZO
DE TODOS……
A. Girón
A. Croston
Banco de muestras:
sangre seca en papel
filtro y concentrado
leucocitario
Caracterización de las
muestras biológicas
Proporción de muestras VIH positivas y negativas y su
relación con las concentraciones normales y elevadas de
neopterina
Se utilizaron seis estándares de referencia con diferentes concentraciones de neopterina (de 0 a
111 nmol/L) para realizar una curva de calibración. Las lecturas de absorbancias obtenidas de las muestras analizadas fueron interpoladas con la
curva de calibración en una hoja semilogarítmica, obteniendo así las concentraciones de neopterina
(nmol/L).
Resultados y discusión de resultados: Los valores esperados que estipula la prueba para
individuos sanos es de < 10 nmol/L. De las muestras clasificadas como VIH-1 negativas, el 82 % presentaron activación inmune celular normal
(neopterina <10 nmol/L) con promedios de neopterina de 7.3 nmol/L. Sin embargo, se detectó
activación inmune elevada (neopterina > 10 nmol/L) en el 18 % del total de muestras negativas por
VIH-1. Aunque se sabe que la neopterina es un marcador inespecífico (4), sus niveles elevados han sido asociados fuertemente a infecciones virales,
Introducción: La neopterina (NPT: Pteridin Trifostato de Guanosina) es conocida como un marcador de
activación inmune celular el cual es liberado a la circulación sanguínea por macrófagos activados por
el interferón gamma (INF g), Se han detectado concentraciones elevadas en fluídos humanos y hemoderivados (suero, plasma, líquido
cefaloraquídeo) en el curso de infecciones por diversos agentes etiológicos (bacterias, virus o
parásitos), enfermedades autoinmunes, enfermedades malignas, entre otras. Las aplicaciones donde más se ha perfilado su
detección es en el monitoreo de trasplantes con el fin de reconocer complicaciones tempranas, en
personas viviendo con el Virus de Inmunodeficiencia Humana (VIH) donde altas
concentraciones se han asociado a la disminución de la expectativa de vida y en el tamizaje de los Bancos de Sangre para la detección de infecciones
agudas con el fin de contribuir a la donación de sangre segura. No se han presentado hasta el
momento niveles significativos de neopterina en individuos sanos (1-3).
Objetivo:
Con la finalidad de evaluar la utilidad de la neopterina como marcador de activación inmune celular en el proceso de caracterización de
muestras biológicas de referencia, el LRR VIH/Sida realizó un estudio para detectar la presencia de la
neopterina en las muestras que conforman su Seroteca Regional y el Banco de Muestras de
Biología Molecular.
Materiales y Métodos: Se evaluaron 173 muestras de plasma y suero las
cuales fueron caracterizadas mediante metodologías inmunoenzimáticas como muestras VIH-1 negativas (143 muestras, 83 %) y VIH-1
positivas (30 muestras, 17 %).
Se midieron las concentraciones de neopterina en todas las muestras por el método de ELISA convencional competitivo de fase sólida (IBL,
Immuno-Biological Laboratories, USA). En el ensayo una cantidad desconocida de antígeno presente en
una muestra y un número fijo de antígeno marcado con una enzima, compiten por los sitios de unión de un anticuerpo (anti-neopterina de conejo). Los
complejos anticuerpo-antígeno, conjugados con peroxidasa, se unen a los pocillos de las tiras de la
placa de microtitulación revestidos con anticuerpo de cabra anti-conejo. El antígeno no unido, se
remueve a través del lavado. La intensidad del color obtenido, después de la incubación con el substrato, es inversamente proporcional a la
cantidad de antígeno en la muestra. Los resultados de la muestra pueden ser determinados
directamente usando la curva de estándares.
precediendo a la aparición de manifestaciones clínicas y seroconversión, Razón por la cual, las muestras
biológicas caracterizadas como “negativas” que conforman un Banco de Muestras de referencia para VIH-1 al tener niveles elevados de neopterina
(> 10 nmol/L), dependiendo los tipos de ensayos para los que se destinen, podrían generar reacciones cruza-
das o resultados confusos. En lo que respecta a los resultados obtenidos para las
muestras caracterizadas como VIH-1 positivas, se detectó activación inmune celular elevada (neopterina
> 10 nmol/L) en el 100% de las muestras positivas por VIH-1 (promedio de neopterina de 36.7 nmol/L). Estos pacientes tenían cargas virales elevadas, conteos bajos
de CD4 y en falla terapeútica. Estos datos concuerdan con hallazgos previos donde valores elevados de
neopterina en los pacientes con VIH-1 se han correlacionado inversamente con el conteo de las
células CD4+ y directamente con el conteo de cargas virales y progresión a SIDA. Incluso existen evidencias en la literatura que asocian su aumento a la cascada
de eventos que regulan la replicación de VIH en personas infectadas (2). Aunque la determinación de
neopterina se efectúa de una manera más sencilla y es menos costosa que los marcadores subrogados para el monitoreo de la infección por el VIH-1 (CD4 y carga
viral), no los reemplaza. Estudios previos lo han considerado como posible marcador de progresión
pues predice la disminución de linfocitos T CD4+ con tres años de anticipación y ha resultado de mucha utilidad en la evaluación de la respuesta a la terapia
antirretroviral, pues los valores de neopterina disminuyen entre 4 a 8 semanas de iniciado el
tratamiento (5).
En conclusión, los resultados obtenidos evidencian la activación celular inmune celular en las muestras con resultados positivos por el VIH-1. En el caso de las
muestras que han sido caracterizadas como “negativas”, en especial por el VIH-1, y que conforman
la Seroteca Regional y el Banco de Muestras de Biología Molecular del LRR VIH /Sida, es de gran utilidad la medición de neopterina como marcador de
activación inmune celular ya que contribuye a disminuir la posibilidad de reacciones inmunes no específicas o
cruzadas en las muestras con niveles elevados de neopterina. Referencias
1. Murr C, Widner B, Wirleitner B, Fuchs D. “Neopterin as a marker for immune system activation” Curr Drug Metab. Institute of Medical Chemistry and Biochemistry, University of Innsbruck, Austria. Abril 2002; 3(2):175-87.
2. Baier-Bitterlich G, Wachter H, Fuchs D. “Role of neopterin and 7,8-dihydroneopterin in human immunodeficiency virus infection: marker for disease progression and pathogenic link.” J Acquir Immune Defic Syndr Hum Retrovirol. Institute for Medical Chemistry and Biochem-istry, University of Innsbruck, Austria. Oct 1996 1;13(2):184-93.
3. Fuchs D, Weiss G, Reibnegger G, Wachter H.“The role of neopterin as a monitor of cellular immune activation in transplantation, inflammatory, infectious, and malignant diseases.”Institute for Medical Chemistry and Biochemistry, University of Innsbruck, Austria.Crit. Rev Clin Lab Sci. 1992: 29(3-4): 307-41
4. Immanuel C, Victor L, Chelvi S y colaboradores. “Serum Neopterin Levels in HIV Infected Patients with & without Tuberculosis” Indian Journal of Medical Research Abril 2005 ;121(4):220-225
5. Sanguineti D., Ana , Fajardo S., Olga “Marcadores de progresión en la enfermedad por el virus de inmunodeficiencia humana” Dermato-logia Peruana Vol 8, suplemento 1.Dic 1998
Detección de la activación inmune celular mediante la Prueba de
Neopterina en el Banco de Muestras y la Seroteca Regional del LRR VIH/Sida
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Volumen 1, nº 2
D. Mojica y C. González
Curva de calibración elaborada con los resultados obtenidos
de la determinación de neopterina de seis calibradores.
Una de las principales funciones de los
Laboratorios Clínicos es proporcionar
datos cualitativos y cuantitativos sobre
especímenes biológicos como ayuda a
la prevención, diagnóstico y tratamiento
de enfermedades humanas. Para asegu-
rar la calidad de los resultados obtenidos
se emplean sistemas que implican todo
un conjunto de acciones destinadas a
lograr la confiabilidad en los mismos.
Para este fin los laboratorios clínicos de-
ben disponer de un sistema para el ase-
guramiento de la calidad. La experien-
cia ha demostrado que los laboratorios
que han aceptado este compromiso
han de disponer de un adecuado proce-
dimiento para el control interno de la
calidad, entre otros componentes de
dicho sistema.
El control de la calidad interno, refleja
objetivamente las variaciones en los re-
sultados de las determinaciones, permite
conocer realmente como está funcio-
nando el laboratorio y posibilita tomar
decisiones oportunas.
Se pueden procesar varios controles
para cada una de las determinaciones,
decidiendo el usuario que procesamien-
to gráfico realizar (Levey-Jennings, CU-
SUM, etc.).
El control de calidad interno tienen la
propiedad de ser independiente y
adaptable, lo que permite adecuar
las características del mismo a las situa-
ciones particulares de cada laboratorio
clínico, esto brinda un espectro amplio
de uso dependiendo de nuestras necesi-
dades.
Control de Calidad Interno: una responsabilidad de todos los laboratorios
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El LRR gestionó y financió en el mes de abril la participación de profesionales de laboratorio de los Laboratorios Cen-trales de Referencia de la región Centroamericana en el “1er Taller de Entrenamiento en la Genotipificación del Virus Papiloma Humano (HPV)” en el marco de la Red Global de Laboratorios de HPV (HPVLabNet). Este taller fue organi-zado por la Organización Panamericana de la Salud-OPS/OMS- en coordinación con el Servicio de Virus Oncogénicos en el Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas, ANLIS Dr. Carlos G. Malbrán, Buenos Aires, Argentina.
Durante el mes de abril, el LRR desarrolló dos talleres sobre “Preparación de control de calidad interno” para prue-bas inmunodiagnósticas de VIH y otros agentes infecciosos. Estos talleres se realizaron en los Laboratorios Centrales de Referencia de Costa Rica y Panamá. Para el mes de mayo se tiene contemplada la replica del taller en la ciudad de San Salvador, El Salvador.
Con el objeto de continuar con el apoyo en la implementación de un Sistema de Gestión de Calidad en los laborato-rios de la Región, el LRR iniciará en el mes de junio una nueva ronda de visitas de seguimiento a los Laboratorios Centrales de Referencia a fin de proporcionar las consultorías técnicas que sean requeridas.
En breve…
LRR EN ACCIÓN
I. Ríos
A. Girón
Los laboratorios de salud pública juegan un papel muy importante en la vigilancia epidemiológica al aportar eviden-cia científica para la toma de decisiones en salud. El LRR consciente de este rol de los laboratorios, ha planificado realizar un taller a fin de fortalecer al recurso humano de los Laboratorios Centrales de Referencia de VIH/SIDA en aspectos relacionados a epidemiología básica. Dicho taller se realizará en el mes de mayo en la ciudad de San Salva-dor, El Salvador.
Características principales:
Se basa en la repetitividad y
reproducibilidad de controles. Ayuda a mejorar la calidad
de las determinaciones reali-
zadas. Permite aplicar criterios de
calidad pertinentes para
asegurar la calidad requerida
en cada procedimiento. La aplicación de las multire-
glas de Shewhart para el
control de calidad interno,
alerta al usuario y contribuye
a una mejor toma de decisio-
nes.
GALERÍA FOTOGRÁFICA
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Volumen 1, nº 2
Tercer taller regional Centroamericano de revisión,
evaluación y actualización de los “Lineamientos
Regionales para la indicación, Toma, Manejo y Envío
de Muestras para Evaluar la Resistencia del VIH-1”
y
Taller regional para la elaboración de lineamientos
para la indicación de pruebas de ADN Proviral para
VIH-1
Participación de la Licda. Dalis Mojica del LRR en el
VI Congreso Centroamericano de ITS/VIH/Sida
(CONCASIDA) presentando los resultados regionales
de resistencia del VIH a los medicamentos ARV
determinados mediante la técnica de Genotipaje.
“1er Taller de Entrenamiento en la Genotipificación del Virus
Papiloma Humano (HPV)”
Instituto Malbrán, Argentina
De izquierda derecha: Elizabeth Rojas (Costa Rica), Ruth Guevara (El
Salvador), Yolanda Tellez (Nicaragua), Dayana Best (Panamá), Yolanda
Mencos (Guatemala) y Dalis Mojica (LRR)
GALERÍA FOTOGRÁFICA
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Volumen 1, nº 2
Taller de “Preparación de control de calidad interno”
Personal del Laboratorio del Hospital San Juan de Dios, Costa Rica, preparando paneles de suero.
Este Laboratorio ha implementado el programa de control interno para VIH por la metodología MEIA con Axsym de 4ta
generación y HTLV por la metodología de ELISA convencional MP, además ha iniciado la organización de una seroteca.
Realización del taller de “Preparación
de control de calidad interno” en el
Laboratorio Central de Referencia en
Salud Pública de Panamá. Este
laboratorio está preparando paneles
de suero, ha implementado el
programa de control interno para VIH
por la metodología de
quimioluminiscencia con el equipo
VITROS ECI y para la Enfermedad de
Chagas por ELISA convencional Wiener.