トラゼンタ錠 5mg - 医薬品医療機器総合機構...hed human equivalent...

トラゼンタ錠 5mg

CTD 第２部資料概要

2.4 非臨床試験の概括評価

日本ベーリンガーインゲルハイム株式会社

2.4 非臨床試験の概括評価 1.........................................................

1. 非臨床試験計画概略 3...........................................................

2. 薬理試験 5.....................................................................

2.1 効力を裏付ける試験 5..........................................................

2.2 安全性薬理試験 8..............................................................

2.2.1 コアバッテリー試験 8.........................................................

2.2.2 フォローアップおよび補足的安全性薬理試験 9...................................

3. 薬物動態 10....................................................................

3.1 測定方法 10...................................................................

3.2 吸収と血漿中薬物動態 10........................................................

3.3 組織分布と蛋白結合 12..........................................................

3.4 代謝 13........................................................................

3.5 排泄 14........................................................................

4. 毒性 15.........................................................................

4.1 単回投与毒性試験 15...........................................................

4.2 反復投与毒性試験 16...........................................................

4.3 遺伝毒性試験 21...............................................................

4.4 がん原性試験 23...............................................................

4.5 生殖発生毒性試験 24...........................................................

4.6 局所忍容性試験 26.............................................................

4.7 注射剤の溶血性試験 26..........................................................

4.8 偽アレルギー 26...............................................................

Table of Contents

4.9 免疫毒性 26...................................................................

4.10 光毒性評価 27................................................................

4.11 不純物の安全性評価 27.........................................................

5 総括および結論 30...............................................................

6 参考文献一覧 33.................................................................

Table of Contents

2.4 非臨床試験の概括評価

略語 ALD approximate lethal dose（概略致死量） ALT alanine aminotransferase（アラニンアミノトランスフェラーゼ） ALP alkaline phosphatase（アルカリホスファターゼ） AST aspartate aminotransferase（アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ） APN aminopeptidase N（アミノペプチダーゼ N） APP aminopeptidase P（アミノペプチダーゼ P） AUC area under the curve（濃度-時間曲線下面積） AUC0-24h area under the concentration-time curve of the analyte in plasma within the time

interval 0 to 24 h（0 から 24 時間までの血漿中濃度－時間曲線下面積） AUC0-24h, ss area under the concentration-time curve of the analyte in plasma over the time

interval from 0 to 24 hours at steady state （定常状態における 0 から 24 時間までの血漿中濃度－時間曲線下面積）

AUC0-96h area under the concentration-time curve of the analyte in plasma within the time interval 0 to 96 h（0 から 96 時間までの血漿中濃度－時間曲線下面積）

AUC0-inf area under the plasma level-time curve from zero time to infinity（時間 0 から無

限大まで外挿した血漿中濃度－時間曲線下面積） BI 1356 BS linagliptin（リナグリプチン） CD 1750 main metabolite of linagliptin（Racemate）

（リナグリプチンの主代謝物（ラセミ体）） CD 1790 main metabolite of linagliptin（S-enantiomer）

（リナグリプチンの主代謝物（S-エナンチオマー）） Cmax maximum concentration of the analyte in plasma（最高血漿中濃度） Cmax, ss maximum concentration of the analyte in plasma at steady state

（定常状態における最高血漿中濃度） Crl:CD-1(ICR) strain of mice（Charles River Laboratories 社） Crl:CHBB(HM) strain of rabbits（Himalayan） Crl:NMRI strain of mice（Charles River Laboratories 社） CrlGlxBrlHan : WI strain of rat（Charles River Laboratories 社） Crl:WI(Han) strain of rat（Charles River Laboratories 社） DPP-2 dipeptidyl peptidase-2（ジペプチジルペプチダーゼ-2） DPP-4 dipeptidyl peptidase-4（ジペプチジルペプチダーゼ-4） DPP-8 dipeptidyl peptidase-8（ジペプチジルペプチダーゼ-8） DPP-9 dipeptidyl peptidase-9（ジペプチジルペプチダーゼ-9） ED50 dose resulting in 50% reduction of pharmacological activity（50%有効用量） F 絶対バイオアベイラビリティ FAP fibroblast activating protein（alpha）（線維芽細胞活性化タンパク質（α）） fB bound fraction of analyte in plasma（血漿中結合分画）

Nippon Boehringer Ingelheim Co., Ltd. Linagliptin 2.4 非臨床試験の概括評価 Page

1

FDA Food and Drug Administration（米食品医薬品局） GD gestational day（妊娠日） GIP glucose-dependent insulinotropic polypeptide

（グルコース依存性インスリン分泌刺激ポリペプチド） GLDH Glutamate dehydrogenase（グルタミン酸脱水素酵素) GLP Good Laboratory Practice

（医薬品の安全性に関する非臨床試験の実施の基準） GLP-1 glucagon-like peptide 1（グルカゴン様ペプチド 1） HbA1c hemoglobin A1c（ヘモグロビン A1c） HED human equivalent dose（ヒトに該当する換算用量） hERG human ether-a-go-go related gene（ヒト ether-a-go-go 関連遺伝子） HsdBrl Han:Wist strain of rats（Harlan 社 Wistar 系） IC50 concentration to achieve 50% inhibition of activity（50%阻害濃度） i.d. intraduodenal（十二指腸内） i.v. intravenous（静脈内） LD lactation day（授乳日） MRHD maximum recommended human dose（最大推奨臨床用量） MRT total mean residence time of the analyte molecules in the body（体内の平均滞留

時間） PEP prolyl endopeptidase（プロリルエンドペプチダーゼ） POP prolyl oligopeptidase（プロリルオリゴペプチダーゼ） PR PR interval （PR 間隔：心電図における P 波の始まりから QRS 波までの時

間） QRS 心電図における QRS 波 t1/2 terminal half-life of the analyte in plasma（消失半減期） tmax time to reach Cmax（Cmax 到達時間）


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1. 非臨床試験計画概略

BI 1356 BS（リナグリプチン）はジペプチジルペプチダーゼ-4（DPP-4，EC 3.4.14.5）の競合

的かつ可逆的な選択的阻害剤である。DPP-4 は膜結合型プロテアーゼのひとつで，腎臓，肝臓，

腸，リンパ球および血管内皮細胞など多くの組織において広く発現している。血漿中において

顕著に高レベルの DPP-4 活性が観察されるが，これはこの酵素を発現する複数の組織に由来

すると考えられる。DPP-4 の生理的基質のうち重要なものはインクレチンと呼ばれるグルカゴ

ン様ペプチド 1（GLP-1）とグルコース依存性インスリン分泌刺激ポリペプチド（GIP）であ

る。DPP-4 のペプチダーゼ活性を阻害することにより，これらの内因性インクレチンホルモン

レベルが上昇することが明らかにされている。GLP-1 と GIP はいずれも，強力なグルコース

依存性インスリン分泌刺激作用を発揮し，この作用により食後の血糖コントロールを改善する。

図 1: 1 リナグリプチンの化学構造

化学的にはリナグリプチンはキサンチン骨格の構造を有している。分子量はフリー体として

472.5 である。リナグリプチンの予想臨床用量（ならびに最大推奨臨床用量：MRHD）は，5 mg 1 日 1 回投

与である。臨床での曝露量に基づく安全性薬理試験ならびに毒性試験における安全域の算出は，

臨床試験において，リナグリプチン 5 mg 1 日 1 回の投与により得られた Cmax, ss（11.1 nM（外

国人），12 nM（日本人））あるいは，AUC0-24h, ss（158 nM⋅h（外国人），193 nM⋅h（日本

人））を用いて計算し，記載する。主要代謝物 CD 1790 の AUC0-24h, ss は，20.4 nM⋅h（外国

人）および 27.4 nM⋅h（日本人）を用いて計算した。非臨床の薬理試験，薬物動態試験および毒性試験によりリナグリプチンの薬理，薬物動態およ

び毒性の特徴を明らかにした。薬理試験においては，リナグリプチンの効力および選択性をいくつかの in vitro 試験で検討し

た。In vivo におけるリナグリプチンの作用は正常動物ならびに各種 2 型糖尿病動物モデルを

用いて検討した。さらに，中枢神経系，心血管系，胃腸管系，泌尿器系および呼吸系への影響

を検討するため，安全性薬理試験および一般薬理試験を実施した。薬物動態試験においては，リナグリプチンの血漿中濃度プロファイル，組織分布，代謝ならび

に排泄試験を実施した。


3

一般毒性は，げっ歯類における単回投与試験，マウス（最長 13 週間），ラット（最長 26 週

間），イヌ（最長 4 週間）およびカニクイザル（最長 12 ヶ月間）における反復投与試験で評

価した。生殖発生毒性試験はラットおよびウサギを用いて実施した。遺伝毒性は細菌および哺

乳類細胞を用いた in vitro 試験およびラットの骨髄細胞を用いた in vivo 試験で評価した。2 年

間のがん原性試験はマウスおよびラットを用いて実施した。また，局所忍容性試験はラットお

よびウサギを用いて実施した。非臨床の概括評価では，これらの試験の要約を記載している。


4

2. 薬理試験

リナグリプチンの効力および選択性をいくつかの in vitro 試験で検討した。In vivo におけるリ

ナグリプチンの作用は正常動物ならびに各種 2 型糖尿病動物モデルを用いて検討した。さらに，

中枢神経系，心血管系，胃腸管系，泌尿器系および呼吸系への影響を検討するため，安全性薬

理試験および一般薬理試験を実施した。

2.1 効力を裏付ける試験

リナグリプチンはヒト DPP-4 に対して阻害作用を示し，その阻害様式は競合的かつ可逆的で

あった。CaCo-2 細胞抽出由来のヒト DPP-4 に対する IC50 は 1 nM である。また，ヒト血漿で

は，3.6 nM の IC50 で DPP-4 活性を阻害する［CTD 4.2.1.1-1］。さらに，種々の動物において

も同様に血漿中 DPP-4 活性を阻害する（表 2.1: 1）。

表 2.1: 1 種々の動物における血漿中 DPP-4 阻害作用

動物種 IC50

ヒト 3.6 nM

マウス 10.2 nM

ラット 6.8 nM

イヌ 10.4 nM

N=1～2

引用元：CTD 4.2.1.1-1 より引用

リナグリプチンを他の DPP-4 阻害剤と比べたとき，in vitro における DPP-4 の最大阻害効果は

同等であったが，その阻害作用（IC50）は約 1 nM とシタグリプチン，ビルダグリプチン，サ

キサグリプチンおよびアログリプチンの IC50（それぞれ 19，62，50 および 24 nM）に比べて

高かった［CTD 4.3-1］。リナグリプチンの DPP-4 以外のプロテアーゼ，イオンチャネル，酵素，受容体に対する作用

を検討した。10 µM までのリナグリプチンは，DPP-4 関連プロテアーゼである DPP-2，DPP-8，DPP-9，POP/PEP，APN，APP やプラスミン，トロンビン，トリプシンなどに対して作用を示

さなかった。ヒト FAP に対するリナグリプチンの IC50 は 94 nM である［CTD 4.2.1.1-2］（表

2.1: 2）。FAP は DPP-4 の関連プロテアーゼのひとつであるが，その詳細な機能は不明である。

FAP は正常組織においては通常は発現していないが，線維症，発癌現象，創傷治癒などの組

織の再生およびリモデリング過程で発現すると考えられている［CTD 4.3-2］。リナグリプチ

ンについて検討したいずれの非臨床薬理試験においても FAP 阻害に起因すると考えられる

in vivo での作用は認められなかったことから，in vitro で認めた FAP 阻害作用は in vivo および

臨床には何ら影響を及ぼさないと考えられる。さらに，FAP が組織再生時に発現することが

知られているため，マウスにおける創傷治癒試験において，in vivo での FAP 阻害作用が創傷

に対して影響を及ぼすかどうかについて検討した［CTD 4.2.1.2-1］。30 mg/kg/日のリナグリプ


5

チン投与により，DPP-4 をほぼ完全に阻害したが，創傷治癒に対する影響はみられなかった。

さらに毒性試験において，FAP を 24 時間以上完全に阻害するために，94 nM をはるかに超え

る血漿中濃度となる用量レベルを投与したところ，FAP に関連すると思われる影響および副

作用は認められなかった（例えばカニクイザルにおける 52 週間毒性試験での NOAEL（無毒

性量）は 10 mg/kg/ 日， Cmax, ss が 2050 nM ， AUC0-24h, ss が 6270 nM·h であった。）

［CTD 4.2.3.2-10］。

表 2.1: 2 各種プロテアーゼに対するリナグリプチンの阻害作用

酵素阻害 FAP IC50=94 nM DPP-2 100 µM で阻害なし DPP-8 IC50=40 µM DPP-9 IC50=11 µM POP/PEP 100 µM で阻害なし APN IC50 >100 µM APP 10 µM で阻害なし

プラスミン 100 µM で阻害なしトリプシン 100 µM で阻害なしトロンビン 100 µM で阻害なし

N=2～3

引用元：CTD 4.2.1.1-2 より引用

さらに，リナグリプチンの 50 種のイオンチャネルおよび受容体，ならびに 27 種の酵素に対す

る作用を検討した。検討したそれぞれの酵素アッセイにおいて，10 µM のリナグリプチンは

50%を超える阻害作用を示さなかった。イオンチャネルおよび受容体に対して，ヒトムスカリ

ン受容体サブタイプの M1（83%），M2（82%）および M3（55%）以外に 3 µM のリナグリプ

チンが 50%以上影響したものはなかった［CTD 4.2.1.1-3，CTD 4.2.1.1-4］。したがって，臨床

で使用される用量のリナグリプチンが，DPP-4 以外に阻害作用を示す可能性は低い。リナグリプチンの主要代謝物である CD 1790（S-エナンチオマー）あるいはそのラセミ体であ

る CD 1750 は DPP-4 に対して影響しなかった。さらに，DPP-4 関連プロテアーゼまたは受容

体を用いたアッセイでも，影響を認めなかった［CTD 4.2.1.1-6，CTD 4.2.1.1-7，CTD 4.2.1.1-8，CTD 4.2.1.1-9］。


6

リナグリプチンは，正常動物および糖尿病モデル動物においても，グルコースの恒常性を保つ

作用を示した（表 2.1: 3）。

表 2.1: 3 動物モデルにおけるリナグリプチンの血糖降下作用

動物モデル用量，用法パラメータ作用参考資料

C57BL/6J マウス 1 mg/kg，単回投与, 45 分後

1 mg/kg，単回投与, 16 時間後

OGTT ，グルコースの

AUC

-49.0%

-24.9%

CTD 4.2.1.1-1

db/db マウス用量反応，単回投与 ED50，OGTT，グルコー

スの AUC

<1 mg/kg CTD 4.2.1.1-1

肥満 Zucker fatty

（fa/fa）ラット

1 mg/kg，単回投与 OGTT ，グルコースの

AUC

-38.5% CTD 4.2.1.1-1

ZDF ラット 1 mg/kg，単回投与 OGTT ，グルコースの

AUC

-19.5% CTD 4.2.1.1-1

db/db マウス 3 mg/kg，8 週間反復投与 HbA1c -0.98% CTD 4.2.1.1-5

db/db マウス 1 mg/kg と 200 mg/kg のメト

ホルミンとの反復併用投与

OGTT ，グルコースの

AUC

-36.5% CTD 4.2.1.4-1

経口糖負荷試験（OGTT）においてリナグリプチン投与による有意な血糖値の低下作用は長時

間持続し，単回投与（1 mg/kg）16 時間後においても持続していた［CTD 4.2.1.1-1］。糖尿病

モデル動物（C57BL/KsJ-db/db（db/db）マウス）におけるリナグリプチンの ED50 は 1 mg/kg 未

満であった。肥満 Zucker Fatty（fa/fa）ラットでは 1 mg/kg の投与によりグルコースの AUC は

38.5%低下し［CTD 4.2.1.1-1］，3 mg/kg 投与では GLP-1 レベルも有意に上昇していた。この

作用は，より重度な耐糖能異常を示すモデルの Zucker Diabetic fatty（ZDF）ラットでも同様に

認められた［CTD 4.2.1.1-1］。db/db マウスに対する長期間（8 週間）のリナグリプチン投与

（3 mg/kg/日）は HbA1c を有意に低下させた（-0.98%）が，問題となる作用は認められなかっ

た［CTD 4.2.1.1-5］。また db/db マウスではグルコース AUC に対し，リナグリプチンとメトホルミンの単独投与群

に比べて（それぞれ，-13.2%および-19.3%の低下），併用群では有意で，単剤投与に比べさら

なる血糖降下作用がみられた（-36.5%の抑制）［CTD 4.2.1.4-1］。以上のように，病態モデルあるいは正常動物において，リナグリプチンは単回または反復投与

で血糖降下作用を示した。


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2.2 安全性薬理試験

2.2.1 コアバッテリー試験

In vitro 試験を除き，以下のコアバッテリー試験はすべて GLP 適用下で実施した。中枢神経系に対する影響：リナグリプチンの 6，60 および 600 mg/kg をラットに単回経口投与

し，中枢神経系に対する作用を検討した［CTD 4.2.1.3-1］。Irwin 変法においては，行動また

は生理機能に対して明らかで一貫した変化は認められなかった。さらに，体温や自発運動量に

対する有意な作用も認められなかった。心血管系に対する影響：心血管系に対するプロファイリングを in vitro と in vivo で実施した。

10 µM までのリナグリプチンは，hERG カリウム電流に対して影響しなかった［CTD 4.2.1.3-2］。モルモット心室乳頭筋に 10 µM までのリナグリプチンを適用したところ，静止膜電位，

活動電位幅，オーバーシュートおよび最大立ち上がり速度に影響は認められなかったが，活動

電位持続時間の濃度依存的な短縮が認められた（10 µM で APD90 を 6.9%短縮）［CTD 4.2.1.3-2］。これら in vitro 試験により，リナグリプチンは，心室再分極遅延に基づく不整脈誘発作用

を示す可能性は低いことが示唆された。カニクイザルに 12，60 および 150 mg/kg のリナグリ

プチンを投与し，心血管系に対する作用を検討した。150 mg/kg を投与したとき，最高血漿中

濃度は 14200 nM（予想臨床投与用量である 5 mg 投与時の Cmax, ss（11.1 nM（外国人）， 12 nM（日本人））（以下，臨床用量における Cmax）［CTD 5.3.3.2-1，CTD 5.3.3.1-3］の 1279倍（外国人）あるいは 1183 倍（日本人））という高い血漿中濃度に達したが，150 mg/kg ま

での用量で，心電図（第 II 誘導）に対して変化を認めなかった［CTD 4.2.1.3-3］。60 mg/kgと 150 mg/kg の用量で，わずかではあるが有意な心拍数の増加がみられた［CTD 4.2.1.3-3］。

心拍数の増加が認められていない 12 mg/kg の投与後 1 時間でのリナグリプチンの血漿中濃度

は 3950 nM であり，ヒトでの本薬 5 mg 投与時の Cmax,ssの 356 倍（外国人），329 倍（日本人）

と比較しても高濃度であり，臨床において心拍数の増加が認められる可能性は少ないと考えら

れた。反復投与毒性試験においても心血管系への影響を検討した。イヌの 4 週間毒性試験で

9 mg/kg/日までの用量を投与したとき，血圧，心拍数および心電図に臨床的に意味のある作用

は認められなかった（臨床用量における Cmax の 210 倍（外国人）および 194 倍（日本人））。

45 mg/kg/日の投与で認めた変化は，偽アレルギーに関連したものと考えられた（臨床用量に

おける Cmax の 955 倍（外国人）および 883 倍（日本人））［CTD 4.2.3.2-6］。カニクイザル

（偽アレルギーを認めなかった）に最高 300 mg/kg/日を投与した 4 週間毒性試験（臨床用量に

おける Cmax の 2523 倍（外国人）および 2333 倍（日本人）），または 13 週間および 52 週間

毒性試験では，血圧と心電図に投与によると考えられる変化はみられなかった［CTD 4.2.3.2-8，CTD 4.2.3.2-9， CTD 4.2.3.2-10］。まとめると，安全性薬理試験のデータから，たとえ高用量

を投与し高い血漿中レベルに達した場合でも，リナグリプチンによる心血管リスクは少ないこ

とが示唆された。


8

呼吸系に対する影響：ラットに 6，60 および 600 mg/kg のリナグリプチンを単回経口投与し，

検討した［CTD 4.2.1.3-4］。6 および 60 mg/kg の経口投与は呼吸数，1 回換気量および分時換

気量に作用しなかった。600 mg/kg のリナグリプチン投与により，Wistar ラットでは 1 回換気

量の増加が，Wistar Han ラットでは，呼吸数と分時換気量に低下が認められた（臨床用量にお

ける Cmax の 1099 倍（外国人）および 1017 倍（日本人））［CTD 4.2.3.2-2］。

2.2.2 フォローアップおよび補足的安全性薬理試験

非 GLP 下で，中枢神経系，心血管系，呼吸系，胃腸管系および泌尿器系などの作用を検討し

た（一般薬理試験）。中枢神経系に対する影響：マウスに最高 30 mg/kg のリナグリプチンを経口投与し，Irwin 変法

を用いて，中枢神経系に対する作用を検討した。リナグリプチンによる作用は認められず，検

討した用量では行動に影響しないことが示唆された［CTD 4.2.1.3-5］。心血管系および呼吸系に対する影響：ラットに最高 30 mg/kg のリナグリプチンを経口投与す

るとともに［CTD 4.2.1.3-6］，イヌに最高 10 mg/kg を投与し，心血管系に対する作用を検討

した［CTD 4.2.1.3-7］。その結果，リナグリプチンは血圧，左心室内圧および心電図に対して

影響を与えないことが示された。ラットで測定した呼吸パラメータにも，影響はみられなかっ

た。腎，肝機能および代謝に対する影響：腎機能および臨床生化学パラメータに対する影響を評

価するため，ラットに 3，10 および 30 mg/kg のリナグリプチンを経口投与した［CTD 4.2.1.3-8］。試験の評価項目において，リナグリプチンは腎機能，肝機能および代謝に明らかな影響

を示さなかった。胃腸管系に対する作用：胃腸管系に対して作用がわずかに認められた。ラットの胃液分泌に

対して，リナグリプチン 3 mg/kg の十二指腸内投与は影響しなかった。リナグリプチン 10 お

よび 30 mg/kg の十二指腸内投与は胃液量をわずかに抑制し，それによって胃酸分泌量も低下

した［CTD 4.2.1.3-9］。ラットの胃排出能に，最高 30 mg/kg の経口投与は影響しなかった。

リナグリプチンの経口投与（3，10 および 30 mg/kg）により消化管輸送能にわずかであるが有

意な影響がみられた［CTD 4.2.1.3-10］。以上のように，一般薬理試験からリナグリプチンは中枢神経系，心血管系，呼吸系，胃腸管系

および泌尿器系に大きな影響は認められなかった。以上の中枢神経系，心血管系および呼吸系への作用を検討した安全性薬理試験および一般薬理

試験の結果から，臨床でリナグリプチンを使用した場合に重篤な副作用を引き起こす可能性は

低いと考えられる。


9

3. 薬物動態

薬物動態評価は親化合物リナグリプチン，薬物由来放射能および主代謝物 CD 1790 の血漿／

血中濃度－時間プロフィールについて行った。アルビノラット，有色ラット，妊娠ラットおよ

び DPP-4 欠損ラットの全身オートラジオグラフィだけでなく，肝臓，腎臓，消化管のミクロ

オートラジオグラフィについても実施した。反復投与後の定量的組織分布，血漿蛋白結合，排

泄バランスや胆汁中排泄を含む ADME 試験とともに，血漿中，尿中，糞中および胆汁中代謝

物についても調べた。薬物動態試験は in vitro および in vivo の双方で実施した。薬理試験およ

び毒性試験と同じ動物種・系統を使用した。さらに，DPP-4 欠損マウスとラット，ならびにそ

れらに対応した野生型系統を機構解明のための試験に使用した。

3.1 測定方法

安全性および非臨床試験で使用した動物種から採取した血漿サンプル測定のために，HPLC-MS/MS 法を開発し，バリデートした。当初，分析法はリナグリプチンに対してのみ開発され

たが，後にリナグリプチンと主代謝物 CD 1790 の同時測定のため改変した。EDTA を抗凝固

剤として使用した。CD 1790 の標準物質は当初ラセミ体（CD 1750 と呼ぶ）が合成され，動物

およびヒト試験の代謝物分析定量に用いられた。血漿サンプルは 96-ウェルプレートを用いた

固相抽出法により抽出した。抽出物は分析用逆相カラムをグラジエントモードで用いてクロマ

トグラフィにかけた。

3.2 吸収と血漿中薬物動態

リナグリプチンは中等度の透過性を示し［CTD 5.3.2.3-3］，in vitro［CTD 5.3.2.3-2］だけでな

く，ラット in vivo の消化管［CTD 4.2.2.2-2］および肝臓［CTD 4.2.2.5-8］の P-糖蛋白の基質

である。 in vivo の単回投与試験をマウス，ラット，ウサギおよびカニクイザルで実施した。リナグリプ

チン水溶液を用いた。薬物動態パラメータを表 3.2: 1 に要約する。マウス，ラットおよびカニクイザルの経口バイオアベイラビリティは用量依存的であった。

3 ～ 15 mg/kg 投与時の経口バイオアベイラビリティは 18.4 ～ 68.8%であった。全ての動物

種において分布容積は非常に大きく（>5 L/kg），組織分布が大きいことが示唆された。マウ

スおよびラットにおいては中等度から高度のクリアランスが示される一方で，カニクイザルだ

けは中等度のクリアランスが観察された。マウス［CTD 4.2.2.3-12］およびラット［CTD 4.2.2.3-14］において血漿および組織中 DPP-4 への飽和性高親和性結合があることから，全身

クリアランスが用量に強く依存することが示された。いずれの動物種においても血漿リナグリ

プチンの長い消失半減期が観察された。


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表 3.2: 1 リナグリプチン単回経口投与後の血漿中未変化体濃度から算出した薬物

動態パラメータ平均値の動物種間比較

動物種マウス

(CD-1) ラット

(Wistar) ウサギ

(Himalayan) カニクイザルヒト

パラメータ性別

雄雄お

よび

雌

雄雌雄雄および

雌

男性および

女性

投与量 mg/kg 5 15 5 45 4 25 3 5 5mg/ 被験者

Cmax nM 84.3 1010 547 6830 368 8560 622 1150 11.1

tmaxc) h 1.00 1.00 2.25 1.25 0.67 0.50 0.5-2 0.75 1.53

AUC0-inf nM⋅ h 422 3050 2610 45600 1330a) 16300a) 3740 4550 158d)

MRT h 11.0 4.99 14.3 5.51 33.9 9.98 28.9 17.4 131

t1/2 h 23.6 18.7 35.9 12.2 41.3 59.0 46.7 41.4 131

MAT h NC NC 11.9 3.11 NCe) NCe) 21.0 NC NC

F % 18.4b) 44.4 b) 54.8 NC NCe) NCe) 68.8 41.0 (50.1g)

30 f)

NC=算出せず，動物については算術平均，ヒトのデータについては幾何平均

a) AUC0-96h，b) 異なる試験および同じ動物種の異なる系を用いて算出，c) 中央値，d) 定常状態における

AUC0-24h，e) 経口投与試験のみ実施，f) モデルを用いて算出［CTD 5.3.1.1-2］，g) リナグリプチンの尿中排

泄から算出

リナグリプチンの体内動態に及ぼす DPP-4 の影響を調べるために，雄の野生型マウス

（C57BL/6J）および DPP-4 ノックアウトマウス［CTD 4.2.2.3-12］に加え，雄の野生型 Fischerラット（F344/DuCrl）および DPP-4 欠損 Fischer ラット（F344/DuCrlCrlJ）［CTD 4.2.2.3-14］における静脈内投与（iv）後の薬物動態を評価した。DPP-4 欠損動物と野生型動物との間には

大きな違いがみられた。血漿および組織中の DPP-4 に対するリナグリプチンの飽和性結合は

リナグリプチンの体内動態に大きく影響し，低用量でみられる非線形性薬物動態を説明しうる

と考えられる。反復経口および静脈内投与後のリナグリプチンの薬物動態は，マウス（経口），ラット（経口

および静脈内），ウサギ（経口），イヌ（経口）およびカニクイザル（経口および静脈内）の

毒性試験の一部として調べた。マウスでは反復投与によるリナグリプチン血漿中濃度に対する

変化はみられなかった。ラットでは反復投与によるリナグリプチン全身曝露の増加がみられた。

ほとんどの試験において反復投与による蓄積率は 2 以下であった。最大の蓄積率は約 5 であり，

がん原性試験で観察された［CTD 4.2.3.4.1-2］。カニクイザルのいくつかの試験でわずかな蓄

積（2 以下）が観察されたが，これは全部の試験に共通するものではなかった。結論として，

リナグリプチンは非常に長い消失半減期をもつものの，反復投与後の曝露に増加はみられない

か（マウス），みられてもごくわずかであった（ラット，サル）。さらに，反復経口投与後，

定常状態へは速やかに到達した。このことは，終末相半減期が主要な半減期ではないことをよ

り明確にした。


11

3.3 組織分布と蛋白結合

組織分布の広いことが，全身の容積をはるかに超える大きな分布容積（> 5 L/kg）によって示

された。これは全身オートラジオグラフィによっても確認された。リナグリプチンは検出でき

る範囲では血液脳関門を通過しなかった［CTD 4.2.2.3-6］。腎臓と肝臓が長く放射能の貯留す

る主たる臓器であった［CTD 4.2.2.3-6］。リナグリプチン由来放射能が長く留まることは他の

組織においても認められたが，それがみられたのはより低い濃度においてのみであった。

DPP-4 欠損ラット［CTD 4.2.2.3-14, CTD 4.2.2.3-4］，DPP-4 ノックアウトマウス［CTD 4.2.2.3-12, CTD 4.2.2.3-13］および反復投与後の野生型ラット［CTD 4.2.2.3-11］の試験において，

[14C]リナグリプチン由来放射能の組織分布は飽和性を示し，その飽和性はリナグリプチンが

組織中 DPP-4 へ高親和性で結合するものによると考えられた。[3H]リナグリプチンを使ったミ

クロオートラジオグラフィ試験では，対象臓器（腎臓，肝臓，小腸）での細胞内分布がそれら

組織中 DPP-4 の局在部位と一致していた［CTD 4.2.2.3-8］。これら組織での放射能分布は未

変化体リナグリプチン由来と思われる［CTD 4.2.2.3-9］。しかし，ラットおよびマウスの組織

［CTD 4.2.2.3-13］にみられるリナグリプチンの共有結合は，幾つかの動物種の血漿中にみら

れるのと同様に痕跡程度であった［CTD 5.3.2.3-4］。マウス，ラット，ウサギ，イヌ，ミニブタ，カニクイザルおよびヒトにおけるリナグリプチン

の血漿蛋白結合の程度を in vitro 平衡透析法で求めた。マウス，ラットおよびヒト血漿で行っ

た詳しい検討の結果，蛋白結合は強い濃度依存性を示した。血漿蛋白結合率は 30 nM におけ

る 75%～89%［CTD 5.3.2.1-1, CTD 4.2.2.3-2］から 1 nM における 99%へ増加した［CTD 5.3.2.1-2, CTD 4.2.2.3-2, CTD 4.2.2.3-1］。ヒトにおける治療血漿中濃度の範囲内で，血漿蛋白

結合率の変動が認められる。この濃度依存性は血漿中の可溶性 DPP-4 に対する高親和ではあ

るが低キャパシティなリナグリプチンの結合が原因になっている［CTD 5.3.2.1-2, CTD 4.2.2.3-1］。検討濃度 10 および 100 nM において，薬理学的に不活性な代謝物 CD 1790 の中等度から

高い血漿蛋白結合率がラット（平均 fB=89.3%），カニクイザル（平均 fB=97.1%）およびヒト

（平均 fB=94.7%）で認められた［CTD 5.3.2.1-3］。リナグリプチンの血漿蛋白結合に対する

濃度依存性は，ラット，カニクイザルおよびヒト in vitro における血液分布にも反映されてい

る［CTD 5.3.2.3-1, CTD 4.2.2.3-3］。約 1 nM という低い濃度では，化合物はほぼ完全に血漿部

分に存在した。血漿 DPP-4 濃度を超える高濃度では，血液細胞部分への分布がみられた。 2 mg/kg の投与量において，ラット胎児心臓中および肝臓中のリナグリプチン由来放射能は痕

跡程度であった［CTD 4.2.2.3-7］。ラット胚にはリナグリプチンの高い曝露がみられ，それは

母動物の曝露の約 50%に相当した［CTD 4.2.2.3-17］。ウサギ胎児でのリナグリプチンの曝露

はラットより低かったが，それでも母動物の曝露の約 5%を示した［CTD 4.2.2.3-18］。これら

のデータから，ラットおよびウサギでリナグリプチンは血液胎盤関門を通過し，胚にまで分布

することが示された。


12

表 3.3: 1 種々の動物種におけるリナグリプチンの in vitro 血漿蛋白結合の要約

動物種系統検討濃度範囲

[nM]

リナグリプチンの fB

[%] 資料番号

マウス CD-1 30 - 3000 78.2 - 72.7 CTD 4.2.2.3-2

C57BL/6J 0.172 - 13100 99.3 - 74.5 CTD 5.3.2.1-2

ラット Crl:WI(Han) 3 - 30 96.1 - 76.8 CTD 4.2.2.3-1

Fischer

F344/DuCrl 3 -3 0 95.4 - 80.7 CTD 4.2.2.3-1

Fischer

F344/DuCrl 0.139 - 12700 99.2 - 77.5 CTD 5.3.2.1-2

ウサギ（雌） Crl:CHBB(HM) 30 - 3000 84.3 - 79.6 CTD 4.2.2.3-2

カニクイザル 30 - 3000 82.0 - 70.4 CTD 4.2.2.3-2

ヒト 0.021 - 29900 99.3 - 77.3 CTD 5.3.2.1-2

3.4 代謝

マウス［CTD 4.2.2.4-1］，ラット［CTD 4.2.2.4-2］，雌ウサギ［CTD 4.2.2.4-3］，カニクイザ

ル［CTD 4.2.2.4-4］およびヒト［CTD 5.3.2.3-6, CTD 5.3.2.3-4］においてリナグリプチンの代

謝を調べた。代謝物の定性的なプロファイルは，ヒトも含めた動物間で大きく異ならなかった。

微量代謝物の相対的な割合のみが異なっていた。毒性試験に用いた動物種の中ではカニクイザ

ルの代謝がもっとも活発であり，雌ウサギ，マウスおよびラットの代謝がそれに続いて活発で

あった。ヒトに経口投与後，リナグリプチンの代謝クリアランスは，その体内動態および排泄

全体にわずかに寄与したのみであった。ヒトにリナグリプチン経口投与後，CD 1790 は循環血

中で認められた唯一の代謝物であり，血漿中の全身曝露量は親化合物の全身曝露量の 10%を

超えていた。親化合物からケトン代謝物 CD 10604 を生成する CYP3A4 依存過程および CD 10604 を還元する第 2 の過程を経て，CD 1790 は生成される。この反応は立体選択的で，S-エナンチオマーだけが in vivo で生成される［CTD 5.3.2.3-5］。マウス，ラット，ウサギおよび

カニクイザルでは CD 1790 の十分な曝露が示された。CD 1790 に加えて，他の微量代謝物が

プールヒト血漿で認められたが，ヒト血漿中の薬物由来化合物の総和に対して 10%以下で

あったため，それ以上の検討は行わなかった。リナグリプチンはヒト肝ミクロソームにおける CYP3A4 の弱～中程度の mechanism-based（不

可逆的）阻害剤であることが明らかとなった［CTD 5.3.2.2-1］。リナグリプチンの治療血漿中

濃度が低い濃度範囲（nM レンジ）であることを考えると，この阻害の臨床的重要性はないと

思われる。リナグリプチンはこの実験条件下では他の CYP 分子種に阻害を示すことはなかっ

た。ラットに 6 または 60 mg/kg/日のリナグリプチンを 1 日 1 回 4 日間の反復経口投与後，生

物学的に有意なチトクロム P450 の活性変化はみられなかった［CTD 4.2.2.4-5］。さらに，ヒ

ト肝細胞において酵素誘導（CYP1A2, 2B6 および 3A4）を示す所見はみられなかった［CTD 5.3.2.2-2］。したがって，リナグリプチンは肝チトクロム P450 の誘導剤ではないと示唆され

る。


13

3.5 排泄

動物種を通して，主要排泄経路は糞を介していた。マウスおよびラットにおいて，尿中排泄は

用量依存性を示した［CTD 4.2.2.3-12, CTD 4.2.2.5-9］。1 mg/kg の経口投与では投与量の 1%以

下が尿中に排泄され，一方，30 mg/kg 投与では投与量の約 20%が尿中に排泄された[CTD 4.2.2.5-9]。マウスにおいて示されたように，尿中排泄の用量依存性は組織中および血漿中

DPP-4 に対するリナグリプチンの結合飽和が原因と考えられる［CTD 4.2.2.3-12］。胆汁中排

泄が主たるもので P-糖蛋白が胆汁を伴う排泄に関与していることが示された［CTD 4.2.2.5-8］。

胆汁中に排泄されるのは主に未変化体の親化合物（リナグリプチン）であるにもかかわらず，

腸肝循環を受けるリナグリプチンは予想外に低かった。このことからラットにおける胆汁によ

る吸収の抑制が示唆された［CTD 4.2.2.5-7］。

表 3.5: 1 種々の動物種の特定の用量における[14C]リナグリプチン関連放射能の

排泄バランスの概要（排泄データは投与量の%で示す）

動物種

（系統）

マウス

(CD-1)

ラット

(Wistar)

ウサギ

(Himalayan) カニクイザルヒト

資料番号 CTD 4.2.2.5-2 CTD 4.2.2.4-1

CTD 4.2.2.5-4 CTD 4.2.2.4-2

CTD 4.2.2.5-3 CTD 4.2.2.5-6 CTD 4.2.2.2-5

CTD 5.3.2.3-6 CTD 5.3.3.1-2

投与経路 iv po iv po po iv po iv po

投与量 [mg/kg] 4 25 1 1 25 1.5 5 5 mg/

被験者

10 mg/

被験者

糞中排泄 66.1 69.2 72.8 95.1 66.7 56.6 70.0 58.5 83.8

胆汁中排泄 ND 46.2* 42.8 37.5 (id) >5# ND 27.1

(id) ND ND

尿中排泄 25.6 20.7 21.7 1.6 18.1 15.3 11.1 30.4 6.6

Fe 23.1§ 18.4§ 20.1§ 1.4§ 13.6 11.2 5.3 21.2 2.4

* 最大値 (N=1)

# 胆汁排泄は定量的に評価しなかった。最大値に基づく値(N=1)

Fe =未変化のまま尿とともに排泄された量

§ =各 in vivo 代謝試験において測定された親化合物の分画を用いて推定

ND =測定せず

リナグリプチンはラットの乳汁中に排泄された［CTD 4.2.2.5-5］。さらに，代謝物 CD 1790，M515 (1)および 5 種類の未同定の代謝物が，ラットの乳汁中に検出された。30 mg/kg の[14C]リナグリプチンをラットに経口投与すると，投与関連放射能の 0.35%（平均値）が 24 時間以内

に乳汁中に排出された［CTD 4.2.2.5-5］。


14

4. 毒性

リナグリプチンの安全性について，マウスおよびラットによる単回経口投与毒性試験，マウス

およびラットによる単回静脈内投与毒性試験，マウス，ラット，イヌおよびカニクイザルによ

る反復経口投与用量設定試験，マウス（最長 13 週間），ラット（最長 26 週間）およびカニク

イザル（最長 52 週間）による反復経口投与毒性試験，ラットおよびカニクイザルによる反復

静脈内投与毒性試験，in vitro および in vivo 遺伝毒性試験，マウスおよびラットによるがん原

性試験，ラットおよびウサギによる生殖発生毒性試験，ラットおよびウサギによる局所忍容性

試験，イヌおよびカニクイザルによる偽アレルギー探索試験，ラットによる免疫毒性試験を実

施して評価した。また，イヌ，ミニブタおよびカニクイザルによる単回経口投与毒性をそれぞ

れの反復経口投与用量設定試験および反復経口投与毒性試験で評価した。

各試験における曝露量とリナグリプチンのMRHDである一日量5 mgに基づく安全域の算出に

は日本人の臨床試験で得られた Cmax, ss 12 nM および AUC0-24h, ss 193 nM·h［CTD 5.3.3.1-3］なら

びに外国人の臨床試験で得られた Cmax, ss 11.1 nM および AUC0-24h, ss 158 nM·h［CTD 5.3.3.2-1］

を，また，主代謝物の CD 1790 に関する安全域の算出には日本人の臨床試験で得られた

AUC0-24h, ss 27.4 nM·h［CTD 5.3.3.1-3］ならびに外国人の臨床試験で得られた AUC0-24h, ss 20.4

nM·h［CTD 5.3.3.2-1，CTD 5.3.1.1-3］を用いて評価した。その結果，広い安全域が認められた。

4.1 単回投与毒性試験

リナグリプチンの急性毒性を Crl:NMRI マウスおよび CrlGlxBrlHan :WI ラットの単回経口投与

毒性試験および単回静脈内投与毒性試験で評価した。非げっ歯類の経口投与急性毒性は，イヌ

の漸増投与用量設定試験と 2 週間反復投与用量設定試験，カニクイザルの 2 週間反復投与用量

設定試験と 4週間反復経口投与毒性試験およびミニブタの 3日間反復投与毒性試験で評価した。

その結果，単回経口投与による ALD はマウスおよびラットで 1000~2000 mg/kg，イヌおよび

カニクイザルで 300 mg/kg 以上であり，リナグリプチンの急性毒性は弱いと考えられた。単回

経口投与毒性試験における安全域は投与用量を体表面積に基づいて換算した HED（Guidance

for Industry: Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics in

Adult Healthy Volunteers. FDA CDER, July 2005）［CTD 4.3-4］により評価した。

これらの試験成績を表 4.1:1 に示す。


15

表 4.1:1 リナグリプチンの急性毒性試験成績

動物種／系統投与方法/投与期間/ 投与量 [mg/kg] 主要所見安全域 CTD

マウス/ Crl:NMRI

経口/単回/ 1000, 2000

ALD 1000～2000 mg/kg 死亡, 鎮静, 立毛, 無関心, 活動性低下

975 4.2.3.1-1 4.2.3.1-2

ラット/ CrlGlxBrlHan :WI

経口/単回/ 1000, 2000 ALD 1000～2000 mg/kg 死亡, 立毛, 活動性低下, 一過性の体重減少

1935 4.2.3.1-4 4.2.3.1-5

ﾋﾞｰｸﾞﾙ犬/ BASF

経口/反復/ 300 まで

ALD 300 mg/kg 以上初回投与で異常なし

2000 4.2.3.2-17 4.2.3.2-18

カニクイザル経口/反復/ 300 ALD 300 mg/kg 以上初回投与で異常なし

1161 4.2.3.2-7 4.2.3.2-8 4.2.3.2-19

マウス/ Crl:NMRI

静脈内/単回/ 10, 30 60

ALD 60 mg/kg 以上異常なし

該当なし 4.2.3.1-3

ラット/ CrlGlxBrlHan :WI

静脈内/単回/ 10, 30 60, 120

ALD 60～120 mg/kg 死亡

該当なし 4.2.3.1-6

4.2 反復投与毒性試験

リナグリプチンの反復投与毒性を Crl:CD-1(ICR)マウス（最長 13 週間），Crl:WI(Han)ラットお

よび HsdHan:Wist ラット（最長 26 週間），ビーグル犬（最長 4 週間）およびカニクイザル（最

長 52 週間）で臨床予定投与経路である経口投与により評価した。これらの試験のうち，げっ

歯類ではリナグリプチンを餌に混ぜて投与した 2 週間混餌投与試験も実施した。その他の試験

はリナグリプチンを 0.5% Natrosol® 250 HX に懸濁して経口投与により実施した。また，2 週間

までの静脈内投与試験をラットおよびカニクイザルで実施してバイオアベイラビリティを検

討する臨床試験を支持した。

リナグリプチンの非げっ歯類における毒性試験は開発当初ビーグル犬で始めた。ところが，ビ

ーグル犬の試験で偽アレルギーが認められた。一方，カニクイザルを用いた試験では，日本人

および外国人のMRHDにおけるリナグリプチンの血漿中Cmax, ssのそれぞれ 3000倍以上の血漿

中濃度でもこの症状は観察されなかった。さらに，健康成人における臨床試験において，ビー

グル犬に偽アレルギーが生じる血漿中濃度でも，やはり偽アレルギーは観察されなかった

［CTD 5.3.3.1-1］。したがって，ビーグル犬にみられた偽アレルギーはヒトにおいて安全性の

懸念を生じるものでないと考えられた。このようにビーグル犬にみられた偽アレルギーはリナ

グリプチンの毒性評価を妨げるものであり，また，投与用量も限られたことから，非げっ歯類

の動物種としてカニクイザルを選択した。

リナグリプチンの反復投与毒性試験から広い安全域が得られた。ラットの 26 週間反復経口投

与毒性試験［CTD 4.2.3.2-4］およびカニクイザルの 52 週間反復経口投与毒性試験［CTD

4.2.3.2-10］における NOAEL はそれぞれ 30 mg/kg/日（日本人および外国人の MRHD における


16

リナグリプチンの AUC0-24h, ssのそれぞれ 54 および 66 倍，CD 1790 の AUC0-24h, ssのそれぞれ 21

および 28 倍）および 10 mg/kg/日（日本人および外国人の MRHD におけるリナグリプチンの

AUC0-24h, ssのそれぞれ 32 および 40 倍，CD 1790 の AUC0-24h, ss のそれぞれ 69 および 92 倍）で

あった。

反復経口投与で生じる毒性所見は MRHD におけるヒトの血漿中濃度を著しく超える高用量を

投与したときにのみ観察され，腎，肝，消化管，肺，リンパ組織および生殖器が毒性学的標的

臓器と考えられた。

リナグリプチンの高用量投与に起因する腎の所見は毒性試験に用いた全ての動物種に観察さ

れ，尿検査，血液生化学的検査，腎重量および病理組織学的検査で認められた。ラットの 26

週間反復経口投与毒性試験［CTD 4.2.3.2-4］において腎障害は 100 mg/kg/日（日本人および外

国人の MRHD におけるリナグリプチンの AUC0-24h, ssのそれぞれ 283 および 346 倍）以上でみ

られ，NOAEL は 30 mg/kg/日（日本人および外国人の MRHD におけるリナグリプチンの

AUC0-24h, ssのそれぞれ 54 および 66 倍）と判断された。また，カニクイザルの 13 週間反復経

口投与毒性試験［CTD 4.2.3.2-9］では 150 mg/kg/日（日本人および外国人の MRHD における

リナグリプチンの AUC0-24h, ssのそれぞれ 1446 および 1766 倍）で腎障害がみられたが，カニク

イザルの 52 週間反復経口投与毒性試験［CTD 4.2.3.2-10］においては 100 mg/kg/日（日本人お

よび外国人の MRHD におけるリナグリプチンの AUC0-24h, ssのそれぞれ 648 および 791 倍）で

も腎障害は生じなかった。

肝の所見は肝細胞と胆管に観察された。ラットおよびカニクイザルの肝細胞にはリナグリプチ

ンの高用量投与によってグリコーゲンが蓄積したが，この所見はリナグリプチンの薬理学的作

用が過度に発現した結果と考えられた。胆汁はリナグリプチンの主代謝排泄経路である［CTD

4.2.2.5-4，CTD 4.2.2.2-5］ことから，高用量のリナグリプチン投与によって胆管は高い局所濃

度に曝露されると考えられ，その結果，胆管に障害が生じたものと推察された。これらの肝の

所見は可逆性を示した。また，ラットでは 100 mg/kg/日以上およびカニクイザルでは 300 mg/kg/

日の高用量でのみに観察され，したがって広い安全域がみられた（日本人および外国人の

MRHD におけるリナグリプチンの AUC0-24h, ssのそれぞれ 54 および 66 倍以上）。

リナグリプチンの 120 mg/kg/日投与によってマウスの前胃に角化亢進と上皮過形成がみられ

た。この用量におけるリナグリプチンの濃度は 12 mg/mL であった。また，ラットに 600 mg/kg/

日で 4 週間投与すると，腺胃粘膜に壊死およびび爛が観察された。この用量におけるリナグリ

プチンの濃度は 60 mg/mL であった。カニクイザルにおいては胃粘膜の変性および過形成が 25

および 150 mg/kg/日の 13 週間投与でみられた。これらの用量におけるリナグリプチンの濃度

は 30 mg/mL であった。以上の所見より，高濃度のリナグリプチン投与懸濁液は胃粘膜に刺激

性を生じると考えられた。さらに，ラットおよびカニクイザルの高用量投与群に観察された流

涎も刺激性に起因するものと考えられた。ヒトにはこのような高濃度のリナグリプチンが投与

されることはない。カニクイザルの 52 週間反復経口投与毒性試験［CTD 4.2.3.2-10］では 20

mg/mL（100 mg/kg/日）でも胃粘膜に病変は認められなかった。


17

リナグリプチンの高用量投与でリン脂質症を示唆する所見がラットにみられた。リン脂質症は

両親媒性陽イオン構造を有する化合物の投与に共通してみられる蓄積症として知られている

［CTD 4.3-20，CTD 4.3-21］。ラットの 13 週間反復経口投与毒性試験［CTD 4.2.3.2-3］の 100

および 300 mg/kg/日では，肺胞マクロファージ集簇の発生頻度および程度が増加し，26 週間反

復経口投与毒性試験［CTD 4.2.3.2-4］の 300 mg/kg/日では，リン脂質症を示す肺の泡沫細胞集

簇が軽度にみられた。さらに，ラットの 2 年間がん原性試験［CTD 4.2.3.4.1-2］においては 60

mg/kg/日（日本人および外国人の MRHD におけるリナグリプチンの AUC0-24h, ssのそれぞれ 342

および 418 倍）で肺の泡沫細胞集簇の続発性変化と考えられるコレステロール肉芽腫の発生頻

度が増加した。しかし，マウスの 2 年間がん原性試験［CTD 4.2.3.4.1-1］およびカニクイザル

の 52 週間反復経口投与毒性試験［CTD 4.2.3.2-10］では，それぞれ 80 mg/kg/日（日本人およ

び外国人の MRHD におけるリナグリプチンの AUC0-24h, ssのそれぞれ 198 および 242 倍）およ

び 100 mg/kg/日（日本人および外国人の MRHD におけるリナグリプチンの AUC0-24h, ssのそれ

ぞれ 648 および 791 倍）でもリン脂質症を示唆する病理組織学的変化はみられなかった。

胸腺，脾およびリンパ節におけるアポトーシスの増加がラットおよびカニクイザルにみられた

が，マウスには観察されなかった。ラットにおけるリンパ組織の所見は 100 mg/kg/日（日本人

および外国人の MRHD におけるリナグリプチンの AUC0-24h, ssのそれぞれ 238 および 291 倍）

では観察されず，300 mg/kg/日（日本人および外国人の MRHD におけるリナグリプチンの

AUC0-24h, ssのそれぞれ 1161 および 1418 倍）で 2 週間経口投与用量設定試験［CTD 4.2.3.2-15］

に生じたが，13 週間経口投与毒性試験［CTD 4.2.3.2-3］および 26 週間経口投与毒性試験［CTD

4.2.3.2-4］では 300 mg/kg/日でも認められなかった。また，ラットの 4 週間経口投与毒性試験

［CTD 4.2.3.2-2］の 600 mg/kg/日（日本人および外国人の MRHD におけるリナグリプチンの

AUC0-24h, ssのそれぞれ2570および3139倍）ではリンパ組織が毒性学的標的臓器と考えられた。

一方，カニクイザルにおけるリンパ組織の所見は高用量投与群にのみ認められ，各試験で必ず

しも共通した変化ではなかった。カニクイザルにおいては 25 mg/kg/日（日本人および外国人

の MRHD におけるリナグリプチンの AUC0-24h, ssのそれぞれ 118 および 144 倍）までリンパ組

織に病理組織学的変化はみられなかった。カニクイザルの 4 週間経口投与毒性試験［CTD

4.2.3.2-8］の 60 mg/kg/日（日本人および外国人の MRHD におけるリナグリプチンの AUC0-24h, ss

のそれぞれ 391 および 477 倍）で胸腺の細胞密度減少が 1 例の動物に観察され，雄の胸腺重量

が減少（対照群の 0.8 倍）した。しかし，52 週間経口投与毒性試験［CTD 4.2.3.2-10］では 100


および 791 倍）でもリンパ組織に所見は認められなかった。カニクイザルの 4 週間経口投与毒

性試験［CTD 4.2.3.2-8］および 13 週間経口投与毒性試験［CTD 4.2.3.2-9］のそれぞれ 300 mg/kg/

日（日本人および外国人の MRHD におけるリナグリプチンの AUC0-24h, ss のそれぞれ 2860 およ

び 3494 倍）および 150 mg/kg/日（日本人および外国人の MRHD におけるリナグリプチンの

AUC0-24h, ssのそれぞれ 1446 および 1766 倍）で胸腺，骨髄，脾およびリンパ組織に変化がみら

れた。これらのリンパ造血組織に観察された所見はいずれもリナグリプチンの高用量群でみら


18

れたものであり，一般毒性が生じない用量で認められていないことから非特異的なストレスに

起因するものと考えられた。

ラットの 26 週間反復経口投与毒性試験［CTD 4.2.3.2-4］の 300 mg/kg/日（日本人および外国

人の MRHD におけるリナグリプチンの AUC0-24h, ssのそれぞれ 1461 および 1785 倍）で卵巣に

生殖索-間質過形成，膣に粘膜の変化（ムコイド変化・剥離）および前立腺に過形成がみられ

た。しかし，生殖発生毒性試験において生殖能および妊娠能には 240 mg/kg/日（日本人および

外国人の MRHD におけるリナグリプチンの AUC0-24h, ssのそれぞれ 772 および 943 倍）でもリ

ナグリプチン投与の影響はみられなかった。カニクイザルでは卵巣重量および子宮重量の減少

がみられたが各試験に共通して観察された変化ではなく，60 mg/kg/日（日本人および外国人の

MRHD におけるリナグリプチンの AUC0-24h, ssのそれぞれ 391 および 477 倍）以上の用量群で

認められた。

皮膚の壊死病変が DPP-4 阻害剤投与で懸念されているが，リナグリプチンの毒性試験ではど

の動物種においても皮膚壊死はみられなかった。また，DPP-4 阻害剤あるいは GLP-1 ミメテ

ィクスの膵炎誘発作用が懸念されているが，リナグリプチンのどの毒性試験にも膵炎誘発作用，

膵管上皮の増殖作用あるいは化生変化は認められなかった。


表 4.2:1 リナグリプチンの反復投与毒性試験成績（1/3）

動物種/系統

投与方法/投与期間/ 投与量 [mg/kg/日]

主要所見

NOAEL [mg/kg/日] （安全域：

日本人/外国人）

CTD

マウス/ Crl:CD-1 (ICR)

混餌/2 週間/ 100, 300, 1000

1000 mg/kg 摂餌量・体重増加量の減少

該当なし 4.2.3.2-12


経口/4 週間/ 60, 120, 300, 600

120 mg/kg 前胃：角化亢進・上皮過形成 300 mg/kg 前胃：角化亢進・上皮過形成，心重量減少 600 mg/kg 胃壁肥厚，前胃：角化亢進・上皮過形成，円背，立毛，

呼吸低下，肝・胸腺・心重量減少

該当なし 4.2.3.2-13


経口/13 週間/ 100, 300, 600

300 mg/kg ﾋﾞﾘﾙﾋﾞﾝ増加, ｸﾞﾙｺｰｽ・ｺﾚｽﾃﾛｰﾙ・ﾄﾘｸﾞﾘｾﾘﾄﾞ減少, 肝細胞

淡明化頻度減少, 前胃上皮過形成, 600 mg/kg 主試験群 4 例死亡摂餌量・体重増加量減少, ALP・ALT・AST・ﾋﾞﾘﾙﾋﾞﾝ増加，

ｸﾞﾙｺｰｽ・ｺﾚｽﾃﾛｰﾙ・ﾄﾘｸﾞﾘｾﾘﾄﾞ減少, 腎重量増加, 肝・心・

唾液腺・卵巣重量減少, 肝細胞淡明化頻度減少,腎：尿細

管肥大・好塩基性尿細管・尿細管上皮空胞化・尿細管上

皮単細胞壊死, 前胃：穿孔性潰瘍, 上皮過形成・上皮下炎

症

100 (390/476)

4.2.3.2-1

ラット/ Crl:WI (Han)

混餌/2 週間/ 100, 300, 1000

1000 mg/kg 摂餌量・体重・体重増加量減少, 立毛，淡褐色糞便, 胃・

盲腸・結腸膨満

該当なし 4.2.3.2-14


19


動物種/ 系統


主要所見



CTD


経口/2 週間/ 30, 100, 300, 1000

300 mg/kg 脾重量減少, 脾髄外造血減少, 脾ﾘﾝﾊﾟ組織萎縮, 胸腺ｱﾎﾟ

ﾄｰｼｽ増加, 胸腺ﾏｸﾛﾌｧｰｼﾞ空胞化, 免疫毒性なし 1000 mg/kg 投与 6および 8日目に全例屠殺, 立毛, 腹部膨満,流涎, 摂餌量・体重減少, 削痩, 肝：肝細胞壊死，肝細胞空胞化, 小肉芽腫, 炎症を伴う胆管潰瘍, 膵外膵管炎症・潰瘍

該当なし 4.2.3.2-15


経口/4 週間+4 週間回

復/ 6, 60, 600

600 mg/kg 雌 1 例投与 18 日目に屠殺立毛, 腹部膨満, 削痩, 脱毛, 摂餌量・体重増加量減少, 網状赤血球率・白血球数増加, AST・ALT・GLDH・ｱﾙﾄﾞ

ﾗｰｾﾞ・ﾋﾞﾘﾙﾋﾞﾝ増加, ﾄﾘｸﾞﾘｾﾘﾄﾞ減少, 肝・腎重量増加, 胸腺・前立腺・卵巣・下垂体重量減少, 肝細胞空胞化, 肝細

胞消失, 肝内/肝外胆管：過形成・上皮下泡沫細胞集簇・

び爛, 腎尿細管肥大, 肺・ﾘﾝﾊﾟ節・胸腺・脾・骨髄：泡沫

細胞集簇, 顎下腺導管萎縮, 腺胃粘膜壊死・び爛, 皮膚毛

嚢変性, 前立腺：上皮空胞化・ｱﾎﾟﾄｰｼｽ増加, ﾘﾝﾊﾟ組織ｱﾎﾟ

ﾄｰｼｽ増加, 脾ﾘﾝﾊﾟ球減少

60 (130/159)

4.2.3.2-2

ラット/ HsdHan: Wist


復/ 10, 30, 100, 300

100 mg/kg 流涎, ALP・ｸﾚｱﾁﾆﾝ・尿素増加, 腎・副腎・甲状腺重量増

加, 肺胞ﾏｸﾛﾌｧｰｼﾞ増加, 肝細胞淡明化, 300 mg/kg 流涎, 体重増加量減少, ALP・ALT・AST・ﾋﾞﾘﾙﾋﾞﾝ・ｸﾚｱﾁ

ﾆﾝ・尿素増加, 肝・腎・副腎・甲状腺重量増加, 肺胞ﾏｸﾛ

ﾌｧｰｼﾞ増加, 肝細胞淡明化, 甲状腺濾胞上皮細胞肥大

30 (78/96)

4.2.3.2-3



復/ 7, 30, 100, 300

100 mg/kg 活動性低下, ALT・GLDH 増加 300 mg/kg 活動性低下, ALT・AST・GLDH 増加, 肝・腎重量増加, 腎：

好塩基性尿細管・尿細管色素沈着・間質炎症・円柱・腎

盂腎炎, 肝：肝細胞淡明化・小葉中心性肝細胞肥大・小

葉中心性リポフスチン沈着・胆管過形成, 肺：泡沫細胞

集簇, 腺胃：び爛・粘膜表層炎症・腺萎縮, 甲状腺小濾胞

性肥大, 卵巣：生殖索-間質過形成, 膣：粘膜の変化（ム

コイド変化・剥離）, 前立腺：過形成

30 (54/66)

4.2.3.2-4

ビーグル

犬/ BASF

経口/2 週間/ 15, 45, 150

15 mg/kg 偽ｱﾚﾙｷﾞｰ, 嘔吐, 肺炎 45 mg/kg 偽ｱﾚﾙｷﾞｰ, 嘔吐, 肺炎虚脱, ﾋｽﾀﾐﾝ増加, 胆管上皮：ｱﾎﾟﾄ

ｰｼｽ・炎症細胞浸潤・空胞化, 精細管上皮変性 150 mg/kg 雄 1 例投与 9 日目に屠殺：過急性線維素性肺炎, 気管支

炎, 虚血性心筋壊死偽ｱﾚﾙｷﾞｰ, 嘔吐, 肺炎虚脱, ﾋｽﾀﾐﾝ増加, 胆管上皮：ｱﾎﾟﾄ

ｰｼｽ・炎症細胞浸潤・空胞化, 精細管上皮変性, 腸間膜ﾘﾝ

ﾊﾟ節泡沫細胞集簇

該当なし 4.2.3.2-18

ビーグル

犬/ HsdCpb: DOBE


復/ 1, 3, 9, 45

45 mg/kg 偽ｱﾚﾙｷﾞｰ, 嘔吐, 血圧低下, 頻脈, QTc 延長傾向, ﾋｽﾀﾐﾝ増加, 肝内胆管周囲炎症細胞浸潤, 腎髄質尿細管ｱﾎﾟﾄｰｼｽ/壊死, 精細管萎縮

9 (29/36)

4.2.3.2-6

カニクイザル


復/ 10, 30, 100

毒性所見なし 100 (772/943)

4.2.3.2-7


20


動物種/系統


主要所見



CTD

カニクイ

ザル経口/2 週間/ 300

300 mg/kg 嘔吐

該当なし 4.2.3.2-19

カニクイ

ザル経口/4 週間+4 週間回

復/ 10, 60, 300

60 mg/kg 流涎, 腎重量増加, 胸腺・卵巣・子宮重量減少, 卵巣卵胞

発育不全, 雌性生殖器萎縮, 骨髄顆粒球造血亢進, 胸腺

細胞密度減少 300 mg/kg 雄 1 例投与 8 日目に屠殺：腎炎，腎変性流涎, 嘔吐, ALT・AST・ﾋﾞﾘﾙﾋﾞﾝ・ｸﾚｱﾁﾆﾝ増加, 尿中ﾀﾝﾊﾟ

ｸ増加, 腎・肝重量増加, 肝：肝細胞ｸﾞﾘｺｰｹﾞﾝ蓄積・胆管

上皮肥大・胆管周囲炎, 胆嚢上皮肥大/過形成, 腸間膜ﾘﾝ

ﾊﾟ節・顎下ﾘﾝﾊﾟ節胚中心減数, 卵巣卵胞発育不全, 雌性生

殖器萎縮, 骨髄顆粒球造血亢進, 胸腺細胞密度減少, 膵：外分泌腺分泌顆粒減少・膵島過形成

10 (54/66)

4.2.3.2-8

カニクイザル


復/ 4, 25, 150

25 mg/kg 胃粘膜刺激性 150mg/kg 流涎, 嘔吐, 体重減少, 胸腺・子宮重量減少, 腎重量増加, ｸﾚｱﾁﾆﾝ増加, 胃：上皮肥大・上皮過形成・腺変性・炎症

細胞浸潤, 胸腺皮質細胞密度減少, 脾白髄細胞密度減少, 腸管ﾘﾝﾝﾊﾟ節・顎下ﾘﾝﾊﾟ節胚中心減数

4 (17/21)

4.2.3.2-9

カニクイザル


復/ 1, 10, 100

100 mg/kg 雌 1 例投与 6 週目に屠殺：低ﾀﾝﾊﾟｸ血症, 尿中ﾀﾝﾊﾟｸ増加流涎, 嘔吐, 体重増加量減少, 膵島過形成，肝細胞淡明化

10 (32/40)

4.2.3.2-10


静脈内/1 週間/ 30, 60, 100

60 mg/kg 腸骨ﾘﾝﾊﾟ節重量増加, 胸腺重量減少 100 mg/kg 雄 1 例投与 7 日目に屠殺尾肥厚，腸骨ﾘﾝﾊﾟ節重量増加, 胸腺重量減少, 投与部位刺

激性

該当なし 4.2.3.2-16


静脈内/2 週間/ 2.5, 10, 50

50 mg/kg 投与部位痂皮形成, 潰瘍, 壊死, 副腎重量減少

10

4.2.3.2-5

カニクイザル

静脈内/, 3 日間/1, 2.5, 10, 25, 50, 2 週間/40

50 mg/kg 浅呼吸, 嗜眠 40 mg/kg 活動性低下, 半眼

該当なし 4.2.3.2-20

カニクイザル

静脈内/2 週間/ 1, 5, 40

40 mg/kg 浅呼吸, 口唇・鼻口・鼠径部腫脹, 顔面皮膚発赤, 心電

図：PR・QRS 延長, 収縮期血圧低下

5 4.2.3.2-11

4.3 遺伝毒性試験

リナグリプチンの遺伝毒性について細菌を用いた復帰突然変異試験（Ames 試験）により遺伝

子突然変異誘発性を，ほ乳類培養細胞を用いた染色体異常試験およびラットを用いた in vivo

小核試験により染色体異常誘発性を評価した。また，リナグリプチンの主代謝物である CD

1790 の遺伝毒性について細菌を用いた復帰突然変異試験（Ames 試験）により遺伝子突然変異

誘発性を，ほ乳類培養細胞を用いた染色体異常試験により染色体異常誘発性を評価した。これ

らの CD 1790 の in vitro 試験には CD 1790 の S 体および R 体をそれぞれ 50 %含むラセミ化し


21

た CD 1750 を使用した。その結果，リナグリプチン［CTD 4.2.3.3.1-1，CTD 4.2.3.3.1-2］およ

び CD 1790［CTD 4.2.3.3.1-3，CTD 4.2.3.3.1-4，CTD 4.2.3.3.1-5］は Ames 試験および in vitro 染

色体異常試験で遺伝毒性を示さなかった。ラットの骨髄細胞を用いた小核試験［CTD

4.2.3.3.2-1］は 600 mg/kg/日までのリナグリプチン投与量を用いたラットの 4 週間経口投与毒

性試験［CTD 4.2.3.2-2］で実施した。リナグリプチンは毒性用量である 600 mg/kg/日（日本人


まで 4 週間経口投与したラットの骨髄細胞に小核誘発性を示さなかった。ラットにおける CD

1790 の血漿中濃度はリナグリプチンの AUC に対して約 3～5 %を示し［CTD 4.2.3.2-4］，ラッ

トの骨髄細胞を用いた小核試験［CTD 4.2.3.3.2-1］でリナグリプチンは 600 mg/kg/日まで投与

されていることから，CD 1790 の血漿中濃度は約 20000 nM·h（日本人および外国人の MRHD

における AUC0-24h, ssのそれぞれ約 750 および 1000 倍）に達しているものと考えられる。した

がって，この試験で評価されたリナグリプチンの小核誘発性についての試験成績は CD 1790

にも適用できるものと考えられ，CD 1790 にはラットの骨髄細胞に対して小核誘発性を示さな

いと判断された。これらの試験成績を表 4.3:1 および 4.3:2 に示す。

表 4.3:1 リナグリプチンの遺伝毒性試験

試験の種類菌株/細胞濃度主な試験成績 CTD, in vitro Ames 試験 S. typhimurium

TA98, TA100, TA102, TA1535, TA1537

100～5000 µg/ﾌﾟﾚｰﾄ細菌毒性≥1000 µg/ﾌﾟﾚｰﾄ復帰変異ｺﾛﾆｰ誘発性なし

4.2.3.3.1-1

染色体異常試験ヒトリンパ球 10～1000 µg/mL 細胞毒性≥100 µg/mL 染色体異常誘発性なし

4.2.3.3.1-2

in vivo 試験の種類細胞/動物種/系統投与量/投与期間主な試験成績 CTD

骨髄細胞小核試験 (4 週間経口投与毒性試験で実施)

骨髄細胞/ラット/ Crl:WI(Han)

0, 6, 60, 600 mg/kg/日 4 週間

小核誘発性なし 600 mg/kg 毒性, 造血亢進

4.2.3.3.2-1


22

表 4.3:2 CD 1790 の遺伝毒性試験

試験の種類菌株/細胞濃度主な試験成績 CTD in vitro Ames 試験 S. typhimurium

TA98, TA100, TA102, TA1535, TA1537

CD 1750 30～3000 µg/ﾌﾟﾚｰﾄ

細菌毒性：3000 µg/ﾌﾟﾚｰﾄ復帰変異ｺﾛﾆｰ誘発なし

4.2.3.3.1-3

Ames 試験 S. typhimurium TA98, TA100, TA102, TA1535, TA1537

CD 1750 30～3000 µg/ﾌﾟﾚｰﾄ

析出≥1000 µg/ﾌﾟﾚｰﾄ復帰変異ｺﾛﾆｰ誘発なし

4.2.3.3.1-4

染色体異常試験ヒトリンパ球 CD 1750 30～1000 µg/mL

析出･溶血：1000 µg/mL 染色体異常誘発性なし

4.2.3.3.1-5

4.4 がん原性試験

リナグリプチンのがん原性はマウスおよびラットの 2 年間がん原性試験で評価した。投与用量

はリナグリプチンの血漿中 AUC に基づいて設定し，試験計画書を試験実施に先立って FDA

の Carcinogenicity Assessment Committee に提出して承認を得た。

その結果，リナグリプチンのがん原性はマウス［CTD 4.2.3.4.1-1］およびラット［CTD

4.2.3.4.1-2］のそれぞれ 80 mg/kg/日（日本人および外国人の MRHD におけるリナグリプチン

の AUC0-24h, ss のそれぞれ 198 および 242 倍）および 60 mg/kg/日（日本人および外国人の MRHD

におけるリナグリプチンの AUC0-24h, ssのそれぞれ 342 および 418 倍）でもみられなかった。ま

た，代謝物 CD 1790 の高濃度曝露がマウスおよびラットのそれぞれ 80 mg/kg/日（日本人およ

び外国人の MRHD における AUC0-24h, ssのそれぞれ 20 および 27 倍）および 60 mg/kg/日（日本

人および外国人の MRHD における AUC0-24h, ssのそれぞれ 138 および 185 倍）に認められた。

ラットの 60 mg/kg/日の雌雄で肺のコレステロール肉芽腫の発生頻度が増加したが，この変化

は肺におけるリン脂質症を示唆する泡沫細胞集簇に続発するものと考えられた。同様の病変は

ラットの 18 mg/kg/日（日本人および外国人の MRHD におけるリナグリプチンの AUC0-24h, ssの

それぞれ 42 および 51 倍）には認められなかった。


表 4.4:1 げっ歯類におけるリナグリプチンの経口投与がん原性試験成績

動物種/系統投与方法/投与期間/ 投与量 [mg/kg/日]

主要所見がん原性のない用量

[mg/kg/日] （安全域：日本人/外国人）

CTD

マウス/ Crl:CD-1（ICR）

経口/2 年間/ 8, 25, 80

がん原性なし 80 (198/242)

4.2.3.4.1-1

ラット/ HsdHan:Wist

経口/2 年間/ 6, 18, 60

がん原性なし 60mg/kg 肺ｺﾚｽﾃﾛｰﾙ肉芽腫増加

60 (342/418)

4.2.3.4.1-2


23

4.5 生殖発生毒性試験

ラットの受胎能及び着床までの初期胚発生に関する試験，ラットの胚・胎児発生に関する用量

設定試験，ラットの胚・胎児発生に関する試験，ウサギの胚・胎児発生に関する用量設定試験，

ウサギの胚・胎児発生に関する試験およびラットの出生前及び出生後の発生並びに母動物の機

能に関する試験を実施した。

妊娠ラット［CTD 4.2.2.3-18］および妊娠ウサギ［CTD 4.2.2.3-19］のトキシコキネティクス試

験によりリナグリプチンおよび代謝物 CD 1790 は胎盤を通過して胚・胎児に分布することが

明らかとなった。また，リナグリプチンは乳汁中に移行することが明らかとなった［CTD

4.2.2.5-5］。これらの成績からリナグリプチンの生殖発生毒性試験において，胚・胎児および出

生児はリナグリプチンに曝露されていたものと考えられた。

ラットの受胎能及び着床までの初期胚発生に関する試験［CTD 4.2.3.5.1-1］における親動物の

一般毒性学的 NOAEL は 30 mg/kg/日（日本人および外国人の MRHD におけるリナグリプチン

の AUC0-24h, ss のそれぞれ 40 および 49 倍），胚・胎児発生および生殖能に対する NOAEL は 240


および 943 倍）であった。ラット［CTD 4.2.3.5.2-1］およびウサギ［CTD 4.2.3.5.2-3］の胚・

胎児発生に関する試験において，それぞれ 240 mg/kg/日（日本人および外国人の MRHD にお

けるリナグリプチンの AUC0-24h, ssのそれぞれ 772 および 943 倍）および 150 mg/kg/日（日本人


でもリナグリプチン投与による催奇形性はみられなかった。また，ラットの胚・胎児発生に関

する試験における母動物の一般毒性学的 NOAEL および胚･胎児発生に対する NOAEL は 30


および 49 倍），ウサギの胚・胎児発生に関する試験における母動物の一般毒性学的 NOAEL は

4 mg/kg/日（日本人および外国人の MRHD におけるリナグリプチンの AUC0-24h, ss のそれぞれ

1.8 および 2.1 倍），胚･胎児発生に対する NOAEL は 25 mg/kg/日（日本人および外国人の MRHD

におけるリナグリプチンの AUC0-24h, ssのそれぞれ 64 および 78 倍）であった。ラットの出生前

及び出生後の発生並びに母動物の機能に関する試験［CTD 4.2.3.5.3-1］では 300 mg/kg/日（日

本人および外国人のMRHDにおけるリナグリプチンのAUC0-24h, ssのそれぞれ 1233および 1506

倍）で母動物毒性および F1 出生児の体重推移に影響がみられた。したがって，母動物の一般

毒性学的 NOAEL およびは F1出生児に対する NOAEL は 30 mg/kg/日（日本人および外国人の

MRHD におけるリナグリプチンの AUC0-24h, ssのそれぞれ 40 および 49 倍）と判断された。し

かし，F1 出生児の生殖能にはリナグリプチン投与に起因する影響はみられなかったことから

生殖能に対する NOAEL は 300 mg/kg/日（日本人および外国人の MRHD におけるリナグリプ

チンの AUC0-24h, ssのそれぞれ 1233 および 1506 倍）と判断された。

以上，リナグリプチンの生殖発生毒性試験で広い安全域が認められた。



24

表 4.5:1 ラットおよびウサギのリナグリプチン経口投与による生殖発生毒性試験成績

動物種/ 系統


主要所見 NOAEL

[mg/kg/日] （安全域：日本人/外国人）

CTD

ラット/ CrI:WI (Han)

経口/雄：交配前 29 日～

交配期間, 雌：交配前 15日～GD6/ 10, 30, 240

240 mg/kg 親動物：流涎，体重増加量・摂餌量減少

親動物：30 (40/49) 胚・胎児発生：240 (772/943) 生殖能：240 (772/943)

4.2.3.5.1-1


経口/ GD7～GD16/ 6, 60, 600

600 mg/kg 母動物：体重増加量・摂餌量減少, 被毛粗

剛, 鎮静, 流涎, 膣の血様物付着, 全胚吸

収帝王切開：着床後死亡率・吸収胚数増加, 生存胎児数減少, 死亡胎児数・着床前死亡

率増加, 着床数減少, 胎児体重減少, 骨化

遅延, 矮小, 奇形

該当なし 4.2.3.5.2-4


経口/ GD7～GD16/ 10, 30, 240

240 mg/kg 母動物：体重増加量・摂餌量減少帝王切開：黄体数減少, 吸収胚率増加, 骨化遅延, 肋骨変異催奇形性なし

母動物：30 (40/49) 胚・胎児発生：30 (40/49)

4.2.3.5.2-1

ウサギ/ Crl:CHBB (HM)

経口/ GD6～GD18/ 100, 200, 300, 600/400

100 mg/kg 母動物：ｸﾞﾙｺｰｽ減少 200 mg/kg 母動物：異常一般症状, 体重増加量減少, ｸﾞﾙｺｰｽ減少帝王切開：全胚吸収, 変異増加 300 mg/kg 母動物：4 例死亡/屠殺, ｸﾞﾙｺｰｽ減少帝王切開：全胚吸収, 変異増加, 奇形 600/400 mg/kg 母動物：全例死亡/屠殺

該当なし 4.2.3.5.2-2

ウサギ/ Crl:CHBB (HM)

経口/ GD6～GD18/ 4, 25, 150

4 mg/kg ｸﾞﾙｺｰｽ減少 25 mg/kg 母動物：体重増加量減少, ｸﾞﾙｺｰｽ減少 150 mg/kg 母動物：体重増加量・摂餌量減少, ｸﾞﾙｺｰｽ減少帝王切開：胎児死亡率増加, 矮小, 変異増

加, 催奇形性なし

母動物：4 (1.8/2.1) 胚・胎児発生：25 (64/78)

4.2.3.5.2-3


経口/ GD6～LD21 10, 30, 300

300 mg/kg 母動物：流涎, 体重・体重増加量・摂餌量

減少, 着床後死亡率増加 F1 出生児：体重増加量減少

母動物：30 (40/49) F1 出生児：30 (40/49) 生殖能：300 (1233/1506)

4.2.3.5.3-1

GD：妊娠日 LD：授乳日


25

4.6 局所忍容性試験

リナグリプチンのウサギにおける皮膚刺激性［CTD 4.2.3.6-1］，ウサギにおける単回静脈内お

よび単回筋肉内投与の局所刺激性［CTD 4.2.3.6-2］，ウサギにおける単回動脈内投与の局所刺

激性［CTD 4.2.3.6-3］およびラットにおける単回傍静脈投与の局所刺激性［CTD 4.2.3.6-4］を

評価した。その結果，リナグリプチンの皮膚塗布によって局所刺激性はみられず，また，0.5

mg/mL のリナグリプチン注射剤はいずれの注射経路においても局所刺激性を示さなかった。

4.7 注射剤の溶血性試験

リナグリプチンの注射剤原液（0.5 mg/mL），希釈液およびプラセボを対象として in vitro 溶血

性試験［CTD 4.2.3.7-3］を実施した結果，血液の in vitro 溶血は 0.23 %以下であった。したが

って，リナグリプチンの注射剤，希釈液およびプラセボ溶液のいずれもヒトへの静脈内投与に

適していると判断された。

4.8 偽アレルギー

リナグリプチンを投与したビーグル犬に薬物誘発性過敏症が生じた。この所見は事前感作なし

でリナグリプチンの初回投与で生じること，血漿中ヒスタミン濃度の増加に一致して生じるこ

と，およびリナグリプチンの投与用量の増加に伴って生じることから偽アレルギーに分類され

ると考えられた［CTD 4.3-3］。ビーグル犬の 2 週間経口投与用量設定試験［CTD 4.2.3.2-18］

で偽アレルギーに由来する所見は 15 mg/kg/日（日本人および外国人の MRHD におけるリナグ

リプチンの Cmax, ss のそれぞれ 416 および 450 倍）から観察された。一方，ビーグル犬の 4 週間

経口投与毒性試験［CTD 4.2.3.2-6］における NOAEL は 9 mg/kg/日（日本人および外国人の

MRHD におけるリナグリプチンの Cmax, ssのそれぞれ 194 および 210 倍）であり，この投与量

では偽アレルギーはみられなかった。また，カニクイザルにおいては 300 mg/kg/日（日本人お

よび外国人の MRHD におけるリナグリプチンの Cmax, ssのそれぞれ 2967 および 3207 倍）でも

偽アレルギーあるいは血漿中ヒスタミン濃度の増加はみられなかった。さらに，健康成人にお

ける臨床試験で，ビーグル犬では偽アレルギーを生じる血漿中濃度においても同様の所見はみ

られなかった［CTD 5.3.3.1-1］。これらより，偽アレルギーはビーグル犬に特有なものであり，

ヒトにおいて安全性が懸念される所見ではないと判断された。

4.9 免疫毒性

リナグリプチンを 0，6，60 および 600 mg/kg/日で投与したラットの 4 週間反復経口投与毒性

試験［CTD 4.2.3.2-2］で，雄ラットの血液，脾および胸腺のリンパ球フェノタイプ解析，およ

び脾のナチュラルキラー活性を評価した。その結果，6 および 60 mg/kg/日（日本人および外

国人の MRHD におけるリナグリプチンの AUC0-24h, ssのそれぞれ 130 および 159 倍）ではこれ

ら免疫学的指標に異常はみられなかった。600 mg/kg/日（日本人および外国人の MRHD におけ


26

るリナグリプチンの AUC0-24h, ssのそれぞれ 2570 および 3139 倍）では強い一般毒性に伴うスト

レスに起因した非特異的な所見がみられた。また，ラットの 2 週間経口投与用量設定試験［CTD 4.2.3.2-15］で，リナグリプチンを 0，30，

100 および 300 mg/kg/日まで投与した雄ラットの T 細胞依存性抗体産生について Keyhole

Limpet Hemocyanin 抗原を用いて評価した。その結果，300 mg/kg/日（日本人および外国人の

MRHD におけるリナグリプチンの AUC0-24h, ssのそれぞれ 1161 および 1418 倍）においても一

次的あるいは二次的免疫反応に影響は認められなかった。

ラットの 300 mg/kg/日（日本人および外国人の MRHD におけるリナグリプチンの AUC0-24h, ss

のそれぞれ 1161 および 1418 倍）以上およびカニクイザルの 60 mg/kg/日（日本人および外国

人の MRHD におけるリナグリプチンの AUC0-24h, ssのそれぞれ 391 および 477 倍）以上でリン

パ組織の萎縮あるいはアポトーシスがみられた。しかし，マウスにおいては 600 mg/kg/日（日

本人および外国人のMRHDにおけるリナグリプチンのAUC0-24h, ssのそれぞれ 2772および 3386

倍）でもリンパ組織に病理組織学的変化はみられなかった。これらの所見はリナグリプチンの

高用量投与群にのみ観察されていること，および各試験で必ずしも共通した変化でないことか

ら，強い一般毒性の結果生じたストレスに起因する非特異的なものと考えられた。

4.10 光毒性評価

リナグリプチンは 290 nm 以上で 2 番目の最大吸収波長を示す［CTD 3.2.S.3.1］ことから，リ

ナグリプチンの光毒性の有無を臨床試験で評価した。その結果，リナグリプチンの光毒性を示

唆する所見はみられなかった［CTD 2.5.5.3］。光毒性に関する非臨床試験は実施しなかった。

4.11 不純物の安全性評価

原薬および製剤中の不純物の安全性をそれぞれ「新有効成分含有医薬品のうち原薬の不純物に

関するガイドラインの改定について」の一部改定について（薬食審査発第 1204001 号）および

「新有効成分含有医薬品のうち製剤の不純物に関するガイドラインの改定について」の改定に

ついて（薬食審査発第 0703004 号）に従って評価した。このガイドラインおよびリナグリプチ

ンの最大 1 日用量が 5 mg であることに基づけば，1.0 mg/日または 0.15%を超えるいずれか低

い方のリナグリプチン原薬中の不純物の安全性評価が必要となる。同様に，ガイドラインによ

ると，50 µg/日または 1.0%を超えるいずれか低い方のリナグリプチン製剤中の不純物の安全性

評価が必要となる。原薬の申請規格案に従い，不純物，，，，

，，（異性体 1）およびに（異性体 2）の安全性評価を実施

した。リナグリプチン製剤中には該当する不純物は存在しない。リナグリプチン原薬の申請規

格案および主な毒性試験に使用したバッチの不純物の値を表 4.11:1 に示す。

申請規格案に示した安全性評価が必要とされる原薬中の不純物は，いずれも反復経口投与毒性

試験に使用したリナグリプチンのバッチに含まれていたことから，不純物の一般毒性はこれら


27

P* Q* R* M*

S* T* U* U*

negishis

テキストボックス

*：新薬承認情報提供時に置換え

の反復経口投与毒性試験で評価されていると考えられた。ヒトにおける最大投与量と反復投与

毒性試験の NOAEL における投与量を比較すると，その安全域は 96 倍以上となる（表 4.11:2）。

表 4.11: 1 リナグリプチン原薬の申請規格案および主な毒性試験に使用したバッチ

不純物 (%)

異性体 1 異性体 2

原薬規格案

(≤)

ﾊﾞｯﾁ番号

8460060 na na

8460210

8430231 0.32 0.32 0.26 0.11 0.12 0.09 0.09

3050850

5060160 0.14 0.16 0.06

5060170

na：測定せず太字下線：安全域の算出に使用ﾊﾞｯﾁ番号 8430231：ﾗｯﾄの 26 週間経口投与毒性試験に使用，ﾊﾞｯﾁ番号 5060160：ｻﾙの 52 週間経口投与毒性試験

に使用，ﾊﾞｯﾁ番号 5060170：ﾏｳｽおよびﾗｯﾄのがん原性試験に使用

表 4.11: 2 リナグリプチン原薬の不純物：毒性試験における投与量および安全域

不純物

異性体 1

異性体 2 対象毒性試

験 a 52W ｻﾙ

26W ﾗｯﾄ

26W ﾗｯﾄ

26W ﾗｯﾄ

26W ﾗｯﾄ

26W ﾗｯﾄ

52W ｻﾙ

26W ﾗｯﾄ

26W ﾗｯﾄ

NOAEL の

投与量

[µg/kg] 14 96 96 78 33 36 16 27 27

ヒトの最大

投与量†

[µg/kg] 0.125 0.250 0.417 0.250 0.167 0.208 0.167 0.167 0.167

安全域 112 384 230 312 198 173 96 162 162 a：26W ﾗｯﾄ= ﾗｯﾄの 26 週間経口投与毒性試験, NOAEL： 30 mg/kg/日

52W ｻﾙ=ｻﾙの 52 週間経口投与毒性試験, NOAEL： 10 mg/kg/日 †：原薬の規格に従って臨床用量（5 mg/60 kg/日）から算出した値

安全性評価が必要とされる原薬中の不純物，，，，，

，（異性体 1）および（異性体 2）の遺伝毒性を Ames 試験およびヒ

トリンパ球を用いた in vitro 染色体異常試験で評価した結果，いずれの不純物にも遺伝毒性は

みられなかった。


28

E* P* Q*

Q* P* E*

R*

R*

M*

M*

S*

S*

T*

T*

U* U*

U* U*

U* U*

P* Q* R* M* S*

T*

negishis

テキストボックス

*：新薬承認情報提供時に置換え

安全性評価が必要とされる原薬中の不純物はマウスおよびラットのがん原性試験に使用した

リナグリプチンのバッチ番号 5060170 に含まれていた。これらの試験でマウスおよびラットに

がん原性はみられなかった。

以上より，安全性評価が必要とされる原薬中の不純物の高い安全性が確認された。


29

5 総括および結論

リナグリプチンは強力（IC50=1 nM）かつ選択的なジペプチジルペプチダーゼ-4（DPP-4）阻害

剤であり，in vivo において良好な血糖降下作用を示す。リナグリプチンは肥満動物あるいは 2型糖尿病モデル動物において，1 mg/kg あるいはそれ以下の用量で血糖降下作用を示す。リナ

グリプチン投与後に認める血糖コントロールの改善は，グルカゴン様ペプチド 1（GLP-1）な

どの内因性インクレチン類の消失半減期延長と血漿中濃度上昇に，本剤が有効に働くためであ

る。これらのインクレチン類は，食事への反応として腸から放出されるもので，グルコース恒

常性の生理的調節に関わっている。すなわち，インクレチンホルモンレベルの上昇により膵臓

β細胞からのインスリン分泌が上昇し，膵臓α細胞からのグルカゴン放出が抑制される。リナグリプチンの推奨治療量は 5 mg 1 日 1 回である。この用量は，ヒトでの最大推奨用量

（MRHD）でもある。ヒトでリナグリプチン 5 mg 1 日 1 回投与した時の最高血漿中濃度

Cmax, ss は，11.1 nM（外国人），12 nM（日本人）であり，AUC0-24h, ss は，158 nM⋅h（外国

人），193 nM⋅h（日本人）であった。また，主要代謝物 CD 1790 の AUC0-24, ss は，20.4 nM⋅hであった。リナグリプチンは，優れた忍容性を示唆する薬理学的プロファイルを持つ。リナグリプチンを

用いた安全性薬理試験からは，QT 間隔延長などの心電図パラメータに対する作用は観察され

ず，不整脈を起こす可能性は低いと考えられた。安全性薬理試験やカニクイザルにおけるリナ

グリプチン 300 mg/kg/日（臨床における Cmax, ss の 2523 倍（外国人）および 2334 倍（日本

人）を示す用量）の検討においても，心電図に対する影響はなく，さらに中枢神経系ならびに

呼吸系に対しても明らかな作用は認められなかった。リナグリプチンの経口バイオアベイラビリティは用量依存的であり，5 mg/kg 投与では約 50%であった。リナグリプチンの分布は血漿中および組織に存在する標的の DPP-4 への結合によ

るものが主であった。血漿中リナグリプチンの蛋白結合率は用量に依存していた。結合画分の

増加は，30 nM を超える濃度において 75%～89%に対して 1 nM では 99%であった。リナグリ

プチンは中枢を除き，組織に広く分布した。特に腎臓と肝臓においては長時間の滞留が認めら

れた。組織における滞留および血漿中の消失半減期が長いにも関わらず，反復投与後の定常状

態への到達は早く，蓄積は限られたものであった。ヒトにおいてリナグリプチンは CYP3A4により代謝される。経口投与後，薬理活性を持たない代謝物 CD 1790 のみがヒトの血漿中に

認められ，その曝露は親化合物の曝露の 10%を超える程度であった。毒性試験で用いた動物

では CD 1790 の十分な曝露が観察された。リナグリプチンは肝チトクローム P450 を誘導しな

かったが，ヒト肝ミクロソームにおいて CYP3A4 活性に対して弱い競合的阻害および不可逆

的（mechanism-based）な阻害を示した。リナグリプチンの主たる排泄経路は胆汁および糞中

であった。親化合物の経口投与時の吸収と胆汁中排泄過程には P-糖蛋白が寄与している。尿

中排泄は用量依存的で，毒性試験で使用した高用量では排泄の 20-30%を占めた。薬効量レベ

ルにおける尿中排泄は無視しうる程度であった。トキシコキネティクスの結果からリナグリプ

チンの十分な曝露が認められた。概して，曝露の増加は用量比例性を上回った。性差はみられ

なかった。リナグリプチンは血液-胎盤関門を通過し，胚および胎児に移行した。ラットにお

いて，リナグリプチンは乳汁中に移行した。


30

リナグリプチンの反復経口投与で生じる毒性所見は MRHD におけるヒトの血漿中濃度を著し

く超える高用量を投与したときにのみ観察され，その結果広い安全域が示された。ラットの

26 週間経口投与毒性試験およびカニクイザルの 52 週間経口投与毒性試験における NOAEL は

それぞれ 30 mg/kg/日（日本人および外国人の MRHD におけるリナグリプチンの AUC0-24h, ss の

それぞれ 54 および 66 倍，CD1790 の AUC0-24h, ss のそれぞれ 21 および 28 倍）および 10 mg/kg/日（日本人および外国人の MRHD におけるリナグリプチンの AUC0-24h, ss のそれぞれ 32 および

40 倍，CD1790 の AUC0-24h, ss のそれぞれ 69 および 92 倍）であった。リナグリプチンの高用量

投与によって肝，腎，消化管，肺，リンパ組織および生殖器に所見がみられ，毒性学的標的臓

器と考えられた。しかし，高用量投与によって生殖器にみられた変化は，240 mg/kg/日（日本

人および外国人の MRHD におけるリナグリプチンの AUC0-24h, ss のそれぞれ 772 および 943倍）でも雌雄ラットの生殖能に影響を及ぼさなかった。皮膚の壊死病変あるいは膵炎を示唆す

る病変あるいは外分泌腺の毒性所見はいずれの毒性試験にも認められなかった。リナグリプチ

ンの投与によってビーグル犬に生じた偽アレルギーは 15 mg/kg/日（日本人および外国人の

MRHD におけるリナグリプチンの Cmax, ss のそれぞれ 416 および 450 倍）から観察されたが，9 mg/kg/日（日本人および外国人の MRHD におけるリナグリプチンの Cmax, ss のそれぞれ 194 お

よび 210 倍）ではみられず，また，カニクイザルにおいては 300 mg/kg/日（日本人および外国

人の MRHD におけるリナグリプチンの Cmax, ss のそれぞれ 2967 および 3207 倍）でも偽アレル

ギーはみられなかった。さらに，健康成人における臨床試験で，ビーグル犬には偽アレルギー

を生じる血漿中濃度においても同様の所見はみられなかった［CTD 5.3.3.1-1］。これらより，

偽アレルギーはビーグル犬に特有なものであり，ヒトにおいて安全性が懸念される所見ではな

いと考えられた。リナグリプチンおよび代謝物 CD 1790 は in vitro および in vivo 遺伝毒性試験により，遺伝毒

性を示なかった。マウスおよびラットで実施した 2 年間がん原性試験で，それぞれ 80 mg/kg/日（日本人および

外国人の MRHD におけるリナグリプチンの AUC0-24h, ss のそれぞれ 198 および 242 倍）および

60 mg/kg/日（日本人および外国人の MRHD におけるリナグリプチンの AUC0-24h, ss のそれぞれ

342 および 418 倍）でもがん原性はみられなかった。生殖発生毒性試験においても広い安全域が認められた。ラットの交配能，生殖能および妊娠能

には 240 mg/kg/日（日本人および外国人の MRHD におけるリナグリプチンの AUC0-24h, ss のそ

れぞれ 772 および 943 倍）でもリナグリプチン投与の影響はみられなかった。ラットおよびウ

サギのそれぞれ 240 mg/kg/日（日本人および外国人の MRHD におけるリナグリプチンの

AUC0-24h, ss のそれぞれ 772 および 943 倍）および 150 mg/kg/日（日本人および外国人の MRHDにおけるリナグリプチンの AUC0-24h, ss のそれぞれ 1591 および 1943 倍）でも催奇形性は認めら

れず，ラットおよびウサギの胚・胎児発生に関する NOAEL はそれぞれ 30 mg/kg/日（日本人

および外国人の MRHD におけるリナグリプチンの AUC0-24h, ss のそれぞれ 40 および 49 倍）お

よび 25 mg/kg/日（日本人および外国人の MRHD におけるリナグリプチンの AUC0-24h, ss のそれ

ぞれ 64 および 78 倍）であった。ラットにおける出生前及び出生後の発生並びに母動物の機能

に関する試験において母動物毒性が 300 mg/kg/日（日本人および外国人の MRHD におけるリ

ナグリプチンの AUC0-24h, ss のそれぞれ 1233 および 1506 倍）でみられたが，F1 出生児の生殖

能に影響は認められなかった。300 mg/kg/日で F1 出生児の体重推移に影響がみられたことか


31

ら，母動物の一般毒性学的 NOAEL および F1 出生児に対する NOAEL は 30 mg/kg/日（日本人

および外国人の MRHD における F1 出生児の AUC0-24h, ss のそれぞれ 40 および 49 倍）と判断

された。安全性評価が必要とされる原薬中の不純物について実施した in vitro 遺伝毒性試験で，いずれ

の不純物にも遺伝毒性はみられず，さらに，これらの不純物を含むリナグリプチンのバッチを

用いて実施した反復投与毒性試験およびがん原性試験成績からこれら不純物の高い安全性が確

認された。


32

6 参考文献一覧

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33

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