makmal serologi
DESCRIPTION
makmal serologiTRANSCRIPT
MAKMAL SEROLOGI
PENGENALAN
Di dalam makmal serologi di Hospital Nukleus Labuan, ujian yang dilakukan adalah
seperti ujian saringan HIV, HCV, denggi dan beberapa ujian lagi. Makmal serologi ini berkait
rapat dengan makmal blood bank kerana di makma inilah ujian lanjutan bagi beg pendermaan
darah dilakukan iaitu ujian penyaringan. Darah yang diterima daripada kempen derma darah
akan disaring mengikut ujian seperti Ujian HIV, HCV dan bermacam lagi.
CARTA ORGANISASI MAKMAL SEROLOGI
MAKMAL SEROLOGI
Siti Noor Aisyah Bt. Md. HussinPSMP C41
Masri B. SuhaimiJTMP U32
Tajuk Ujian : Ujian Saringan Anti-HIV
Ujian saringan Anti-HIV adalah kit enzim imunoasai untuk mengesan antigen p24 HIV dan
antibodi HIV-1(kumpulan M dan O) serta serum atau plasma pesakit dalam HIV-2. Kit ini boleh
digunakan untuk kedua-dua saringan antigen HIV dan HIV antibodi.
Bahan & Radas :
Penyediaan reagen.
NOTA : Sebelum guna, biarkan keadaan reagen berada pada suhu bilik (18-30°c).
1. Penyediaaan reagen untuk digunakan.
Reagen 1 (R1) : Mikroplat
Dalam beg foil yang tertutup, setiap plat mengandungi 12 petak kolum yang dibalut. Gunting
atau potong beg tersebut dengan menggunakan pisau berukuran 0.5 hingga 1 cm di atas
pengedap. Buka beg dan keluarkan rangka. Letakkan petak kolum plat yang tidak digunakan
semula ke dalam beg. Tutup beg dengan berhati-hati serta letakkan semula penyimpanan pada
+2-8°c.
Reagen 3 (R3) : Kawalan negatif
Reagen 4 (R4) : Kawalan positif Ab HIV
Reagen 5 (R5) : Kawalan positif Ag HIV
Reagen 6 (R6) : Konjugat 1
Reagen 10 (R10) : Larutan terakhir
2. Menyusun semula reagen
Membasuh larutan (20X perhatian) : Reagen 2 (R2)
Cairkan 1:20 dalam air suling untuk mendapatkannya dan sediakan sebelum digunakan untuk
membasuh larutan. Sediakan 800 ml untuk 1 plat bagi 12 petak kolum.
Larutan kerja konjugat 2 : Reagen 7a (R7a) + Reagen 7b (R7b)
Goncangkan botol konjugat lyophilised konjugat 2 (R7a) secara perlahan-perlahan bagi
mengelakkan terdapat kehadiran bahan asing yang ada pada penutup getah. Berhati-hati
memindahkan penutup bagi kandungan botol pencair konjugat (R7b) kepada pencair Konjugat
Lyophilised (R7a). Gantikan penutup dan biarkan selama 10 minit,goncangkan perlahan-lahan
serta songsangkan semasa ke semasa untuk memudahkan penyelenggaraan.
Larutan perkembangan enzim : Reagen 8 (R8) + Reagen (R9)
Cairkan 1:11 kromogen (R9) dalam substrat penampan (R8) (Bekas : 1 ml reagen R9 + 10 ml
reagen R8). Kestabilan adalah selama 6 jam dalam keadaan gelap serta sekali sahaja
disediakan.
Prinsip :
Ujian saringan HIV Ag-Ab adalah enzim imunoasai berasaskan prinsip jenis ‘sandwich’ untuk
mengesan antigen HIV dan untuk pelbagai antibodi berkaitan dengan virus HIV-1 serta HIV-2
dalam serum atau plasma pesakit.
Fasa pepejal dilapis dengan:
1. Monoklonal terhadap antibodi p24 antigen HIV-1.
2. Antigen dtulenkan: gp160 protein rekombinan, peptida sintetik menyerupai sepenuhnya
(seperti dikodkan oleh virus yang tidak sedia ada).
1. HIV-1 kumpulan O-spesifik epitop dan peptida yang menyerupai immunodominan
kandungan HIV 2.
Konjugat berdasarkan penggunaan:
Biotinilated antibodi poliklonal Ag HIV (Konjugat 1)
Streptavidin dan antigen HIV- Konjugat peroksidase (gp41 dan gp36 peptides menyerupai
kandungan glikoprotein epitop immunodominan HIV- 1 dan HIV.
1. Kandungan glikoprotein dan peptida sintetik yang menyerupai kumpulan O- spesifik HIV
2. epitop digunakan untuk fasa pepejal) (Konjugat 2)
Langkah-langkah prosedur tindak balas termasuklah:
3. Konjugat 1 (biotinilat antibodi poliklonal p24 Ag HIV- 1) ditambah ke dalam petak kolum
mikroplat.
4. Sampel serum dan kontrol asai akan dipipet ke dalam petak kolum.
1. Jika hadir,antigen HIV akan mengikat dengan antibodi monoklonal yang terikat
pada fasa pepejal dan konjugat 1.
2. Jika ada antibodi HIV- 1 atau HIV- 2 mengikat pada antigen dan berubah kepada
fasa pepejal konjugat 1.
3. Pemendapan konjugat 1 dan sampel akan berubah warna daripada kuning hijau
kepada biru.
4. Selepas pengeraman pada suhu 37°c dan dibasuh, ditambahkan dengan konjugat 2:
1. Streptividin bertindak balas bersama biotinilated Ab-Ag-Ab kompleks.
2. Peroksidase dilabel,antigen HIV- 1 dan HIV-2 ditulenkan mengikat dalam bentuk
antibodi IgG,IgM atau IgA untuk pada fasa pepejal.
5. Selepas pengeraman pada suhu 18-30°c,pecahan konjugat 2 diasingkan dengan teknik
membasuh. Selepas pengeraman dalam kehadiran substrat pada suhu bilik (18-
13°c),kehadiran kompleks konjugat akan menunjukkan perubahan warna.
6. Tindak balas akan berhenti dan serapan akan dibaca oleh spektrofotometer pada
450/620-700 nm.Penyerapan diukur pada sampel untuk menentukan kehadiran samada
ada atau tidak Ag HIV atau HIV- 1 dan antibodi HIV- 2.
Kaedah Ujian :
1. Terima sampel daripada kaunter
2. Pastikan nama pada tiub dan borang pesanan adalah sama. Jika tidak sama, hantar
kembali ke kaunter
3. Daftarkan maklumat pesakit dan permohonan ujian di LabNet.
4. Emparkan sampel pada kelajuan 3500 rpm selama 5 minit
5. Keluarkan kit ujian dan biarkan pada suhu bilik.
6. Pastikan tarikh luput dan strip ujian berada dalam keadaan yang baik dalam kit ujian.
7. Bahagikan 'microplate' kepada 3 bahagian dengan 4 'wells' setiap bahagian dengan
menggunakan 'marker'.
8. Labelkan 'wells' mengikut spesimen yang hendak diuji.
9. Titiskan 3 titik (75 µl) 'serum diluent' ke 'well' yang pertama, 1 titik (25 µl) ke 'well' yang
kedua, 1 titik (25 µl) ke 'well' yang ketiga dan 1 titik (25 µl) ke 'well' yang keempat dengan
menggunakan penitik.
10. Pipetkan 25 µl serum pesakit ke 'well' yang pertamadi langkah 9.
1. Lakukan pencairan bersiri dan pipet keluar 25 µl daripada 'well' yang keempat.
2. Titiskan 1 titik (25 µl) 'unsensitized particles' ke 'well' yang kedua, 1 titik (25 µl) 'HIV-1
sensitized particles' ke 'well' yang ketiga dan 1 titik (25 µl) 'HIV-2 sensitized particles' ke
'well' yang keempat.
3. Sebatikan campuran dengan diletakkan pada 'mixer' pada 1000 rpm selama 5 saat.
4. Eramkan pada suhu bilik selama 2 jam.
5. Semak keputusan. (rujuk fail pengendalian ujian serologi & kawalan kualiti). Jika
keputusan meragukan, ulangi ujian.
6. Rekodkan keputusan di LabNet, buku rekod ujian serologi , borang ujian Anti HIV 1/2
dan borang Per. Pat 301.
7. Sahkan keputusan.
8. Hantar keputusan bersama borang Per. Pat. 301 ke kaunter.
Interpretasi Ujian :
Sampel dengan kehadiran nilai kurang daripada nilai yang ditolak pada mulanya dianggap
negatif oleh ujian saringan Ag-Ab ULTRA HIV.
Keputusan hanya nilai dibawah yang ditolak (C.O – 10% < OD <
C.O).Walaubagaimanapun,perlu ditafsirkan dengan berhati-hati (ini adalah untuk
pengulanganujian dalam 2 salinan sampel yang sepadan jika sistem dan prosedur makmal
dapat melakukannya). Sampel dengan kehadiran nilai sama dengan atau lebih besar daripada
nilai yang ditolak dianggap positif oleh ujian saringan Ag-Ab ULTRA HIV. Ia perlu diuji dalam 2
salinan sebelum interpretasi keputusan akhir. Jika selepas sampel diuji, kehadiran nilai 2
salinan kurang daripada nilai yang ditolak,keputusan awal adalah tidak berulang dan sampel
disahkan negatif oleh ujian saringan Ag-Ab ULTRA HIV.
Tindak balas yang tidak diulang sering disebabkan oleh:
1. Mikroplat tidak dibasuh dengan baik.
2. Terkontaminasi oleh sampel serum atau plasma negatif dengan antibodi titre tinggi.
3. Terkontaminasi larutan subsrat oleh agen pengoksidaan ( peluntur,ion logam dan lain-
lain).
4. Terkontaminasi pemberhentian larutan.
Jika selepas pengulang ujian,kehadiran 1 salinan sama dengan atau lebih besar daripada nilai
yang ditolak,keputusan yang pertama diulang dan sampel disahkan positif oleh ujian saringan
Ag-Ab ULTRA HIV,tertakluk kepada had prosedur.
Tajuk ujian : Ujian Saringan HBs Ag ULTRA
Ujian saringan Ag HBs ULTRA merupakan satu enzim imunoasai dengan menggunakan teknik
jenis ‘sandwich’ untuk mengesan kehadiran antigen Hepatittis virus B (Ag HBs) dalam serum
atau plasma.
Bahan & Radas :
Penyediaan reagen.
NOTA : Sebelum guna, biarkan keadaan reagen berada pada suhu bilik (18-30°c).
1. Penyediaan reagen untuk digunakan.
Reagen 1 (R1) : Mikroplat
Dalam beg foil yang tertutup, setiap plat mengandungi 12 petak kolum yang dibalut.
Gunting atau potong beg tersebut dengan menggunakan pisau berukuran 0.5 hingga 1 cm
di atas pengedap. Buka beg dan keluarkan rangka. Letakkan petak kolum plat yang tidak
digunakan semula ke dalam beg. Tutup beg dengan berhati-hati serta letakkan semula
penyimpanan pada +2-8°c.
Reagen 3 (R3) : Kawalan negatif
Reagen 4 (R4) : Kawalan positif
Reagen 10 (R10) : Larutan terakhir
2. Menyusun semula reagen
Membasuh larutan (20X perhatian) : Reagen 2 (R2)
Cairkan 1:20 dalam air suling untuk mendapatkannya dan sediakan sebelum digunakan
untuk membasuh larutan. Sediakan 800 ml untuk 1 plat bagi 12 petak kolum.
Larutan kerja konjugat (R6 + R7)
Goncangkan botol konjugat lyophilised konjugat (R7) secara perlahan-perlahan bagi
mengelakkan terdapat kehadiran bahan asing yang ada pada penutup getah. Berhati-hati
memindahkan penutup bagi kandungan botol pencair konjugat (R6) kepada pencair
Konjugat Lyophilised (R7). Gantikan penutup dan biarkan selama 10 minit,goncangkan
perlahan-lahan serta songsangkan semasa ke semasa untuk memudahkan
penyelenggaraan.
Larutan perkembangan enzim : Reagen 8 (R8) + Reagen (R9)
Cairkan 1:11 kromogen (R9) dalam substrat penampan (R8) (Bekas : 1 ml reagen R9 + 10
ml reagen R8). Kestabilan adalah selama 6 jam dalam keadaan gelap serta sekali sahaja
disediakan.
Prinsip :
Ujian saringan HBs Ag adalah enzim imunoasai berdasarkan prinsip jenis ‘sandwich’ iaitu
menggunakan antibodi monoklonal dan antibodi poliklonal yang dipilih untuk kebolehan
mereka mengikat kepada subjenis pelbagai HBs Ag. Diiktiraf oleh Pertubuhan Kesihtan
Sedunia (WHO) dan perkara yang paling HBV strain yang variasi.
HBs Ag fasa pepejal dilapisi dengan antibodi monoklonal.
Konjugat HBs Ag berdasarkan antibodi monoklonal yang digunakan daripada tikus dan
antibodi poliklonal daripada kambing terhadap HBs Ag. Antibodi ini terikat untuk
peroksidase.
Kaedah :
1. Penerimaan sampel daripada Unit Tabung Darah (UTD)
2. Pastikan nombor beg darah pada tiub dan borang rekod mobile adalah sama. Jika tidak
sama, hantar kembali ke UTD.
3. Isikan borang saringan ujian.
4. Emparkan sampel pada kelajuan 3500 rpm selama 5 minit
5. Keluarkan kit ujian dan biarkan pada suhu bilik.
6. Pastikan tarikh luput dan strip ujian berada dalam keadaan yang baik dalam kit ujian.
7. Pipetkan 100 µl 'control' atau 'sample' ke strip ujian.
8. Seterusnya, tambahkan 50 µl 'conjugate (R6 + R7)' ke strip ujian di langkah 7.
9. Eramkan selama 1 jam 30 minit pada suhu 37 °C di dalam 'incubator'.
10. Selepas pengeraman, cuci strip ujian (rujuk prosedur penggunaan washer PW40).
11. Selepas cucian, tambahkan 100 µl 'TMB substrate(10 ml R8 + 1 ml R9)'.
12. Eramkan selama 30 minit pada suhu bilik (18°C-30°C) di tempat gelap.
13. Selepas pengeraman, tambahkan 100 µl 'stopping solution'.
14. Baca keputusan ujian pada panjang gelombang 450/620-700 nm (rujuk prosedur
penggunaan mesin PR3100).
15. Sahkan keputusan
16. Simpan keputusan ujian saringan dalam fail ujian saringan penderma darah.
Langkah-langkah prosedur tindak balas termasuklah:
1. Pengagihan kawalan sera dan sampel dilakukan ke dalam petak kolum mikroplat.
Pengagihan ini boleh mnejadi kawalan visual: Pewarnaan ini adalah lebih jelas
berbanding petak kolum yang kosong antara petak kolum yang ada sampel.
Pengagihan ini juga boleh menjadi kawalan automatik untuk membaca pada 490/620-
700 nm (pilihan).
2. Pengagihan konjugat berwarna merah ke dalam petak kolum.
Pengagihan ini boleh mnejadi kawalan visual: Selepas penambahan larutan
konjugat,warna pada petak kolum akan berwarna merah. Kawalan secara automatik ini
mungkin untuk bacaan spektrofotometer pada 490/620-700 nm (pilihan). Pemendapan
sampel ini juga boleh menjadi kawalan pada langkah ini untuk memanipulasikan
bacaan automatik pada 490/620-700 nm.
3. Selepas pengeraman pada 37°c semasa satu jam dan separuh konjugat dipindah
secara membasuh.
4. Pengagihan larutan substrat bewarna.
Pengagihan ini boleh mnejadi kawalan visual: Pewarnaan ini adalah lebih jelas
berbanding petak kolum yang kosong dan petak kolum larutan substart merah jambu.
Pengagihan ini juga boleh menjadi kawalan automatik untuk bacaan pada 490 nm
(pilihan).
5. Selepas 30 minit pengeraman dalam kehadiran substrat yang gelap dan suhu bilik (18-
30°c),kehadiran kompleks konjugat menunjukkan perubahan warna.
6. Pengagihan larutan terakhir.
Pengagihan ini boleh mnejadi kawalan visual: Larutan substrat pada mulanya bewarna
merah jambu akan berubah kepada jernih untuk petak kolum sampel yang tidak reaktif
dan berubah dari biru kepada kuning untuk petak kolum sampel yang posoitif.
7. Bacaan untuk ketumpatan optikal pada 490/620-700 nm dan interpretasi keputusan.
Interpretasi Ujian :
HBs Ag ULTRA. Keputusan dibawah hanya ditolak nilai (nisbah sampel antara 0.9 hingga 1).
Walaubagaimanapun, interpretasi keputusan hendaklah dilakukan dengan berhati-hati.
Pengulangan ujian dalam 2 salinan sampel yang sepadan adalah lebih baik jika sistem dan
prosedur makmal dapat melakukannya. Selepas sampel diulang semula,nilai nisbah 2 salinan
sampel kurang daripada 1,keputusan yang pertama tidak akan diulang dan sampel disahkan
negatif oleh ujian saringan HBs Ag ULTRA. Untuk reaktif awal atau sampel meragukan (0.9 <
nisbah <1),jika selepas pengulangan nilai nisbah sekurang-kurangnya satu daripada 2 salinan
adalah sama atau lebih besar daripada 1,keputusan yang pertama tidak akan diulang dan
sampel disahkan positif oleh ujian saringan HBs Ag ULTRA,tertakluk kepada had prosedur.
Tajuk ujian : Ujian Saringan HCV Ag-Ab ULTRA
Ujian saringan HCV ag-Ab ULTRA adalah enzim imunoasai untuk mengesan infeksi HCV
berdasarkan pengesanan kapsid antigen dan antibodi yang berkaitan dengan infeksi oleh virus
Hepatitis C di dalam serum atau plasma pesakit.
Bahan dan Radas :
Sebelum menggunakan reagen kit ujian saringan HCV Ag-Ab ULTRA,pastikan reagen dalam
kedaan baik pada suhu bilik selama 30 minit.
1. Penyediaan reagen untuk diguna.
Mikroplat (R1)
Dalam beg foil yang tertutup, setiap plat mengandungi 12 petak kolum yang dibalut. Gunting
atau potong beg tersebut dengan menggunakan pisau berukuran 0.5 hingga 1 cm di atas
pengedap. Buka beg dan keluarkan rangka. Letakkan petak kolum plat yang tidak digunakan
semula ke dalam beg. Tutup beg dengan berhati-hati serta letakkan semula penyimpanan pada
+2-8°c.
Konjugat 1 : Sediakan untuk digunakan (R6)
Songsangkan untuk mensebatikan sebelum diguna.
Konjugat 2 : sediakan untuk digunakan (R7)
2. Reagen yang digunakan semula
Konsentrasi larutan pembasuh untuk mencairkan R2 1:20 dalam air suling. Sediakan 800 ml
untuk 1 plat 12 petak kolum.
Larutan substrat untuk dicairkan (R8 + R9)
Reagen (R9) dicairkan menggunakan reagen R8 (contoh : 1 ml reagen R9 dalam 10 ml reagen
8ml). 10 ml mesti cukup untuk 1 hingga 12 petak kolum bagi mensebatikan.
Kawalan positif antigen (R5a + Rb)
Tuangkan kandungan R5 yang dicairkan ke dalam botol Ag R5 liopilised. Senaraikan botol dan
biarkan 10 minit dan goncang perlahan-lahan secara songsang dari semasa ke semasa untuk
memudahkan sebatian.
Prinsip :
Mikroplat fasa pepejal ujian saringan HCV Ag-Ab berlapis dengan :
1. Antibodi monoklonal terhadap kapsid protein virus Hepatitis C.
2. 2 produk protein rekombinan oleh E.coli daripada bahagian NS3 : genotip 1 dan 3a.
3. 1 antigen rekombinan daripada bukan struktural bahagian NS4.
4. Peptida bermutasi daripada bahagian strukutral kapsid genom virus hepatitis C.
Konjugat digunakan untuk :
1. Konjugat 1 (R6) : Antibodi monoklonal biotinilet tikus terhadap kapsid Hepatitis C.
Monoklonal ini tidak ada reaksi terhadap peptida bermutasi hepatitis C yang berlapis
pada mikroplat.
2. Konjugat 2 (R7) : Antibodi berlabel peroksidase tikus kepada IgG manusia dan
peroksidase berlabel streptividin.
3. Prestasi ujian termasuk langkah-langkah reaksi berikut :
4. Konjugat 1 dan sampel ditambahkan dengan kawalan sera untuk di uji pada petak
kolum. Jika antibodi HCV hadir,mereka akan terikat sebagai antigen tetap pada fasa
pepejal dan jika antigen kapsid hepatitis C hadir,antigen ini akan terikat oleh antibodi
monoklonal berlapis pada mikroplat oleh antibodi monoklonal biotinilet terhadap antigen
kapsid hepatitis C (konjugat 1).
5. Selepas pengeraman pada suhu 37°c selama 90 minit dan kaedah
pembasuhan,antibodi peroksidase berlabel IgG manusia dan peroksidase streptividin
(konjugat 2) ditambahkan. Konjugat streptividin peroksidase dengan antibodi
monoklonal biotinilet bertindak balas terhadap antigen hepatits C jika hadir. Konjugat
Anti-IgG manusia bertindak balas kepada peroksidase dan antibodi anti HCV jika hadir.
6. Selepas 30 minit pengeraman pada 37°c,enzim konjugat diasingkan melalui kaedah
pembasuhan dan menunjukkan kompleks antigen-antibodi oleh penambahan substrat.
7. Selepas 30 minit tindak balas akan berhenti,nilai serapannya dibaca dengan
menggunakan spektrofotometer pada 450/620-700nm. Serapan sampel diukur untuk
membolehkan mengesan kehadiran atau tidak hadir antibodi dan kapsid antigen HCV.
Warna intensiti berkadar pada kuantitti antibodi atau antigen HCV yang terikat pada fasa
pepejal.
Kaedah :
1. Penerimaan sampel daripada Unit Tabung Darah (UTD)
2. Pastikan nombor beg darah pada tiub dan borang rekod mobile adalah sama. Jika tidak
sama, hantar kembali ke UTD.
3. Isikan borang saringan ujian.
4. Emparkan sampel pada kelajuan 3500 rpm selama 5 minit
5. Keluarkan kit ujian dan biarkan pada suhu bilik.
6. Pastikan tarikh luput dan strip ujian berada dalam keadaan yang baik dalam kit ujian.
7. Pipetkan 100 µl 'conjugate 1 (R6)' ke strip ujian.
8. Seterusnya, tambahkan 50 µl 'control' atau 'sample' ke strip ujian di langkah 7.
9. Eramkan selama 90 minit pada suhu 37 °C di dalam 'incubator'.
10. Selepas pengeraman, cuci strip ujian (rujuk prosedur penggunaan washer PW40).
11. Selepas cucian, tambahkan 100 µl 'conjugate 2 (R7)'.
12. Eramkan selama 30 minit pada suhu 37 °C.
13. Selepas pengeraman, cuci strip ujian (rujuk prosedur penggunaan washer PW40).
14. Selepas cucian, tambahkan 80 µl 'TMB substrate(10 ml R8 + 1 ml R9)'.
15. Eramkan selama 30 minit pada suhu bilik (18°C-30°C) di tempat gelap.
16. Selepas pengeraman, tambahkan 100 µl 'stopping solution'.
17. Baca keputusan ujian pada panjang gelombang 450/620-700 nm (rujuk prosedur
penggunaan mesin PR3100).
18. Sahkan keputusan.
19. Simpan keputusan ujian saringan dalam fail ujian saringan penderma darah.
Interpretasi keputusan :
Sampel dengan ketumpatan optik kurang daripada nilai yang ditolak dianggap negatif oleh
ujian anti-HCV Ag-Ab. Keputusan nilai yang ditolak dibawah hanya (C.O -10% < OD < C.O)
walaubagaimanapun,interpretasi dilakukan dengan berhati-hati (ini kerana adalah lebih baik
untuk pengulangan ujian dalam dua salinan sampel yang sepadan apabila sistem serta
prosedur makmal membenarkan. Manakala sampel dengan ketumpatan optik tinggi
daripada,atau sama dengan nilai yang ditolak dianggap pada mulanya positif dan diuji dalam
dua salinan sebelum tafsiran terakhir.
Selepas diuji semula,sampel dianggap positif oleh ujian anti-HCV Ag-Ab jika pengukuran
kedua atau ketiga adalah positif. Tinggi daripada,atau sama dengan nilai yang ditolak,sampel
dianggap negatif jika nilai kedua-dua kurang daripada nilai yang ditolak.
Tajuk ujian : Ujian SD denggi IgG / IgM (BIOLINE)
Ujian cepat SD Bioline Denggi IgG/IgM bentuk pepejal imunokromatografik asai untuk
cepat,kualitatif dan pembezaan mengesan antibodi IgG/IgM kepada virus denggi dalam serum
manusia,plasma atau darah penuh. Ujian ini bertujuan untuk membantu secara profesional
dalam diagnosis andaian antara infeksi denggi primer atau sekunder. Ujian ini hanya
memberikan keputusan pada awal ujian. Oleh itu,penyelesaian untuk virus,antigen dikesan
dalam tissu tetap,RT-PCR dan ujian serologi seperti ujian hemagglutinasi-perencatan,kaedah
diagnosis lebih spesifik hanya digunakan dalam mengesahkan bagi infeksi virus denggi.
Bahan dan radas :
1. Pemungutan sampel.
2. Serum,plasma atau sampel darah penuh mesti digunakan dengan ujian ini.
Darah penuh.
(Pengambilan melalui salur vena).
1. Ambil darah penuh dan simpan dalam tiub (mengandungi tiub berantikoagulan seperti
heparin,EDTA dan sodium sitrat) melalui salur vena.
2. Jika spesimen darah tidak diuji segera,spesimen disimpan di dalam peti sejuk pada
suhu 2-8°C.
3. Apabila disimpan pada suhu 2-8°C,spesimen darah penuh boleh digunakan dalam masa
3 hari.
4. Untuk masa penyimpanan lebih daripada 3 hari,pembekuan adalah digalakkan.
Spesimen dibiarkan pada suhu bilik sebelum hendak digunakan.
5. Penggunaan spesimen darah menyimpan dalam jangka masa panjang lebih daripada 3
hari boleh menyebabkan reaksi tidak spesifik.
(Pemungutan menggunakan jarum lanset).
1. Bersihkan kawasan yang hendak ditusuk dengan lanset dengan swab kapas beralkohol.
2. Picit pada hujung jari dan tusukkan dengan lanset steril yang disediakan.
3. Ambil 10µl pipet kapilari yang disediakan,celupkan pada hujungdalm setitik darah
kemudian tekan darah pada pipet kapilari kepada garisan hitam.
serum atau plasma.
(Serum) pengambilan darah penuh dimasukkan ke dalam tiub (TIDAK mengandungi
antikoagulan seperti heparin,EDTA dan sodium sitrat) melalui salur vena,biarkan
selama 30 minit untuk koagulasi darah kemudian emparkan darah untuk
mendapatkan spesimen supernatan serum.
(Plasma) pengambilan darah penuh dimasukkan ke dalam tiub (mengandungi tiub
berantikoagulan seperti heparin,EDTA dan sodium sitrat) melalui salur vena
kemudian empar darah untuk mendapatkan spesimen plasma.
1. Jika spesimen serum atau plasma tidak diuji segera,spesimen boleh diletakkan dalam
peti sejuk pada suhu 2-8°C. Untuk penyimpanan jangka masa panjang lebih daripada 2
minggu,pembekuan digalakkan. Spesimen dibiarkan pada suhu bilik sebelum
digunakan.
2. Spesimen serum atau plasma mengandungi mendakan mungkin boleh tidak konsisten
pada hasil ujian.
Prinsip :
Ujian cepat SD Denggi IgG/IgM adalah direka secara serentak mengesan dan membezakan
antibodi IgG dan IgM pada virus denggi dalam serum manusia,plasma atau darah penuh. Ujian
ini juga boleh mengesan semua 4 jenis denggi dengan menggunakan rekombinan protein
denggi. Ujian SD BIOLINE Denggi IgG/IgM terdiri daripada 3 anti garisan,”G” (garisan Ujian
denggi IgG),”M” (garisan Ujian denggi IgM),dan “C”(garisan kawalan) pada atas permukaan
membran. Keputusan boleh dilihat melalui semua ketiga-tiga garisan sebelum memohon mana-
man sampel. “Garisan kawalan” ini digunakan untuk kaedah kontrol. Garisan kawalan selalunya
muncul jika kaedah prosedur ini dilakuan betul dan reagen ujian garisan kawalan berfungsi. “G”
berwarna ungu dan garisan “M” akan dapat dilihat keputusannya jika antibodi IgG dan IgM
dalam sampel cukup untuk virus denggi. Jika antibodi IgG dan IgM tidak hadir di dalam sampel
untuk virus denggi,tidak ada perubahan warna yang akan berlaku dalam “G” atau “M”. Apabila
spesimen ditambahkan ke dalam kolum sampel,anti-denggi IgG dan IgM dalam spesimen akan
bertindak balas dengan rekombinan koloid-protein konjugat emas virus denggi dan bentuk
kompleks antigen-antibodi. Kompleks bertukar panjang dan peranti ujian oleh tindakan capilari.
Anti IgG atau anti IgM manusia akan menjadi relevan dalam dua garisan ujian serta
menghasilkan garisan berwarna.
Kaedah :
1. Terima sampel daripada kaunter
2. Pastikan nama pada tiub dan borang pesanan adalah sama. Jika tidak sama, hantar
kembali ke kaunter
3. Daftarkan maklumat pesakit dan permohonan ujian di LabNet.
4. Emparkan sampel pada kelajuan 3500 rpm selama 5 minit
5. Keluarkan kit ujian dan biarkan pada suhu bilik.
6. Pastikan tarikh luput dan strip ujian berada dalam keadaan yang baik dalam kit ujian.
7. Tambahkan 10 µl serum/plasma ke ruang sampel bertanda "S" di kit ujian.
8. Titiskan 3-4 titik 'diluent' ke ruang bulat di kit ujian.
9. Tafsirkan keputusan ujian dalam 15-20 minit
10. Semak keputusan (rujuk fail pengendalian ujian serologi & kawalan kualiti). Jika
keputusan meragukan, ulangi ujian
11. Rekodkan keputusan di LabNet, buku rekod ujian serologi dan borang Per. Pat 301.
12. Sahkan keputusan.
13. Hantarkan keputusan bersama borang Per. Pat. 301 ke kaunter.
Interpretasi ujian :
Negatif (Tidak ada infeksi denggi).
Satu garisan merah jambu “C”.
Positif
1. IgM positif (Infeksi denggi primer).
Dua garisan merah jambu “C” dan “M”.
Jika positif walaupun pada “M” ia adalah lemah.
2. IgG positif (Infeksi denggi sekunder).
Dua garisan merah jambu “C” dan “G”.
Jika positif walaupun pada “G” ia adalah lemah.
3. IgG dan IgM positif (Infeksi denggi primer akhir atau sekunder awal).
Tiga garisan “C”,”M” dan “G”.
Tidak sah.
1. Tidak ada garisan “C” untuk keputsan.
2. Sampel digalakkan untuk diulang dan diuji semula.
Tajuk ujian : Ujian RPR Kit.
Antigen karbon RPR digunakan dalam ujian bukan treponemal untuk kualitatif dan separuh
kualitatif mengesan siphilis menggunakan serum (dipanaskan atau tidak dipanaskan) dan
plasma.
Bahan dan radas :
Komposisi kit.
Kandungan piawai kit mungkin berbeza-beza bergantung dengan format yang dibekalkan.
Antigen (2 ml untuk 100 ujian kit,10 ml untuk 500 ujian kit)
Reagen ini sedia untuk digunakan dan dibekalkan dalam 2 ml/10 ml botol yang dihadkan. Masa
hanya dibenarkan untuk antigen mencecah suhu bilik sebelum ujian dan perlu digoncang untuk
memastikan kehomogenan.
Positif/negatif kawalan sera.
Kawalan yang dibekalkan boleh disemak secara berkala untuk kesahihan.
Kawalan yang dibekalkan sedia untuk digunakan.
Penbahagian botol (3ml) dan jarum.
Rekaan kompenen untuk pembahagian ujian antigen RPR. Untuk kegunaan,kepilkan jarum
pada hujung botol dan lakarkan serta GONCANGKAN antigen ke dalam botol. Keluarkan setitis
atau dua titis antigen bagi menyingkirkan kebarangkalian yang tidak mencukupi dalam sampel
kerana kehadiran udara dalam jarum. Ia adalah sangat penting untuk mengekalkan botol dan
jarum dalam kedudukan menegak apabila pendispensan antigen. Pada akhir ujian,jarum yang
telah digunakan mestilah dibuang,dibilas dengan air suling dan dbiarkan kering. Jarum
pendispensan tidak perlu dihapuskan kerana ia boleh mengeluarkan lapisan silikon yang
menyebabkan terdapat sestengah antigen mengikut jarum yang boleh mengakibatkan pada
antigen yang dihantar tidak mencukupi.
Kad ujian
Kad ujian ini digunakan dengan suspensi antigen RPR terutamanya penyediaan kad berlapis
plastik. Bulatan kad ujian ini mestilah tidak pernah tersentuh dengan jari,kerana ini mungkin
boleh menyebabkan keputusan ujian tidak sah. Ujian ini hanya boleh digunakan sekali sahaja
dan kad ujian mestilah dibuang.
Pipet stirrers (100 atau 500)
Titis demi titisan serum atau plasma dipindahkan pada permukaan kad ujian dan satu titis
bersamaan kira-kira 50µl. Dalam kualitatif ujian,titisan baru mesti digunakan untuk spesimen
ujian.
Prinsip :
Sifilis adalah penyakit kelamin yang disebabkan oleh mikorganisma spiroket Treponema
pallidum. Organisma ini tidak boleh dikultur pada media tiruan,diagnosis sifilis bergantung pada
kolerasi data klinikal dengan mengesan antibodi spesifik oleh ujian serologi. Ujian VDRL
antigen “Bukan Treponemal” dimana bermaksud antibodi mengesan bukan spesifik T.
Pallidum,walaupun kehadiran kuat menunjukkan infeksi oleh organisma. Langkah-langkah
antibodi (IgG dan IgM) dihasilkan dalam respon material lipoidal yang dibebaskan daripada sel-
sel perumah yang rosak serta lipoprotein seperti material yang dilepaskan oleh spiroket.
Selepas rawatan berjaya antibodi titre akan cepat jatuh.
Ujian penyaringan serologi bagi sifilis menggunakan kardiolipin dan lesitin iaitu antigen
merupakan sampel untuk melakukan tetapi untuk menjalankan boleh membawa sebahagian
kecil keputusan positif palsu kerana seperti yang dinyatakan di atas,ujian menggunakan “Bukan
Treponema” antigen. VDRL Antigen Partikel Karbon yang telah ditukarkan VDRL Antigen
mengandungi mikro-partikular karbon1. Ini adalah rekaan yang digunakan dalam ujian
pengelompokan untuk sero-diagnosis sifilis. Patikel karbon membantu bacaan keputusan
makrokospik. Keputusan reaktif lemah lebih mudah dan senang dikenal untuk corak bukan
reaktif dimana kehadiran makroskopik yang licin dan walaupun antigen ini sesuai untuk kedua-
dua ujian slaid manual serta Ujian Reagen Automasi2.
Kaedah :
1. Terima sampel daripada kaunter
2. Pastikan nama pada tiub dan borang pesanan adalah sama. Jika tidak sama, hantar
kembali ke kaunter
3. Daftarkan maklumat pesakit dan permohonan ujian di LabNet.
4. Emparkan sampel pada kelajuan 3500 rpm selama 5 minit
5. Keluarkan kit ujian dan biarkan pada suhu bilik.
6. Pastikan tarikh luput dan strip ujian berada dalam keadaan yang baik dalam kit ujian.
7. Tambahkan 1 titik (gunakan 'dropper') RPR Carbon Antigen pada 50 µl serum/plasma di
kad ujian
8. Putarkan sampel pada kelajuan 100 rpm selama 8 minit
9. Semak keputusan(rujuk fail pengendalian ujian serologi & kawalan kualiti). Jika
keputusan meragukan, ulangi ujian
10. Rekodkan keputusan di LabNet, buku rekod ujian serologi dan borang Per. Pat 301.
11. Sahkan keputusan.
12. Hantarkan keputusan bersama borang Per. Pat 301 ke kaunter.
Interpretasi keputusan :
Pada masa 8 minit pusingan terakhir keputusan positif akan menunjukkan ciri-ciri beragglutinasi
bermula dari sedikit (reaktif lemah) kepada kuat (reaktif kuat). Keputusan reaktif sangat lemah
ciri-cirinya adalah beragglutinasi kecil sekeliiling ujian periferi. Keputusan negatif tidak dapat
menunjukkan reaksi dan menunjukkan kehadiran makroskopik licin. Spesimen positif ujian
mestilah menjadi subjek kepada kajian serologi (seperti TPHA,FTA,dan ABS) setelah prosedur
kajian serologi banyak,diagnosis bagi sifilis mestilah tidak menjadi berubah kepada keputusan
satu reaktif. Untuk kaedah separuh kuantitatif,bacaan keputusan muktamad ujian akhir adalah
positif. Jika larutan ujian meningkat (1:32) ia masih menunjukkan reaktiviti kuat,pelarutan untuk
kali kedua hendaklah diteruskan sehinggalah titik akhir titre dapat ditentukan.
Tajuk ujian :ujian TPPA Kit.
Ujian TPPA digunakan untuk mengesahkan jangkitan sifilis setelah didapati positif bagi bakteria
sifilis dengan kaedah lain. Ujian ini mengesan antibodi untuk bakteria yang menyebabkan sifilis
dan boleh digunakan untuk mengesan sifilis disemua peringkat,kecuali pada 3 hingga 4 minggu
pertama.
Bahan dan radas :
Sel ujian : Eritrosit burung dilapisi dengan antigen T.pallidum diawet.
Sel kawalan : Eritrosit burung yang tidak dilapisi dengan antigen yang diawet.
Serum kawaln positif : (Larutkan 1:20). Gunakan secara berhati-hati. Ini akan memberi titre
iaitu bersamaan 1/640:/2560 dalam ujian kuantitatif.
Serum kawalan bukan reaktif: (Larutkan 1:20). Gunakan secara berhati-hati.
Masukkan kit.
Semua reagen yang dibekalkan sedia untu digunakan.
Prinsip :
Ujian treponemal adalah ujian Kromosom Treponema Pallidum zarah (TPPA),(ujian
pengesahan) untuk mengesan serologi antibodi kepada pelbagai spesies dan subspesies
Treponema patogenik,agen penyebab sifilis,puru,pintal,bejel,sifilis endemik. Ujian ini adalah
satu prosedur kromosom pasif yang berasaskan atas menunjukkan pengagglutinasian zarah gel
yang peka dengan antigen T.Pallidum oleh antibodi yang ditemui dalam serum pesakit (1-3).
Ujian ini dicadangkan sebagai ujian pengesahan untuk menggantikan asai mikroagglutinasi bagi
antibodi T.Pallidum (MHA-TP).
Kaedah :
1. Terima sampel daripada kaunter
2. Pastikan nama pada tiub dan borang permohonan adalah sama. Jika tidak sama, hantar
kembali ke kaunter
3. Daftarkan maklumat pesakit dan permohonan ujian di LabNet.
4. Emparkan sampel pada kelajuan 3500 rpm selama 5 minit
5. Keluarkan kit ujian dan biarkan pada suhu bilik.
6. Pastikan tarikh luput dan strip ujian berada dalam keadaan yang baik dalam kit ujian.
7. Bahagikan 'microplate' kepada 3 bahagian dengan 4 'wells' setiap bahagian dengan
menggunakan 'marker'.
8. Labelkan 'wells' mengikut spesimen yang hendak diuji.
9. Titiskan 4 titik (100 µl) 'serum diluent' ke 'well' yang pertama, 1 titik (25 µl) ke 'well' yang
kedua, 1 titik (25 µl) ke 'well' yang ketiga dan 1 titik (25 µl) ke 'well' yang keempat
dengan menggunakan penitik.
10. Pipetkan 25 µl serum pesakit ke 'well' yang pertamadi langkah 9.
11. Lakukan pencairan bersiri dan pipet keluar 25 µl daripada 'well' yang keempat.
12. Titiskan 1 titik (25 µl) 'unsensitized particles' ke 'well' yang ketiga dan 1 titik (25 µl)
'sensitized particles' ke 'well' yang keempat.
13. Sebatikan campuran dengan diletakkan pada 'mixer' pada 1000 rpm selama 5 saat.
14. Eramkan pada suhu bilik selama 2 jam.
15. Semak keputusan. (rujuk fail pengendalian ujian serologi & kawalan kualiti). Jika
keputusan meragukan, ulangi ujian
16. Rekodkan keputusan di LabNet, buku rekod ujian serologi , borang ujian TPPA dan
borang Per. Pat 301.
17. Sahkan keputusan.
18. Hantarkan keputusan bersama borang Per. Pat. 301 ke kaunter.
Interpretasi keputusan :
Interpretasi kekerapan agglutinasi.
Kekerapan partikel Bacaaan Interpretasi
Partikel konsentrasi dalam bentuk seperti ‘button’
pada tengah bekas dengan sekeliling tepi yang
lembut atau licin. _ Tidak reaktif
Partikel konsentrasi dalam bentuk cecincin padat
dengan ‘lubang’ dalam sangat kecil pada tengah
bekas dengan sekeliling tepi yang lembut atau licin. _ Tidak reaktif
Partikel konsentrasi dalam bentuk cecincin padat
dengan ‘lubang’ pada tengah dan licin disekeliling
tepi. ± Tiada
kesimpulan
Partikel cecincin besar dengan bentuk multi kasar
diluar tepi dan agglutinasi periperal,dikelilingi oleh
bulatan merah kecil. 1+ Reaktif
Partikel agglutinasi merebak keluar menyeluruh
menyelaputi bawah bekas,dikelilingi oleh bulatan
merah kecil. 2+ Reaktif
Partikel yang licin menutupi atau menyelaputi kurang
daripada seluruh bawah bekas dan mungkin
dikelilingi oleh cecincin warna pucat. 3+ Reaktif
Partikel yang licin menyelaputi seluruh bawah bekas.
4+ Reaktif