meios microbiologia 2
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Meios microbiologia 2 Micronutrientes – Pequena quantidade mas funcionalmente importantes.
Manganês
Cobalto
Cobre
Molibdénio
Zinco
Macronutrientes – Grandes quantidades e desempenham papeis fundamentais na estrutura e metabolismo da célula.
Carbono
Oxigénio
Hidrogénio
Azoto
Enxofre
Magnésio
Fósforo
Fatores de Crescimento – São nutrientes acessórios, que fazem parte da célula mas eu não podem ser sintetizados pelo microrganismo.
Microrganismos heterotróficos - São organismos que usam carbono orgânico como principal fonte de carbono.
Autotróficos – São organismos que usam CO2 como principal fonte de carbono.
Cultura pura ou axénia – Tem apenas um tipo de microrganismo.
Cultura Mista – Tem vários tipos de microrganismos (muitos microrganismos diferentes).
Os meios devem conter – Nutrientes indispensáveis ao organismo em causa sob a forma assimilável.
O meio deve ser – Estéril e efetuado com técnicas de assepsia.
Fatores de crescimento
PH de 2 – 10
Tensão de oxigénio
Atividade da água Nota: A temperatura não é um fator de crescimento que possa ser posto no meio de cultura, tem a ver sim com as condições ótimas para a incubação da bactéria. Cultura – Crescimento de uma população microbiana em meios laboratoriais. Isolamento - Separação de um microrganismo a partir de uma população mista. Cultura de enriquecimento- Permite o crescimento de uma espécie microbiana em detrimento de outras. Ex.: Gelose de sangue; chocolate; coração. Meios enriquecidos – Permitem o crescimento de microrganismos fastidiosos, devido ao seu alto teor nutritivo.
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Estado Físico
Líquido
Caldos
Nutrientes dissolvidos em água
desionizada
Semi - sólido
Agar na concentração
0,3 - 0,5 %
3g Agas/L
Sólido
Agar na concentração
1 - 1,5 %
15 - 20 g Agar/ L
Tipos de “culturas”
Placas de Petri
Tubos de ensaio - Rampa - A direito
Distinção de colónias numa Placa
Cor
Aspeto
Brilho
Tipo de colónias
Classificação dos meios de cultura
Composição Química
Quimicamente Definido
Consoante o grau de exigência do microrganismo
Conhecemos o que é lá posto
Conhecemos a quantidade
exacta.
Quimicamente Complexos
Não se conhece a composição quimica
exacta.
Utiliza nutrientes complexos
Permitem o crescimento de muitos
microrganismos diferentes.
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Objectivos Funcionais
Simples Selectivos
São formulados para suprimir o crescimento de organismos que não interessam, permitindo
o crescimento dos microrgaismos que desejamos isolar.
Diferenciais
Podem crecer vários tipos de
microrganismos, mas devido ao diferente aspecto que tomam
no meio podem distinguir-se as
colónias.
Complexos
Microrganismos
Heterotróficos
Fotoheterotróficos
Compostos orgânicos
Luz
Químiolitoheterotróficos
Compostos Orgânicos
Inorgânico
Quimiorganoheterotróficos Compostos orgânicos
Orgânica
Autotróficos
Fotoautotróficos
CO2
Luz
Químioautotróficos CO2
Inorgânico
Químiorganoautotróficos
CO2 Orgânica
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Meios de Cultura
Caldo de açúcar – Para determinar se as bactérias fermentam a glucose. Resultados:
Glucose + - Cor amarela – Com gás – hidrogenoliase fórmica reage com o ácido fórmico
- Sem gás
Glucose (-) – cor vermelha Kligler - meio diferencial para a capacidade fermentativa da glucose e lactose e produção de sulfito de hidrogênio.
- Fermentação da lactose na rampa - Fermentação da glucose no fundo do tubo [Fermentação]> 10 xs na rampa do que a [glucose].
Resultados:
Amarelo na rampa e no fundo – fermentação da lactose e glucose
Amarelo só no fundo – fermentador da glucose
Amarelo só na rampa – fermentador da lactose
Vermelho – Não fermentou – Na rampa – Não fermenta a lactose - No fundo – Não fermenta a glucose - Na rampa e no fundo – Não fermenta nada
Se existir – deslocamento no fundo do tubo – formação de CO2 + H2 - Formação de precipitado negro – formação de H2S
Nota: Semeia-se em profundidade e na rampa em esteria.
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Meio MacConkey - Fermentação da Lactose. Não permite o crescimento de bactérias Gram + e fungos Resultados Bactérias Gram (-) e fermentadoras da lactose – Colónias vermelhas Bactérias Gram (-) e não fermentadoras da lactose – Colónias amarelas.
Manitol Salt Agar – Permite saber se as bactérias fermentam ou não o manitol. Não permite o crescimento de bactérias Gram (-) por causa da grande concentração de NaCl. Resultados Meio de cor amarela – bactérias fermentadoras de manitol. Meio de cor rosa – bactérias não fermentadoras de manitol.
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CLED - permite distinguir bactérias fermentadoras da lactose e não fermentadoras de lactose. Resultados Cor inicial do meio – verde Se meio de cor verde => Lac (-) – Bactérias não fermentadoras da Lactose Se meio de cor amarelo => Lac + - Bactérias fermentadoras da Lactose
ONPG – Permite saber se a bactéria possui ou não permease. Resultados Cor inicial do meio – incolor Se meio incolor – Não possui β-galactosidade Se meio amarelo – Tem β-galactosidade – que a bactéria fermenta a lactose na presença de permeases.
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OF – Serve para ver se a bactérias fermentam ou oxidam a glucose. Resultados Cor original do meio - verde
Se cor amarela( microrganismo anaeróbio facultativo) (é porque ocorre acidificação em todo o tubo) – tubo fechado Usa a glicose por
via fermentativa - tubo aberto
Se cor verde (microrganismo aeróbio estrito) – Tubo fechado
- Tubo aberto Usa a glicose por via oxidativa (ocorre acidificação no topo do tubo)
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MR-VP
+ vermelho de metilo
Se vermelho
MR+
Se incolor
MR-
Acetoína
KOH + α naftol
Anel Púrpura
VP+
Incolor
VP -
MR – VP – Indica se a bactéria produz ácidos fortes a partir do piuvato
Ocorre baixa de Ph no meio quando o teste dá MR+
As reações são mutuamente exclusivas
MR+ - Produz ácidos fortes a partir do piruvato VP+ - Produz acetoína
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Cor Original do meio
Verde
Azul - houve subida de Ph
Citrato +
Verde
Citrato -
Citratos - Uso de citrato como fonte de carbono
APP – Serve para saber se o microrganismo possui fenilalanina
desaminase
APP+ Cor verde na rampa – Tem fenilalanina desaminase
Por causa da formação de um complexo com ferro APP - Cor amarela na rampa – Não tem fenilalanina desaminase Indica a presença de ácidos provenientes da degradação da glicose
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Púrpura
Púrpura
LDC +
Com
parafina
Púrpura
LDC+
Amarelo
Preença de ácidos provenientes da
degradação da glicose
Ausência de decarboxilases
LDC -
LDC/ODC - Serve para verificar a existência de descarboxilases de aminoácidos
- O microrganismo começa por degradar a glucose acidificando o meio. Quando esta tiver sido completamente utilizada, os microrganismos que possuem a descarboxilase vão utilizar o aminoácido presente no meio tornando-o alcalino. -É necessário cobrir com parafina líquida. - Os falsos positivos acontecem quando não usamos a parafina e há uma falsa alcalinização na superfície do meio. SIM – Produção de Indol a partir do Triptofano - Mobilidade - Formação de H2S Indol + - Fromação de anel Púrpura (vermelho) no tubo + Reagente de Erlich – Kovac’s Possui Triptofanases H2S – Formação de composto de cor preta Nota: Este meio e semeado em profundidade.
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Nitratos – Redução de Nitratos NO3
- NO2- N2
NO3
- NO2- + Reagente A e B Vermelho – Bactéria tem nitrato redutases
NO3- NO2
- N2 + Reagente Incolor + Zinco Incolor Bactéria tem Nitrato Redutases NO3
-+ Reagente Incolor+Zinco Vermelho – Bactéria não tem Nitrato Redutases
Nitrato Redutases Nitrato Redutases
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NaCl 6,5% ou PYR - determina a atividade da enzima pyrrolidonil arilamidase Teste positivo – Há turvação no meio – há crescimento bacteriano Teste negativo – Não há turvação do meio – não há crescimento bacteriano
Hidrólise da Esculina – meio contém Bílis e Esulina - Não crescem bactérias Gram neg. e também muitas de Gram positivo. - Crescem bem o Enterococcus e estes vão hidrolisar a esculina – Na presença de sais férricos presentes no meio este fica preto - A exceção neste meio é o S. bovis Resultados: Teste positivo – meio de cor preta Teste negativo – meio de cor amarela (cor original)
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XLD – Xylose Desoxychocolate (xilose lisina deoxicolato) É usado para isolar enterobactérias patogénicas - Cor original do meio – vermelho
Microrganismo Crescimento Cor da Colónia
Proteus vulgaris Bom - Abundante Amarela
Proteus mirabilis Bom – Abundante Amarela
S. Thyphi Bom – Abundante Vermelha com pontos pretos
S. Typhimurium Bom – Abundante Vermelha com pontos pretos
Sigella dysenteriae Bom – Abundante Vermelha
Enterobater aerogenes Pobre Amarela
E.Coli Pobre Amarela
Staphylococcus Aureus Inibido -
SS –Destinado a isolar Salmonella e Sigella - Contém sais biliares e verde brilhante Cor original do meio – Rosa Alaranjado
Oraganismo Cor das colónias
Sigella Transparentes
Salmonella Transparentes com centro negro
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MacConkey Sorbito Agar - A E. coli O157: H7 difere da maioria das outras estirpes de E. coli por ser incapaz de fermentar sorbitol. - No meio MacConkey sorbitol, a lactose é substituída por sorbitol. - A maioria das estirpes de E. coli fermentar sorbitol para produzir ácido, a E. coli O157: H7 não pode fermentar sorbitol, de modo que esta estirpe utiliza a peptona par a crescer. Isto eleva o pH do meio, permitindo que a estirpe O157: H7 possa ser distinguida de outras estirpes de E. coli.
Resultado: Positivo – Crescimento de colónias vermelhas
Ctalase Enzima intracelular que decompões o peróxido de hidrogénio encontrado no citoplasma de procariotas. 2H2O2 2H2O + O2
Teste Positivo – formação de bolhas Teste negativo – Não formação de bolhas Oxidase - Ultimo aceitador de eletrões no citocromo C - Encontrado em proteínas transmembranares de bactérias e mitocôndrias - Coverte O2 em H2O DNAse Enzima responsável pela quebra das ligações no DNA durante a apoptose. Verificar se o microrganismo possui a enzima desoxiribonuclease, a qual degrada o ácido nucléico (DNA). Resultados:
Formação de halo transparente, identifica Staphylococcus aureus; Ausência de formação de halo transparente, identifica Staphylococcus coagulase
negativa.
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Coagulase É uma adesina produzida pelo staphylococcus aureus e staphylococcus intermedius. - No laboratório é usado para distinguir os diferentes tipos de staphylococcus. - Teste negativo exclui a presença de S. aureus. - A coagulase não é uma enzima. - Reage com a protrombina no sangue. Factor de coagulação Teste positivo – no eppendorf a solução fica colada ao fundo. Teste negativo - no eppendorf a solção escorre dentro do tubo. Adesina – complexo proteico que reconhece e se liga a recetores também proteicos na superfície das células do hospedeiro. Pili
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