Mousumi Paul2017年11月

微生物快速检验法

RAPID MICRO METHODS

提 纲

• 引言 –为什么要使用微生物快速检验法（RMM）?

• 方法概述– 操作的基本原理– RMM实例/创新技术

• 默沙东公司对RMM的愿景与策略

• RMM实施策略– 注册与验证的考虑– 全球实施策略

• 有关RMM的法规和指南

• 总结

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QC实验室自动化和效率

自动化(条码监测, 自

动读取)

效率 –转换成FTE

现场检测

缩短前置时间

缩短产品放行的

检验周期

快速解决问题

的工具/协助调查

质量: 有风险时，

可选择不生产

快速确保低或无生物

负荷

提高过程控制

(频繁或实时监测)

RMM可对微生物进

行客观分析(排除人为

因素)

快速方法能缩短获得结果的时间（前置时间较短），使微生物实验室检验自动化（节省成本）和在发生污染事件时进行设施保护，增加早期介入的可能性（质量更高）。3

RMM是实现最高质量、最短前置时间和最低成本的手段

常规方法

• 100 %基于微生物生长

• 目视检查生长

• 这意味着你必须耐心等待结果

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微生物检测项目 培养时间

常规 RMM

需氧菌总数 5-7天 3天

无菌检查(放行) 14-28天 7天

有/无污染(IPC) 14-28天 7天

内毒素检查 1小时 15分钟

微生物鉴定 7天 基于使用的方法，每次运行45个样本

需3-26小时。

支原体检查 28天 7天

报告时间 = 样本运送到实验室的时间 管理时间 样本准备时间 样本培养时间 分析时间 核查时间 批准时间 报告结果时间

产品放行周期是上述所有依次活动的时间之和。这表明要改变总的前置时间必须加速所有活动。

快速方法

采用RMM法缩短检验周期（培养时间）

常规微生物检验法 vs. 微生物快速检验法 (RMM)

1. 基于微生物生长的检验技术

BacT/ALERT：二氧化碳比色法

直接增长：自发荧光

Milliflex Quantum：荧光染色

2. 活微生物直接检验技术

流式细胞计量术：荧光

MuScan：荧光扫描和图像分析

3. 微生物细胞特定组分的分析技术

Q-PCR：核酸检测

MicroSEQ：基因型鉴定

4. 1 & 2，3之间的混合检验技术

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微生物检验法基本原理

• 取代常规无菌检查– 适于流体（ ≤10ml ），也适于含细胞流体检测– 常用于医院血液无菌检查

• 原理– 检测CO2

– 有CO2存在时指示剂显黄色– 用于原液污染控制

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CO2比色法用于污染检测

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富集步骤(7天) DNA分离(45分钟) qPCR (3小时)

Day 3 Day 7 Day 14

14天 14天 14天

0.2 mL

10 mL

14天常规方法:

28天

快速方法:

1-7 天

+在第0天进行检测以最

小化生产过程中的风险：

检测低水平的支原体

mAb和疫苗的支原体检查

+指示剂细胞培养法

液体培养基和琼脂培养法

微生物快速检验技术生物负荷检查

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• 基于微生物生长

• 结果获得时间: 2.5 – 3天; 染色提高方法灵敏度

• 无破坏性, 可鉴定微生物

• 可视为改进的药典方法

• 基于微生物生长

• 高通量，负载可变

• 获得结果的时间: 2.5 – 3天

• 条码和使用LIMS界面

• 无破坏性,可鉴定微生物

• 可进行早期检测和干预，系统实时报警

• 不基于微生物生长, 直接检测法

• 结果获得时间 ：1小时无需培养

• 灵敏度高：该方可检测活的不可培养的微生物

• 适于解决紧急问题

• 无法进行批处理

Milliflex Quantum Growth Direct MuScan

微生物快速检验技术无菌检查

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• 适用于混悬液产品/无法过滤的低容量样品

• 因可现场培养，是工艺分析技术的理想方法

• 系统采用药典培养基和温度

• 如生物制品生产所用培养基中含有抗生素，

能够克服该干扰

• 结果可自动读出，包括阳性结果通知

• 可使用LIMS界面

• 检测周期缩短50%

• 高通量，负载可变

• 便于采纳类似于目前无菌检查的过滤方法

• 本法是一种过滤方法，故不适用于混悬液

• 可进行早期检测和干预，系统实时报警

• 采用非药典培养基，在22.5°C和32.5°C

下进行的需氧培养有3种培养条件，在32.5°C

下进行的厌氧培养有1种培养条件

• 条码和使用LIMS界面

• 检测周期缩短~50%，培养时间从14天缩短至7天

• 高通量，负载可变

BacT/Alert Growth Direct

已上市产品由常规检验法向

微生物快速检验法过渡

新产品/新工艺建立早期整合的指导文件

和策略部署

开发工作案例

向生产厂/业务部门推荐

与生产厂/业务部门协同工作

让默沙东实验室，工艺研发组和外部生产单位共同参与

根据产品类型和采取的策略选择相应技术方法

将RMM移交给默沙东内部和外部生产厂／ＱＣ实验室

默沙东公司ＲＭＭ愿景与策略

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注册

对于新产品

- RMM采用备案方法

- 基本原则: 快速检验方法需进行验证

-与默沙东实验室协作（与分析负责人，产品研发

组和临床前研发组进行早期沟通和洽谈）

对于现有产品

- 开发全球推广时间线

- 需开展前期研发工作

- 希望证明传统方法和替代方法的可比性

验证

- 证明参数相等

- 与统计学小组密切协作进行试验设计

- 将药典方法作为方法性能的参考标准（如

将USP, EP, JP等视为金标准）

- 在选择微生物时 – 理解审评机构希望看

到低水平回收率

定量方法

准确度，LOD&LOQ，线性，精密度

和耐用性

定性方法

特异性, 准确度, LOD, 耐用性

验证的主要考虑: • 微生物检验的变异性非常大• 不能准确掺入预先规定数量的微生物• 发生假阳性结果可掩盖缺乏灵敏度

注册与验证的考虑

商业流程的考虑: • 评估变更对RMM的影响，并决定是否继续执

行• 包含监管机构的反馈意见，可完善后续申报

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在多个生产厂取代常规检验方法

在多个生产厂实施微生物快速检验取得高效益

方法建立

和验证

技术评估和

工作案例开发

方法转移/

适用性试验

方法转移/

适用性试验

方法转移/

适用性试验

可行性研究实施

A 生产厂

第1阶段

第2阶段

RMM的全球实施策略

B 生产厂 C 生产厂

• FDA鼓励采用RMM:

2012年６月４日颁布的美国联邦法规21章600, 610和680款修正案， 要求对生

物制品进行无菌检查：

“食品药品管理局（ FDA ）正在修订生物制品无菌检查要求。

该规定修改了对联邦法规（ CFR ）21章Ｆ分章600 － 680款规定下的大部分生

物制品的无菌性要求，旨在促进无菌检查方法的改进和创新 ，给予产生商在对

某些上市新产品进行无菌检查时的灵活性，加强对目前已批准产品的无菌检查，

鼓励生产商在无菌检查方法中采用先进的科学技术。”

FDA鼓励采创新

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《中国药典》2015年版四部通则9201

药品微生物检验替代方法验证指导原则

• 一般要求

• 方法验证的概括性指南

• 对验证参数信息的要求取决于方法类型

• 微生物定性检验方法验证

• 微生物定量检验方法验证

来自《中国药典》2015年版正文 ：

“ 这些方法与传统检查方法比较，或简便快速，或具有实时或近实时监控的潜力，使生产早期采取纠正措施及监控和指导优良生产成为可能，同时新技术的使用也促进了生产成本降低及检验水平的提高。

在控制药品微生物质量中，微生物实验室出于各种原因如成本、生产量、快速简便及提高药品质量等需要而采用非药典规定的检验方法（即替代方法）时，应进行替代方法的验证，确认其应用效果优于或等同于药典的方法。”

RMM相关法规及指南《中国药典》2015年版

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USP通则<1223> 微生物检验替代方法验证

• 验证用作药典微生物检验方法的替代方法的指南• 讨论微生物检验方法变异性和与药典方法可比性

方面所面临的挑战

EP通则5.1.6 微生物质量控制替代方法

• 微生物检验替代方法指南• 如果微生物检验替代方法能节约微生物检验的成

本，同时提高对药品质量的保证，应推动该方法的实施和使用

PDA TR 33, 微生物快速检验法和替代方法的评价，验证和实施

• 讨论微生物检验方法所面临的挑战——获得结果的时间长，可能无法恢复微生物生长，尤其在不利环境中和休眠状态下

• 将微生物学与QbD和质量风险管理原则联系起来• 指导文件，政策和法规变化，验证预期等• RMM的价值, 不断改进和风险

ICH Q2(R1)分析方法验证 • 方法验证概括性指南• 对验证参数信息的要求取决于方法类型

RMM相关法规及指南

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RMM的驱动因素显著降低获得结果的时间和缩短产品放行时间。解决数据完整性问题，同时提高自动化和效率。提高工艺控制，通过早期检验和介入进行设施保护。可用作快速解决问题的工具。

可获得RMM 技术的完整资料。

重点关注生产过程，以选出正确的方法进行应用。

这些RMM需进行验证。替代方法将获得等同于药典方法的结果。

RMM的广泛接受度。

默沙东 在微生物学实验室，统计组与生产厂之间建立了紧密协作，以进行方法建立，验证和实施。

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总结

THANK YOU