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ICH Q5A(R1) Viral Safety Evaluation of Biotechnology Products Derived from Cell Lines of Human or Animal Origin

GI014A

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INTERNATIONAL CONFERENCE ON HARMONISATION OF TECHNICAL

REQUIREMENTS FOR REGISTRATION OF PHARMACEUTICALS FOR HUMAN USE

ICH HARMONISED TRIPARTITE GUIDELINE

사람 또는 동물 기원 세포주 유래 생명 공학 제품의

바이러스 안전성 평가

(Viral Safety Evaluation of Biotechnology

Products Derived From Cell Lines of Human or

Animal Origin)

Q5A(R1)

Current Step 4 version

dated 23 September 1999

This Guideline has been developed by the appropriate ICH Expert Working Group

and has been subject to consultation by the regulatory parties, in accordance with

the ICH Process. At Step 4 of the Process the final draft is recommended for

adoption to the regulatory bodies of the European Union, Japan and USA.


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Q5A(R1)

Document History

First

Codification

History Date New

Codification

November

2005

Q5A Approval by the Steering Committee under

Step 2 and release for public consultation

1

December

1995

Q5A

Q5A Approval by the Steering Committee under

Step 4 and recommendation for adoption

to the three ICH regulatory bodies

5 March

1997

Q5A

Current Step 4 version

Q5A Approval by the Steering Committee of the

post Step 4 editorial corrections

23

September

1999

Q5A(R1)


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VIRAL SAFETY EVALUATION OF BIOTECHNOLOGY PRODUCTS DERIVED

FROM CELL LINES OF HUMAN OR ANIMAL ORIGIN

ICH Harmonised Tripartite Guideline

Having reached Step 4 of the ICH Process at the ICH Steering Committee meeting

on 5 March 1997, this guideline is recommended for adoption to the three

regulatory parties to ICH.

(This guideline includes the typographic correction on Table A-1: the Genome of the

Reovirus 3 is RNA, agreed by the Steering Committee on 23 September 1999)

목차

I. 서론(INTRODUCTION)

II. 바이러스 오염원(POTENTIAL SOURCES OF VIRUS CONTAMINATION)

A. MCB에서 발생할 수 있는 바이러스(Viruses That Could Occur in the

Master Cell Bank (MCB))

B. 생산 중에 유입될 수 있는 외래성 바이러스(Adventitious Viruses That

Could Be Introduced during Production)

III. 세포주 적격성평가: 바이러스 시험(CELL LINE QUALIFICATION: TESTING

FOR VIRUSES)

A. MCB, WCB, 생산용 체외 세포 연령 한계 상태 세포의 권장 바이러스

시험(Suggested Virus Tests for MCB, Working Cell Bank (WCB) and

Cells at the Limit of in vitro Cell Age Used for Production)

1. MCB(Master Cell Bank)

2. WCB(Working Cell Bank)

3. 생산용 체외 세포 연령 한계 상태 세포(Cells at the Limit of in vitro

Cell Age Used for Production)

B. 권장 바이러스 검출 및 확인 분석(Recommended Viral Detection and

Identification Assays)

1. 레트로바이러스 시험(Tests for Retroviruses)

2. 체외 분석(In vitro Assays)

3. 체내 분석(In vivo Assays)

4. 항체 생산 시험(Antibody Production Tests)

C. 세포주의 적합성(Acceptability of Cell Lines)

IV. 미가공 벌크의 바이러스 시험(TESTING FOR VIRUSES IN UNPROCESSED


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BULK)

V. 정제 벌크의 바이러스 시험 및 바이러스 클리어런스 실험의 근거와 추진

계획(RATIONALE AND ACTION PLAN FOR VIRAL CLEARANCE

STUDIES AND VIRUS TESTS ON PURIFIED BULK)

VI. 바이러스 클리어런스 절차의 특성 분석 및 평가(EVALUATION AND

CHARACTERISATION OF VIRAL CLEARANCE PROCEDURES)

A. 바이러스 클리어런스 평가 및 특성 분석을 위한 바이러스 선택(The Choice

of Viruses for the Evaluation and Characterisation of Viral Clearance)

1. "관련" 바이러스와 "모델" 바이러스("Relevant" Viruses and "Model"

Viruses)

2. 기타 고려 사항(Other Considerations)

B. 바이러스 클리어런스 평가 및 특성 분석 실험의 디자인 및 의미(Design

and Implications of Viral Clearance Evaluation and Characterisation

Studies)

1. 시설 및 작업자(Facility and Staff)

2. 규모 축소 생산 시스템(Scaled-Down Production System)

3. 단계별 바이러스 제거 분석(Analysis of Step-Wise Elimination of

Virus)

4. 물리적 제거와 불활화(Determining Physical Removal versus

Inactivation)

5. 불활화 평가(Inactivation Assessment)

6. 칼럼의 기능 및 재생(Function and Regeneration of Columns)

7. 특이적 주의 사항(Specific Precautions)

C. 바이러스 클리어런스 실험의 해석(Interpretation of Viral Clearance

Studies)

D. 바이러스 클리어런스 실험의 한계(Limitations of Viral Clearance Studies)

E. 통계(Statistics)

F. 바이러스 클리어런스의 재평가(Re-Evaluation of Viral Clearance)

VII. 요약(SUMMARY)

VIII. 용어정의(GLOSSARY)

Table 1: 여러 세포 레벨에서 1회 실시하는 바이러스 시험(Virus Tests to Be

Performed Once at Various Cell Levels)

Table 2: 바이러스 시험에 사용할 수 있는 분석 방법의 용도와 한계(예)(Examples

of the Use and Limitations of Assays Which May Be Used to Test for

Virus)


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Table 3: 항체 생산 시험에서 검출되는 바이러스(Virus Detected in Antibody

Production Tests)

Table 4: 정제 벌크의 바이러스 시험 및 바이러스 클리어런스 공정 평가를 위한 추진

계획(Action Plan for Process Assessment of Viral Clearance and Virus

Tests on Purified Bulk)

APPENDIX 1 특성 분석이 완료된 세포 뱅크를 체내에서 증식시켜 생산하는

제품(Products Derived from Characterised Cell Banks which Were

Subsequently Grown in vivo)

APPENDIX 2 바이러스 클리어런스 실험을 위한 바이러스 선택(The Choice of Viruses

for Viral Clearance Studies)

Table A-1: 바이러스 클리어런스 실험에 사용되는 바이러스의 예(Examples of Viruses

Which Have Been Used in Viral Clearance Studies)

APPENDIX 3 바이러스 분석 결과 평가 시의 통계학적 고려 사항(Statistical

Considerations for Assessing Virus Assays)

APPENDIX 4 바이러스 클리어런스 실험 시의 감소율 계산(Calculation of Reduction

Factors in Studies to Determine Viral Clearance)

APPENDIX 5 용량별 입자 추정치 계산(Calculation of Estimated Particles per Dose)


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VIRAL SAFETY EVALUATION OF BIOTECHNOLOGY PRODUCTS DERIVED

FROM CELL LINES OF HUMAN OR ANIMAL ORIGIN

I. 서론(INTRODUCTION)

This document is concerned with testing and evaluation of the viral safety of

biotechnology products derived from characterised cell lines of human or animal

origin (i.e., mammalian, avian, insect) and outlines data that should be submitted

in the marketing application/registration package. For the purposes of this

document the term virus excludes nonconventional transmissible agents like those

associated with Bovine Spongiform Encephalopathy (BSE) and scrapie. Applicants

are encouraged to discuss issues associated with BSE with the regulatory

authorities.

이 문서는 사람 또는 동물에서 기원하며 특성 분석이 완료된 세포주 유래 생명 공학 제품의

바이러스 안정성 시험과 평가에 관한 것으로, 판매 신청 문서/등록 문서에 포함시켜

제출해야 할 데이터를 기술한다. 이 문서에서 "바이러스"라는 용어는 BSE나 스크래피와

관련된 것과 같은 비전통적인 전염성 인자를 제외한다. BSE 관련 사항은 규제 기관과

협의할 것을 권장한다.

The scope of the document covers products derived from cell cultures initiated from

characterised cell banks. It covers products derived from in vitro cell culture, such

as interferons, monoclonal antibodies and recombinant DNA-derived products

including recombinant subunit vaccines, and also includes products derived from

hybridoma cells grown in vivo as ascites. In this latter case, special considerations

apply and additional information on testing cells propagated in vivo is contained in

Appendix 1. Inactivated vaccines, all live vaccines containing self-replicating agents,

and genetically engineered live vectors are excluded from the scope of this

document.

이 문서는 특성 분석이 완료된 세포 뱅크의 세포 배양 유래 제품을 대상으로 한다. 체외

세포 배양 유래 제품(예, 인터페론, 단클론 항체, 재조합 아단위 백신을 포함한 재조합

DNA 유래 제품)을 대상으로 하며, 체내에서 복수로 증식된 하이브리도마 세포 유래 제품도

대상에 포함된다. 하이브리도마 세포 유래 제품인 경우에는 특별히 고려해야 할 사항이

있으며, 체내 증식 세포의 시험에 관한 자세한 사항은 부록 1에 정리되어 있다. 불활화

백신, 자가 복제 인자를 함유하는 모든 생백신, 유전자 조작 생벡터는 이 문서의 범위에서

제외된다.


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The risk of viral contamination is a feature common to all biotechnology products

derived from cell lines. Such contamination could have serious clinical

consequences and can arise from the contamination of the source cell lines

themselves (cell substrates) or from adventitious introduction of virus during

production. To date, however, biotechnology products derived from cell lines have

not been implicated in the transmission of viruses. Nevertheless, it is expected that

the safety of these products with regard to viral contamination can be reasonably

assured only by the application of a virus testing program and assessment of virus

removal and inactivation achieved by the manufacturing process, as outlined below.

바이러스 오염 리스크는 세포주 유래 모든 생명 공학 제품에 공통적인 특징이다. 바이러스

오염은 심각한 임상 영향을 유발할 수 있으며, 세포주 자체(세포 기질)의 오염이나 생산

시의 외래성 바이러스 유입에 의해 발생한다. 그러나 현재까지 세포주 유래 생명 공학

제품이 바이러스 전파에 관련되었던 적은 없다. 그럼에도 불구하고 바이러스 오염과 관련된

이들 제품의 안전성은, 아래에서 기술하고 있는 바와 같은 제조 공정의 바이러스 제거 및

불활화 능력 평가와 바이러스 시험 프로그램의 적용에 의해서만 합리적으로 보장될 수 있을

것이다.

Three principal, complementary approaches have evolved to control the potential

viral contamination of biotechnology products:

생명 공학 제품의 바이러스 오염 가능성을 관리하기 위하여, 상보적인 세 가지 기본 방법이

개발되었다.

a) selecting and testing cell lines and other raw materials, including media

components, for the absence of undesirable viruses which may be infectious

and/or pathogenic for humans;

사람에게 감염되거나 병을 유발할 수 있는 바람직하지 않은 바이러스가 없는

세포주와 기타 원료(배지 성분 포함)을 선정하고, 그와 같은 바이러스의 존재 여부를

시험한다.

b) assessing the capacity of the production processes to clear infectious viruses;

생산 공정의 감염성 바이러스 클리어런스 능력을 평가한다.

c) testing the product at appropriate steps of production for absence of

contaminating infectious viruses.


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적정 생산 단계의 제품을 대상으로 감염성 바이러스 오염 여부를 시험한다.

All testing suffers from the inherent limitation of quantitative virus assays, i.e., that

the ability to detect low viral concentrations depends for statistical reasons on the

size of the sample. Therefore, no single approach will necessarily establish the

safety of a product. Confidence that infectious virus is absent from the final product

will in many instances not be derived solely from direct testing for their presence,

but also from a demonstration that the purification regimen is capable of removing

and/or inactivating the viruses.

모든 시험 방법은 정량적 바이러스 분석 능력이 제한적이라는 내재적 문제를 갖고 있다.

낮은 농도의 바이러스를 검출할 수 있는 능력은 통계적인 이유에서 검체의 규모에 달려

있다. 그러므로 한 가지 방법만으로 제품의 안전성이 확립되지 않는다. 바이러스의 존재를

직접적으로 시험하여 확인하고 정제 기법이 바이러스의 제거 및/또는 불활화에 효과적임을

증명함으로써, 최종 제품에 감염성 바이러스가 없다는 신뢰를 확보할 수 있다.

The type and extent of viral tests and viral clearance studies required at different

steps of production will depend on various factors and should be considered on a

case-by-case and step-by-step basis. The factors that should be taken into account

include the extent of cell bank characterisation and qualification, the nature of any

viruses detected, culture medium constituents, culture methods, facility and

equipment design, the results of viral tests after cell culture, the ability of the

process to clear viruses, and the type of product and its intended clinical use.

여러 생산 단계에서 요구되는 바이러스 시험과 바이러스 클리어런스 실험의 유형과 강도는

여러 요소의 영향을 받으며, 경우별로 단계적으로 검토해야 한다. 고려해야 할 요소로는

세포 뱅크 특성 분석 및 적격성평가 정도, 검출된 바이러스의 특성, 배양 배지 구성 성분,

배양 방법, 시설 및 설비 디자인, 세포 배양 이후 바이러스 시험 결과, 공정의 바이러스

클리어런스 능력, 제품 유형 및 제품의 예정 임상 용도가 있다.

The purpose of this document is to provide a general framework for virus testing,

experiments for the assessment of viral clearance and a recommended approach for

the design of viral tests and viral clearance studies. Related information is described

in the appendices and selected definitions are provided in the glossary.

이 문서의 목적은 바이러스 시험, 바이러스 클리어런스 평가 실험의 일반적인 틀과

바이러스 시험 및 바이러스 클리어런스 실험 디자인을 위한 권장 방법을 제공하는데 있다.

부록에 관련 정보를 기술했으며, 일부 용어의 의미도 따로 정리했다.


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The manufacturers should adjust the recommendations presented here to their

specific product and its production process. The approach used by manufacturers in

their overall strategy for ensuring viral safety should be explained and justified. In

addition to the detailed data which is provided, an overall summary of the viral

safety assessment would be useful in facilitating the review by regulatory

authorities. This summary should contain a brief description of all aspects of the

viral safety studies and strategies used to prevent virus contamination as they

pertain to this document.

제조업체는 해당 제품과 생산 공정을 감안해 이 문서에 제시된 권고 사항을 조정해

적용해야 한다. 바이러스 안전성 보장을 위한 제조업체의 전반적인 전략과 이를 위한

방법을 설명하고 그 타당성을 제시한다. 제공된 데이터 이외에도, 바이러스 안전성 평가

결과의 요약 정보는 규제 기관의 심사에 도움이 될 수 있다. 이 문서와 관련하여 바이러스

오염 예방을 위한 전략과 바이러스 안전성 실험의 모든 부분을 간단히 기술하여 요약

정보에 포함시킨다.

II. 바이러스 오염원(POTENTIAL SOURCES OF VIRUS CONTAMINATION)

Viral contamination of biotechnology products may arise from the original source of

the cell lines or from adventitious introduction of virus during production processes.

생명 공학 제품의 바이러스 오염은 세포주의 원래 출처 또는 생산 공정 중의 외래성

바이러스 유입에 의해 발생될 수 있다.

A. MCB에서 발생할 수 있는 바이러스(Viruses That Could Occur in the

Master Cell Bank (MCB))

Cells may have latent or persistent virus infection (e.g., herpesvirus) or

endogenous retrovirus which may be transmitted vertically from one cell generation

to the next, since the viral genome persists within the cell. Such viruses may be

constitutively expressed or may unexpectedly become expressed as an infectious

virus.

잠복성 또는 지속성 바이러스(예, herpesvirus) 또는 세대에 걸쳐 수직으로 전파될 수 있는

내인성 레트로바이러스에 세포가 감염될 수 있다. 바이러스 유전체가 세포에서 지속적으로

잔존할 수 있기 때문이다. 그와 같은 바이러스가 구조적으로 발현되거나 예상치 못하게

감염성 바이러스로 발현되기도 한다.


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Viruses can be introduced into the MCB by several routes such as: 1) derivation of

cell lines from infected animals; 2) use of virus to establish the cell line; 3) use of

contaminated biological reagents such as animal serum components; 4)

contamination during cell handling.

바이러스가 MCB에 유입되는 경로는 다양하다. 1) 세포주가 감염된 동물에서 유래한 것일

수 있다. 2) 바이러스를 이용하여 세포주를 확립하기도 한다. 3) 오염된 생물학적 시약(예,

동물 혈청 성분)의 사용으로 유입될 수 있다. 4) 세포 취급 시에 오염되기도 한다.

B. 생산 중에 유입될 수 있는 외래성 바이러스(Adventitious Viruses That

Could Be Introduced during Production)

Adventitious viruses can be introduced into the final product by several routes

including, but not limited to, the following: 1) the use of contaminated biological

reagents such as animal serum components; 2) the use of a virus for the induction

of expression of specific genes encoding a desired protein; 3) the use of a

contaminated reagent, such as a monoclonal antibody affinity column; 4) the use of

a contaminated excipient during formulation; 5) contamination during cell and

medium handling. Monitoring of cell culture parameters can be helpful in the early

detection of potential adventitious viral contamination.

다음을 포함하되 이에 국한되지 않는 여러 경로로, 외래성 바이러스가 최종 제품에 유입될

수 있다. 1) 오염된 생물학적 시약(예, 동물 혈청 성분) 사용, 2) 원하는 단백질을

인코딩하는 특정 유전자의 발현 유도에 바이러스 사용, 3) 오염된 시약(예, 단클론 항체

친화성 칼럼) 사용, 4) 조제 시에 오염된 첨가제 사용, 5) 세포와 배지 취급 시에 오염.

세포 배양 파라미터의 모니터가 외래성 바이러스 오염의 조기 검출에 도움이 될 수 있다.

III. 세포주 적격성평가: 바이러스 시험(CELL LINE QUALIFICATION: TESTING

FOR VIRUSES)

An important part of qualifying a cell line for use in the production of a

biotechnology product is the appropriate testing for the presence of virus.

생명 공학 제품 생산에 사용되는 세포주의 적격셩펑가에서 중요한 부분은, 바이러스 존재

여부의 적절한 시험이다.

A. MCB, WCB, 생산용 체외 세포 연령 한계 상태 세포의 권장 바이러스


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시험(Suggested Virus Tests for MCB, Working Cell Bank (WCB) and

Cells at the Limit of in vitro Cell Age Used for Production)

Table 1 shows an example of virus tests to be performed once only at various cell

levels, including MCB, WCB and cells at the limit of in vitro cell age used for

production.

표 1은 MCB, WCB, 그리고 생산용 체외 세포 연령 한계 상태 세포를 포함하여, 여러 세포

단계에서 실시하는 바이러스 시험의 예를 정리한 것이다.

1. MCB(Master Cell Bank)

Extensive screening for both endogenous and non-endogenous viral contamination

should be performed on the MCB. For heterohybrid cell lines in which one or more

partners are human or non-human primate in origin, tests should be performed in

order to detect viruses of human or non-human primate origin as viral

contamination arising from these cells may pose a particular hazard.

MCB에 대하여 내인성 바이러스와 비내인성 바이러스 오염 여부를 광범위하게

스크리닝한다. 하나 이상의 파트너가 사람이거나 비사람 영장류인 헤테로하이브리드

세포주인 경우에는, 이 세포로 인한 바이러스 오염이 특별한 위해 요소가 될 수 있으므로,

사람 또는 비사람 영장류 유래 바이러스를 검출하기 위한 시험을 실시해야 한다.

Testing for non-endogenous viruses should include in vitro and in vivo inoculation

tests and any other specific tests, including species-specific tests such as the

mouse antibody production (MAP) test, that are appropriate, based on the passage

history of the cell line, to detect possible contaminating viruses.

비내인성 바이러스 시험으로는, 세포주의 계대 이력에 근거하여 오염 바이러스 검출에

적절한 MAP(mouse antibody production) 시험 같은 종 특이적 시험을 포함하여,

체외/체내 접종 시험과 기타 특이적 시험을 포함해 실시한다.

2. WCB(Working Cell Bank)

Each WCB as a starting cell substrate for drug production should be tested for

adventitious virus either by direct testing or by analysis of cells at the limit of in

vitro cell age, initiated from the WCB. When appropriate non-endogenous virus

tests have been performed on the MCB and cells cultured up to or beyond the limit


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of in vitro cell age have been derived from the WCB and used for testing for the

presence of adventitious viruses, similar tests need not be performed on the initial

WCB. Antibody production tests are usually not necessary for the WCB. An

alternative approach in which full tests are carried out on the WCB rather than on

the MCB would also be acceptable.

의약품 생산의 출발 세포 기질인 각 WCB에 대하여, WCB부터 시작하여 체외 세포 연령

한계 상태 세포의 분석이나 직접 시험을 통해 외래성 바이러스 시험을 실시한다. MCB에

대하여 적절한 비내인성 바이러스 시험을 실시하고, 체외 세포 연령 한계 시점 이상까지

배양한 세포가 WCB에서 유래하며 이에 대하여 외래성 바이러스 시험을 하는 경우, 초기

WCB에 대하여 유사한 시험을 실시할 필요는 없다. 일반적으로 WCB의 항체 생산 시험이

필요하지 않다. MCB보다는 WCB에 대하여 전체 시험을 실시하는 다른 방법도 인정될 수

있다.

3. 생산용 체외 세포 연령 한계 상태 세포(Cells at the Limit of in vitro Cell

Age Used for Production)

The limit of in vitro cell age used for production should be based on data derived

from production cells expanded under pilot-plant scale or commercial-scale

conditions to the proposed in vitro cell age or beyond. Generally, the production

cells are obtained by expansion of the WCB; the MCB could also be used to prepare

the production cells. Cells at the limit of in vitro cell age should be evaluated once

for those endogenous viruses that may have been undetected in the MCB and WCB.

The performance of suitable tests (e.g., in vitro and in vivo) at least once on cells at

the limit of in vitro cell age used for production would provide further assurance

that the production process is not prone to contamination by adventitious virus. If

any adventitious viruses are detected at this level, the process should be carefully

checked in order to determine the cause of the contamination, and completely

redesigned if necessary.

생산용 체외 세포 연령 한계는 파일럿 플랜트 스케일 또는 상업적 스케일의 조건에서 예정

체외 세포 연령 이상까지 증식시킨 생산 세포의 데이터에 근거하여 설정한다. 일반적으로

생산 세포는 WCB의 증식을 통해 확보한다. MCB를 사용하여 생산 세포를 만들 수도 있다.

체외 세포 연령 한계 상태인 세포에 대하여, MCB와 WCB에서 검출되지 않았을 수 있는

내인성 바이러스 시험을 한 번 실시한다. 생산용 체외 세포 연령 한계 상태 세포에 대하여

적합한 시험(예, 체외 및 체내 시험)을 최소한 한 번 실시하여, 생산 공정이 외래성

바이러스에 오염되지 않음을 추가로 보증할 수 있다. 여기서 외래성 바이러스가 검출되면,


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그 공정을 철저하게 점검하여 오염 원인을 파악하고 필요하면 공정을 완전히 다시 설계해야

한다.

B. 권장 바이러스 검출 및 확인 분석(Recommended Viral Detection and

Identification Assays)

Numerous assays can be used for the detection of endogenous and adventitious

viruses. Table 2 outlines examples for these assays. They should be regarded as

assay protocols recommended for the present, but the list is not all-inclusive or

definitive. Since the most appropriate techniques may change with scientific

progress, proposals for alternative techniques, when accompanied by adequate

supporting data, may be acceptable. Manufacturers are encouraged to discuss

these alternatives with the regulatory authorities. Other tests may be necessary

depending on the individual case. Assays should include appropriate controls to

ensure adequate sensitivity and specificity. Wherever a relatively high possibility of

the presence of a specific virus can be predicted from the species of origin of the

cell substrate, specific tests and/or approaches may be necessary. If the cell line

used for production is of human or non-human primate origin, additional tests for

human viruses, such as those causing immunodeficiency diseases and hepatitis,

should be performed unless otherwise justified. The polymerase chain reaction

(PCR) may be appropriate for detection of sequences of these human viruses as

well as for other specific viruses. The following is a brief description of a general

framework and philosophical background within which the manufacturer should

justify what was done.

내인성 및 외래성 바이러스의 검출을 위한 분석 방법이 다양하게 있다. 표 2는 이와 같은

분석 방법의 예를 정리한 것이다. 이 분석 방법은 현재 권장되는 분석 프로토콜로

간주되지만, 이 표가 모든 것을 포함하거나 확정적인 것은 아니다. 과학의 발달에 따라

가장 적절하다고 생각되는 기법이 변할 수 있으므로, 적절한 근거 데이터가 있으면 다른

기법도 인정될 수 있다. 제조업체는 그와 같은 다른 방법을 규제 기관과 협의하는 것이

좋다. 상황에 따라 다른 시험이 필요할 수 있다. 적절한 관리 대책을 구비하여 분석의

민감도와 특이도를 확보한다. 세포 기질의 기원 종을 감안할 때 특정 바이러스의 존재

가능성이 상대적으로 크다고 예상되면, 특이적인 시험이나 방법이 필요할 수 있다. 생산용

세포주가 사람 또는 비사람 영장류에서 유래한 경우, 달리 타당성을 입증할 수 없으면,

면역 결핍 질병과 간염을 유발하는 바이러스와 같은 사람 바이러스 검출 시험을 추가로

실시한다. 사람 바이러스의 서열 검출과 기타 특이적 바이러스 검사에 PCR이 적절할 수


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있다. 일반적인 틀과 원칙을 간략히 정리하면 다음과 같으며, 이 안에서 제조업체는 성과의

타당성을 제시한다.

1. 레트로바이러스 시험(Tests for Retroviruses)

For the MCB and for cells cultured up to or beyond the limit of in vitro cell age used

for production, tests for retroviruses, including infectivity assays in sensitive cell

cultures and electron microscopy (EM) studies, should be carried out. If infectivity

is not detected and no retrovirus or retrovirus-like particles have been observed by

EM, reverse transcriptase (RT) or other appropriate assays should be performed to

detect retroviruses which may be noninfectious. Induction studies have not been

found to be useful.

MCB와 생산용 체외 세포 연령 한계 이상으로 배양된 세포인 경우, 전자현미경 검사와

감수성 세포 배양액을 이용한 감염성 분석을 포함하여 레트로바이러스 시험을 실시한다.

감염성이 검출되지 않고 전자현미경 검사에서 레트로바이러스나 레트로바이러스성 입자가

관찰되지 않으면, 비감염성인 레트로바이러스 검출을 위하여 RT(reverse transcriptase)

시험이나 기타 적절한 시험을 실시한다. 유도 시험은 유용하지 않은 것으로 밝혀졌다.

2. 체외 분석(In vitro Assays)

In vitro tests are carried out by the inoculation of a test article (see Table 2) into

various susceptible indicator cell cultures capable of detecting a wide range of

human and relevant animal viruses. The choice of cells used in the test is governed

by the species of origin of the cell bank to be tested, but should include a human

and/or a non-human primate cell line susceptible to human viruses. The nature of

the assay and the sample to be tested are governed by the type of virus which may

possibly be present based on the origin or handling of the cells. Both cytopathic and

hemadsorbing viruses should be sought.

다양한 사람 바이러스와 관련 동물 바이러스를 검출할 수 있는 여러 가지 감수성 지표 세포

배양액에 검체(표 2 참조)를 접종하여 체외 시험을 실시한다. 시험에 사용할 세포는 시험

대상 세포 뱅크의 기원 종을 고려하여 선정하되, 사람 바이러스에 민감한 사람 및/또는

비사람 영장류 세포주를 포함해야 한다. 세포의 기원 또는 취급 절차를 고려할 때 존재할

가능성이 있다고 판단되는 바이러스의 유형을 감안하여, 분석 방법의 특성과 시험 검체를

결정한다. 세포 변성 바이러스와 HA(hemadsorbing) 바이러스를 모두 찾는다.


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3. 체내 분석(In vivo Assays)

A test article (see Table 2) should be inoculated into animals, including suckling and

adult mice, and in embryonated eggs to reveal viruses that cannot grow in cell

cultures. Additional animal species may be used depending on the nature and

source of the cell lines being tested. The health of the animals should be monitored

and any abnormality should be investigated to establish the cause of the illness.

새끼 마우스와 성체 마우스를 포함한 동물과 계태아에 검체(표 2 참조)를 접종하여, 세포

배양에서 증식되지 않는 바이러스를 파악한다. 시험 대상 세포주의 특성과 기원에 따라

동물 종을 추가로 사용할 수 있다. 동물의 건강 상태를 모니터하며, 비정상적인 것이

발견되면 조사를 실시하여 질병의 원인을 파악한다.

4. 항체 생산 시험(Antibody Production Tests)

Species-specific viruses present in rodent cell lines may be detected by inoculating

test article (see Table 2) into virus-free animals, and examining the serum antibody

level or enzyme activity after a specified period. Examples of such tests are the

mouse antibody production (MAP) test, rat antibody production (RAP) test, and

hamster antibody production (HAP) test. The viruses currently screened for in the

antibody production assays are discussed in Table 3.

설치류 세포주에 존재하는 종 특이적 바이러스는 바이러스가 없는 동물에 검체(표 2

참조)를 접종하고 지정 기간 이후 혈청 항체 농도나 효소 활성을 검사해 검출할 수 있다.

예를 들면 MAP(mouse antibody production) 시험, RAP(rat antibody production) 시험,

HAP(hamster antibody production) 시험이 있다. 항체 생산 시험에서 현재 스크리닝되는

바이러스는 표 3을 참조한다.

C. 세포주의 적합성(Acceptability of Cell Lines)

It is recognised that some cell lines used for the manufacture of product will contain

endogenous retroviruses, other viruses or viral sequences. In such circumstances,

the action plan recommended for manufacture is described in Section V of this

document. The acceptability of cell lines containing viruses other than endogenous

retroviruses will be considered on an individual basis by the regulatory authorities,

by taking into account a risk/benefit analysis based on the benefit of the product

and its intended clinical use, the nature of the contaminating viruses, their potential


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for infecting humans or for causing disease in humans, the purification process for

the product (e.g., viral clearance evaluation data), and the extent of the virus tests

conducted on the purified bulk.

제품 생산용 세포주 가운데 일부는 내인성 레트로바이러스, 다른 바이러스, 또는 바이러스

서열을 갖고 있을 수 있다. 그와 같은 경우의 제조를 위한 권장 방안이 섹션 V에 설명되어

있다. 내인성 바이러스 이외의 바이러스를 갖고 있는 세포주의 적합성은, 제품의 혜택과

예정 임상 용도, 오염 바이러스의 특성, 사람 감염성 또는 사람에서 질병 유발 가능성,

제품 정제 공정(예, 바이러스 클리어런스 평가 데이터), 정제 벌크의 바이러스 시험 정도를

토대로 한 리스크/혜택 분석 결과를 고려하여 규제 기관이 경우별로 검토한다.

IV. 미가공 벌크의 바이러스 시험(TESTING FOR VIRUSES IN UNPROCESSED

BULK)

The unprocessed bulk constitutes one or multiple pooled harvests of cells and

culture media. When cells are not readily accessible (e.g., hollow fiber or similar

systems), the unprocessed bulk would constitute fluids harvested from the

fermenter. A representative sample of the unprocessed bulk, removed from the

production reactor prior to further processing, represents one of the most suitable

levels at which the possibility of adventitious virus contamination can be

determined with a high probability of detection. Appropriate testing for viruses

should be performed at the unprocessed bulk level unless virus testing is made

more sensitive by initial partial processing (e.g., unprocessed bulk may be toxic in

test cell cultures, whereas partially processed bulk may not be toxic).

미가공 벌크는 하나 이상의 세포 수득물 풀과 배양 배지로 구성된다. 용이하게 세포에

접근할 수 없는 경우(예, 중공사 또는 이와 유사한 시스템), 미가공 벌크는 발효기에서

수득한 유체일 수 있다. 추가 가공을 시작하기에 앞서 생산 반응기에서 채취하는 미가공

벌크 대표 검체는, 높은 검출 확률로 외래성 바이러스 오염 가능성을 파악할 수 있는 가장

적합한 부분 가운데 하나에서 확보한다. 일차 부분 가공으로 바이러스 시험의 민감성을

높일 수 있는 경우가 아니면, 미가공 벌크 상태 그대로 바이러스 시험을 실시한다(예,

미가공 벌크가 시험 세포 배양에서 독성을 나타내지만, 부분 가공 벌크는 독성이 없을 수

있다).

In certain instances it may be more appropriate to test a mixture consisting of both

intact and disrupted cells and their cell culture supernatants removed from the

production reactor prior to further processing. Data from at least 3 lots of


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unprocessed bulk at pilot-plant scale or commercial scale should be submitted as

part of the marketing application/registration package.

추가 가공에 앞서 생산 반응기에서 확보한 완전한 세포와 파쇄 세포, 그리고 세포 배양

상청액으로 구성된 혼합물을 시험하는 편이 더 적절한 경우도 있다. 파일럿 플랜트 규모

또는 상업적 규모로 생산된 최소 3개 로트의 미가공 벌크를 시험하여 확보한 데이터를

판매 신청/등록 문서에 포함시켜 제출한다.

It is recommended that manufacturers develop programs for the ongoing

assessment of adventitious viruses in production batches. The scope, extent and

frequency of virus testing on the unprocessed bulk should be determined by taking

several points into consideration including the nature of the cell lines used to

produce the desired products, the results and extent of virus tests performed

during the qualification of the cell lines, the cultivation method, raw material

sources and results of viral clearance studies. In vitro screening tests, using one or

several cell lines, are generally employed to test unprocessed bulk. If appropriate, a

PCR test or other suitable methods may be used.

제조업체는 생산 배치의 외래성 바이러스 평가를 지속적으로 진행하기 위한 프로그램을

개발해야 할 것이다. 미가공 벌크의 바이러스 시험 범위, 정도, 빈도는 원하는 제품의

생산에 사용된 세포주의 특성, 세포주 적격성평가 시에 실시한 바이러스 시험 결과와 정도,

배양 방법, 원료의 출처, 바이러스 클리어런스 실험 결과를 포함해 다양한 요소를 감안하여

정한다. 일반적으로 하나 또는 여러 개의 세포주를 이용한 체외 스크리닝 시험으로 미가공

벌크를 시험한다. 적절한 경우에는 PCR 방법이나 다른 적합한 방법을 사용할 수 있다.

Generally, harvest material in which adventitious virus has been detected should

not be used to manufacture the product. If any adventitious viruses are detected at

this level, the process should be carefully checked to determine the cause of the

contamination, and appropriate actions taken.

일반적으로 외래성 바이러스가 검출된 수득 물품을 제품 제조에 사용해서는 안 된다.

여기서 외래성 바이러스가 검출된다면, 공정을 철저하게 점검하여 오염의 원인을 파악하고

적절한 조치를 추진한다.

V. 정제 벌크의 바이러스 시험 및 바이러스 클리어런스 실험의 근거와 추진

계획(RATIONALE AND ACTION PLAN FOR VIRAL CLEARANCE

STUDIES AND VIRUS TESTS ON PURIFIED BULK)


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It is important to design the most relevant and rational protocol for virus tests from

the MCB level, through the various steps of drug production, to the final product

including evaluation and characterisation of viral clearance from unprocessed bulk.

The evaluation and characterisation of viral clearance plays a critical role in this

scheme. The goal should be to obtain the best reasonable assurance that the

product is free of virus contamination.

MCB부터 여러 생산 단계를 거쳐 최종 제품에 이르기까지, 미가공 벌크의 바이러스

클리어런스 평가와 특성 분석을 포함하여, 바이러스 시험을 위한 가장 적절하고 합리적인

프로토콜을 디자인하는 것이 중요하다. 여기서 바이러스 클리어런스의 평가와 특성 분석이

핵심적인 역할을 한다. 제품의 바이러스 오염 부정에 대한 최선의 합리적인 보증을

확보하는 것이 목적이다.

In selecting viruses to use for a clearance study, it is useful to distinguish between

the need to evaluate processes for their ability to clear viruses that are known to be

present and the desire to estimate the robustness of the process by characterising

the clearance of non-specific “model” viruses (described later). Definitions of

“relevant”, specific and non-specific “model” viruses are given in the glossary.

Process evaluation requires knowledge of how much virus may be present in the

process, such as the unprocessed bulk, and how much can be cleared in order to

assess product safety. Knowledge of the time dependence for inactivation

procedures is helpful in assuring the effectiveness of the inactivation process. When

evaluating clearance of known contaminants, in-depth time-dependent inactivation

studies, demonstration of reproducibility of inactivation/removal, and evaluation of

process parameters will be needed. When a manufacturing process is characterised

for robustness of clearance using non-specific “model” viruses, particular attention

should be paid to non-enveloped viruses in the study design. The extent of viral

clearance characterisation studies may be influenced by the results of tests on cell

lines and unprocessed bulk. These studies should be performed as described below

(Section VI).

바이러스 클리어런스 실험에 사용할 바이러스를 선정할 때는, 존재할 것으로 알려진

바이러스의 클리어런스 능력을 평가할 필요성과 비특이적 "모델" 바이러스(뒤에서 설명)의

클리어런스 특성을 분석함으로써 공정의 견고성을 추정하고자 하는 의욕을 구분할 필요가

있다. "관련(relevant)", 특이적, 비특이적 "모델" 바이러스의 정의가 용어정의 부분에

설명되어 있다. 공정 평가를 위해서는 공정에(예, 미가공 벌크) 얼마나 많은 바이러스가

존재할지, 그리고 클리어런스 정도가 얼마나 될 수 있는지 알아야 한다. 그래야 제품


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안전성을 평가할 수 있다. 불활화 공정의 시간 의존성을 알면, 불활화 공정의 효과를

보장하는데 도움이 된다. 기지 오염물의 클리어런스를 평가할 때, 심층적인 시간 의존성

불활화 실험, 불활화/제거 공정의 재현성 증명, 그리고 공정 파라미터 평가가 필요하다.

비특이적 "모델" 바이러스를 이용해 제조 공정의 클리어런스 견고성을 평가할 때는,

비외피성 바이러스에 특히 주의를 기울여야 한다. 바이러스 클리어런스 특성 분석 실험의

정도는 세포주와 미가공 벌크의 시험 결과에 의해 영향을 받을 수 있다. 이들 실험을

아래에 기술된 바에 따라 실시한다(섹션 VI).

Table 4 presents an example of an action plan, in terms of process evaluation and

characterisation of viral clearance as well as virus tests on purified bulk, in response

to the results of virus tests on cells and/or the unprocessed bulk. Various cases are

considered. In all cases, characterisation of clearance using non-specific “model”

viruses should be performed. The most common situations are Cases A and B.

Production systems contaminated with a virus other than a rodent retrovirus are

normally not used. Where there are convincing and well justified reasons for drug

production using a cell line from Cases C, D or E, these should be discussed with

the regulatory authorities. With Cases C, D and E it is important to have validated

effective steps to inactivate/remove the virus in question from the manufacturing

process.

표 4는 세포 및/또는 미가공 벌크의 바이러스 시험 결과에 대응하여, 정제 벌크의 바이러스

시험과 바이러스 클리어런스의 특성 분석 및 공정 평가 측면에서 정리한 조치 계획의 한

예이다. 다양한 경우를 고려한다. 모든 경우에 비특이적 "모델" 바이러스를 이용한

클리어런스의 특성 분석을 실시한다. 가장 일반적인 상황은 케이스 A와 B이다. 설치류

레트로바이러스 이외의 다른 바이러스에 오염된 생산 시스템은 사용하지 않는다. 케이스 C,

D, E의 세포주를 이용하여 의약품을 생산할 설득력 있고 타당한 이유가 있다면, 규제

기관과 협의한다. 케이스 C, D, E의 경우에는 제조 공정에서 문제의 바이러스를 효과적으로

불활화/제거하는 밸리데이션된 단계를 갖추는 것이 중요하다.

케이스 A(Case A): Where no virus, virus-like particle or retrovirus-like

particle has been demonstrated in the cells or the unprocessed bulk, virus

removal and inactivation studies should be performed with non-specific

“model” viruses as previously stated.

세포 또는 미가공 벌크에서 바이러스, 바이러스성 입자 또는 레트로바이러스성

입자가 확인되지 않은 경우, 앞서 설명한 바와 같이 비특이적 "모델" 바이러스로

바이러스 제거 및 불활화 실험을 실시한다.


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케이스 B(Case B): Where only a rodent retrovirus (or a retrovirus-like

particle which is believed to be non-pathogenic, such as rodent A- and R-

type particles) is present, process evaluation using a specific “model” virus,

such as a murine leukemia virus, should be performed. Purified bulk

should be tested using suitable methods having high specificity and

sensitivity for the detection of the virus in question. For marketing

authorisation, data from at least 3 lots of purified bulk at pilot-plant scale

or commercial scale should be provided. Cell lines such as CHO, C127, BHK

and murine hybridoma cell lines have frequently been used as substrates

for drug production with no reported safety problems related to viral

contamination of the products. For these cell lines in which the

endogenous particles have been extensively characterised and clearance

has been demonstrated, it is not usually necessary to assay for the

presence of the non-infectious particles in purified bulk. Studies with non-

specific “model” viruses, as in Case A, are appropriate.

설치류 레트로바이러스(또는 비병원성으로 믿어지는 레트로바이러스성 입자(예,

설치류 A- 및 B-형 입자))만 존재하는 경우, 특이적 "모델" 바이러스(예,

MLV(murine leukemia virus))를 이용하여 공정을 평가한다. 문제의 바이러스를

검출할 수 있는 높은 특이도와 민감도를 지닌 적합한 방법으로 정제 벌크를

시험한다. 판매 신청 문서를 제출할 때는, 파일럿 플랜트 스케일 또는 상업적

스케일로 제조한 정제 벌크 최소 3개 로트의 데이터를 제출한다. CHO, C127,

BHK, 설치류 하이브리도마 세포주와 같은 세포주가 의약품 생산의 기질로

사용되며, 제품의 바이러스 오염과 관련된 안전성 문제가 보고된 적이 없다.

내인성 입자를 광범위하게 분석하고 클리어런스 능력이 증명된 이들 세포주의

경우에는, 정제 벌크를 대상으로 비감염성 입자의 존재 여부를 분석할 필요는

없다. 비특이적 "모델" 바이러스(케이스 A처럼)를 이용한 실험이 적절하다.

케이스 C(Case C): When the cells or unprocessed bulk are known to

contain a virus, other than a rodent retrovirus, for which there is no

evidence of capacity for infecting humans, (such as those identified by

footnote 2 in Table 3, except rodent retroviruses (Case B)), virus removal

and inactivation evaluation studies should use the identified virus. If it is

not possible to use the identified virus, “relevant” or specific “model”

viruses should be used to demonstrate acceptable clearance. Time-


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dependent inactivation for identified (or “relevant” or specific “model”)

viruses at the critical inactivation step(s) should be obtained as part of

process evaluation for these viruses. Purified bulk should be tested using

suitable methods having high specificity and sensitivity for the detection of

the virus in question. For the purpose of marketing authorisation, data

from at least 3 lots of purified bulk manufactured at pilot-plant scale or

commercial scale should be provided.

세포 또는 미가공 벌크에 설치류 레트로바이러스 이외의 다른 바이러스가

함유되어 있는 것으로 알려져 있으며 사람 감염 증거는 없는 경우(예, 표 3의

각주 2에 기술된 것, 설치류 레트로바이러스 제외(케이스 B)), 확인된 바이러스를

이용하여 바이러스 제거 및 불활화 평가 실험을 실시한다. 확인된 바이러스를

사용할 수 없다면, "관련" 또는 특이적 "모델" 바이러스를 사용하여 클리어런스의

적합성을 증명한다. 이들 바이러스에 대한 공정 평가의 일환으로, 확인된

바이러스(또는 "관련" 또는 특이적 "모델" 바이러스)에 대하여 핵심 불활화

단계의 시간 의존성 불활화를 증명한다. 문제의 바이러스를 검출할 수 있는 높은

특이도와 민감도를 지닌 적합한 방법으로 정제 벌크를 시험한다. 판매 신청

문서를 제출할 때는, 파일럿 플랜트 스케일 또는 상업적 스케일에서 제조한 정제

벌크 최소 3개 로트의 데이터를 제출한다.

케이스 D(Case D): Where a known human pathogen, such as those

indicated by footnote 1 in Table 3, is identified, the product may be

acceptable only under exceptional circumstances. In this instance, it is

recommended that the identified virus be used for virus removal and

inactivation evaluation studies and specific methods with high specificity

and sensitivity for the detection of the virus in question be employed. If it

is not possible to use the identified virus, “relevant” and/or specific

“model” viruses (described later) should be used. The process should be

shown to achieve the removal and inactivation of the selected viruses

during the purification and inactivation processes. Time-dependent

inactivation data for the critical inactivation step(s) should be obtained as

part of process evaluation. Purified bulk should be tested using suitable

methods having high specificity and sensitivity for the detection of the

virus in question. For the purpose of marketing authorisation, data from at

least 3 lots of purified bulk manufactured at pilot-plant scale or commercial

scale should be provided.


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기지의 사람 병원체(예, 표 3의 각주 1에 기술된 것)가 확인된 경우, 해당 제품은

예외적인 경우에만 인정될 수 있다. 이와 같은 경우에는 바이러스 제거 및 불활화

평가 실험에 확인된 바이러스를 사용해야 하며, 문제의 바이러스를 검출할 수

있는 높은 특이도와 민감도를 지닌 특이적 방법을 사용해야 한다. 확인된

바이러스를 사용할 수 없다면, "관련" 및/또는 특이적 "모델" 바이러스(뒤에서

설명)를 사용한다. 정제 및 불활화 공정을 거치면서 지정 바이러스의 제거 및

불활화가 달성됨을 보여 주어야 한다. 핵심 불활화 단계의 시간 의존성 불활화

데이터를 공정 평가 시에 확보한다. 문제의 바이러스를 검출할 수 있는 높은

특이도와 민감도를 지닌 적합한 방법으로 정제 벌크를 시험한다. 판매 신청

문서를 제출할 때는, 파일럿 플랜트 스케일 또는 상업적 스케일로 제조한 정제

벌크 최소 3개 로트의 데이터를 제출한다.

케이스 E(Case E): When a virus, which cannot be classified by currently

available methodologies, is detected in the cells or unprocessed bulk, the

product is usually considered unacceptable since the virus may prove to be

pathogenic. In the very rare case where there are convincing and well

justified reasons for drug production using such a cell line, this should be

discussed with the regulatory authorities before proceeding further.

현재의 방법으로는 분류할 수 없는 바이러스가 세포 또는 미가공 벌크에서 검출된

경우, 그 바이러스가 병원체로 밝혀질 수 있으므로, 해당 제품은 일반적으로

인정되지 않는다. 그런 세포주를 이용한 의약품 생산이 필요하다는 설득력 있고

타당한 이유가 있는 매우 드문 경우에, 연구 개발을 더 진행하기에 앞서 이

부분을 규제 기관과 협의한다.

VI. 바이러스 클리어런스 절차의 특성 분석 및 평가(EVALUATION AND

CHARACTERISATION OF VIRAL CLEARANCE PROCEDURES)

Evaluation and characterisation of the virus removal and/or inactivation procedures

play an important role in establishing the safety of biotechnology products. Many

instances of contamination in the past have occurred with agents whose presence

was not known or even suspected, and though this happened to biological products

derived from various source materials other than fully characterised cell lines,

assessment of viral clearance will provide a measure of confidence that any

unknown, unsuspected and harmful viruses may be removed. Studies should be

carried out in a manner that is well documented and controlled.


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바이러스 제거 및/또는 불활화 공정의 평가 및 특성 분석은 생명 공학 제품의 안전성

확립에 중요한 역할을 한다. 과거에는 존재 자체를 알지 못했거나 의심하지도 않았던

인자에 의한 오염 사례가 많았으며, 이런 현상은 특성 분석이 철저하게 이루어진 세포주

이외의 다른 기원 물질로 만든 생물학적 제품에서 발생했지만, 바이러스 클리어런스 평가는

미지의 의심하지 않았던 유해 바이러스도 제거된다는 신뢰를 제공할 것이다. 실험 내용을

충분히 문서화하고 실험 과정을 관리하면서 실시한다.

The objective of viral clearance studies is to assess process step(s) that can be

considered to be effective in inactivating/removing viruses and to estimate

quantitatively the overall level of virus reduction obtained by the process. This

should be achieved by the deliberate addition (“spiking”) of significant amounts of a

virus to the crude material and/or to different fractions obtained during the various

process steps and demonstrating its removal or inactivation during the subsequent

steps. It is not necessary to evaluate or characterise every step of a manufacturing

process if adequate clearance is demonstrated by the use of fewer steps. It should

be borne in mind that other steps in the process may have an indirect effect on the

viral inactivation/removal achieved. Manufacturers should explain and justify the

approach used in studies for evaluating virus clearance.

바이러스 클리어런스 실험의 목적은 바이러스 불활화/제거에 효과적이라고 생각되는 공정

단계를 평가하고, 그 공정에서 확보되는 전반적인 바이러스 감소 수준을 정량적으로

추정하는 것이다. 미가공 물품 및/또는 여러 공정 단계에서 확보한 다양한 분획물에 상당한

양의 바이러스를 투입("스파이킹")하고 이후 단계에서 제거 또는 불활화됨을 증명함으로써

이 목적을 달성할 수 있다. 더 적은 수의 단계로 적절한 클리어런스가 증명된다면, 모든

제조 공정 단계를 평가하거나 특성 분석을 할 필요는 없다. 다른 공정 단계가 바이러스

불활화/제거에 간접적인 영향을 미칠 수 있다는 점도 고려해야 한다. 제조업체는 바이러스

클리어런스 평가 실험 방법을 설명하고 그 타당성을 제시해야 한다.

The reduction of virus infectivity may be achieved by removal of virus particles or

by inactivation of viral infectivity. For each production step assessed, the possible

mechanism of loss of viral infectivity should be described with regard to whether it

is due to inactivation or removal. For inactivation steps, the study should be

planned in such a way that samples are taken at different times and an inactivation

curve constructed (see Section VI.B.5).

바이러스 입자 제거 또는 바이러스 감염성 불활화로 바이러스 감염성 감소를 달성할 수

있다. 평가 대상 생산 단계별로 바이러스 감염성 상실 메커니즘을 불활화 또는 제거와


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관련하여 설명한다. 불활화 단계인 경우에는 검체를 여러 시점에 채취하고 불활화 곡선을

만들 수 있도록 실험을 설계한다(섹션 VI.B.5 참조).

Viral clearance evaluation studies are performed to demonstrate the clearance of a

virus known to be present in the MCB and/or to provide some level of assurance

that adventitious viruses which could not be detected, or might gain access to the

production process, would be cleared. Reduction factors are normally expressed on

a logarithmic scale which implies that, while residual virus infectivity will never be

reduced to zero, it may be greatly reduced mathematically.

MCB에 존재하는 것으로 알려진 바이러스의 클리어런스를 증명하거나, 또는 검출되지

않거나 생산 공정에 접근할 수 있는 외래성 바이러스의 클리어런스를 보증하기 위하여

바이러스 클리어런스 평가 실험을 실시한다. 감소율은 로그 단위로 표현하는데, 이는 잔류

바이러스 감염성이 절대 "0" 수준까지 감소되지 않지만 수학적으로 크게 감소될 수 있다는

의미이다.

In addition to clearance studies for viruses known to be present, studies to

characterise the ability to remove and/or inactivate other viruses should be

conducted. The purpose of studies with viruses, exhibiting a range of biochemical

and biophysical properties, that are not known or expected to be present, is to

characterise the robustness of the procedure rather than to achieve a specific

inactivation or removal goal. A demonstration of the capacity of the production

process to inactivate or remove viruses is desirable (see Section VI.C). Such studies

are not performed to evaluate a specific safety risk. Therefore, a specific clearance

value needs not be achieved.

존재하는 것으로 알려진 바이러스의 클리어런스 실험 이외에도, 다른 바이러스의 제거

및/또는 불활화 능력을 평가하는 실험을 실시한다. 존재하는 것으로 알려지지 않았거나

예상되지 않는, 다양한 생화학적/생물물리학적 특징을 지닌 바이러스를 활용한 실험의

목적은, 특정 불활화 또는 제거 목적의 달성보다는 그 공정 절차의 견고성을 파악하는데

있다. 생산 공정의 바이러스 불활화 또는 제거 능력을 증명하는 것이 바람직하다(섹션 VI.C

참조). 특이적인 안전성 리스크를 평가하기 위해 그런 실험을 실시하지 않는다. 그러므로

특이적인 클리어런스 값을 달성할 필요는 없다.

A. 바이러스 클리어런스 평가 및 특성 분석을 위한 바이러스 선택(The Choice of

Viruses for the Evaluation and Characterisation of Viral Clearance)


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Viruses for clearance evaluation and process characterisation studies should be

chosen to resemble viruses which may contaminate the product and to represent a

wide range of physico-chemical properties in order to test the ability of the system

to eliminate viruses in general. The manufacturer should justify the choice of

viruses in accordance with the aims of the evaluation and characterisation study

and the guidance provided in this guideline.

클리어런스 평가 및 공정 특성 분석 실험을 위한 바이러스는, 제품을 오염시킬 가능성이

있는 바이러스를 닮고 다양한 이화학적 특징을 대표하여, 바이러스 제거 시스템의 전반적인

능력을 평가할 수 있는 것으로 선택한다. 제조업체는 이 가이드라인에 제시된 사항과 평가

및 특성 분석 실험의 목적에 따라 바이러스 선택의 타당성을 제시해야 한다.

1. "관련" 바이러스와 "모델" 바이러스("Relevant" Viruses and "Model"

Viruses)

A major issue in performing a viral clearance study is to determine which viruses

should be used. Such viruses fall into three categories: “relevant” viruses, specific

“model” viruses and non-specific “model” viruses.

바이러스 클리어런스 실험에서 중요한 문제는, 어떤 바이러스를 사용할지 결정하는 것이다.

바이러스는 "관련(relevant)" 바이러스, 특이적 "모델" 바이러스, 비특이적 "모델" 바이러스

등 세 종류로 구분할 수 있다.

“Relevant” viruses are viruses used in process evaluation of viral clearance studies

which are either the identified viruses, or of the same species as the viruses that

are known, or likely to contaminate the cell substrate or any other reagents or

materials used in the production process. The purification and/or inactivation

process should demonstrate the capability to remove and/or inactivate such viruses.

When a “relevant” virus is not available or when it is not well adapted to process

evaluation of viral clearance studies (e.g., it cannot be grown in vitro to sufficiently

high titers), a specific “model” virus should be used as a substitute. An appropriate

specific “model” virus may be a virus which is closely related to the known or

suspected virus (same genus or family), having similar physical and chemical

properties to the observed or suspected virus.

바이러스 클리어런스 실험의 공정 평가에 사용되는 "관련" 바이러스는 확인된

바이러스이거나 생산 공정에 사용되는 세포 기질이나 다른 시약 또는 물품을 오염시키는

것으로 알려져 있거나 그럴 가능성이 있는 바이러스와 동일한 종의 바이러스이다. 정제


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및/또는 불활화 공정이 그와 같은 바이러스의 제거 및/또는 불활화 능력을 갖추었음을

증명해야 한다. "관련" 바이러스를 확보할 수 없거나 바이러스 클리어런스 실험을 위한

공정 평가에 적응되지 않는 경우(예, 체외에서 배양하여 충분한 역가를 확보할 수 없는

경우), 특이적 "모델" 바이러스를 대신 사용한다. 기지의 바이러스나 의심되는 바이러스와

접한 관계에 있으며(동일 속 또는 과), 관찰된 바이러스나 의심되는 바이러스와 유사한

이화학적 특징을 가지는 바이러스가 특이적 "모델" 바이러스로 적절할 수 있다.

Cell lines derived from rodents usually contain endogenous retrovirus particles or

retrovirus-like particles, which may be infectious (C-type particles) or non-infectious

(cytoplasmic A- and R-type particles). The capacity of the manufacturing process to

remove and/or inactivate rodent retroviruses from products obtained from such

cells should be determined. This may be accomplished by using a murine leukemia

virus, a specific “model” virus in the case of cells of murine origin. When human cell

lines secreting monoclonal antibodies have been obtained by the immortalization of

B lymphocytes by Epstein-Barr Virus (EBV), the ability of the manufacturing process

to remove and/or inactivate a herpes virus should be determined. Pseudorabies

virus may also be used as a specific “model” virus.

설치류 유래 세포주에는 일반적으로 내인성 레트로바이러스 입자 또는 레트로바이러스성

입자가 포함되어 있으며, 이들 바이러스는 감염성(C-형 입자)이거나 비감염성(세포질성 A-

형 및 R-형 입자)일 수 있다. 그와 같은 세포에서 유래된 산물에서 설치류

레트로바이러스를 제거 및/또는 불활화할 수 있는 제조 공정의 능력을 확인해야 한다.

설치류 유래 세포인 경우에 특이적 "모델" 바이러스인 MLV(murine leukemia virus)를

이용하여 이 목적을 달성할 수 있다. EBV(Epstein-Barr Virus)에 의한 B 림프구의

불멸화로 단클론 항체를 분비하는 사람 세포주를 확보한 경우, 제조 공정의 헤르페스

바이러스 제거 및/또는 불활화 능력을 확인해야 한다. 가성광견병 바이러스도 특이적

"모델" 바이러스로 이용할 수 있다.

When the purpose is to characterise the capacity of the manufacturing process to

remove and/or inactivate viruses in general, i.e., to characterise the robustness of

the clearance process, viral clearance characterisation studies should be performed

with non-specific “model” viruses with differing properties. Data obtained from

studies with “relevant” and/or specific “model” viruses may also contribute to this

assessment. It is not necessary to test all types of viruses. Preference should be

given to viruses that display a significant resistance to physical and/or chemical

treatments. The results obtained for such viruses provide useful information about


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the ability of the production process to remove and/or inactivate viruses in general.

The choice and number of viruses used will be influenced by the quality and

characterisation of the cell lines and the production process.

제조 공정의 전반적인 바이러스 제거 및/또는 불활화 능력을 평가하는 것, 즉 클리어런스

공정의 견고성을 평가하는 것이 목적이라면, 서로 다른 특징을 지닌 비특이적 "모델"

바이러스를 이용하여 바이러스 클리어런스 특성 분석 실험을 실시한다. "관련" 및/또는

특이적 "모델" 바이러스를 이용한 실험에서 확보된 데이터를 이 평가에 활용할 수 있다.

모든 유형의 바이러스를 실험할 필요는 없다. 물리적 및/또는 화학적 처리에 유의미한

저항성을 보이는 바이러스를 우선적으로 고려한다. 그와 같은 바이러스를 이용한 실험을

통해, 생산 공정의 일반적인 바이러스 제거 및/또는 불활화 능력에 관해 유용한 정보를

확보할 수 있다. 생산 공정과 세포주의 품질과 특성 평가 결과를 고려하여 사용할

바이러스의 종류와 수를 선택한다.

Examples of useful “model” viruses representing a range of physico-chemical

structures and examples of viruses which have been used in viral clearance studies

are given in Appendix 2 and Table A-1.

다양한 이화학적 구조의 유용한 "모델" 바이러스 예와 바이러스 클리어런스 실험에

사용되었던 바이러스의 예가 부록 2와 표 A-1에 정리되어 있다.

2. 기타 고려 사항(Other Considerations)

Additional points to be considered are as follows:

이외에도 다음 사항을 고려한다.

a) Viruses which can be grown to high titer are desirable, although this may

not always be possible.

항상 가능하지 않을 수도 있지만, 고역가로 증식될 수 있는 바이러스가

바람직하다.

b) There should be an efficient and reliable assay for the detection of each

virus used, for every stage of manufacturing that is tested.

실험 대상 모든 제조 단계에서, 사용 바이러스 각각을 검출할 수 있는 효율적이고

신뢰성 있는 분석 방법이 있어야 한다.

c) Consideration should be given to the health hazard which certain viruses


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may pose to the personnel performing the clearance studies.

특정 바이러스가 클리어런스 실험을 하는 작업자에게 미칠 수 있는 건강 위해

요소도 고려한다.

B. 바이러스 클리어런스 평가 및 특성 분석 실험의 디자인 및 의미(Design and

Implications of Viral Clearance Evaluation and Characterisation

Studies)

1. 시설 및 작업자(Facility and Staff)

It is inappropriate to introduce any virus into a production facility because of GMP

constraints. Therefore, viral clearance studies should be conducted in a separate

laboratory equipped for virological work and performed by staff with virological

expertise in conjunction with production personnel involved in designing and

preparing a scaled-down version of the purification process.

GMP 측면의 제약 조건 때문에 바이러스를 생산 시설에 도입하는 것은 적절하지 않다.

그러므로 바이러스 클리어런스 실험은 별도의 바이러스 실험실에서, 규모 축소 정제 공정의

디자인 및 준비를 담당하는 생산 작업자와 함께 바이러스 전문 지식을 갖춘 사람이

실시한다.

2. 규모 축소 생산 시스템(Scaled-Down Production System)

The validity of the scaling down should be demonstrated. The level of purification of

the scaled-down version should represent as closely as possible the production

procedure. For chromatographic equipment, column bed-height, linear flow-rate,

flow-rate-to-bed-volume ratio (i.e., contact time), buffer and gel types, pH,

temperature, and concentration of protein, salt, and product should all be shown to

be representative of commercial-scale manufacturing. A similar elution profile

should result. For other procedures, similar considerations apply. Deviations which

cannot be avoided should be discussed with regard to their influence on the results.

규모 축소의 유효성을 증명해야 한다. 규모 축소 정제 공정은 실제 생산 공정을 최대한

대표할 수 있어야 한다. 크로마토그래피 설비인 경우에는, 칼럼 베드 높이, 선형 유속, 유속

대비 베드 용적 비율(즉, 접촉 시간), 완충액 및 겔 유형, pH, 온도, 단백질 및 염, 제품

농도 등 모든 것이 상업적 스케일의 제조 공정을 대표할 수 있음을 증명해야 한다. 용출

프로파일도 유사해야 한다. 다른 기법의 제조 공정인 경우에도 고려해야 할 사항은


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유사하다. 피할 수 없는 차이점이 있는 경우에는, 결과에 미치는 영향을 중심으로 설명한다.

3. 단계별 바이러스 제거 분석(Analysis of Step-Wise Elimination of Virus)

When viral clearance studies are being performed, it is desirable to assess the

contribution of more than one production step to virus elimination. Steps which are

likely to clear virus should be individually assessed for their ability to remove and

inactivate virus and careful consideration should be given to the exact definition of

an individual step. Sufficient virus should be present in the material of each step to

be tested so that an adequate assessment of the effectiveness of each step is

obtained. Generally, virus should be added to in-process material of each step to be

tested. In some cases, simply adding high titer virus to unpurified bulk and testing

its concentration between steps will be sufficient. Where virus removal results from

separation procedures, it is recommended that, if appropriate and if possible, the

distribution of the virus load in the different fractions be investigated. When

virucidal buffers are used in multiple steps within the manufacturing process,

alternative strategies such as parallel spiking in less virucidal buffers, may be

carried out as part of the overall process assessment. The virus titer before and

after each step being tested should be determined. Quantitative infectivity assays

should have adequate sensitivity and reproducibility and should be performed with

sufficient replicates to ensure adequate statistical validity of the result. Quantitative

assays not associated with infectivity may be used if justified. Appropriate virus

controls should be included in all infectivity assays to ensure the sensitivity of the

method. Also, the statistics of sampling virus when at low concentrations should be

considered (Appendix 3).

바이러스 클리어런스 실험을 할 때는, 하나 이상의 생산 단계가 바이러스 제거에 기여하는

정도를 평가하는 것이 바람직하다. 바이러스 클리어런스 가능성이 있는 단계를 개별적으로

평가하여 바이러스 제거 및 불활화 능력을 파악하며, 각 단계의 정확한 규정에 특히 주의를

기울인다. 실험 대상 단계별로 물품 중에 충분한 바이러스가 있어야, 각 단계의 효과를

적절하게 평가할 수 있다. 일반적으로 실험 대상 단계별로 반제품에 바이러스를 투입한다.

미정제 벌크에 고역가의 바이러스를 투입하고 단계별로 그 농도를 시험하는 방법으로도

충분한 경우가 있다. 분리 공정에 의하여 바이러스가 제거되는 경우, 적절하고 가능하다면

여러 분획물 중의 바이러스 로드 분포를 조사할 필요가 있다. 제조 공정 중의 여러

단계에서 항바이러스 완충액을 사용한다면, 전체 공정 평가의 일환으로 항바이러스성이

적은 완충액에 병행 스파이킹을 하는 방법 같은 다른 전략을 채택하여 실시할 수도 있다.


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각 실험 대상 단계를 시작하기 전과 종료 이후에 바이러스 역가를 평가한다. 정량적 감염성

분석 방법은 적절한 민감도와 재현성을 구비해야 하며, 결과의 적절한 통계적 유효성을

보장하기 위해서는 충분히 반복하여 실시해야 한다. 타당성이 있는 경우에는 감염성과

관련이 없는 정량적 분석 방법을 활용할 수도 있다. 분석 방법의 민감도를 확보하기 위하여,

모든 감염성 분석 검사 시에 적절한 바이러스 대조를 포함시킨다. 또한 저 농도 상태인

경우에 바이러스 검체 채취의 통계학적 측면도 고려한다(부록 3).

4. 물리적 제거와 불활화(Determining Physical Removal versus

Inactivation)

Reduction in virus infectivity may be achieved by the removal or inactivation of

virus. For each production step assessed, the possible mechanism of loss of viral

infectivity should be described with regard to whether it is due to inactivation or

removal. If little clearance of infectivity is achieved by the production process, and

the clearance of virus is considered to be a major factor in the safety of the product,

specific or additional inactivation/removal steps should be introduced. It may be

necessary to distinguish between removal and inactivation for a particular step, for

example when there is a possibility that a buffer used in more than one clearance

step may contribute to inactivation during each step; i.e., the contribution to

inactivation by a buffer shared by several chromatographic steps and the removal

achieved by each of these chromatographic steps should be distinguished.

바이러스 제거 또는 불활화로 바이러스 감염성 감소를 달성할 수 있다. 평가 대상 생산

단계별로 바이러스 감염성 상실 메커니즘을 바이러스 불활화 또는 제거와 관련하여

기술한다. 생산 공정으로 감염성 클리어런스가 거의 실현되지 않으며 바이러스

클리어런스가 제품 안전성 확보의 중요한 요소로 간주된다면, 특이적 또는 추가적인

불활화/제거 단계를 도입해야 한다. 특정 단계가 바이러스 제거와 불활화 가운데 어떤

역할을 하는지 구분하여 파악할 필요가 있다. 예를 들어 하나 이상의 클리어런스 단계에

사용되는 완충액이 각 단계의 불활화 능력에 기여할 가능성이 있는 경우, 여러

크로마토그래피 단계에 사용되는 완충액의 불활화 기여도와 여러 크로마토그래피 단계

각각이 달성하는 제거 정도를 구분하여 파악해야 한다.

5. 불활화 평가(Inactivation Assessment)

For assessment of viral inactivation, unprocessed crude material or intermediate

material should be spiked with infectious virus and the reduction factor calculated.


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It should be recognised that virus inactivation is not a simple, first order reaction

and is usually more complex, with a fast “phase 1” and a slow “phase 2”. The study

should, therefore, be planned in such a way that samples are taken at different

times and an inactivation curve constructed. It is recommended that studies for

inactivation include at least one time point less than the minimum exposure time

and greater than zero, in addition to the minimum exposure time. Additional data

are particularly important where the virus is a “relevant” virus known to be a

human pathogen and an effective inactivation process is being designed. However,

for inactivation studies in which non-specific “model” viruses are used or when

specific “model” viruses are used as surrogates for virus particles such as the CHO

intracytoplasmic retrovirus-like particles, reproducible clearance should be

demonstrated in at least two independent studies. Whenever possible, the initial

virus load should be determined from the virus which can be detected in the spiked

starting material. If this is not possible, the initial virus load may be calculated from

the titer of the spiking virus preparation. Where inactivation is too rapid to plot an

inactivation curve using process conditions, appropriate controls should be

performed to demonstrate that infectivity is indeed lost by inactivation.

바이러스 불활화 평가 시에는 미가공 물품 또는 반제품에 감염성 바이러스를 스파이킹하고

감소율을 계산한다. 바이러스 불활화는 단순한 1차 반응이 아니며, 일반적으로 보다

복잡하고 대개는 빠른 "1단계"와 느린 "2단계"로 구성된다. 그러므로 여러 시점에 검체를

채취하여 불활화 곡선을 그리는 방식으로 실험을 계획한다. 불활화 실험 시에는 최소 노출

시간 이외에도, 0보다 크고 최소 노출 시간보다 작은 1개 시점 이상을 포함시켜야 한다.

바이러스가 사람 병원성이 있는 것으로 알려진 "관련" 바이러스이고 효과적인 불활화

공정을 설계 중인 경우에는 추가 데이터를 확보하는 것이 특히 중요하다. 그러나 비특이적

"모델" 바이러스를 사용하거나 특이적인 "모델" 바이러스를 CHO 세포질내

레트로바이러스성 입자 같은 바이러스 입자의 대용물로 사용하는 불활화 실험인 경우에는,

적어도 두 개의 독립적인 실험을 통해 클리어런스의 재현성을 증명한다. 가능하면

스파이크를 한 출발 물질에서 바이러스를 검출하여 초기 바이러스 로드를 확인한다. 이렇게

할 수 없는 경우에는, 바이러스 스파이크 조제물의 역가에서 초기 바이러스 로드를 계산할

수 있다. 불활화가 매우 빠르게 진행되어 공정 조건에 따른 불활화 곡선을 그릴 수 없다면,

적절한 관리 대책을 갖추어 감염성이 실제로 불활화에 의하여 사라짐을 증명한다.

6. 칼럼의 기능 및 재생(Function and Regeneration of Columns)

Over time and after repeated use, the ability of chromatography columns and other


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devices used in the purification scheme to clear virus may vary. Some estimate of

the stability of the viral clearance after several uses may provide support for

repeated use of such columns. Assurance should be provided that any virus

potentially retained by the production system would be adequately destroyed or

removed prior to reuse of the system. For example, such evidence may be provided

by demonstrating that the cleaning and regeneration procedures do inactivate or

remove virus.

시간이 지나고 반복적으로 사용하면, 크로마토그래피 칼럼과 기타 정제 장치들의 바이러스

클리어런스 능력이 변할 수 있다. 여러 차례 사용한 다음의 바이러스 클리어런스 안정성을

평가하여, 칼럼 반복 사용의 근거를 마련할 수 있다. 생산 시스템에 잔류할 수 있는

바이러스가 그 시스템의 재사용에 앞서 적절하게 파괴 또는 제거된다는 보증이 있어야 한다.

예를 들어 세척 및 재생 작업으로 바이러스가 불활화 또는 제거됨을 증명함으로써, 그와

같은 증거를 확보할 수 있다.

7. 특이적 주의 사항(Specific Precautions)

a) Care should be taken in preparing the high-titer virus to avoid aggregation

which may enhance physical removal and decrease inactivation thus

distorting the correlation with actual production.

고역가 바이러스를 준비할 때는 응집이 발생하지 않게 주의한다. 응집은 물리적

제거를 향상시키고 불활화를 감소시켜 실제 생산과의 상관관계를 왜곡시킬 수

있기 때문이다.

b) Consideration should be given to the minimum quantity of virus which can

be reliably assayed.

신뢰성 있게 분석 가능한 최소 바이러스 양을 고려해야 한다.

c) The study should include parallel control assays to assess the loss of

infectivity of the virus due to such reasons as the dilution, concentration,

filtration or storage of samples before titration.

병행 대조 분석을 실시하여, 바이러스 분석 이전의 검체 희석, 농축, 여과, 또는

보관 등의 사유로 인한 바이러스 감염성 상실을 평가한다.

d) The virus “spike” should be added to the product in a small volume so as

not to dilute or change the characteristics of the product. Diluted, test-


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protein sample is no longer identical to the product obtained at commercial

scale.

제품 특성을 변화시키거나 희석시키지 않도록, 바이러스 "스파이크"를 소량으로

제품에 투입한다. 희석된 단백질 검체는 상업적 규모의 제품과 동일하지 않다.

e) Small differences in, for example, buffers, media, or reagents, can

substantially affect viral clearance.

예를 들어 완충액, 배지, 또는 시약의 작은 차이가 바이러스 클리어런스에

실질적인 영향을 줄 수 있다.

f) Virus inactivation is time-dependent, therefore, the amount of time a

spiked product remains in a particular buffer solution or on a particular

chromatography column should reflect the conditions of the commercial-

scale process.

바이러스 불활화는 시간 의존적이므로, 스파이크 제품을 특정 완충액 또는 특정

크로마토그래피 칼럼으로 처리하는 시간은상업적 스케일의 공정 조건을 반영해야

한다.

g) Buffers and product should be evaluated independently for toxicity or

interference in assays used to determine the virus titer, as these

components may adversely affect the indicator cells. If the solutions are

toxic to the indicator cells, dilution, adjustment of the pH, or dialysis of the

buffer containing spiked virus might be necessary. If the product itself has

anti-viral activity, the clearance study may need to be performed without

the product in a “mock” run, although omitting the product or substituting

a similar protein that does not have anti-viral activity could affect the

behaviour of the virus in some production steps. Sufficient controls to

demonstrate the effect of procedures used solely to prepare the sample for

assay (e.g., dialysis, storage) on the removal/inactivation of the spiking

virus should be included.

완충액과 제품은 독성 또는 바이러스 역가 분석의 간섭 효과를 별도로 평가해야

한다. 이들 성분은 지표 세포에 부정적인 영향을 줄 수 있기 때문이다. 용액이

지표 세포에 독성이 있다면, 바이러스 스파이크 함유 완충액의 투석, pH 조정,

또는 희석이 필요할 수 있다. 제품 자체가 항바이러스 활성을 갖고 있다면,

제품을 생략하거나 항바이러스 활성이 없는 유사 단백질로 대체하면 일부 생산


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단계에서 바이러스의 행동에 영향을 줄 수도 있지만, 제품을 제외한 "모의"

공정으로 클리어런스 실험을 실시할 필요가 있다. 분석을 위한 검체 조제 절차(예,

투석, 보관)가 스파이크한 바이러스의 제거/불활화에 미치는 영향을 증명하기

위한 충분한 관리가 포함되어야 한다.

h) Many purification schemes use the same or similar buffers or columns

repetitively. The effects of this approach should be taken into account

when analysing the data. The effectiveness of virus elimination by a

particular process may vary with the stage in manufacture at which it is

used.

많은 정제 공정이 동일 또는 유사한 완충액 또는 칼럼을 반복적으로 사용한다.

데이터를 분석할 때는 이러한 방식의 영향을 고려한다. 특정 공정의 바이러스

제거 효과는 제조 단계에 따라 다를 수 있다.

i) Overall reduction factors may be underestimated where production

conditions or buffers are too cytotoxic or virucidal and should be discussed

on a case-by-case basis. Overall reduction factors may also be

overestimated due to inherent limitations or inadequate design of viral

clearance studies.

생산 조건 또는 완충액의 세포 독성 또는 항바이러스성이 큰 경우에는 전체

감소율이 과소평가될 수 있으며, 이 부분은 각각의 경우별로 검토한다. 또한

바이러스 클리어런스 실험의 부적절한 디자인 또는 내재적 한계 때문에 전체

감소율이 과대평가될 수도 있다.

C. 바이러스 클리어런스 실험의 해석(Interpretation of Viral Clearance

Studies)

적합성(Acceptability)

The object of assessing virus inactivation/removal is to evaluate and characterise

process steps that can be considered to be effective in inactivating/removing

viruses and to estimate quantitatively the overall level of virus reduction obtained

by the manufacturing process. For virus contaminants, as in Cases B - E, it is

important to show that not only is the virus eliminated or inactivated, but that there

is excess capacity for viral clearance built into the purification process to assure an


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appropriate level of safety for the final product. The amount of virus eliminated or

inactivated by the production process should be compared to the amount of virus

which may be present in unprocessed bulk.

바이러스 불활화/제거 평가의 목적은, 바이러스 불활화/제거에 효과적인 것으로 간주되는

공정 단계를 평가하고 특성을 파악하며, 제조 공정의 전체 바이러스 감소 수준을

계량적으로 추정하는데 있다. 케이스 B – E의 바이러스 오염물인 경우, 바이러스가 제거

또는 불활화되며, 정제 공정에 충분한 바이러스 클리어런스 능력이 통합되어 있어 최종

제품의 안전성이 적절한 수준에서 보장됨을 보여 주는 것이 중요하다. 생산 공정에 의해

제거 또는 불활화되는 바이러스의 양을, 미가공 벌크 중에 존재할 수 있는 바이러스의 양과

비교한다.

To carry out this comparison, it is important to estimate the amount of virus in the

unprocessed bulk. This estimate should be obtained using assays for infectivity or

other methods such as transmission electron microscopy (TEM). The entire

purification process should be able to eliminate substantially more virus than is

estimated to be present in a single-dose-equivalent of unprocessed bulk. See

Appendix 4 for calculation of virus reduction factors and Appendix 5 for calculation

of estimated particles per dose.

이와 같은 비교를 실시할 때는 미가공 벌크 중의 바이러스 양을 추정하는 것이 중요하다.

이러한 추정은 감염성 분석이나 TEM 같은 다른 방법으로 할 수 있다. 일회 용량에

상응하는 미가공 벌크 중에 존재하는 것으로 추정되는 것보다 실질적으로 더 많은

바이러스를 전체 정제 공정이 제거할 수 있어야 한다. 바이러스 감소율 계산은 부록 4를

참조하고, 용량별 바이러스 입자 계산은 부록 5를 참조한다.

Manufacturers should recognise that clearance mechanisms may differ between

virus classes. A combination of factors must be considered when judging the data

supporting the effectiveness of virus inactivation/removal procedures. These

include:

바이러스 클래스별로 클리어런스 메커니즘이 다를 수 있다는 점을 인식해야 한다. 바이러스

불활화/제거 절차의 효과를 뒷받침하는 데이터를 평가할 때는 다음을 포함하여 여러 요소를

고려해야 한다.

(i) The appropriateness of the test viruses used;

테스트 바이러스의 적절성

(ii) The design of the clearance studies;


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클리어런스 실험의 디자인

(iii) The log reduction achieved;

로그 감소 결과

(iv) The time-dependence of inactivation;

불활화의 시간 의존성

(v) The potential effects of variation in process parameters on virus

inactivation/removal;

공정 파라미터의 변화가 바이러스 불활화/제거에 미치는 영향

(vi) The limits of assay sensitivities;

분석 민감도의 한계

(vii) The possible selectivity of inactivation/removal procedure(s) for

certain classes of viruses.

불활화/제거 절차의 특정 바이러스 클래스에 대한 선택성

Effective clearance may be achieved by any of the following: multiple inactivation

steps, multiple complementary separation steps, or combinations of inactivation

and separation steps. Since separation methods may be dependent on the

extremely specific physico-chemical properties of a virus which influence its

interaction with gel matrices and precipitation properties, “model” viruses may be

separated in a different manner than a target virus. Manufacturing parameters

influencing separation should be properly defined and controlled. Differences may

originate from changes in surface properties such as glycosylation. However,

despite these potential variables, effective removal can be obtained by a

combination of complementary separation steps or combinations of inactivation and

separation steps. Therefore, well designed separation steps, such as

chromatographic procedures, filtration steps and extractions, can be effective virus

removal steps provided that they are performed under appropriately controlled

conditions. An effective virus removal step should give reproducible reduction of

virus load shown by at least two independent studies.

복수의 불활화 단계, 복수의 보완적 분리 단계, 또는 불활화 및 분리 단계의 조합을 통해

효과적인 클리어런스를 달성할 수 있다. 분리 방법은 침전 특징과 겔 매트릭스와의

상호작용에 영향을 미치는 바이러스의 특이적인 이화학적 특징과 긴 한 관계에 있으므로,

목표 바이러스와는 다른 방식으로 "모델" 바이러스가 분리될 수 있다. 분리에 영향을 주는

제조 파라미터를 적절하게 규명하고 관리해야 한다. 당화 등 표면 특징의 변화에 따라

차이가 발생할 수 있다. 그러나 이러한 변수에도 불구하고, 보완적인 분리 단계의 조합이나


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불활화 및 분리 단계의 조합에 의하여 효과적인 제거를 달성할 수 있다. 그러므로

크로마토그래피, 여과, 추출 등 분리 단계를 잘 설계하면, 적절한 관리 조건에서 효과적인

바이러스 제거 단계가 될 수 있다. 효과적인 바이러스 제거 단계가 되려면, 적어도 두 개의

독립적인 실험을 통해 바이러스 로드의 감소가 재현성 있게 증명되어야 한다.

An overall reduction factor is generally expressed as the sum of the individual

factors. However, reduction in virus titer of the order of 1 log10 or less would be

considered negligible and would be ignored unless justified.

전체 감소율은 개별 감소율의 합으로 표현한다. 하지만 1 log10 이하의 바이러스 역가

감소는 무시할 수 있는 것으로 간주되며, 타당성을 제시할 수 없는 경우에는 무시한다.

If little reduction of infectivity is achieved by the production process, and the

removal of virus is considered to be a major factor in the safety of the product, a

specific, additional inactivation/removal step or steps should be introduced. For all

viruses, manufacturers should justify the acceptability of the reduction factors

obtained. Results will be evaluated on the basis of the factors listed above.

생산 공정에 의한 감염성 감소 효과가 거의 없고, 바이러스 제거가 그 제품의 안전성을

보장하는데 매우 중요한 요소라 할 수 있다면, 특이적인 불활화/제거 단계를 추가로

도입해야 한다. 모든 바이러스에 대하여 감소율의 적합성을 증명할 수 있어야 한다. 앞서

설명한 요소를 토대로 결과를 평가한다.

D. 바이러스 클리어런스 실험의 한계(Limitations of Viral Clearance Studies)

Viral clearance studies are useful for contributing to the assurance that an

acceptable level of safety in the final product is achieved but do not by themselves

establish safety. However, a number of factors in the design and execution of viral

clearance studies may lead to an incorrect estimate of the ability of the process to

remove virus infectivity. These factors include the following:

바이러스 클리어런스 실험은 최종 제품의 적정 안전성 수준 달성을 보증하는데 기여하는

유용한 것이지만, 그 자체로는 안전성을 확립하지 못한다. 또한 바이러스 클리어런스

실험의 디자인과 실행에 있어서 여러 가지 요소 때문에, 공정의 바이러스 감염성 제거

능력을 정확하게 추정하지 못할 수 있다.

1. Virus preparations used in clearance studies for a production process are

likely to be produced in tissue culture. The behaviour of a tissue culture


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virus in a production step may be different from that of the native virus;

for example, if native and cultured viruses differ in purity or degree of

aggregation.

생산 공정의 클리어런스 실험에 사용되는 바이러스 조제물을 조직 배양을 통해

생산할 것이다. 조직 배양 바이러스가 생산 단계에서 보이는 행동은, 네이티브

바이러스의 행동과 다를 수 있다. 예를 들어 네이티브 바이러스와 조직 배양

바이러스는 순도나 응집 정도가 다를 수 있다.

2. Inactivation of virus infectivity frequently follows a biphasic curve in which

a rapid initial phase is followed by a slower phase. It is possible that virus

escaping a first inactivation step may be more resistant to subsequent

steps. For example, if the resistant fraction takes the form of virus

aggregates, infectivity may be resistant to a range of different chemical

treatments and to heating.

바이러스 감염성 불활화는 2단계 곡선을 보이는 경향이 있는데, 먼저 초기에는

급속하게 불활화되고, 다음에는 느리게 불활화된다. 첫 번째 불활화 단계에서

살아남은 바이러스는 이후 단계에서 더 큰 저항성을 보일 가능성이 있다. 예를

들어 저항성 분획물이 바이러스 응집물 형태를 띤다면, 다양한 화학적 처리와

가열 처리에도 저항성을 보일 것이다.

3. The ability of the overall process to remove infectivity is expressed as the

sum of the logarithm of the reductions at each step. The summation of the

reduction factors of multiple steps, particularly of steps with little reduction

(e.g., below 1 log10), may overestimate the true potential for virus

elimination. Furthermore, reduction values achieved by repetition of

identical or near identical procedures should not be included unless

justified.

전체 공정의 감염성 제거 능력은 개별 단계의 로그 감소율의 합으로 표현된다.

여러 단계, 특히 감소율이 매우 작은 단계(예, 1 log10 이하)의 감소율을 합하면,

실제 바이러스 제거 능력이 과대평가될 수도 있다. 또한 동일하거나 거의 동일한

절차를 반복함으로써 달성되는 감소치는, 타당성을 입증할 수 없다면 포함시키지

말아야 한다.

4. The expression of reduction factors as logarithmic reductions in titer

implies that, while residual virus infectivity may be greatly reduced, it will


GI014A


39

never be reduced to zero. For example, a reduction in the infectivity of a

preparation containing 8 log10 infectious units per ml by a factor of 8 log10

leaves zero log10 per ml or one infectious unit per ml, taking into

consideration the limit of detection of the assay.

감소율을 로그 역가 감소로 표현하는 것은, 잔류 바이러스 감염성이 크게

감소되더라고, 절대 "0" 수준으로는 감소되지 않는다는 의미이다. 예를 들어

mL당 8 log10 감염 단위를 함유하는 조제물의 감염성이 8 log10 감소된다고 해도,

분석 방법의 검출 한계를 고려하면, mL당 0 log10 또는 mL당 1 감염 단위는

남는다.

5. Pilot-plant scale processing may differ from commercial-scale processing

despite care taken to design the scaled-down process.

공정의 규모 축소 설계 시에 아무리 주의를 기울여도, 파일럿 플랜트 규모의

공정은 상업적 스케일 공정과 다를 수 있다.

6. Addition of individual virus reduction factors resulting from similar

inactivation mechanisms along the manufacturing process may

overestimate overall viral clearance.

제조 공정 중의 유사 불활화 메커니즘에 의한 개별 바이러스 감소율을 더하면,

전체 바이러스 클리어런스가 과대평가될 수 있다.

E. 통계(Statistics)

The viral clearance studies should include the use of statistical analysis of the data

to evaluate the results. The study results should be statistically valid to support the

conclusions reached (refer to Appendix 3).

바이러스 클리어런스 실험 시에는 데이터를 통계적으로 분석하여 결과를 평가한다. 도출된

결론을 뒷받침하기 위해서는, 실험 결과가 통계적으로 유효해야 한다(부록 3 참조).

F. 바이러스 클리어런스의 재평가(Re-Evaluation of Viral Clearance)

Whenever significant changes in the production or purification process are made,

the effect of that change, both direct and indirect, on viral clearance should be

considered and the system re-evaluated as needed. For example, changes in

production processes may cause significant changes in the amount of virus


GI014A


40

produced by the cell line; changes in process steps may change the extent of viral

clearance.

생산 또는 정제 공정에 중대한 변경이 발생하면, 그러한 변경이 직접적으로나 간접적으로

바이러스 클리어런스에 미치는 영향을 검토하고 필요한 경우에는 시스템을 재평가한다.

예를 들어 생산 공정의 변경은 세포주에 의해 생산된 바이러스 양의 변화를 유발할 수 있다.

공정 단계의 변경은 바이러스 클리어런스 정도를 변화시킬 수 있다.

VII. 요약(SUMMARY)

This document suggests approaches for the evaluation of the risk of viral

contamination and for the removal of virus from product, thus contributing to the

production of safe biotechnology products derived from animal or human cell lines

and emphasises the value of many strategies, including:

이 문서는 바이러스 오염 리스크 평가와 제품에서 바이러스를 제거하기 위한 방법을

제시하여, 동물 또는 사람 세포주 유래의 안전한 생명공학 제품 생산에 기여하기 위한

것이며, 다음을 포함하여 여러 전략의 중요성을 강조한다.

A. thorough characterisation/screening of cell substrate starting material in

order to identify which, if any, viral contaminants are present;

바이러스 오염물의 존재 여부를 파악하기 위하여, 세포 기질 출발 물질의 철저한

특성 분석/스크리닝.

B. assessment of risk by determination of the human tropism of the

contaminants;

오염물의 인체 지향성 파악에 의한 리스크 평가.

C. establishment of an appropriate program of testing for adventitious viruses

in unprocessed bulk;

미가공 벌크의 외래성 바이러스 시험을 위한 적절한 프로그램 확립.

D. careful design of viral clearance studies using different methods of virus

inactivation or removal in the same production process in order to achieve

maximum viral clearance; and

최대한의 바이러스 클리어런스 성취를 위하여, 동일 생산 공정에서 서로 다른

바이러스 불활화 또는 제거 방법을 활용해 바이러스 클리어런스 실험 설계.


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41

E. performance of studies which assess virus inactivation and removal.

바이러스 불활화 및 제거를 평가하는 실험 실시

VIII. 용어 정의(GLOSSARY)

외래성 바이러스(Adventitious Virus)

See Virus.

바이러스 참조.

세포 기질(Cell Substrate)

Cells used to manufacture product.

제품 제조에 사용되는 세포.

내인성 바이러스(Endogenous Virus)

See Virus.


불활화(Inactivation)

Reduction of virus infectivity caused by chemical or physical modification.

화학적 또는 물리적 변형에 의한 바이러스 감염성의 감소.

체외 세포 연령(In Vitro Cell Age)

A measure of the period between thawing of the MCB vial(s) and harvest of the

production vessel measured by elapsed chronological time in culture, population

doubling level of the cells or passage level of the cells when subcultivated by a

defined procedure for dilution of the culture.

MCB 바이알의 해동부터 생산 용기에서의 수득까지 걸린 시간을 배양 경과 시간, 세포

집단 배증 시간, 배양물의 희석을 위한 지정 절차로 계대 배양한 경우에는 세포 계대

횟수로 표시하는 시간 단위.

MCB(Master Cell Bank)

An aliquot of a single pool of cells which generally has been prepared from the

selected cell clone under defined conditions, dispensed into multiple containers and

stored under defined conditions. The MCB is used to derive all working cell banks.


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42

The testing performed on a new MCB (from a previous initial cell clone, MCB or

WCB) should be the same as for the MCB, unless justified.

일반적으로 선정된 세포 클론을 활용해 지정 조건에서 제조하여 여러 용기에 분주하고 지정

조건에서 보관하는 단일 세포 풀의 분주물. MCB을 이용하여 상용 세포 뱅크를 만든다.

신규 MCB(이전 초기 세포 클론, MCB 또는 WCB 유래)에 대한 시험은 별도의 타당성이

없는 한, MCB에 대한 것과 동일해야 한다.

최소 노출 시간(Minimum Exposure Time)

The shortest period for which a treatment step will be maintained.

처리 단계가 지속되는 가장 짧은 기간.

비내인성 바이러스(Non-endogenous Virus)

See Virus.


바이러스 클리어런스의 공정 특성 분석(Process Characterisation of Viral

Clearance)

Viral clearance studies in which non-specific “model” viruses are used to assess the

robustness of the manufacturing process to remove and/or inactivate viruses.

비특이적 "모델" 바이러스를 이용하여 제조 공정의 바이러스 제거 및/또는 불활화 견고성을

평가하는 바이러스 클리어런스 실험.

바이러스 클리어런스의 공정 평가 실험(Process Evaluation Studies of Viral

Clearance)

Viral clearance studies in which “relevant” and/or specific “model” viruses are used

to determine the ability of the manufacturing process to remove and/or inactivate

these viruses.

"관련" 및/또는 특이적 "모델" 바이러스를 이용하여 제조 공정의 바이러스 제거 및/또는

불활화 능력을 평가하는 바이러스 클리어런스 실험.

생산 세포(Production Cells)

Cell substrate used to manufacture product.

제품 제조에 사용되는 세포 기질.

미가공 벌크(Unprocessed Bulk)


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One or multiple pooled harvests of cells and culture media. When cells are not

readily accessible, the unprocessed bulk would constitute fluid harvested from the

fermenter.

하나 이상의 세포 및 배양 배지 수득물. 세포에 용이하게 접근할 수 없는 경우, 발효기에서

수득한 액체가 미가공 벌크를 구성한다.

바이러스(Virus)

Intracellularly replicating infectious agents that are potentially pathogenic,

possessing only a single type of nucleic acid (either RNA or DNA), are unable to

grow and undergo binary fission, and multiply in the form of their genetic material.

병원성일 가능성이 있고 한 종류의 핵산(RNA 또는 DNA)만 보유하며 증식하거나

이분법으로 분열하지 않고 유전 물질 형태로 늘어나는, 세포 내에서 복제되는 감염성 인자.

외래성 바이러스(Adventitious Virus)

Unintentionally introduced contaminant viruses.

의도적이지 않게 유입된 오염 바이러스.

내인성 바이러스(Endogenous Virus)

Viral entity whose genome is part of the germ line of the species of origin

of the cell line and is covalently integrated into the genome of animal from

which the parental cell line was derived. For the purposes of this document,

intentionally introduced, non-integrated viruses such as EBV used to

immortalise cell substrates or Bovine Papilloma Virus fit in this category.

유전체가 세포주 유래 종 생식 계열의 일부이며 모 세포주가 유래한 동물

유전체에 통합되어 있는 바이러스 개체. 여기서는 BPV(Bovine Papilloma

Virus)나 세포 기질의 불멸화에 사용된 EBV 같은, 의도적으로 도입된 비통합

바이러스가 이 카테고리에 속한다.

비내인성 바이러스(Non-endogenous Virus)

Viruses from external sources present in the Master Cell Bank.

MCB에 존재하는 외부 유래 바이러스.

비특이적 모델 바이러스(Non-specific Model Virus)

A virus used for characterisation of viral clearance of the process when the

purpose is to characterise the capacity of the manufacturing process to


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remove and/or inactivate viruses in general, i.e., to characterise the

robustness of the purification process.

제조 공정의 일반적인 바이러스 제거 및/또는 불활화 능력의 특성 분석, 즉 정제

공정의 견고성 특성 분석을 목적으로 하는, 공정의 바이러스 클리어런스 특성

분석에 사용되는 바이러스.

관련 바이러스(Relevant Virus)

Virus used in process evaluation studies which is either the identified virus,

or of the same species as the virus that is known, or likely to contaminate

the cell substrate or any other reagents or materials used in the

production process.

확인된 바이러스이거나 생산 공정에 사용되는 세포 기질이나 기타 시약, 또는

물품을 오염시키는 것으로 알려져 있거나 그럴 가능성이 있는 바이러스와 동일한

종의 바이러스로, 공정 평가 실험에 사용되는 바이러스.

특이적 모델 바이러스(Specific Model Virus)

Virus which is closely related to the known or suspected virus (same genus

or family), having similar physical and chemical properties to those of the

observed or suspected virus.

관찰된 바이러스나 의심되는 바이러스와 유사한 물리적/화학적 특징을 갖는,

기지의 바이러스 또는 의심 바이러스와 접한 관계에 있는(동일 속 또는 과)

바이러스.

바이러스 클리어런스(Viral Clearance)

Elimination of target virus by removal of viral particles or inactivation of viral

infectivity.

바이러스 감염성의 불활화 또는 바이러스 입자의 제거에 의한 목표 바이러스의 배제.

바이러스성 입자(Virus-like Particles)

Structures visible by electron microscopy which morphologically appear to be

related to known viruses.

형태적으로 기지의 바이러스와 관계가 있는 것으로 보이는, 전자 현미경으로 보이는 구조물.

바이러스 제거(Virus Removal)

Physical separation of virus particles from the intended product.


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목적 제품에서 바이러스 입자를 물리적으로 분리하는 것.

WCB(Working Cell Bank)

The WCB is prepared from aliquots of a homogeneous suspension of cells obtained

from culturing the MCB under defined culture conditions.

WCB는 지정 배양 조건에서 MCB를 배양하여 확보한 균질한 세포 현탁액 분주물로 만든다.


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Table 1: 여러 세포 레벨에서 1회 실시하는 바이러스 시험(Virus Tests to Be

Performed Once at Various Cell Levels)

MCB WCBa Cells at the

limitb

Tests for Retroviruses and Other Endogenous Viruses

Infectivity + - +

Electron microscopyc +c - +c

Reverse transcriptased +d - +d

Other virus-specific testse as appropriatee - as appropriatee

Tests for Non-endogenous or Adventitious Viruses

In vitro Assays + -f +

In vivo Assays + -f +

Antibody production testsg +g - -

Other virus-specific testsh +h - -

a. See text - Section III.A.2.

본문 참조 – 섹션 III.A.2

b. Cells at the limit: cells at the limit of in vitro cell age used for production (See

text - Section III.A.3).

한계 세포: 생산용 체외 세포 연령 한계 시점의 세포(본문 참조 – 섹션 III.A.3).

c. May also detect other agents.

다른 인자도 검출 가능.

d. Not necessary if positive by retrovirus infectivity test.

레트로바이러스 감염성 검사에서 양성이 나오면, 필요하지 않음.

e. As appropriate for cell lines which are known to have been infected by such

agents.

그와 같은 인자에 의해 감염되는 것으로 알려진 세포주인 경우에 적절함.

f. For the first WCB, this test should be performed on cells at the limit of in vitro

cell age, generated from that WCB; for WCBs subsequent to the first WCB, a

single in vitro and in vivo test can be done either directly on the WCB or on

cells at the limit of in vitro cell age.

첫 WCB인 경우, 그 WCB에서 유래한 체외 세포 연령 한계 시점의 세포에 대하여 이

시험을 실시한다. 첫 WCB 이후의 WCB인 경우, WCB 또는 체외 세포 연령 한계


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시점의 세포에 대하여 단일 체외/체내 시험을 직접 실시할 수 있다.

g. e.g., MAP, RAP, HAP - Usually applicable for rodent cell lines.

예: MAP, RAP, HAP – 일반적으로 설치류 세포주에 적용.

h. e.g., tests for cell lines derived from human, non-human primate or other cell

lines as appropriate.

예: 사람 또는 비사람 영장류 유래 세포주, 또는 기타 세포주의 시험


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Table 2: 바이러스 시험에 사용할 수 있는 분석 방법의 용도와 한계(예)(Examples of

the Use and Limitations of Assays Which May Be Used to Test for Virus)

TEST TEST ARTICLE DETECTION

CAPABILITY

DETECTION

LIMITATION

Antibody production Lysate of cells and

their culture medium

세포 용해물 및 이의

배양 배지

Specific viral

antigens

특이적 바이러스 항원

Antigens not

infectious for animal

test system

항원은 동물 시험

시스템에서 감염성이

없음

in vivo virus screen Lysate of cells and



배양 배지

Broad range of

viruses pathogenic

for humans

사람 병원성의 다양한

바이러스

Agents failing to

replicate or produce

diseases in the test

system

시험 시스템에서는

복제 또는 질병 유발

능력 없음

in vitro virus screen

for:

Broad range of

viruses pathogenic

for humans

사람 병원성의 다양한

바이러스

Agents failing to

replicate or produce

diseases in the test

system

시험 시스템에서는

복제 또는 질병 유발

능력 없음

1. Cell bank

characterisation

2. Production screen

1. Lysate of cells and


(for co-cultivation,

intact cells should be

in the test article)


배양 배지(동시 배양인

경우, 시험 물품에

완전한 세포가 있어야

함

2. Unprocessed bulk


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harvest or lysate of

cells and their cell

culture medium from

the production

reactor

미가공 벌크 수득물

또는 세포 용해물 및

생산 반응기에서

확보한 이의 배양 배지

TEM on: Virus and virus-like

particles

바이러스 및

바이러스성 입자

Qualitative assay

with assessment of

identity

정성적 분석 및 확인

평가

1. Cell substrate

2. Cell culture

supernatant

1. Viable cells

살아 있는 세포

2. Cell-free culture

supernatant

세포가 없는 배양

상청액

Reverse

transcriptase (RT)

Cell-free culture

supernatant


상청액

Retroviruses and

expressed retroviral

RT

레트로 바이러스 및

발현된 레트로바이러스

RT

Only detects

enzymes with

optimal activity

under preferred

conditions.

Interpretation may

be difficult due to

presence of cellular

enzymes;

background with

some concentrated

samples

바람직한 조건에서

최적 활성을 나타내는


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효소만 검출. 세포

효소의 존재로 인하여

해석이 어려울 수

있음. 일부 농축

검체의 백그라운드

Retrovirus (RV)

infectivity

Cell-free culture

supernatant


상청액

Infectious

retroviruses

감염성 레트로바이러스

RV failing to

replicate or form

discrete foci or

plaques in the

chosen test system

RV는 선택된 시험

시스템에서 복제 또는

뚜렷한 병소나

플라크를 형성하지

못함

Cocultivation Viable cells

살아 있는 세포

Infectious

retroviruses

감염성 레트로바이러스

RV failing to

replicate

RV는 복제 못함

1. Infectivity

endpoint

2. TEM endpoint

3. RT endpoint

1. See above under

RV infectivity

상기 RV 감염성 참조

2. See above under

TEMa

상기 TEM 참조

3. See above under

RT

상기 RT 참조

PCR (Polymerase

chain reaction)

Cells, culture fluid

and other materials

세포, 배양액, 기타

물품

Specific virus

sequences

특이적 바이러스 서열

Primer sequences

must be present.

Does not indicate

whether virus is

infectious

프라이머 서열이

있어야 함. 바이러스

감염성은 알 수 없음.


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a In addition, difficult to distinguish test article from indicator cells

이외에도, 지표 세포와 시험 물품을 구분하기 어려움.


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Table 3: 항체 생산 시험에서 검출되는 바이러스(Virus Detected in Antibody

Production Tests)

MAP HAP RAP

Ectromelia Virus2,3

Lymphocytic

Choriomeningitis Virus

(LCM)1,3

Hantaan Virus1,3

Hantaan Virus1,3

Pneumonia Virus of Mice

(PVM)2,3

Kilham Rat Virus (KRV)2,3

K Virus 2 Reovirus Type 3 (Reo3)

1,3 Mouse Encephalomyelitis

Virus (Theilers, GDVII)2

Lactic Dehydrogenase Virus

(LDM)1,3

Lymphocytic

Choriomeningitis Virus

(LCM)1,3

Minute Virus of Mice 2,3

Mouse Adenovirus (MAV)2,3

Mouse Cytomegalovirus

(MCMV)2,3

Sendai Virus1,3

SV5


(PVM)2,3

Rat Coronavirus (RCV)2

Reovirus Type 3 (Reo3)1,3

Sendai Virus1,3

Sialoacryoadenitis Virus

(SDAV) 2

Mouse Encephalomyelitis

Virus (Theilers, GDVII)2

Toolan Virus (HI)2,3

Mouse Hepatitis Virus

(MHV)2

Mouse Rotavirus (EDIM)2,3


(PVM)2,3

Polyoma Virus 2

Reovirus Type 3 (Reo3)1,3

Sendai Virus1,3

Thymic Virus 2

1. Viruses for which there is evidence of capacity for infecting humans or

primates.

사람 또는 영장류 감염성 증거가 있는 바이러스

2. Viruses for which there is no evidence of capacity for infecting humans.


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사람 감염성 증거가 없는 바이러스

3. Virus capable of replicating in vitro in cells of human or primate origin.

사람 또는 영장류 유래 세포에서 체외 조건의 복제 능력이 있는 바이러스


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Table 4: 정제 벌크의 바이러스 시험 및 바이러스 클리어런스 공정 평가를 위한 추진

계획(Action Plan for Process Assessment of Viral Clearance and Virus Tests

on Purified Bulk)

Case A Case B Case C2 Case D2 Case E2

STATUS

상태

Presence of virus1

바이러스 존재

- - + + (+)3

Virus-like particles1

바이러스성 입자

- - - - (+)3

Retrovirus-like particles1

레트로바이러스성 입자

- + - - (+)3

Virus identified

바이러스 확인

not

applicable

+ + + -

Virus pathogenic for humans

사람 병원성 바이러스

not

applicable

-4 -4 + unknown

ACTION

조치

Process characterisation of viral

clearance using non-specific

“model” viruses

비특이적 "모델" 바이러스를 활용한

바이러스 클리어런스 공정 특성

분석

yes5 yes5 yes5 yes5 yes7

Process evaluation of viral

clearance using “relevant” or

specific “model” viruses

"관련" 또는 특이적 "모델"

바이러스를 활용한 바이러스

클리어런스 공정 평가

no yes6 yes6 yes6 yes7

Test for virus in purified bulk

정제 벌크의 바이러스 시험

not

applicable

yes8 yes8 yes8 yes8

1. Results of virus tests for the cell substrate and/or at the unprocessed bulk

level. Cell cultures used for production which are contaminated with viruses

will generally not be acceptable. Endogenous viruses (such as retroviruses) or


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viruses that are an integral part of the MCB may be acceptable if appropriate

viral clearance evaluation procedures are followed.

세포 기질 및/또는 미가공 벌크를 대상으로 실시한 바이러스 시험 결과. 바이러스에

오염된 생산용 세포 배양액은 일반적으로 적합하지 않다. 내인성 바이러스(예,

레트로바이러스) 또는 MCB의 통합적 일부인 바이러스는, 적절한 바이러스

클리어런스 평가 절차를 거친다면 수용할 수 있다.

2. The use of source material which is contaminated with viruses, whether or not

they are known to be infectious and/or pathogenic in humans, will only be

permitted under very exceptional circumstances.

사람 감염성 및/또는 병원성이 있건 없건, 바이러스에 오염된 기원 물질의 사용은,

매우 예외적인 상황에서만 허용된다.

3. Virus has been observed by either direct or indirect methods.

직접 또는 간접 방법으로 바이러스 관찰.

4. Believed to be non-pathogenic.

비병원성으로 생각됨.

5. Characterisation of clearance using non-specific “model” viruses should be

performed.

비특이적 "모델" 바이러스를 이용한 클리어런스 특성 분석을 실시해야 한다.

6. Process evaluation for “relevant” viruses or specific “model” viruses should be

performed.

"관련" 바이러스 또는 특이적 "모델" 바이러스를 대상으로 한 공정 평가를 실시한다.

7. See text under Case E.

본문의 케이스 E 부분 참조.

8. The absence of detectable virus should be confirmed for purified bulk by

means of suitable methods having high specificity and sensitivity for the

detection of the virus in question. For the purpose of marketing authorisation,

data from at least 3 lots of purified bulk manufactured at pilot-plant scale or

commercial scale should be provided. However, for cell lines such as CHO cells

for which the endogenous particles have been extensively characterised and

adequate clearance has been demonstrated, it is not usually necessary to

assay for the presence of the non-infectious particles in purified bulk.

문제의 바이러스 검출 특이도와 민감도가 높은 적합한 방법으로, 정제 벌크에 검출

가능한 바이러스가 없음을 확인해야 한다. 판매 허가 신청 시에는, 파일럿 플랜트

규모 또는 상업적 스케일로 제조된 최소 3개 로트의 정제 벌크 데이터를 제공한다.

하지만 내인성 입자의 특성 분석이 광범위하게 수행되었고 적절한 클리어런스가


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56

증명된 CHO 세포 같은 세포주인 경우, 정제 벌크를 대상으로 비감염성 입자의 존재

여부를 확인하는 시험은 일반적으로 필요하지 않다.


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APPENDIX 1

특성 분석이 완료된 세포 뱅크를 체내에서 증식시켜 생산하는 제품(Products Derived

from Characterised Cell Banks which Were Subsequently Grown in vivo)

For products manufactured from fluids harvested from animals inoculated with cells

from characterised banks, additional information regarding the animals should be

provided.

특성 분석이 완료된 뱅크의 세포를 동물에 접종하고 이 동물에서 수득한 체액으로 제품을

제조하는 경우에는, 동물과 관련하여 추가적인 정보를 제공해야 한다.

Whenever possible, animals used in the manufacture of biotechnological/biological

products should be obtained from well defined, specific pathogen-free colonies.

Adequate testing for appropriate viruses, such as those listed in Table 3, should be

performed. Quarantine procedures for newly arrived as well as diseased animals

should be described, and assurance provided that all containment, cleaning and

decontamination methodologies employed within the facility are adequate to

contain the spread of adventitious agents. This may be accomplished through the

use of a sentinel program. A listing of agents for which testing is performed should

also be included. Veterinary support services should be available on-site or within

easy access. The degree to which the vivarium is segregated from other areas of

the manufacturing facility should be described. Personnel practices should be

adequate to ensure safety.

가능하면 생명공학/생물학적 제품의 제조에 사용되는 동물은, 잘 규명되고 특정 병원체가

없는 콜로니에서 확보해야 한다. 표 3에 정리된 바와 같이 적절한 바이러스 시험도

실시한다. 새로 입고된 동물과 질병에 걸린 동물의 격리 절차를 기술하고, 해당 시설 내의

모든 차폐, 세척, 오염 제거 방법이 외래성 바이러스의 확산을 방지하는데 적절하다는

보증이 있어야 한다. 이는 감시 프로그램을 활용하여 달성할 수 있다. 시험 대상 인자 목록

또한 포함해야 한다. 수의학적 지원 기능을 현장에 구비하거나 용이하게 확보할 수 있어야

한다. 동물 사육장을 다른 제조 시설 지역과 분리하는 정도도 기술한다. 작업자의 업무

절차는 안전성 보증에 적절해야 한다.

Procedures for the maintenance of the animals should be fully described. These

would include diet, cleaning and feeding schedules, provisions for periodic

veterinary care if applicable, and details of special handling that the animals may

require once inoculated. A description of the priming regimen(s) for the animals,


GI014A


58

the preparation of the inoculum and the site and route of inoculation should also be

included.

동물 유지관리 절차를 충분히 기술한다. 사료, 세척 및 급식 일정, 해당되는 경우에는

주기적인 수의학적 관리 대책, 그리고 일단 접종을 한 다음에 필요할 수 있는 특별 취급

사항을 포함하여 기술한다. 동물 프라이밍 방법, 접종물 준비, 접종 부위 및 경로에 관한

설명도 포함한다.

The primary harvest material from animals may be considered an equivalent stage

of manufacture to unprocessed bulk harvest from a bioreactor. Therefore, all testing

considerations previously outlined in Section IV of this document should apply. In

addition, the manufacturer should assess the bioburden of the unprocessed bulk,

determine whether the material is free of mycoplasma, and perform species-specific

assay(s) as well as in vivo testing in adult and suckling mice.

동물에서 확보한 일차 수득 물품은 바이오리액터에서 수득한 미가공 벌크에 상응하는 제조

단계로 간주될 수 있다. 그러므로 섹션 IV에서 설명한 모든 시험 관련 사항을 고려해야

한다. 이외에도 미가공 벌크의 바이오버든을 평가하고, 마이코플라즈마 존재 여부를

확인하며, 종 특이적 분석과 성체 마우스와 영아 마우스를 대상으로 체내 시험을 실시한다.


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APPENDIX 2

바이러스 클리어런스 실험을 위한 바이러스 선택(The Choice of Viruses for Viral

Clearance Studies)

A. 유용한 "모델" 바이러스의 예(Examples of useful "model" viruses)

1. Non-specific “model” viruses representing a range of physico-chemical

structures:

다양한 이화학적 구조를 대표하는 비특이적 "모델" 바이러스

− SV40 (Polyomavirus maccacae 1), human polio virus 1 (Sabin),

animal parvovirus or some other small, non-enveloped viruses;

SV 40(Polyomavirus maccacae 1), 사람 폴리오 바이러스 1(Sabin),

동물 파보바이러스, 또는 기타 작은 비외피성 바이러스

− a parainfluenza virus or influenza virus, Sindbis virus or some other

medium-to-large, enveloped, RNA viruses;

파라인플루엔자 바이러스 또는 인플루엔자 바이러스, 신드비스 바이러스,

기타 중형 내지 대형 외피성 RNA 바이러스

− a herpes virus (e.g., HSV-1 or a pseudorabies virus), or some other

medium-to-large, DNA viruses.

헤르페스 바이러스(예, HSV-1, 또는 가성광견병 바이러스), 또는 기타 중형

내지 대형 DNA 바이러스

These viruses are examples only and their use is not mandatory.

이들 바이러스는 예에 불과하며, 이 바이러스를 반드시 사용해야 하는 것은

아니다.

2. For rodent cell substrates murine retroviruses are commonly used as

specific “model” viruses.

설치류 세포 기질인 경우에는 설치류 레트로바이러스가 특이적 "모델" 바이러스로

흔히 사용된다.

B. 바이러스 클리어런스 실험에 사용되는 바이러스의 예(Examples of viruses

which have been used in viral clearance studies)


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Several viruses which have been used in viral clearance studies are listed in Table

A-1. However, since these are merely examples, the use of any of the viruses in the

table is not mandatory and manufacturers are invited to consider other viruses,

especially those which may be more appropriate for their individual production

processes. Generally, the process should be assessed for its ability to clear at least

three different viruses with differing characteristics.

바이러스 클리어런스 실험에 사용되는 여러 바이러스가 표 A-1에 정리되어 있다. 하지만

이들은 단순히 예에 불과하므로, 표에 제시된 바이러스를 반드시 사용해야 하는 것은

아니며, 다른 바이러스, 특히 생산 공정에 보다 적절한 바이러스를 고려해야 한다.

일반적으로 서로 다른 특성을 지닌 최소 3종류의 바이러스에 대한 클리어런스 능력을

평가한다.


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Table A-1: 바이러스 클리어런스 실험에 사용되는 바이러스의 예(Examples of

Viruses Which Have Been Used in Viral Clearance Studies)

Virus Family Genus Natural

host

Genome Env Size

(nm)

Shape Resis-

tance*

Vesicular

Stomatitis Virus

Rhabdo Vesiculovirus Equine

Bovine

RNA yes 70x150 Bullet Low

Parainfluenza

Virus

Paramyxo Paramyxovirus Various RNA yes 100-

200+

Pleo/Spher Low

MuLV Retro Type C oncovirus Mouse RNA yes 80-110 Spherical Low

Sindbis Virus Toga Alphavirus Human RNA yes 60-70 Spherical Low

BVDV Flavi Pestivirus Bovine RNA yes 50-70 Pleo-Spher Low

Pseudorabies

Virus

Herpes Swine DNA yes 120-200 Spherical Med

Poliovirus Sabin

Type 1

Picorna Enterovirus Human RNA no 25-30 Icosahedral Med

Encephalomyo-

carditis Virus

(EMC)

Picorna Cardiovirus Mouse RNA no 25-30 Icosahedral Med

Reovirus 3 Reo Orthoreovirus Various RNA no 60-80 Spherical Med

SV40 Papova Polyomavirus Monkey DNA no 40-50 Icosahedral Very

high

Parvoviruses

(canine, porcine)

Parvo Parvovirus Canine

Porcine

DNA no 18-24 Icosahedral Very

high

* Resistance to physico-chemical treatments based on studies of production

processes. Resistance is relative to the specific treatment and it is used in the

context of the understanding of the biology of the virus and the nature of the

manufacturing process. Actual results will vary according to the treatment.

생산 공정 실험에 근거한 이화학적 처리에 대한 저항성. 저항성은 특정 처리와 관련된

것이며, 제조 공정의 특성과 바이러스의 생물학에 대한 이해를 바탕으로 정한다. 실제

결과는 처리 방법에 따라 다를 수 있다.

These viruses are examples only and their use is not mandatory.

이 바이러스는 예에 불과하며, 반드시 이 바이러스를 사용해야 하는 것은 아니다.


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APPENDIX 3

바이러스 분석 결과 평가 시의 통계학적 고려 사항(Statistical Considerations for

Assessing Virus Assays)

Virus titrations suffer the problems of variation common to all biological assay

systems. Assessment of the accuracy of the virus titrations and reduction factors

derived from them and the validity of the assays should be performed to define the

reliability of a study. The objective of statistical evaluation is to establish that the

study has been carried out to an acceptable level of virological competence.

모든 생물학적 분석 시스템에 공통적으로 존재하는 편차 문제 때문에 바이러스 역가 검사도

어려움이 있다. 바이러스 역가 검사의 정확성과 그에 근거한 감소율 및 분석의 유효성을

평가하여 실험의 신뢰성을 파악한다. 통계적 평가의 목적은 실험이 적합한 바이러스학적

수준으로 실시되었음을 확인하는 것이다.

1. Assay methods may be either quantal or quantitative. Quantal methods

include infectivity assays in animals or in tissue-culture-infectious-dose

(TCID) assays, in which the animal or cell culture is scored as either

infected or not. Infectivity titers are then measured by the proportion of

animals or culture infected. In quantitative methods, the infectivity

measured varies continuously with the virus input. Quantitative methods

include plaque assays where each plaque counted corresponds to a single

infectious unit. Both quantal and quantitative assays are amenable to

statistical evaluation.

분석 방법은 가부 반응 또는 계량적인 것일 수 있다. 가부 반응 방법으로는

동물을 이용한 감염성 분석 방법이나 TCID 방법이 있고, 이때 동물 또는 세포

배양물을 감염 또는 비감염으로 구분하여 평가한다. 다음에 감염성 정도를 감염된

동물이나 배양물의 비율로 계산한다. 계량적 방법인 경우에 측정 감염성은

바이러스 투입물에 따라 계속 달라진다. 계량적 방법으로는 플라크 분석법이

있는데, 각 플라크는 단일 감염 단위에 해당된다. 가부 반응 방법과 계량적 분석

방법 모두 통계 평가가 가능하다.

2. Variation can arise within an assay as a result of dilution errors, statistical

effects and differences within the assay system which are either unknown

or difficult to control. These effects are likely to be greater when different

assay runs are compared (between-assay variation) than when results


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63

within a single assay run are compared (within-assay variation).

희석 오류, 통계적 영향, 분석 시스템 내부의 차이(알려지지 않은 것이거나

관리가 어려운 것)로 인하여 분석 편차가 발생할 수 있다. 단일 분석 작업에 의한

결과들을 비교하는 것보다(within-assay variation), 서로 다른 분석 작업 결과를

비교할 때(between-assay variation) 이와 같은 영향이 더 크다.

3. The 95% confidence limits for results of within-assay variation normally

should be on the order of 0.5 log10 of the mean. Within-assay variation

can be assessed by standard textbook methods. Between-assay variation

can be monitored by the inclusion of a reference preparation, the estimate

of whose potency should be within approximately 0.5 log10 of the mean

estimate established in the laboratory for the assay to be acceptable.

Assays with lower precision may be acceptable with appropriate

justification.

분석내 편차 결과의 95% 신뢰한계는 일반적으로 평균의 0.5 log10이어야 한다.

분석내 편차는 표준적인 방법으로 평가할 수 있다. 분석간 편차는 참조 조제물을

이용해 모니터 할 수 있는데, 역가 추정치는 해당 분석법에 대하여 실험실에서

확립한 평균 추정치의 약 0.5 log10 이내여야 한다. 적절한 타당성이 있는

경우에는 이보다 낮은 정 도의 분석 방법도 인정될 수 있다.

4. The 95% confidence limits for the reduction factor observed should be

calculated wherever possible in studies of clearance of “relevant” and

specific “model” viruses. If the 95% confidence limits for the viral assays

of the starting material are +s, and for the viral assays of the material

after the step are +a, the 95% confidence limits for the reduction factor

are

"관련" 및 특이적 "모델" 바이러스의 클리어런스 실험 시에 가능하면, 관찰

감소율의 95% 신뢰한계를 계산해야 한다. 출발 물질 바이러스 분석의 95%

신뢰한계가 +s이고 해당 공정 단계 이후 바이러스 분석의 95% 신뢰한계가

+a라면, 감소율의 95% 신뢰한계는 다음과 같다.

저농도 바이러스의 검출 확률(Probability of Detection of Viruses at Low

Concentrations)


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At low virus concentrations (e.g., in the range of 10 to 1,000 infectious particles per

liter) it is evident that a sample of a few milliliters may or may not contain

infectious particles. The probability, p, that this sample does not contain infectious

viruses is:

바이러스 농도가 낮을 때는(예, 리터당 10 내지 1,000 감염성 입자 범위), 몇 리리터의

검체에 감염성 입자가 포함되어 있을 수도 있고, 포함되어 있지 않을 수도 있다. 이 검체가

감염성 바이러스를 포함하고 있지 않을 확률(p)은 다음과 같다.

p = ((V-v)/V)n

where V (liter) is the overall volume of the material to be tested, v (liter) is the

volume of the sample and n is the absolute number of infectious particles

statistically distributed in V.

여기서 V(L)는 시험 대상 물품의 총량이며, v(L)는 검체의 용량이고, n은 V에 통계적으로

분포하는 감염성 입자의 절대 수치이다.

If V >> v, this equation can be approximated by the Poisson distribution:

V >> v라면, 포아송 분포로 다음과 같은 공식을 구할 수 있다.

p = e-cv

where c is the concentration of infectious particles per liter.

여기서 c는 리터당 감염성 입자의 농도이다.

or, c = ln p /-v

As an example, if a sample volume of 1 ml is tested, the probabilities p at virus

concentrations ranging from 10 to 1,000 infectious particles per liter are:

예를 들어 1 mL의 검체를 검사한다면, 리터당 10 내지 1,000개의 감염성 입자가 있는

바이러스 농도에서의 확률(p)은 다음과 같다.

c 10 100 1000

p 0.99 0.90 0.37

This indicates that for a concentration of 1,000 viruses per liter, in 37% of sampling,


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1 ml will not contain a virus particle.

이는 리터당 1,000개의 바이러스가 있는 경우, 1 mL 중에 바이러스 입자가 포함되어 있지

않을 확률은 37%라는 의미이다.

If only a portion of a sample is tested for virus and the test is negative, the amount

of virus which would have to be present in the total sample in order to achieve a

positive result should be calculated and this value taken into account when

calculating a reduction factor. Confidence limits at 95% are desirable. However, in

some instances, this may not be practical due to material limitations.

검체 중 일부만을 상대로 바이러스 시험을 하며 이 시험 결과가 음성이라면, 양성 결과를

얻기 위하여 전체 검체에 존재해야 할 바이러스의 양을 계산해야 하며, 감소율을 계산할

때는 이 값을 고려해야 한다. 95% 신뢰한계가 바람직하다. 그러나 어떤 경우에는 물품

자체의 한계 때문에 이것이 가능하지 않을 수도 있다.


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APPENDIX 4

바이러스 클리어런스 실험 시의 감소율 계산(Calculation of Reduction Factors in

Studies to Determine Viral Clearance)

The virus reduction factor of an individual purification or inactivation step is defined

as the log10 of the ratio of the virus load in the pre-purification material and the

virus load in the post-purification material which is ready for use in the next step of

the process. If the following abbreviations are used:

각 정제 또는 불활화 단계의 바이러스 감소율은, 정제 이전 물품에 존재하는 바이러스

로드와 다음 공정 단계에서 투입될 준비가 완료된 정제 이후 물품에 존재하는 바이러스

로드 비율의 log10으로 표현한다. 다음과 같이 약어로 표현하면,

출발 물질(Starting material):

vol v'; titer 10a';

virus load: (v')(10 a'),

최종 물질(Final material):

vol v"; titer 10a";

virus load: (v")(10a"),

the individual reduction factors Ri are calculated according to

개별 감소율 Ri는 다음과 같이 계산된다.

10Ri = (v')(10a') / (v")(10a")

This formula takes into account both the titers and volumes of the materials before

and after the purification step.

정제 단계 전후 물품의 용량과 역가 모두를 고려한 공식이다.

Because of the inherent imprecision of some virus titrations, an individual reduction

factor used for the calculation of an overall reduction factor should be greater than

1.

일부 바이러스 역가의 내재적 비정 성 때문에, 전체 감소율 계산에 적용되는 개별

감소율은 1보다 커야 한다.


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The overall reduction factor for a complete production process is the sum logarithm

of the reduction factors of the individual steps. It represents the logarithm of the

ratio of the virus load at the beginning of the first process clearance step and at the

end of the last process clearance step. Reduction factors are normally expressed on

a logarithmic scale which implies that, while residual virus infectivity will never be

reduced to zero, it may be greatly reduced mathematically.

전체 생산 공정의 전체 감소율은, 개별 단계 감소율의 로그 합이다. 이는 첫 공정

클리어런스 단계 시작 시의 바이러스 로드와 마지막 공정 클리어런스 단계 종료 시점의

바이러스 로드 비율의 로그이다. 감소율은 로그 단위로 표현하며, 이는 잔여 바이러스

감염성이 절대 "0"으로 감소되지 않지만, 수학적으로 크게 감소될 수 있다는 의미이다.


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APPENDIX 5

용량별 입자 추정치 계산(Calculation of Estimated Particles per Dose)

This is applicable to those viruses for which an estimate of starting numbers can be

made, such as endogenous retroviruses.

내인성 레트로바이러스처럼, 시작 시점의 바이러스 수를 추정하기 위한 것이다.

예(Example):

I. 가정(Assumptions)

Measured or estimated concentration of virus in cell culture harvest = 106/ml

세포 배양 수득물 중 측정 또는 추정 바이러스 농도 = 106/mL

Calculated viral clearance factor = >1015

계산한 바이러스 클리어런스 비율 = >1015

Volume of culture harvest needed to make a dose of product = 1 litre (103 ml)

제품 1 투여 용량 제조에 필요한 배양 수득물의 양 = 1 L (103 mL)

II. 추정 입자/용량 계산(Calculation of Estimated Particles/Dose)

(106 virus units/ml)x(103 ml/dose)

Clearance factor >1015

= 109 particles/dose

Clearance factor >1015

= <10-6 particles/dose2

Therefore, less than one particle per million doses would be expected.

그러므로 100만 투여 용량 당 1개 미만의 입자가 예상된다.

q5ar1 viral safety evaluation of biotechnology products · ich q5a(r1) viral safety evaluation of...

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