산화스트레스 및 Amyloid β 의 세포독성으로부터

신경세포를 보호하는 Allantoin 의 효능 연구Protective Effect of Allantoin on Neuron

against Oxidative Damage and Amyloid beta Toxicity

21008 김용승

INDEX

연구 동기 및 서론연구 내용결과 및 결론추후 연구 방향 및 계획

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연구 동기 및 서론

학습 도중 아이디어 선정 정보 검색 및 구체화 고령화로 인한 Alzheimer 성 치매

증가 Allantoin 의 항산화적 효능 및 적용

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연구 내용

연구 대상

Sigma Aldrich 사에서 구매한

Neuro 2a Cell Line from mouse

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연구 내용

산화 스트레스의 측정과 Allantoin 의 작용

Neuro2a cell 을 배양하여 24well 에 균등하게 배양

농도별 Allantoin solution 100μl 을 24 시간 처리

24 시간후 H2O2 를 1mM 의 농도로 4 시간 처리 H2O2 비처리군 ( 대조군 ) 을 포함

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연구 내용

Amyloid β 의 세포독성과 Allantoin 의 작용

Neuro2a cell 을 배양하여 24well 에 균등하게 배양

농도별 Allantoin solution 100μl 와 Amyloid β 5μM을 24 시간 처리

Amyloid β 비처리군 ( 대조군 ) 을 포함21008 김용승

연구

내용

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세포 활성도 측정법 : WST-1

탈수소효소에 의해 생성된 Formazan 산물의 흡광도를 측정(420~480nm)Premix WST-1 을 1well 당 10μl 씩 첨가Incubator 에서 0.5~3 시간 반응

연구 내용

통계분석

WST-1 의 결과값을 정리하고 평균값 산출 평균값들을 그래프로 그리고 기준 시간 선정 정한 시간에서의 값 비교 , 분석 Student’s t test 를 진행하여 결과값의 통계학적

의미 존재 여부 판단

결과

및

결론

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• 산화 스트레스에 따른 활성도 및 보호 효과

. ** P<0.01 vs control. ns = not significant difference

결과

및

결론

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• 세포 독성에 따른 활성도 및 보호 효과

ns = not significant difference

결과 및 결론

산화스트레스에 따른 활성도 및 보호 효과

이 실험에서 H2O2 로 인한 세포 활성도는 유의미하게 감소하였으나 대조군과 비교하였을 때 Allantoin 으로 인한 활성도 증가는 유의미하지 않았다 . 아쉽지만 실험데이터는 Allantoin 이 약간의 항산화효과 경향은 보였으나 , 통계적으로 차이를 줄 만큼 효과가 없었다 .

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결과 및 결론

세포 독성에 따른 활성도 및 보호 효과

Amyloid β 의 독성으로 인해 세포의 활성도는 대조군에 비해 실험군에서 감소하였으나 급성 세포독성이 약하였기 때문에 유의미하게 감소하지 않았다 . 또한 대조군에서 Allantoin 의 농도가 10μM 이었을 때 가장 활성도가 높은 경향을 보였으나 큰 차이를 보이지 않았다 . 이 부분에 대해서도 Allantoin 의 세포 독성에 대한 신경세포 보호효과는 없었다 .

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결과 및 결론

Allantoin 의 신경세포 보호 효과에 대한 종합적 평가

이번 연구에서 Allantoin 의 신경세포 보호효과에 대한 전반적 능력은 미미했다 . H2O2 의 대조군 에서 Allantoin 농도를 올리면 WST-1 수치가 올라가지만 , Amyloid β 의 대조군 에서는 그런 경향이 없으므로 , Allantoin 이 세포 분열을 증가시키는지 여부는 증명되었다고 하기는 어렵다 . 이부분은 추가실험으로 다시 확인이 필요한 부분이다 . 위와 같은 세포 활성능력이 아닌 알려져있는 산화 스트레스 작용 능력도 이 실험으로는 증명 할 수 없었고 , 세포독성에 대한 실험 결과도 Allantoin 이 Amyloid β에는 효과가 없어서 이 실험에서는 Amyloid β 에의한 알츠하이머병에서는 효과가 일단 없는 것으로 평가를 내린다 .

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추후 연구 방향 및 계획

Allantoin 의 작용 기전 확인

Allantoin 의 표적 단백질 확인

Allantoin 의 표적단백질과 Amyloid β 의 표적단백질 비교

Allanoin 과 산화 스트레스에 공통적으로 반응하는 단백질 확인 및 산화로 인한 노화 연구

산화스트레스와 Allantoin 의 실험 순서 및 시간 재조정

실험의 반복회수 증가

동물 실험모델 이용

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