实验八　实验八　细菌的鉴定（细菌的鉴定（ BBLBBL 半半自动鉴定系统）自动鉴定系统）

一、教学要求了解不同的微生物快速鉴定方法及应用初步掌握细菌自动鉴定系统 （ BBL CRYSTAL ）的操

作技术二、实验原理1 、 Miniaturized Biochemical Assays Bacteria can be identified by specific biochemical produc

ts they produce during growth. Biochemical and enzymatic reactions Miniaturized biochemical assays test for these specific prod

ucts

API- Identification Kits

Gram-negative bacteria

Staphylococci

22 、、 ImmunoassaysImmunoassays

血清学反应（ Serological reactions ）Agglutination reactions 、 Precipitation reactions

免疫标记（ immunolabel) Radioimmunoassays (RIA) Fluorescent immunoassays (FIA) Enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA) Chemiluminesent Immunoassay(CLIA) 、 Time-resolved fluorescent immunoassays （ TRFI

A ） Immunogold labelling

ELISAELISA （（ enzyme linked immunosorbent enzyme linked immunosorbent

assayassay ）） The ELISA can be used to detect the presence

of antigens that are recognized by an antibody, or it can be used to test for antibodies that recognize an antigen.

Sandwich ELISA

Immunogold labelling techiquesImmunogold labelling techiques

斑点免疫金渗滤法胶体金标记免疫层析法

33 、、 Nucleic acid based assayNucleic acid based assay

DNA hybridization– followed by detection with

Dot blot assay Fluorescence or Chemiluminesence

Polymerase Chain Reaction (PCR)– followed by detection with

Gel electrophoresis Fluorescence or Chemiluminesence

New assay formats under development

Automated Identification Systems•VITEK 系列全自动微生物分析系统（ biosMerieumx ）•BBL CrystalTM半自动 /自动细菌鉴定系统（ BD）鉴定板，比浊仪，微生物鉴定专家数据分析系统，自动判读仪 (Autoreader)

 

1 、  鉴定版（ 6 类）NH 奈瑟氏 / 嗜血杆菌 3.0 麦氏浊度 35 ～ 3

7 ℃ 孵育 4 小时GP 革兰氏阳性菌 0.5 麦氏浊度 35 ～ 37

℃ 孵育 18 ～ 24 小时RGP 快速革兰氏阳性菌 2.0 麦氏浊度 35 ～

37 ℃ 孵育 4 小时ANR 厌氧菌 4.0-5.0 麦氏浊度 35 ～ 37 ℃

孵育 4 小时ENF 肠 / 非发酵菌 0.5 麦氏浊度 35 ～ 37

℃ 孵育 18 ～ 20 小时RSE 快速粪 / 肠菌 0.5-1.0 麦氏浊度 35 ～ 3

7 ℃ 孵育 3 小时

三 材料与器材三 材料与器材菌种：待测的分纯菌株试剂：无菌水，液体石腊，灭菌滴管等API 20 E 系统

四 操作步骤 四 操作步骤 (BBL CRYSTAL—(BBL CRYSTAL— 细菌自动鉴定细菌自动鉴定系统 系统 ))

1 、配制菌液 挑取单个菌落，在肉汤管（厂商已提供）中混匀，调节

好菌液浓度（ 0.5-1.0 麦氏浊度 ）。2 、接种 取出盛液盒 , 配制好的菌悬液直接倒入头部，轻轻地来

回颠倒盛液盒，使菌液均匀充满每一孔，并让多余的菌液回到头部。撕开鉴定板的密封包装，鉴定板，其泡沫部位对应盛液盒的头部，均匀下压，使鉴定板和盛液盒合紧。

3 、培养 翻转鉴定板（标签向下）放鉴定板入配套托盘内，放入

非 CO2 35-37OC ，湿度 40-60% 的孵育箱孵育 3.0h 。

4 、读板按时取出鉴定板，立刻判读结果。如果暂时无法判读结果。放鉴定板于 2 ～ 8℃冰箱。尽早判读。注意事项：•应使用新鲜菌落（菌龄小于 24 小时）•使用单个菌落配制菌悬液。 90% 以上的鉴定错误或无鉴定结果是由细菌不纯引起。•不同的鉴定板需配置特定的菌液浓度。•鉴定板起封后， 1 小时内使用。•已装有标本的检测板 5 分钟内放入孵育箱。•检测板孵育时，重叠不超过两层。•孵育完成需尽快将鉴定板从温箱中取出，不能超过规定孵育时间。（可提前不能延后）。•及时读板，否则放入冰箱。•每种鉴定板只能鉴定其菌种库中包含的细菌种类。所以选择鉴定板前，请仔细阅读各鉴定板的鉴定菌种库。

五 注意事项配制菌悬液时一定要按操作要求调节好浓度。

六 思考题采用细菌自动鉴定系统 （ BBL CRYSTAL ）进行细菌鉴定有何优缺点 ？