Öøðø ö îÙüöÿöóîídìÜóîí Öøøö úÖøøï ó îí dì ø÷î...

Ref. code: 25605809032146MLB

การประเมนความสมพนธทางพนธกรรมและการระบพนธทเรยน โดยใชเครองหมายดเอนเอ

โดย

นางสาวทศนย สงหศลารกษ

วทยานพนธนเปนสวนหนงของการศกษาตามหลกสตร

วทยาศาสตรมหาบณฑต (เทคโนโลยชวภาพ) สาขาวชาเทคโนโลยชวภาพ

คณะวทยาศาสตรและเทคโนโลย มหาวทยาลยธรรมศาสตร ปการศกษา 2560

ลขสทธของมหาวทยาลยธรรมศาสตร

Ref. code: 25605809032146MLB

การประเมนความสมพนธทางพนธกรรมและการระบพนธทเรยน โดยใชเครองหมายดเอนเอ

โดย


วทยานพนธนเปนสวนหนงของการศกษาตามหลกสตร วทยาศาสตรมหาบณฑต (เทคโนโลยชวภาพ)

สาขาวชาเทคโนโลยชวภาพ คณะวทยาศาสตรและเทคโนโลย มหาวทยาลยธรรมศาสตร

ปการศกษา 2560 ลขสทธของมหาวทยาลยธรรมศาสตร

Ref. code: 25605809032146MLB

GENETIC RELATIONSHIP ASSESSMENT AND IDENTIFICATION OF DURIAN (Durio zibethinus Murr.) USING DNA MARKERS

BY

MISS TASSANEE SINGHSILARAK

A THESIS SUBMITTED IN PARTIAL FULFILLMENT OF THE REQUIREMENTS FOR THE DEGREE OF MASTER OF SCIENCE (BIOTECHNOLOGY)

DEPARTMENT OF BIOTECHNOLOGY FACULTY OF SCIENCE AND TECHNOLOGY

THAMMASAT UNIVERSITY ACADEMIC YEAR 2017

COPYRIGHT OF THAMMASAT UNIVERSITY

Ref. code: 25605809032146MLB

(1)

หวขอวทยานพนธ การประเมนความสมพนธทางพนธกรรมและการระบพนธทเรยนโดยใชเครองหมายดเอนเอ

ชอผเขยน นางสาวทศนย สงหศลารกษ ชอปรญญา วทยาศาสตรมหาบณฑต (เทคโนโลยชวภาพ) สาขาวชา/คณะ/มหาวทยาลย สาขาวชาเทคโนโลยชวภาพ

วทยาศาสตรและเทคโนโลย มหาวทยาลยธรรมศาสตร

อาจารยทปรกษาวทยานพนธ อาจารยทปรกษาวทยานพนธรวม

รองศาสตราจารย ดร. ธระชย ธนานนต ผชวยศาสตราจารย ดร. นฤมล ธนานนต

ปการศกษา 2560

บทคดยอ

ทเรยน เปนผลไมเมองรอนทเจรญเตบโตไดดในเขตรอนบรเวณใกลแถบเสนศนยสตร ใน

ประเทศไทยถอเปนผลไมทางเศรษฐกจทส าคญ เนองจากเปนทนยมของผบรโภคและสามารถสงออกนอกประเทศท ารายไดมหาศาลใหกบเกษตรกร ประเทศไทยมทเรยนมากกวา 200 พนธ พนธทนยมคาขาย คอ หมอนทอง และชะน เพราะรสชาตอรอยและใหผลผลตสง ภายหลงเรมมการคาขายพนธอนมากขน เชน กานยาว พวงมณ หลงลบแล และหลนลบแล การจ าแนกพนธทเรยนโดยดจากลกษณะสณฐานจงท าใหเกดความยงยาก งานวจยนเลอกศกษาเครองหมายสกอต เครองหมาย แฮตอารเอพด และล าดบนวคลโอไทดของต าแหนงจ าเพาะมาชวยประเมนความสมพนธและจ าแนกทเรยนจ านวน 40 พนธ การศกษาดวยเครองหมายสกอตสามารถคดเลอกไพรเมอรจ านวน 19 ชนด เพอเพมปรมาณดเอนเอ แผนภมความสมพนธมคาดชนความสมพนธ 0.67-0.89 สวนการศกษาดวยเครองหมายแฮตอารเอพดสามารถคดเลอกไพรเมอรจ านวน 20 ชนด แผนภมความสมพนธมคาดชนความเหมอน 0.59-0.89 และเมอวเคราะหรวมกนของเครองหมายสกอตและเครองหมายแฮตอารเอพด แผนภมความสมพนธมคาดชนความเหมอน 0.65-0.87 สวนการศกษาล าดบนวคลโอไทดต าแหนงจ าเพาะบรเวณยน rbcL และ rpoC1 แลวสรางแผนภมความสมพนธทางพนธกรรมดวยโปรแกรม MEGA7 พบวายน rbcL สามารถแยกพนธท เรยนได 4 พนธ ไดแก กานสน หาลกไมถงผว กะเทยขวสน และเมดในกานยาว ในขณะทยน rpoC1 ไมสามารถแยกพนธทเรยน 40 พนธ ออกจากกน โดยทกพนธมล าดบนวคลโอไทดเหมอนกนทงหมด

ค าส าคญ: ทเรยน, สกอต, แฮตอารเอพด, ล าดบนวคลโอไทดของต าแหนงจ าเพาะ, การระบพนธ

Ref. code: 25605809032146MLB

(2)

Thesis Title GENETIC RELATIONSHIP ASSESSMENT AND IDENTIFICATION OF DURIAN (Durio zibethinus Murr.) USING DNA MARKERS

Author Miss Tassanee Singhsilarak Degree Master of science (Biotechnology) Department/Faculty/University Biotechnology

Science and Technology Thammasat University

Thesis Advisor Thesis Co-Advisor

Associate Prof. Dr.Theerachai Thanananta, Ph.D. Assistant Prof. Dr.Narumol Thanananta, Ph.D.

Academic Year 2017

ABSTRACT

Durian (Durio zibethinus Murr.) is a tropical fruit that grows well in the

tropics near the equator. In Thailand, it is a major economic fruit because it is popular for local consumption and can be exported to abroad, producing enormous income for gardeners. There are more than 200 durian cultivars/varieties in Thailand. Most of the commercial cultivars are Monthong and Chani because their good taste and high yield. But later, more cultivars such as Kanyao, Phuang Mani, Longlap-lae and Linlap-lae were sold on the market, thus the identification by morphological characteristics is difficult. This research, SCoT Hat-RAPD and the nucleotide sequence of specific genes were used for assessment the genetic relationship and identification of 40 cultivars. The study by using the SCoT marker was selected 19 SCoT primers to increase the amount of DNA. The dendogram showed a correlation coefficient of 0.67-0.89. In addition, using the HAT-RAPD markers was selected 20 primers. The dendogram showed a similarity coefficient 0.59-0.89. Then, analysis both SCoT and HAT-RAPD marker showed that the dendogram was given a similarity coefficient 0.65-0.87. Next, phylogenetic tree by the nucleotide sequence of rbcL and rpoC1 genes were constructed by MEGA7. The results showed that the rbcL gene could be classify into 4

Ref. code: 25605809032146MLB

(3)

cultivars which is Kansan, Haluk Maithuengphua, Kathoei Khuasan and Metnai Kanyao. The rpoC1 genes could not be completely. All cultivars have the same sequence of nucleotides.

Keywords: Durio zibethinus Murr., SCoT, HAT-RAPD, nucleotide sequence of specific gene, identification

Ref. code: 25605809032146MLB

(4)

กตตกรรมประกาศ

วทยานพนธเรองการประเมนความสมพนธทางพนธกรรมและการระบพนธทเรยนโดยใชเครองหมายดเอนเอฉบบสมบรณ ประสบความส าเรจไปไดดวยดเนองจากไดรบความชวยเหลอและอ านวยความสะดวกจากบคคลทงหลายเหลาน

ขอขอบคณ รองศาสตราจารย ดร. ธระชย ธนานนต อาจารยทปรกษาวทยานพนธหลก และผชวยศาสตราจารย ดร. นฤมล ธนานนต อาจารยทปรกษาวทยานพนธรวม ทใหค าปรกษา ค าแนะน า ความชวยเหลอในการแกไขขอบกพรอง รวมถงใหขอมลเอกสารวชาการส าหรบการเขยนเลมวทยานพนธ และใหความอนเคราะหอปกรณ สารเคมในหองปฏบตการ และขอขอบคณผชวยศาสตราจารย ดร. ศภชย วฒพงศชยกจ และ อาจารย ดร. ภทรพร คมภยทใหค าแนะน า ตลอดจนรวมเปนกรรมการสอบปองกนวทยานพนธใหส าเรจผานไปดวยด

ขอขอบคณอาจารย นกวทยาศาสตร และเจาหนาทของสาขาเทคโนโลยชวภาพ มหาวทยาลยธรรมศาสตร ศนยรงสต ทกทาน ทใหความร ค าแนะน า และการชวยเหลอในทกเรอง โดยเฉพาะคณประไพ เทยนเทพ เจาหนาทสาขาเทคโนโลยชวภาพ ทคอยด าเนนการเรองเอกสารทเกยวของกบการสอบวทยานพนธใหสมบรณ

ขอขอบคณทนสนบสนนการวจยจากกองทนวจยมหาวทยาลยธรรมศาสตร ภายใต “ทนวจยทวไป” ตามสญญาเลขท ทน 83/2560 และมหาวทยาลยธรรมศาสตร ศนยรงสต สถานทเพอการศกษา หาความรและด าเนนงานวจย

ขอขอบคณนายทศนะ สงหศลารกษ และครอบครวอนเปนทรก ทสงเสรมและสนบสนนคาใชจายเพอการศกษาในระดบมหาบณฑต ตลอดจนก าลงใจและค าแนะน า เพอเปนแรงผลกดนในการท างานวจยใหส าเรจลลวงไปดวยด

ขอขอบคณเพอน รนพ รนนองทกคน ทงจากมหาวทยาลยธรรมศาสตร ศนยรงสต และจากโรงเรยนเซนตโยเซฟคอนเวนต ทคอยเปนก าลงใจและใหค าปรกษา โดยเฉพาะเพอนในหองปฏบตการ B407 นางสาวทปกา มเสงยม ทเปนคนคอยสอน อธบายขนตอน และใหค าแนะน า ตลอดการท างานวจย รวมถงนางสาวจฑามาศ เจยมเจอจนทร นางสาวฐตาพร มณเนตร และนางสาวพรประภา ศรเทพทว ทคอยอยเคยงขาง และชวยเหลอในหลายเรองมาโดยตลอด

และขอขอบคณ คณขจร พฤฒสขนรนดร เจาของ “สวนบานเรา” สวนทเรยนในต าบลกระแสบน อ าเภอแกลง จงหวดระยอง ทใหความอนเคราะหตวอยางใบทเรยนส าหรบงานวจย ผวจยรสกซาบซงในความกรณาของทกทานทกลาวถง จงขอขอบคณทกทานเปนอยางสงมา ณ ทน


Ref. code: 25605809032146MLB

(5)

สารบญ หนา

บทคดยอภาษาไทย (1)

บทคดยอภาษาองกฤษ (2) กตตกรรมประกาศ (4)

สารบญตาราง (10)

สารบญภาพ (11) บทท 1 บทน า 1

1.1 ทมาและความส าคญ 1 1.2 วตถประสงค 1 1.3 ประโยชนทคาดวาจะไดรบ 2 1.4 ขอบเขตของงานวจย 2 1.5 สถานทท าวจย 2

บทท 2 วรรณกรรมและงานวจยทเกยวของ 3

2.1 ทเรยน 3 2.1.1 ลกษณะทางพฤกษศาสตร 4

2.1.1.1 ราก 4 2.1.1.2 ล าตน 4 2.1.1.3 ใบ 5

Ref. code: 25605809032146MLB

(6)

2.1.1.4 ดอก 5 (1) กลบเลยง 5 (2) กลบรอง 5 (3) กลบดอก 5 (4) เกสรตวผ 5 (5) เกสรตวเมย 6

2.1.1.5 ผล 6 2.1.1.6 เมลด 6

2.2 ทเรยนในประเทศไทย 7 2.3 การจ าแนกพนธทเรยนในประเทศไทย 7

2.3.1 การจ าแนกพนธทเรยนตามลกษณะสณฐาน 7 2.3.1.1 กลมกบ 10 2.3.1.2 กลมทองยอย 11 2.3.1.3 กลมกานยาว 12 2.3.1.4 กลมก าปน 13 2.3.1.5 กลมลวง 14 2.3.1.6 กลมเบดเตลด 15

2.3.2 การจ าแนกพนธทเรยนตามอายผล 17 2.3.2.1 พนธเบา 17 2.3.2.2 พนธกลาง 17 2.3.2.3 พนธหนก 17

2.4 จโนมและเครองหมายดเอนเอ 17 2.4.1 จโนม 17 2.4.2 เครองหมายดเอนเอ 18

2.4.2.1 เครองหมายสกอต 20 2.4.2.2 เครองหมายแฮตอารเอพด 21 2.4.2.3 ล าดบนวคลโอไทดต าแหนงจ าเพาะ 22

Ref. code: 25605809032146MLB

(7)

บทท 3 วธการวจย 24

3.1 เครองมอและอปกรณ 24 3.1.1 อปกรณส าหรบสกดและตรวจคณภาพดเอนเอ 24 3.1.2 อปกรณส าหรบปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส 24 3.1.3 อปกรณส าหรบวเคราะหเจลอเลกโทรโฟรซส 24

3.2 สารเคม 24 3.2.1 สารเคมส าหรบสกดดเอนเอ 24 3.2.2 สารเคมส าหรบปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส 25 3.2.3 สารเคมส าหรบวเคราะหเจลอเลกโทรโฟรซส 25

3.3 วธการวจย 25 3.3.1 การเกบตวอยาง 25 3.3.2 การสกดดเอนเอ 34 3.3.3 การตรวจสอบคณภาพและปรมาณของดเอนเอ 35

3.3.3.1 การวดคาการดดกลนแสงอลตราไวโอเลต 35 3.3.3.2 การวดคาการเรองแสงกบเอธเดยมโบรไมด 35

3.3.4 การสรางเครองหมายดเอนเอ 35 3.3.4.1 เครองหมายสกอต 35

(1) ตรวจหาไพรเมอรทตอบสนองตอปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส 35 (2) เพมปรมาณดเอนเอดวยปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส 37

3.3.4.2 เครองหมายแฮตอารเอพด 38 (1) ตรวจหาไพรเมอรทตอบสนองตอปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส 38 (2) เพมปรมาณดเอนเอดวยปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส 42

3.3.4.3 ล าดบนวคลโอไทดต าแหนงจ าเพาะ 43 3.3.5 การตรวจสอบขนาดชนดเอนเอ 44 3.3.6 การวเคราะหผล 44

3.3.6.1 เครองหมายสกอตและเครองหมายแฮตอารเอพด 44 3.3.6.2 ล าดบนวคลโอไทดต าแหนงจ าเพาะ 45 3.3.6.3 เปรยบเทยบเครองหมายดเอนเอ 45

Ref. code: 25605809032146MLB

(8)

บทท 4 ผลการวจยและอภปรายผล 46

4.1 เครองหมายสกอต 46 4.1.1 การคดเลอกไพรเมอรทใชเพมปรมาณดเอนเอ 46 4.1.2 การวเคราะหความสมพนธ 67

4.2 เครองหมายแฮตอารเอพด 70 4.2.1 การคดเลอกไพรเมอรทใชเพมปรมาณดเอนเอ 70 4.2.2 การวเคราะหความสมพนธ 92

4.3 เครองหมายสกอตรวมกบเครองหมายแฮตอารเอพด 95 4.4 ล าดบนวคลโอไทดต าแหนงจ าเพาะ 98

4.4.1 การเพมปรมาณดเอนเอบรเวณยนทเปนต าแหนงจ าเพาะ 98 4.4.2 การตรวจสอบล าดบนวคลโอไทดต าแหนงจ าเพาะ 99 4.4.3 การวเคราะหล าดบนวคลโอไทดต าแหนงจ าเพาะ 102

4.4.3.1 ล าดบนวคลโอไทดต าแหนงจ าเพาะของยน rbcL 102 4.4.3.2 ล าดบนวคลโอไทดต าแหนงจ าเพาะของยน rpoC1 108

4.5 การอภปรายผล 112 บทท 5 สรปผลการวจยและขอเสนอแนะ 119

5.1 เครองหมายสกอต เครองหมายแฮตอารเอพด และล าดบนวคลโอไทดต าแหนงจ าเพาะ 119 5.5 ขอเสนอแนะ 120

รายการอางอง 121

Ref. code: 25605809032146MLB

(9)

ภาคผนวก

ภาคผนวก ก 130 ภาคผนวก ข 131 ภาคผนวก ค 132

ประวตผเขยน 173

Ref. code: 25605809032146MLB

(10)

สารบญตาราง

ตารางท หนา 2.1 ลกษณะทเรยนพนธดงเดม 8 2.2 พนธทเรยนในประเทศไทย 82 พนธ 9 2.3 ลกษณะสณฐานกลมกบ 10 2.4 ลกษณะสณฐานกลมทองยอย 11 2.5 ลกษณะสณฐานกลมกานยาว 12 2.6 ลกษณะสณฐานกลมก าปน 13 2.7 ลกษณะสณฐานกลมลวง 14 2.8 ลกษณะสณฐานกลมเบดเตลด 16 3.1 พนธทเรยนจ านวน 40 พนธ ส าหรบงานวจย 26 3.2 ใบทเรยนจ านวน 40 พนธ ส าหรบงานวจย 27 3.3 ไพรเมอรทใชเพมปรมาณดเอนเอของเครองหมายสกอต 36 3.4 องคประกอบสารส าหรบปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส 37 3.5 อณหภม เวลา และจ านวนรอบในแตละขนตอนของปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส 38 3.6 ไพรเมอรทใชเพมปรมาณดเอนเอของเครองหมายแฮตอารเอพด 39 3.7 องคประกอบสารส าหรบปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส 42 3.8 อณหภม เวลา และจ านวนรอบในแตละขนตอนของปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส 42 3.9 ไพรเมอรทใชเพมปรมาณดเอนเอของล าดบนวคลโอไทดต าแหนงจ าเพาะ 43 3.10 องคประกอบสารส าหรบปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส 43 3.11 อณหภม เวลา และจ านวนรอบในแตละขนตอนของปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส 44 4.1 หมายเลขจ าเพาะของล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL 100 4.2 หมายเลขจ าเพาะของล าดบนวคลโอไทดของยน rpoC1 101 4.3 ต าแหนงล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL ทเกดการเปลยนแปลง 106 4.4 การเปลยนแปลงล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL ทมผลตอการสรางกรดอะมโน 106

Ref. code: 25605809032146MLB

(11)

สารบญภาพ

ภาพท หนา 2.1 ลกษณะใบ ดอก ผล เมลดของทเรยน 6 3.1 ทตงสวนทเรยน “สวนบานเรา” จงหวดระยอง 26 4.1 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายสกอตโดยใชไพรเมอร SCoT22 47 4.2 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายสกอตโดยใชไพรเมอร SCoT23 48 4.3 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายสกอตโดยใชไพรเมอร SCoT31 49 4.4 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายสกอตโดยใชไพรเมอร SCoT35 50 4.5 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายสกอตโดยใชไพรเมอร SCoT46 51 4.6 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายสกอตโดยใชไพรเมอร SCoT47 52 4.7 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายสกอตโดยใชไพรเมอร SCoT48 53 4.8 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายสกอตโดยใชไพรเมอร SCoT52 54 4.9 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายสกอตโดยใชไพรเมอร SCoT53 55 4.10 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายสกอตโดยใชไพรเมอร SCoT54 56 4.11 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายสกอตโดยใชไพรเมอร SCoT66 57 4.12 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายสกอตโดยใชไพรเมอร SCoT67 58 4.13 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายสกอตโดยใชไพรเมอร SCoT68 59 4.14 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายสกอตโดยใชไพรเมอร SCoT71 60 4.15 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายสกอตโดยใชไพรเมอร SCoT72 61 4.16 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายสกอตโดยใชไพรเมอร SCoT73 62 4.17 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายสกอตโดยใชไพรเมอร SCoT74 63 4.18 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายสกอตโดยใชไพรเมอร SCoT76 64 4.19 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายสกอตโดยใชไพรเมอร SCoT77 65 4.20 คาดชนความเหมอนของทเรยนดวยเครองหมายสกอต 68 4.21 แผนภมความสมพนธของทเรยนดวยเครองหมายสกอต 69 4.22 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายแฮตอารเอพดโดยใชไพรเมอร A22 71 4.23 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายแฮตอารเอพดโดยใชไพรเมอร A24 72 4.24 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายแฮตอารเอพดโดยใชไพรเมอร A30 73 4.25 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายแฮตอารเอพดโดยใชไพรเมอร A31 74

Ref. code: 25605809032146MLB

(12)

4.26 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายแฮตอารเอพดโดยใชไพรเมอร A32 75 4.27 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายแฮตอารเอพดโดยใชไพรเมอร B22 76 4.28 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายแฮตอารเอพดโดยใชไพรเมอร B23 77 4.29 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายแฮตอารเอพดโดยใชไพรเมอร B32 78 4.30 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายแฮตอารเอพดโดยใชไพรเมอร C21 79 4.31 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายแฮตอารเอพดโดยใชไพรเมอร C22 80 4.32 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายแฮตอารเอพดโดยใชไพรเมอร C28 81 4.33 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายแฮตอารเอพดโดยใชไพรเมอร C31 82 4.34 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายแฮตอารเอพดโดยใชไพรเมอร D31 83 4.35 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายแฮตอารเอพดโดยใชไพรเมอร E22 84 4.36 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายแฮตอารเอพดโดยใชไพรเมอร E23 85 4.37 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายแฮตอารเอพดโดยใชไพรเมอร E24 86 4.38 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายแฮตอารเอพดโดยใชไพรเมอร E26 87 4.39 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายแฮตอารเอพดโดยใชไพรเมอร E31 88 4.40 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายแฮตอารเอพดโดยใชไพรเมอร E32 89 4.41 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายแฮตอารเอพดโดยใชไพรเมอร F31 90 4.42 คาดชนความเหมอนของทเรยนดวยเครองหมายแฮตอารเอพด 93 4.43 แผนภมความสมพนธของทเรยนดวยเครองหมายแฮตอารเอพด 94 4.44 คาดชนความเหมอนของทเรยนดวยเครองหมายสกอตรวมกบ เครองหมายแฮตอารเอพด 96 4.45 แผนภมความสมพนธของทเรยนดวยเครองหมายสกอตรวมกบ เครองหมายแฮตอารเอพด 97 4.46 การเพมปรมาณดเอนเอของทเรยนดวยยน rbcL 98 4.47 การเพมปรมาณดเอนเอของทเรยนดวยยน rpoC1 99 4.48 การเปรยบเทยบล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL 102 4.49 แผนภมความสมพนธทางพนธกรรมของล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL จดกลมแบบ maximum likelihood 107 4.50 การเปรยบเทยบล าดบนวคลโอไทดของยน rpoC1 108

Ref. code: 25605809032146MLB

1

บทท 1 บทน า

1.1 ทมาและความส าคญ

ประเทศไทยเปนหนงในผผลตและสงออกผลไมรายใหญทส าคญ เนองจากเปนประเทศ

ททรพยากรธรรมชาตมความหลากหลายและอดมสมบรณ ผลไมจงมใหรบประทานตลอดทงป ส าหรบผลไมในประเทศไทยทไดรบการกลาวขานวาเปน “ราชาผลไม” คอ “ทเรยน” ดวยลกษณะภายนอกทเปนหนามคลายมงกฎของพระราชาและเนอภายในมรสชาตอรอย แมวาจะมราคาแพงกวาผลไมชนดอนแตกยงเปนทนยมรบประทานกนทวไป

ทเรยนจดเปนผลไมเศรษฐกจรองของประเทศไทย ผลผลตสามารถรองรบการบรโภคภายในประเทศและสงออกนอกประเทศแลวท ารายไดมหาศาลตอเกษตรกร พนธทเรยนทปลกในประเทศไทยมมากกวา 200 พนธ ส าหรบการจดกลมทเรยน แบงออกเปน 6 กลม คอ กลมกบ กลมลวง กลมกานยาว กลมก าปน กลมทองยอย และกลมเบดเตลด โดยจ าแนกจากลกษณะสณฐาน (morphology) ของทรงใบ ปลายใบ ฐานใบ ทรงผล และหนามผล ซงเปนลกษณะคอนขางคงท พนธทเรยนในประเทศไทยมความหลากหลายมาก การจ าแนกลกษณะภายนอกดวยตาเปลาอาจเกดความผดพลาดตอการคดแยกพนธการคาทสงผลตอการคาขายและสงออก ผวจยจงเลอกใชเครองหมายโมเลกลในการศกษาลกษณะทางพนธกรรมเพอชวยจ าแนกพนธทเรยนใหมความชดเจนและแมนย ามากขน นอกจากนนยงมบทบาทชวยตรวจสอบระบพนธทเรยนโดยไมตองรอใหออกผลโตเตมท และเพอการปรบปรงพนธใหมลกษณะทดขน 1.2 วตถประสงค

1.2.1 วเคราะหความสมพนธทางพนธกรรมและระบจ าแนกพนธของทเรยนดวย

เครองหมายสกอต เครองหมายแฮตอารเอพด และล าดบนวคลโอไทดต าแหนงจ าเพาะ 1.2.2 เปรยบเทยบแผนภมความสมพนธของ เครองหมายสกอตกบเครองหมาย

แฮตอารเอพด และเปรยบเทยบแผนภมความสมพนธทางพนธกรรมของล าดบนวคลโอไทดต าแหนงจ าเพาะ

Ref. code: 25605809032146MLB

2

1.3 ประโยชนทคาดวาจะไดรบ

ศกษาความสมพนธของทเรยน โดยเปรยบเทยบแผนภมความสมพนธดวยเครองหมาย

ดเอนเอ และศกษาแผนภมความสมพนธทางพนธกรรมดวยล าดบนวคลโอไทดต าแหนงจ าเพาะ

1.4 ขอบเขตของงานวจย

1.4.1 ศกษาความสมพนธของทเรยนรวม 30 พนธ ไดแก กบวดกลวย กบเจาคณ

หาลกไมถงผว ลวงทอง นกหยบ ก าปนเหลอง ก าปนเดม ทองแดง ทองยอยฉตร พวงมณ หลงลบแล ทองสก ตนใหญ กานยาว ชะน ชะนน าตาลทราย หลนลบแล ฉตรสทอง ชมพพาน กะเทยเนอขาว ชมพศร ก าปนพวง ธรณไหว อลบนายทพย กบพกล ทบทม กบรศม เมดในกานยาว กานสน กบสวรรณ ดวยเครองหมายสกอต และเครองหมายแฮตอารเอพด

1.4.2 ศกษาความสมพนธทางพนธกรรมของทเรยนรวม 40 พนธ ไดแก กบวดกลวย กบเจาคณ หาลกไมถงผว ลวงทอง นกหยบ ก าปนเหลอง ก าปนเดม ทองแดง กานยาววดสก กบชายน า ทองยอยฉตร พวงมณ หลงลบแล ทองสก ย ามะหวาด สาลกา ตนใหญ กานยาว ชะน ชะนน าตาลทราย หลนลบแล ฉตรสทอง ชมพพาน หมอนทอง กะเทยเนอขาว ชมพศร ก าปนพวง กบหนาศาล ธรณไหว กานยาวสนาค อลบนายทพย กบพกล ทบทม กบรศม เมดในกานยาว จอกลอย เมลดอารย กานสน กบสวรรณ กะเทยขวสน ดวยล าดบนวคลโอไทดต าแหนงจ าเพาะบางต าแหนง 2 ชนด คอ ล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL และ rpoC1

1.5 สถานทท าวจย

หองปฏบตการ B403 และ B407 อาคารเรยนและปฏบตการคณะวทยาศาสตรและ

เทคโนโลย (อาคารบรรยายเรยนรวม 5, บร.5) สาขาเทคโนโลยชวภาพ คณะวทยาศาสตรและเทคโนโลย มหาวทยาลยธรรมศาสตร ศนยรงสต อ าเภอคลองหลวง จงหวดปทมธาน

Ref. code: 25605809032146MLB

3

บทท 2 วรรณกรรมและงานวจยทเกยวของ

2.1 ทเรยน

ทเรยน (Durian) เปนผลไมเขตรอน จดอยในอนดบ Mavales วงศ Bombacaceae สกล Durio (Macmillan, 1994) พชวงศนมประมาณ 30 สกล มากกวา 200 ชนด (species) พบแพรกระจายรอบโลกในพนททมลกษณะภมอากาศในเขตรอน (Seogeng-Reksodihardjo, 1962) พชสกล Durio ประกอบไปดวยพชประมาณ 30 ชนด มถนก าเนดในแถบเอเชยตะวนออกเฉยงใตทเปนศนยกลางความหลากหลายในเกาะบอรเนยว (Mendoza, 1941; Lim, 1990) แพรกระจายในแถบเอเชยตะวนออกเฉยงใตและแถบอนโดจน จดเปนพชพนเมองของประเทศมาเลเซย บรไน และอนโดนเซย (Orwa et al., 2009) ค าวา “ทเรยน” มาจากภาษามาเลย คอ ดร (duri แปลวา หนาม) ตอกบ –an เพอสรางเปนค านาม (Don, 1831) ถงแมวาทเรยนจะไมไดมถนก าเนดในประเทศไทย แตจดวาเปนผลไมทสามารถปลกไดหลายพนท และเปนผลไมเศรษฐกจทนยมบรโภคและสงออกขายตางประเทศท ารายไดมหาศาลใหกบเกษตรกร

พชสกล Durio สวนใหญเปนชนดทรบประทานไมไดเนองจากมปรมาณเนอ (fresh) เล กนอย หรอ ไมม เน อ ได แก (1) Durio acutifolius (Mast.) Kosterm., (2) D. affinis Becc., (3) D. beccarianus Kosterm. & Soegeng., (4) D. bukitrayaensis Kosterm., (5) D. burmanicus Soegeng., (6) D. carinatus Mast., (7) D. crassipes Kosterm., (8) D. excelsus (Korth.) Bakh., (9) D. grandiflorus Kosterm. & Soegeng, (10) D. griffithii (Mast.) Bakh., (11) D. kinabaluensis Kosterm & Soegeng., (12) D. lanceolatus Mast., (13) D. lissocarpus Mast., (14) D. macrantha Kosterm., (15) D. macrolepis Kosterm., (16) D. macrophyllus Ridl., (17) D. malaccensis Planch., (18) D. mansoni (Gamble) Bakh., (19) D. oblongus Mast., (20) D. pinangianus Ridl., (21) D. purpureus Kosterm. & Soegeng., (22) D. singaporensis Ridl. แ ล ะ (23) D. wyatt-Smithii Kosterm. (Vangnai, 1996) สวนชนดทรบประทานไดมอยางนอย 9 ชนด ไ ด แ ก (1) D. dulcis Becc., (2) D. graveolens Becc., (3) D. kutejensis Hassk. & Becc., (4) D. oxleyanus Griff., (5) D. testudinarum Becc., (6) D. lowianus Scort. & King., (7) D. macrantha Kosterm., (8) D. zibethinus Murr. และ (9) D. grandiflorus แตมเพยงชนด D. zibethinus Murr. ทไดรบความนยมและปลกในเชงการคากนอยางแพรหลาย (Muhammad et al., 2012)

Ref. code: 25605809032146MLB

4 ทเรยนมชอวทยาศาสตรวา D. zibethinus Murr. หรอทเรยนบาน เปนผลไมท

เจรญเตบโต และใหผลผลตดในเขตสภาพอากาศรอนชน ถอเปนทเรยนชนดเดยวทไดรบความนยม ทวโลก ตงแตประเทศศรลงกา พมาตอนใต ฟลปปนสตอนใต ไปจนถงชวา (Kostermans, 1958; Zeven และ Zhukovshy, 1975) นอกจากนนยงแพรกระจายไปประเทศออสเตรเรยตอนเหนอรวมทงสหรฐอเมรกาแถวรฐฟลอรดาและฮาวายดวย (Abidin et al., 1996)

2.2.1 ลกษณะทางพฤกษศาสตร ทเรยนมลกษณะทางพฤกษศาสตร ดงน (ภาพท 2.1)

2.2.1.1 ราก ทเรยนเปนพชทมระบบรากหลายชนด คอ รากแกว (primary root) ของ

ตนทเรยนมรากเดยวทเจรญจากล าตนดงลกสชนดน รากแกวจะแตกแขนงไปเปนรากกง (secondary roots) และรากแขนง (tertiary roots) จะแตกออกจากรากกงตามล าดบ ซงรากแขนงทแตกออกจากรากแกวนนพบหาไดยากมาก และจะพบในระดบ 12 นว จากผวดนลกลงไป รากทเรยนไมมรากขนออน (root hairs) จะมรากพเศษทเกดจากบรเวณโคนตนตามผวดนอยมากมาย เปนรากอาหารทอยตามผวดนจนถงระดบ 20 นว ส าหรบรากฝอยทอยบรเวณผวดน มกมรากพเศษทแตกออกมามากมายลกษณะคลายตนตะขาบเรยกวา “รากตะขาบ” รากเหลานจะชวยดดซมน าและแรธาต รากแกวของทเรยนท าหนาทยดล าตน สวนรากแขนงและรากฝอยจะท าหนาทชวยยดล าตนและหาอาหาร

การปลกทเรยนจะมทงการปลกดวยเมลดและปลกจากกงตอน ทเรยนทปลกจากเมลดจะมระบบรากแกวทเจรญออกมาการแกนกลางของโคนตนลงไปดงลกสชนดน มรากแขนงแตกออกจากรากแกว มรากฝอยแตกออกมากจากรากแขนง มรากพเศษแตกออกจากรากแขนงและรากฝอยท าหนาทดดซมน าและแรธาตคลายรากฝอย สวนทเรยนทปลกจากกงตอนจะมรากพเศษ หรอรากแขนงทแตกจากรากพเศษดงลกสชนดนท าหนาทคลายรากแกวและสามารถดงลกลงไปถงระดบน า จะมรากอาหารและรากฝอยท าหนาทดดอาหาร (แสวง, 2527; พจตร, 2540; ชยสทธ, 2548)

2.2.1.2 ล าตน ทเรยนเปนไมยนตนขนาดใหญไมผลดใบ ล าตนตงตรง เสนผานศนยกลาง

6-24 นว ความสง 20-40 เมตร ถาปลกจากกงตอนล าตนเตยกวา ความสง 8-12 เมตร อายยนยาวถง 80-150 ป ล าตนใหญเตมทจะมเสนผานศนยกลางระหวาง 50-120 เซนตเมตร เปลอกล าตนเปน สน าตาลเขม แขง ผวขรขระ มรอยแตกเปนทางยาว ลอกเปลอกไดแตคอนขางล าบาก เปนพวกไมเนอออน กงกานแตกออกจากล าตนหลกโดยรอบสลบทศทางกน ลกษณะกงจะเหยยดตรงหรอเปน

Ref. code: 25605809032146MLB

5

คดโคงขนอยกบพนธและการตอบสนองตอแสง กงดานลางของล าตนมากกวาดานบน ล าตนเปนทรงพระมดหรอกรวยคว า (แสวง, 2527; พจตร, 2540; ชยสทธ, 2548)

2.2.1.3 ใบ ทเรยนเปนใบเลยงคมลกษณะกวาง เปนใบเดยวเรยงตวแบบสลบกน

ขนาดความกวาง 2-3 นว ความยาว 6-8 นว ปลายใบแหลม รปรางยาวร ใบเรยบ ดานบนใบจะม สเขยวออนถงเขยวเขม ดานลางใบจะมออกสน าตาลแดง ใบแตกจากตากงลกษณะทแยงตรงขามกบกง ใบออนจะพบครงตามความยาวของกานกลางใบตดกน เมอเรมแกจะคลออกมาเรอย ๆ กานใบกลมเปนสน าตาลความยาวประมาณ 1 นว เสนใบสานกนเปนรางแห (แสวง, 2527; พจตร, 2540; ชยสทธ, 2548)

2.2.1.4 ดอก ดอกทเรยนเปนดอกชอเจรญออกจากล าตนหรอโคนกงทแยกออกจาก

ล าตน มลกษณะคลายระฆง ทเรยนจะออกดอกเปนชอ ๆ ใน 1 ชอ มดอก 1-30 ดอก ดอกรวงจะอยกนเปนพวง พวงหนงม 1-8 ดอก เปนดอกสมบรณเพศ โดยมทงเกสรตวผและเกสรตวเมยอยภายในดอกเดยวกน มรงไขอย เหนอสวนอนของดอก ดอกตมมลกษณะกลมหรอรปไข ในแตละดอกประกอบดวย (แสวง, 2527; พจตร, 2540; ชยสทธ, 2548)

(1) กลบเลยง เปนกลบชนนอกสด มสเขยวอมน าตาลหมดอกมดชด มรอยแบงกลบ

เหมอนดอกไมชนดอน เมอดอกใกลแยมจะแยกออกเปน 2 หรอ 3 กลบ (2) กลบรอง

มสขาวอมเหลองออนลกษณะคลายหมอตาลโตนดอยถดเขาไปจากกลบเลยง กลบรอง 5 กลบมโคนเชอมตดกนเปนกระเปาะพองออก มความยาวเสนผานศนยกลาง 1-2 นว เปนสวนเกบน าหวาน

(3) กลบดอก มสขาวนวล ม 5 กลบเรยงถดจากกลบรอง

(4) เกสรตวผ ม 5 ชด แตละชดประกอบดวยกานเกสร 5-8 อน เปนกานยาวสขาว

ตรงปลายมอบเรณอยเปนจ านวนมาก สวนนจะอยเชอมตดกนเปนแผงตนโคนดอกทอยถดจากกลบดอก ซงอยดานในท าใหดอกทเรยนผสมในดอกเดยวกนตามธรรมชาตไดยาก ชวงเวลาทเกสรตวผและอบเรณจะแตกและปลอยละอองเกสรคอชวงภายหลงจากมดแลว กานเกสรสนกวากานเกสรตวเมย

Ref. code: 25605809032146MLB

6

(5) เกสรตวเมย เมอดอกเรมบานเกสรตวเมยจะโผลออกมากอนและรอรบการผสมเกสร

จากดอกอนหรอตนอน ดอกจะบานเตมทและสงกลนหอมโดยเกสรตวเมยในชวงบาย ๆ ใกลค า 2.2.1.5 ผล

ทเรยนเปนผลเดยวมลกษณะรปทรงหลายแบบ เชน กลม ร กนปาน เปนผลทมเปลอกหนาหมรอบผลมหนามคมลอมรอบรปรางพระมด เสนผานศนยกลางประมาณ 6-8 นว ยาว 9-13 นวแตละสวนของผลเรยกวา “พ” บางพมเมลดเตมบางพเมลดลบ ขนอยกบการผสมเกสรและพนธทเรยน เนอผลจะพฒนาตงแตสปดาหท 4 หลงจากผสมเกสรโดยเรมจากเปนแผนบาง สขาวแลวขยายจนหอหมเมลด เนอมสหลากหลายตงแตขาวเหลอง เหลองออน เหลองเขม จนถงแดงแลวแตพนธ (แสวง, 2527; พจตร, 2540; ชยสทธ, 2548)

2.2.1.6 เมลด เมลดทเรยนมลกษณะรปทรงยาวร ขนาดและสแตกตางกนขนอยกบพนธ

โดยปกตเมลดจะมสน าตาลเหลอง หรอน าตาลอมแดงเมอแกจด มเยอบางหมอย เมอผาดจะเหนเนอสขาวมเมอกลน ๆ อยภายใน (แสวง, 2527; พจตร, 2540; ชยสทธ, 2548)

ภาพท 2.1 ลกษณะใบ ดอก ผล เมลดของทเรยน

ใบ เนอ เมลด

ดอกตม ดอกบาน ผล

Ref. code: 25605809032146MLB

7

2.2 ทเรยนในประเทศไทย

หรญ (2547) ไดรายงานถงทเรยนในประเทศไทยวาการปลกทเรยนในภาคกลางของไทยมมาตงแตสมยอยธยา สวนแสวง (2513) และ Vangnai (1996) รายงานวาทเรยนแพรมาจาก 2 บรเวณ คอ ทางตะวนออกเฉยงใตของพมาและทางใตของไทย มการกลาววาทเรยนบานพนธดหลายพนธมจดก าเนดมาจากจงหวดธนบร ปจจบนเปนสวนหนงของกรงเทพมหานครไปแลว จากนนกไดมการแพรกระจายไปจงหวดโดยรอบสจงหวดนนทบร สมทรสงคราม และเชอกนวาแหลงปลกทเรยนในเชงพาณชยแหงแรกในประเทศไทยคอจงหวดนนทบร จากนนกไดแพรกระจายไปทางภาคเหนอและภาคตะวนออก (ทรงพล, 2551) ในอดตพนธทเรยนทปลกเพอการคามอยางนอย 60 พนธ จาก 480 พนธ แตปจจบนเหลอเพยง 4-5 พนธ ทผบรโภคนยมและท าก าไรใหกบเกษตรกร สวนพนธอนแทบไมเหลอท าใหทเรยนพนธโบราณคอย ๆ เลอนหายไป 2.3 การจ าแนกพนธทเรยนในประเทศไทย

2.3.1 การจ าแนกพนธทเรยนตามลกษณะสณฐานวทยา ทเรยนแตละพนธมความแตกตางกนหลายอยางในเรองลกษณะตน ขนาดใบ

ลกษณะดอก ลกษณะผล รปทรงผล ลกษณะเนอ ปรมาณเนอ ความหนาเนอ ลกษณะเมลด รสชาต กลน มการกลาวถงตนก าเนดทเรยนไทยทมาจากการพนธดงเดมเพยง 5 พนธ คอ พนธลวง พนธการะเกด พนธทองสก พนธทองยอยเดม และพนธก าปน แลวตอมามการถายทอดไปสรนลกหลานเปนพนธตางๆ โดยแสวง (2513, 2527) และวจตร (2519, 2526) ไดรายงานลกษณะพนธดงเดม ดงตารางท 2.1

Ref. code: 25605809032146MLB

8

ตารางท 2.1 ลกษณะทเรยนพนธดงเดม

พนธดงเดม ลกษณะ พนธรนลกหลาน

1. พนธลวง ผลทรงร ขนาดปานกลาง ยาว 8-10 นว กวาง 6-8 นว ผลแกเปลอกสเขยวอมเหลอง ผลม 4-5 พ ปลายผลสอบ หนามหางปานกลางขนาดเลก กานผลสน เนอหนาปานกลาง คอนขางหยาบ สเหลอง รสหวาน แตละพม 1-6 เมลด

ลวงเขยว ชะน ชมพศร ย ามะหวาด

2. พนธการะเกด ผลทรงร ขนาดปานกลางถงใหญ ยาว 10 นว กวาง 8 นว เปลอกสน าตาลอมเขยว ผลม 5 พ ปลายผลสอบ หนามโคงแหลมคม เนอหนาละเอยด สเหลองเขม รสหวานจดและมน กลนแรง แตละพม 2-3 เมลด

กบแมเฒา กบพวง จอมกบ กบเลบเหยยว ย าเพะ

3. พนธทองสก ผลทรงกลม ยาว 8 นว กวาง 8 นว เปลอกหนา พเหนไมชด ปลายผลสอบ หนามหนาแนน กานผลยาว 5-6 นว เนอหนาปานกลาง ละเอยด สเหลอง รสหวานมนมาก กลนออน แตละพม 3-5 เมลด

ก า น ย า ว ศ ร ส ว ร ร ณ กานยาววดสก

4. พนธทองยอยเดม ผลทรงยาว ขนาดปานกลางถงใหญ ยาว 11 นว กวาง 8 นว เปลอกสแดงอมเหลอง ผลม 5 พชดเจน ปลายผลแหลม หนามฐานใหญ เนอหนา สเหลองเขม รสหวานมน กลนปานกลาง

ทองยอยฉตร นมสวรรค ฉ ต ร ส น า ค ฉ ต ร ส ท อ ง ฉตรเงน สนสมทร

5. พนธก าปน ผลทรงคอนขางกลม ขนาดปานกลางถงใหญ ยาว 8 นว กวาง 7 นว เปลอกสน าตาลอมเขยวและน าตาลอมแดง ผลม 5 พ ปลายผลแหลม หนามหนาสน เนอหนาละเอยดมาก สเหลองออนถงขาว รสหวานมาก กลนแรง แตละพม 1-2 เมลด

ก าปนเหลอง ชายมะไฟ ก าปนสนาค

Ref. code: 25605809032146MLB

9

ชม (2498) จ าแนกพนธท เรยนในประเทศไทย 82 พนธ แบงเปน 6 กลม ดงตารางท 2.2

ตารางท 2.2 พนธทเรยนในประเทศไทย แบงเปน 6 กลม

กลม พนธ

1. กลมกบ 25 พนธ ไดแก จอมกบ (โคตรกบ) กบแมเฒา กบเลบเหยยว กบบญนาค กบตาข า กบเหมราช (เขยวสะอาด) กบชมพ กบทองกอน กบขนแผน กบพระไว กบเงน กบเจาคณ ย าเพะ สดสาคร เหลองหกพ กบพลายชมพล ฉตรทอง กลบสมทร กบตาแจม กบยายพลบ กบตานอย กบลอยน า จอมโยธา กบชมพ (ตนบางยขน) กบทองค า

2. กลมทองยอย 17 พนธ ไดแก ทองยอยฉตร นมสวรรค (สาวสวรรค) สนธสมทร ฉตรเงน พวงฉตร ฉตรสนาค ฉตรสทอง ชมพนช ทองสวด ทองยอยสนาค ธรณไหว อรวง สสก ก ามะหย บางบน นกหยบ แดงรศม ทบทม

3. กลมกานยาว 7 พนธ ไดแก กานยาว ศรสวรรณ กานยาววดสก กานยาวหนามใหญ ชมพพาน กานยาวสนาค กานยาวบญยง

4. กลมก าปน 11 พนธ ไดแก ก าปนขาว ก าปนเหลอง ก าปนแดง (ใบสน) ก าปนแดง (ใบยาว) ก าปนแดง ตากลวยลกเลก สครพ ก าปนสนาค เมลดฝอย ตะเข ชายมะไฟ

5. กลมลวง 10 พนธ ไดแก ลวงทอง ลวงลม ลวงเขยว ลวงเนอแดง เหลองสมปอย ละแวง ย ามะหวาด ชมพศร ชะน สชมพ

6. กลมเบดเตลด 13 พนธ ไดแก การะเกด แมเฒา การะเกดสนาค พวงมาลย กระปกทอง แดงตานอย ทศกณฑ อหนก ทองแดง ใหมทองหยบ ขวใหญ กระปกทองด กะเทยเนอแดง ไอแอด

จากการศกษาของหรญ และคณะ (2530, 2541) พบวาลกษณะของรปรางใบ

รปทรงผล และลกษณะหนาม สามารถจ าแนกทเรยนไดเปน 6 กลม ตามลกษณะสณฐาน (ส านกคมครองพนธพชแหงชาต, 2544) ไดแก กลมกบ 46 พนธ กลมทองยอย 14 พนธ กลมกานยาว 8 พนธ กลมก าปน 13 พนธ กลมลวง 12 พนธ กลมเบดเตลด 81 พนธ โดยลกษณะแตละกลม มดงน

Ref. code: 25605809032146MLB

10

2.3.1.1 กลมกบ รปทรงใบเปนรปไขขอบขนาน ปลายใบแหลมโคง ฐานใบกลมมน ทรงผล

มกระจาย 3 ลกษณะ คอ กลม กลมร กลมแปน หนามผลโคงงอ (ตารางท 2.3) มจ านวน 46 พนธ ไดแก กบแมเฒา กบเลบเหยยว กบตาข า กบพกล

กบวดกลวย กบชายน า กบสาวนอย (กบกานสน) กบสวรรณ กบเจาคณ กบตาทวม (กบด า) กบตาปน กบหนาศาล กบจ าปา (กบแขงสงห) กบเบา กบรศม กบตาโห กบตาแจม กบทองค า กบสนาค กบทองกอน กบไว กบง กบตาเฒา กบชมพ กบพลเทพ กบพวง กบวดเพลง กบกานเหลอง กบตานวล กบตามาก กบทองเพง กบราชเนตร กบแกว กบตานช กบตามตร กลบสมทร กบตาแมน การะเกด กบซอนกลน กบตาเปน กบทองด กบธระ กบมงกร กบล าเจยก กบหลงวหาร และกบหวลาน ตารางท 2.3 ลกษณะสณฐานกลมกบ (ทรงพล, 2551)

สวนของพช ลกษณะสณฐาน

ใบ

(ก) รปไขขอบขนาน (ข) แหลมโคง (ค) กลมมน

หนาม

(ง) โคงงอ

ผล

(จ) กลมแปน (ฉ) กลม (ช) กลมร

Ref. code: 25605809032146MLB

11

2.3.1.2 กลมทองยอย รปทรงใบเปนปอมปลายใบ ปลายใบเรยวแหลม ฐานใบมน ทรงผลรปไข

หนามผลนนปลายแหลม (ตารางท 2.4) มจ านวน 14 พนธ ไดแก ทองยอยเดม ทองยอยฉตร ฉตร ฉตรสนาค

ฉตรสทอง พวงฉตร ทองใหม นมสวรรค ทบทม ธรณไหว นกหยบ แดงรศม ออง และอทย

ตารางท 2.4 ลกษณะสณฐานกลมทองยอย (ทรงพล, 2551)


ใบ

(ก) ปอมปลายใบ (ข) เรยวแหลม (ค) มน

หนาม

(ง) นนปลายแหลม

ผล

(จ) รปไข

Ref. code: 25605809032146MLB

12

2.3.1.3 กลมกานยาว รปทรงใบเปนปอมปลายใบ ปลายใบเรยวแหลม ฐานใบเรยว ทรงผล

กระจาย 2 ลกษณะ คอ ทรงกลม และทรงไขกลบ หนามผลนน (ตารางท 2.5) มจ านวน 8 พนธ ไดแก กานยาว กานยาววดสก (เหลองประเสรฐ )

กานยาวสนาค กานยาวพวง กานยาวใบดาง ทองสก ชมพพาน และ ตนใหญ

ตารางท 2.5 ลกษณะสณฐานกลมกานยาว (ทรงพล, 2551)


ใบ

(ก) ปอมปลายใบ (ข) เรยวแหลม (ค) เรยว

หนาม

(ง) นน

ผล

(จ) รปไขกลบ (ฉ) กลม

Ref. code: 25605809032146MLB

13

2.3.1.4 กลมก าปน รปทรงใบยาวเรยว ปลายใบเรยวแหลม ฐานใบแหลม ทรงผลขอบขนาน

หนามผลแหลมตรง (ตารางท 2.6) มจ านวน 13 พนธ ไดแก ก าปนเดม (ก าปนขาว) ก าปนเหลอง (เจากรม)

ก าปนแดง ก าปนตาแพ ก าปนพวง ชายมะไฟ ปนทอง เมดในก าปน เห -รา หมอนเดม หมอนทอง ก าปนบางสทอง และลงเกต

ตารางท 2.6 ลกษณะสณฐานกลมก าปน (ทรงพล, 2551)


ใบ

(ก) ยาวเรยว (ข) เรยวแหลม (ค) แหลม

หนาม

(ง) แหลม

ผล

(จ) ขอบขนาน

Ref. code: 25605809032146MLB

14

2.3.1.5 กลมลวง รปทรงใบเปนปอมกลางใบ ปลายใบเรยวแหลม ฐานใบแหลมและมน

ทรงผลกระจาย 2 ลกษณะ คอ ทรงกระบอก และทรงร หนามผลเวา (ตารางท 2.7) มจ านวน 11 พนธ ไดแก ลวงทอง ลวงมะรม ชะน ชะนกงมวน ชมพศร

ย ามะหวาด สายหยด ชะนกานยาว ชะนน าตาลทราย มดแดง และสเทา

ตารางท 2.7 ลกษณะสณฐานกลมลวง (ทรงพล, 2551)


ใบ

(ก) รปไขขอบขนาน (ข) แหลมเรยว (ค) แหลม (ง) มน

หนาม

(จ) เวา

ผล

(ฉ) รปร (ช) ทรงกระบอก

Ref. code: 25605809032146MLB

15

2.3.1.6 กลมเบดเตลด ลกษณะในกลมนมลกษณะไมแนชด บางลกษณะอาจเหมอนกบกลมใด

กลมหนงใน 5 กลมทกลาวมากอนหนา ลกษณะบางอยางมการผนแปรออกไป เชน ลกษณะรปทรงใบจะปอมกลางใบหรอรปไขขอบขนาน ปลายใบเรยวแหลมหรอเรยวตงแหลม ฐานใบแหลมหรอมน ทรงผลกระจาย 3 ลกษณะ คอ ทรงกระบอก ทรงกลมร และทรงกลมแปน หนามผลเวาปลายแหลมหรอนนปลายแหลม (ตารางท 2.8)

มจ านวน 80 พนธ ไดแก กะเทยเนอขาว กระดมทอง กระปกทอง (กระปกทองด) ขนทอง แดงชางเขยน แดงสาวนอย ตะโก (ทองแดง) ทองค าตาพรวด นกกระจบ เปดถบ พวงมณ ยนด สไพร หางสงห อนทรชต อยกษ ทองนพคณ นมสด ฟกขาว เมดในกระดม เมลดพงษพนธ เมลดสม ลวงเพาะเมลด สาเก หมอนละอองฟา เหมราช ไอเมน กะเทยเนอแดง กระดมสนาค กอนทอง จอกลอย แดงตานอย ดาวกระจาย ตมทอง ทองมวน บาตรทองค า (อบาตร) ฝอยทอง เมดในยายปราง ไอใหม สาวชมเหด เหรยญทอง อลา อหนก ทองหยอด เนอหนา พนเมองเกาะชาง เมดในกานยาว เมลดเผยน เมลดอารย ลงไหล สาวใหญ ห ลงลบแล เหลองทอง กะเทยขวสน กะเทยเนอเหลอง กระโปรงทอง เขยวต าลง ชายมงคด แดงตาเผอน ตะพาบน า ทศพณ ทองค า บางขนนนท พวงมาลย เมดในบางขนนนท สทอง สาวชมฟกทอง (ฟกทอง) ไอเข อลบ ตอสามเสา ทองหยบ โบราณ มะนาว เมดในลวง เมลดลบแล ยามแมหวาด ลกหนก หมอนขาง หาลกไมถงผว และองอน

Ref. code: 25605809032146MLB

16

ตารางท 2.8 ลกษณะสณฐานกลมเบดเตลด (ทรงพล, 2551)


ใบ

(ก) รปไขขอบขนาน (ข) ปอมกลางใบ (ค) แหลมเรยว (ง) ตงแหลมยาว

(จ) มน (ฉ) แหลม

หนาม

(ช) นนปลายแหลม (ซ) เวาปลายแหลม

Ref. code: 25605809032146MLB

17

2.3.2 การจ าแนกพนธทเรยนตามอายผล ทเรยนมระยะการตดดอกถงระยะผลสกจนเกบเกยวผลไมพรอมกนเหมอนผลไม

อนๆ ขนอยกบสภาพแวดลอมหรอปจจยอนๆ เชน พนธทเรยน การดแลสถานทปลก เปนตน สงเหลานลวนเปนตวก าหนดการเจรญเตบโตและการตกผลทแตกตางกน แมวาระยะการออกดอกและเกบเกยวจะไมพรอมกนแตระยะเวลาตงแตดอกบานถงพรอมเกบเกยวคอนขางคงท การจ าแนกพนธตามอายการเกบเกยวสามารถแบงได ดงน (แสวง, 2527; โรสต, 2530; พจตร, 2540)

2.3.2.1 พนธเบา ลกษณะทเรยนพนธนจะตกผลเรวกวาพนธอน ตกผลครงแรกใชเวลา 4-5

ป ท าใหมผลออกสตลาดกอน ดอกจะเรมบานชวงตนเดอนธนวาคม หลงจากดอกบานประมาณ 163-165 วน จะเรมเกบเกยวไดในกลางเดอนพฤษภาคม เชน พนธชะน ลวง กระดมทอง ชมพศร

2.3.2.2 พนธกลาง ลกษณะทเรยนพนธนจะตกผลชากวาพนธเบาเลกนอย ตกผลครงแรกใช

เวลาประมาณตงแตเรมปลก 5-6 ป ดอกจะเรมบานชวงกลางเดอนกมภาพนธ หลงจากดอกบานประมาณ 120-130 วน จะเรมเกบเกยวไดในตนเดอนมถนายน เชน พนธกานยาวและกบตาง ๆ หมอนทอง

2.3.2.2 พนธหนก ลกษณะทเรยนพนธนจะตกผลนานกวาพนธอน โดยจะใชเวลาตงแตเรม

ปลกมากกวา 6 ป ชวงเวลาดอกบานจะพรอมกนกบพนธกลาง คอ ชวงกลางเดอนกมภาพนธ แตจะใชเวลาในการเกบเกยวมากกวาประมาณ 140-150 วน ผลแกจะเกบไดในชวงกลางเดอนกรกฎาคม เชน พนธก าปน อหนก ทองนอยฉตร

2.4 จโนมและเครองหมายดเอนเอ

2.4.1 จโนม สงมชวตทกชนดถกก าหนดไวดวยจโนม (genome) หมายถง สารพนธกรรม

ทงหมดทมอยในเซลลสงมชวต ซงในสงมชวตแตละชนดจะมความแตกตางกน ท าหนาทเปนเหมอนค าสงหรอวธการทใชสรางและด ารงอยของสงมชวต จะอย ในรปของโมเลกลดเอนเอ ( DNA, deoxyribonucleic acid) ดงนนจโนมจงครอบคลมดเอนเอสวนทเปนชดรหส (coding sequences) ของยน เรยกวา เอกซอน (exon) และสวนทไมเปนชดรหส (non-coding sequences) ของยน เรยกวา อนทรอน (intron) ในสงมชวตชนสง (eukaryote) ขนาดจโนมของสงมชวตมความผนแปร

Ref. code: 25605809032146MLB

18

มาก มกมขนาดใหญกวาสงมชวตชนต า (prokaryote) แตไมเสมอไป บางทขนาดของจโนมไมไดสมพนธกบความซบซอนโครงสรางหรอจ านวนยนทอยในสงมชวต ตวอยางเชน โปรโตซวเซลลเดยวบางชนดมปรมาณดเอนเอในจโนมมากกวาสตวเลยงลกดวยนมหลายชนดทมโครงสรางทซบซอนกวา (Li and Graur, 1991)

จโนมของพช ประกอบไปดวย 3 สวน คอ นวเคลยรจโนม (nuclear genome) คลอโรพลาสตจโนม (chloroplast genome) และไมโตคอนเดรยจโนม (mitochondria genome) โดยสวนทจดเปนออรแกเนลจโนม (organelle genome) มคลอโรพลาสตจโนมและไมโตคอนเดรย จโนม จะประกอบไปดวยดเอนเอทใหรหสสรางอารเอนเอและโปรตนทจ าเปน การศกษาวเคราะหจโนมจะชวยใหทราบจ านวน ลกษณะรปรางของโครโมโซมโดยใชเทคนคการยอมสและตรวจสอบภายใตกลองจลทรรศน รวมถงดการจดเรยงตวของยนบนโครโมโซม และเมอไมนานมานมการน า ดเอนเอมาใชเปนเครองหมายท าใหการวเคราะหจโนมเปนไปไดอยางรวดเรว สามารถศกษาไดทงสวนทเปนยนและไมใชยน (สรนทร, 2545)

2.4.2 เครองหมายดเอนเอ เครองหมายดเอนเอ (DNA marker) เปนสงทบงชความแตกตางหลากหลายทาง

พนธกรรม (genetic diversity) หรอความแปรปรวนทางพนธกรรม (genetic variation) ของสงมชวตทงปรมาณและคณภาพ ชวยจ าแนกความแตกตางระหวางและภายในสปชสหรอระหวางและภายในประชากร ซงสามารถตรวจสอบไดทระดบสณฐานวทยา (morphological marker) ระดบชวเคม (biochemical marker) และระดบโมเลกล (molecular marker)

เครองหมายโมเลกล (molecular marker) เปนเครองหมายทสรางมาจากชนสวนดเอนเอ ดงนนจงถกเรยกวา เครองหมายเอนเอ (DNA marker) ดวย แตเครองหมายโมเลกลมขอไดเปรยบตรงทมจ านวนมหาศาล ขนาดจโนมของพชมประมาณ 108-109 นวคลโอไทด ในจโนมพชบางชนดพบวามการเปลยนแปลงล าดบนวคลโอไทดทก 1 กโลเบส (kb) และสภาพแวดลอมและการเจรญเตบโตของพชไมมอทธพลตอกาแสดงออกของเครองหมาย (อรรตน, 2548) ดงนนเครองหมายโมเลกลจงถกน ามาใชประโยชนในการศกษางานจโนมดานงานพนธศาสตรและการปรบปรงพช เนองจากการจดจ าแนกและการจดกลมของสงมชวตโดยอาศยลกษณะทางสณฐานท าไดยากตองอาศยผเชยวชาญ โดยเฉพาะพชทมลกษณะคลายคลงกนมากทจะท าใหเกดความผดพลาดในการจดจ าแนก (สรพงศ, 2554) ดงนนการใชเครองหมายโมเลกลชวยบงชความแตกตางของพช จะชวยใหการจดจ าแนกมความถกตองแมนย ามากยงขน (สรพร, 2546)

Ref. code: 25605809032146MLB

19

งานวจยทใชเครองหมายดเอนเอชนดอนๆ เพอวเคราะหความหลากหลายทางพนธกรรมของทเรยน มดงน

เอมอร และคณะ (2556) ศกษาความหลากหลายของพนธทเรยนในจงหวดนนทบร โดยใชเครองหมายโมเลกลเอสเอสอาร (SSR, simple sequence repeat) โดยใชทเรยนพนธพนเมองนนทบรจ านวน 47 ตวอยาง ใชไพรเมอรจ านวน 20 ไพรเมอร พบวาไพรเมอรทสามารถเพมปรมาณดเอนเอได 16 ไพรเมอร มขนาดระหวาง 142-274 คเบส ผลการจดกลมดวยวธ UPGMA (unweighted pair group method with arithmetic mean) สามารถจ าแนกพนธทเรยนไดเปนกลมใหญๆ แตไมสอดคลองกบการจ าแนกดวยสณฐานวทยาโดย ดร.หรญ หรญประดษฐ

ฐตาภรณ และคณะ (2549) ศกษาความแตกตางและความสมพนธทางพนธกรรมในการจดจ าแนกทเรยนวเคราะหโดยใชเทคนคเอเอฟแอลพ (AFLP, amplified fragment length polymorphism) โดยใชทเรยนจ านวน 130 พนธ ผลการจดกลมดวยวธ UPGMA สามารถแบงกลม ของทเรยนได 2 กลม ผลการแบงกลมทเรยนแสดงใหเหนวายงมความไมชดเจน ดงนนควรวเคราะหดวยเครองหมายชนดอนแทน

ฮดา และคณะ (2557) วเคราะหพนธกรรมของทเรยนพนบานในภาคใตโดยใชเครองหมายไมโครแซทเทลไลท (microsatellite) โดยใชทเรยนจ านวน 67 ตน วเคราะหความใกลชดทางพนธกรรมการจดกลมดวยวธ UPGMA ในโปรแกรม NTSYS สามารถแบงกลมทเรยนพนบานภาคใต 6 กลม และมคาดชนความใกลชดทางพนธกรรมเทากบ 0.52 ถง 0.95 ซงแตละกลมมความสมพนธกบแหลงทมาของตวอยาง คอพนทเดยวกนจะอยกลมเดยวกน แตมบางตวอยางถกจดอยในกลมพนทอน ผลการศกษานสามารถน ามาใชเปนขอมลในการคดเลอกพนธเพอการปรบปรงพนธทเรยนในอนาคต

Ismi และคณะ (2009) วเคราะหพนธกรรมของทเรยนในประเทศอนโดนเซยโดยใชเครองหมายอารเอพด (RAPD, random amplified polymorphic DNA) ตรวจสอบพนธทเรยน 5 พนธ ไดแก สคณ (Sukun), สนน (Sunan), กาน (Kani), หมอนทอง (Monthong) และ เพทรก (Petruk) โดยใชไพรเมอรแบบสม 6 ชนด คอ OPA-01, OPA-02, OPA-07, OPA-16, OPA-18, OPA-09 ซงพนธสคณเปนพนธเดยวทตวอยางเกบมาจากคนละพนท เมอน ามาสรางแผนภมความสมพนธสามารถแบงกลมได 2 กลม พบวา กลมท 1 ไดแก สคณ สนน หมอนทอง และเพทรก กลมท 2 ไดแก กาน และจากการจดกลมของพนธสคณทเกบจากคนละพนท เพยงพนธเดยว พบวาแผนภมความสมพนธสามารถแบงกลมได 2 กลม กลมท 1 คอ พนธสคณอยในพนท Gempolan Karanganyar และ Salatiga และกลมท 2 คอ พนธสคณอย ในพนท Ranukutri seed garden Karanganyar และ Jepara

Ref. code: 25605809032146MLB

20

2.4.2.1 เครองหมายสกอต เครองหมายสกอต (SCoT, start codon targeted) เปนเครองหมาย

ทางโมเลกลถกพฒนาขนโดย Collard และ Mackill (2009) เพอศกษาความหลากหลายทางพนธกรรมและตรวจสอบความแตกตางของสงมชวต โดยอาศยการเพมปรมาณดเอนเอดวยปฏกรยาลกโซพอรเมอเรส (Welsh และ McClean, 1990) ไพรเมอรทใชมขนาด 18 นวคลโอไทด มการออกแบบใหมต าแหนงล าดบเบสอนรกษ ATG เรมตนในสายทเปนต าแหนงจดเรมตนในการถอดรหสล าดบนวคลโอไทดดวยปฏกรยาลกโซพอรเมอเรส โดยใชอณหภมส าหรบท าใหไพรเมอรเขาจบกบเบสคสมกบดเอนเอตนแบบ (annealing) ทอณหภม 50 องศาเซลเซยส

ขอดของการใชเครองหมายสกอต คอ ไพรเมอรออกแบบงาย ปฏบตงาย คาใชจายไมสงมาก ผลการทดลองมความนาเชอถอ เกดความความหลากรป (polymorphism) และมประสทธภาพในการตรวจสอบความแตกตางทางพนธกรรมของสงมชวต สวนขอเสยของเครองหมายน คอ จดเปนเครองหมายโดมแนนท (dominant marker) ท าใหไมสามารถระบความแตกตางระหวางลกษณะทเปนโฮโมไซกส (homozygous) กบเฮเทอโรไซกส (heterozygous) ได งานวจยสวนใหญทพบจะเกยวกบพช

Lou และคณะ (2010) ประเมนความสมพนธของมะมวงโดยการใชเครองหมายสกอตเพอน าไปใชประโยชนในการบรหารจดการแหลงรวบรวมพนธและใชประโยชนในการปรบปรงพนธพช คดเลอกไพรเมอรทงหมด 80 ไพรเมอร พบวามไพรเมอร 33 ไพรเมอร ทสามารถเพมปรมาณดเอนเอได ใหแถบดเอนเอ 273 แถบ มขนาดระหวาง 250-4000 คเบส เปนแถบดเอนเอทมความหลากรป 208 แถบ คดเปนรอยละ 76.19 ผลการจดกลมดวยวธ UPGMA สามารถแบงกลมไดเปน 6 กลม มคาสมประสทธความเหมอนทางพนธกรรมอยในชวง 0.531 ถง 0.923 คาเฉลยคอ 0.782

Guo และคณะ (2012) วเคราะหความหลากหลายทางพนธกรรมขององน เพอประเมนความหลากหลายทางพนธกรรมและความสมพนธของสายพนธองนในประเทศจน เครองหมายสกอต คดเลอกไพรเมอรทงหมด 36 ไพรเมอร พบวามไพรเมอร 17 ไพรเมอร ทสามารถเพมปรมาณดเอนเอได ใหแถบดเอนเอ 131 แถบ มขนาดระหวาง 100-2000 คเบส เปนแถบดเอนเอทมความหลากรป 122 แถบ คดเปนรอยละ 93.1 ผลการจดกลมดวยวธ UPGMA สามารถแบงกลมไดเปน 6 กลม มคาสมประสทธความเหมอนทางพนธกรรมอยในชวง 0.75 ถง 0.91 คาเฉลยคอ 0.82

Paliwal และคณะ (2013) ศกษาความผนแปรทางพนธกรรมของบอระเพดจ านวน 21 ตวอยาง ดวยเครองหมายสกอต คดเลอกไพรเมอรทงหมด 35 ไพรเมอร พบวาไพรเมอรทสามารถเพมปรมาณดเอนเอไดทงหมดม 19 ไพรเมอร ใหแถบดเอนเอ 102 แถบ เปนแถบ

Ref. code: 25605809032146MLB

21

ดเอนเอทใหความหลากรป 90 แถบ คดเปนรอยละ 87.02 ของแถบดเอนเอทงหมด ผลการจดกลมดวยวธ UPGMA สามารถแบงกลมได 2 กลมใหญ คาสมประสทธความคลายคลงทางพนธกรรมเทากบ 0.68 ถง 1

Admad และคณะ (2014) วเคราะหความหลากหลายทางพนธกรรมของมะเขอเทศ จ านวน 10 ตวอยาง ดวยเครองหมายสกอต โดยคดเลอกไพรเมอร 10 ไพรเมอร พบวาไพรเมอรทสามารถเพมปรมาณดเอนเอไดทงหมดม 10 ไพรเมอร ใหแถบดเอนเอ 83 แถบ เปนแถบ ดเอนเอทใหความหลากรป 30 แถบ คดเปนรอยละ 36.14 ของแถบดเอนเอทงหมด จากการวเคราะหคา PCA สามารถแบงกลมได 3 กลมใหญ

Deng และคณะ (2015) ตรวจสอบและวเคราะหความหลากหลายทางพนธกรรมของพชสกลมะพลบในมณฑลกวางส ประเทศจน โดยใชเครองหมายสกอต คดเลอก ไพรเมอรทงหมด 80 ไพรเมอร พบวามไพรเมอร 18 ไพรเมอร ทสามารถเพมปรมาณดเอนเอได ใหแถบดเอนเอ 241 แถบ มขนาดระหวาง 250-2500 คเบส เปนแถบดเอนเอทมความหลากรป 233 แถบ คดเปนรอยละ 96.68 ผลการจดกลมดวยโปรแกรม Ntedit สามารถแบงกลมไดเปน 3 กลม มคาสมประสทธความเหมอนทางพนธกรรมอยในชวง 0.485 ถง 0.946

2.4.2.2 เครองหมายแฮตอารเอพด เ ค ร อ ง ห ม า ย แ ฮ ต อ า ร เ อ พ ด ( HAT-RAPD, high annealing

temperature-random amplified polymorphic DNA) เปนเครองหมายทางโมเลกลเพมปรมาณ ดเอนเอดวยปฏกรยาลกโซพอลเมอเรสโดยใชไพรเมอรแบบสม ขนาด 8-12 นวคลโอไทด ในการจบกบดเอนเอแมแบบเพอสรางลายพมพดเอนเอ เปนเครองหมายทดดแปลงมาจากเครองหมายอารเอพดของ Williams และคณะ ป ค.ศ. 1990 (Weising et al., 2005) คอ มความแตกตางตรงอณหภมของขนตอนการเขาจบไพรเมอรกบดเอนเอแมแบบ (annealing temperature) โดยเพมจากอญหภม 35-42 องศาเซลเซยส เปน 46-62 องศาเซลเซยส ซงท าใหผลของลายพมพดเอนเอมความหลากรป (polymorphic) เพมขน (Anuntalabhochai et al., 2000) ขอดของการใชเครองหมายน คอ ใชดเอนเอปรมาณนอย ไมจ าเปนตองทราบขอมลล าดบเบสของดเอนเอ ประหยดคาใชจาย สะดวก และรวดเรว

นฤมล และคณะ (2556) ศกษาความสมพนธทางพนธกรรมและจ าแนกพนธของกลวยไมชางและลกผสม 13 พนธ ดวยเครองหมายแฮตอารเอพด พบวาไพรเมอรแบบสม 72 ชนด ม 41 ชนดทสามารถเพมปรมาณดเอนเอได แลวคดเลอกไพรเมอร 29 ชนด ทใหลายพมพ ดเอนเอทชดเจนมาตรวจสอบ พบวาสามารถแยกความแตกตางระหวางพนธได คาสมประสทธความเหมอนอยระหวาง 0.61-0.84

Ref. code: 25605809032146MLB

22

นฤมล และคณะ (2557) ประเมนความหลากหลายทางพนธกรรมของกลวยไมสกลกหลาบ 15 พนธ ดวยเครองหมายแฮตอารเอพด พบวาไพรเมอรทสามารถเพมปรมาณ ดเอนเอได 57 ชนด แลวคดเลอกไพรเมอร 24 ชนด ทใหลายพมพดเอนเอชดเจนมาตรวจสอบ พบวาสามารถแยกความแตกตางระหวางพนธได พบวาสามารถแยกความแตกตางระหวางพนธได คาสมประสทธความเหมอนอยระหวาง 0.32-0.75

2.4.2.3 ล าดบนวคลโอไทดต าแหนงจ าเพาะ ล าดบน วคล โอไทดต าแหน งจ า เพ าะ (nucleotide sequence of

specific gene) เปนเครองหมายดเอนเอทใชล าดบนวคลโอไทดบรเวณใดบรเวณหนง หรอหลายบรเวณรวมกนในการระบชนดทสามารถจ าแนกทกระยะพฒนาการของสงมชวตได โดยพฒนาจากการเลอกใชชนดเอนเอขนาดสนๆ (150-800 คเบส) บรเวณต าแหนงจ าเพาะ (specific site) แนวความคดมาจากแถบบารโคด (barcode) บนสนคา ซงเครองหมายชนดนใชดเอนเอของยนในสงมชวต โดยยนในสงมชวตแตละชนดจะตองมความแตกตางกนสามารถแยกออกจากกนได และตองมบรเวณสวนอนรกษ (conserved sequences region) ทสามารถใชไพรเมอรสากล (universal primer) ในการเพมปรมาณดเอนเอดวยปฎกรยาลกโซพอลเมอเรส (PCR, polymerase chain reaction) ของบรเวณยนนนได (Hebert et al., 2003)

คณะท างานทเรยกวา CBOL Plant Working Group รวมถงนกวจยอนๆทมความสนใจในเรองการสรางระบบเครองหมายดเอนเอบารโคดในพช เพอคนหาบรเวณดเอนเอมาตรฐานทน ามาใชกบพชแลวใหผลลพธดทสด แตคอนขางใชเวลานานเนองจากไมมดเอนเอของพชบรเวณใดของจโนมทมคณลกษณะครบเปนไปตามเกณฑก าหนด (Fazekas et al., 2008) โดยกลมนไดเสนอบรเวณของดเอนเอทน ามาประเมนความเหมาะสมใชเปนเครองหมายดเอนเอบารโคด ไดแก atpF-atpH, matK, rbcL, rpoB, rpoC1, psbK-psbI, trnH-psbA ซง CBOL สรปวาบรเวณทเสนอใหเปนดเอนเอมาตรฐานมความเหมาะสมใชเปนเครองหมายดเอนเอบารโคดในพช คอ การใชขอมลรวมกนของ matK และ rbcL

ปจจบนเครองหมายชนดนก าลงไดรบความนยมและน าไปประยกตใชมากขนเพอศกษาววฒนาการและดความสมพนธของสงมชวตทงพชและสตว งานวจยศกษาในพช ตวอยางเชน การศกษาความสมพนธทางพนธกรรมในมะมวงโดยใชล าดบนวคลโอไทดของยน rpoB และชนดเอนเอทอยระหวางยน trnH กบ psbA (นฤมล และคณะ, 2559) ศกษาความสมพนธทางพนธกรรมของกลวยไมสกลกหลาบโดยใชล าดบนวคลโอไทดของยน matK และสวนของดเอนเอทอยระหวางยน trnH กบ psbA (นฤมล และคณะ, 2557) สวนงานวจยทศกษาในสตว ตวอยางเชน

Ref. code: 25605809032146MLB

23

การศกษาดเอนเอบารโคดในปลาวงศเสอตอโดยใชล าดบนวคลโอไทดของยน COI (ดจฤด และนนทร, 2557)

อรอนงค (2549) ศกษาล าดบเบสของยน matK ในคลอโรพลาสตของทเรยนตางพนท ล าดบนวคลโอไทดทไดมความยาวขนาด 1509 คเบส เมอเปรยบเทยบกบล าดบเบสของทเรยนบรเวณยน matK ทมการศกษากอนหนานในฐานขอมล Genbank ยน matK พบวา บรเวณต าแหนง 275 ของทเรยนพนธพนเมองเปนเบสไซโทซน (C) หรออะดนน (A) ในขณะททเรยนพนธหมอนทอง ชะนจาก 2 จงหวด และกระดมทอง ในฐานขอมล Genbank เปนเบสไซโทซน (C) สวนทต าแหนง 860 ทกสายพนธเปนเบสไซโทซน (C) และต าแหนง 862 ทกสายพนธเปนเบสไธมน (T) จากการศกษาดวยล าดบเบสของยน matK พบวามความแตกตางกนนอย ยงไมเหมาะสมใชเปนเครองหมายโมเลกล จงท าการศกษาเพมเตมโดยใชเทคนคอารเอพด และสามารถแบงกลมได 2 กลมหลก คอ ทเรยนพนเมองทเปนพนธดงเดมและทเรยนพนธเพาะปลก

Ref. code: 25605809032146MLB

24

บทท 3 วธการวจย

3.1 เครองมอและอปกรณ

3.1.1 อปกรณส าหรบสกดและตรวจคณภาพดเอนเอ ไดแก (1) ชดโกรงบดตวอยาง (mortar และ pestle), (2) เครองชง 4 ต าแหนง

ไฟ ฟ า (electric balance), (3) เ ค ร อ งหม น เ หว ย งค ว าม เ ร ว ส ง ( high speed refrigerated centrifuge), (4) เครองปรบอณหภมดวยน า (water bath), (5) เครองวดความเปนกรดเปนดาง (pH meter), (6) ต อบแห ง (hot air oven), (7) หมอน งความดน (autoclave), (8) ต ดดควน ( fume hood), (9) เ คร อ งว ดค า กา รด ดกล นแส ง ( spectrophotometer), (10) ช ด อปกรณ อ เล ก โตรโฟรซ ส (electrophoresis set), (11) เคร องถ ายภาพเจล (UV transilluminator), (12) เตาไมโครเวฟ (microwave), (13) เครองท าความเยน (freezer), (14) เครองผสม (vortex mixer), (15) กระบอกตวง (cylinder), (16) หลอดเซนตรฟวจขนาด 1.5 มลลลตร และขนาด 50 มลลลตร, (17) ปเปตอตโนมต (automatic pipettes) และ (18) ปเปตทปขนาดตาง ๆ

3.1.2 อปกรณส าหรบปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส ไดแก (1) เครองเพมปรมาณสารพนธกรรม (Perkin Elmer; Gene Amp PCR

system 2400), (2) เครองท าความเยน, (3) เครองผสม, (4) หลอดเซนตรฟวจขนาด 1.5 มลลลตร และขนาด 50 มลลลตร, (5) ปเปตอตโนมต และ (6) ปเปตทปขนาดตาง ๆ

3.1.3 อปกรณส าหรบวเคราะหเจลอเลกโทรโฟรซส ได แ ก (1) เ ค ร อ ง จ า ยกร ะแส ไฟ ฟ า ( power supply; BIO-RAD, U.S.A.),

(2) เตาไมโครเวฟ (microwave), (3) เครองถายภาพเจล (UV transilluminator), (4) เครองชง 4 ต าแหนงไฟฟา, (5) ชดอปกรณอเลกโตรโฟรซส, (6) เครองผสม, (7) หลอดเซนตรฟวจขนาด 1.5 มลลลตร, (8) ปเปตอตโนมต และ (9) ปเปตทปขนาดตาง ๆ 3.2 สารเคม

3.2.1 สารเคมส าหรบสกดดเอนเอ ได แก (1) ซ ท ล ไต ร เมท ลแอมโม เน ยม โบร ไมด (CTAB, cetyltrimethyl

ammonium bromide), (2) เอทลนไดอามนเตตราอะซตก (EDTA, ethylene diamine tetra

Ref. code: 25605809032146MLB

25

acetic acid) pH 8.0 ความเขมขน 20 มลลโมลาร, (3) โซเดยมคลอไรด (NaCI) ความเขมขน 2.5 โมลาร , (4) พอลไวนลไพโรล โดน (PVP, polyvinyl pyrolidone), (5) โซเดยมเมตาไบซลเฟส ( sodium metabisulfite), (6) โ ซ เ ด ย ม โ ด เ ด อ ล ซ ล เ ฟต ( SDS, sodium dodecyl sulfate) , (7) โซเดยมอะซเตต (sodium acetate) pH 5.2 ความเขมขน 3 โมลาร, (8) เบตาเมอแคปโตน (β–mercaptoethonol), (9) ล เ น ย ร พ อ ล อ ะ ค ร ล า ไ ม ด (linear polyacrylamide), (10) ไอโซโพรพานอล ( isopropanol), (11) คลอโรฟอรม (chloroform), (12) ฟนอล (phenol), (13) ทรสคลอไรด (Tris-HCI) pH 8.0 ความเขมขน 100 มลลโมลาร, (13) ไอโซเอมลแอลกอฮอล (isoamyl alcochol), (14) เอทานอลบรสทธ (absolute ethanol), (15) เอนไซม RNase A และ (16) สารละลายบฟเฟอร TE (Tris-EDTA buffer) ความเขมขน 10 ยนตตอมลลลตร

3.2.2 สารเคมส าหรบปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส ไดแก (1) ชดสารเคมส าเรจรป Taq DNA polymerase (Vivantis, Vivantis

technologies Sdn. Bhd., Malaysia) ความเขมขน 5 ยนตตอไมโครลตร, (2) แมกนเซยมคลอไรด (MgCl2) ความเขมขน 50 มลลโมลาร, (3) สารละลายบฟเฟอร A ความเขมขน 10 เทา, (4) dNTPs (deoxyribonucleotide triphosphate) ความเขมขน 2 มลลโมลาร และ (5) น ากลน (ddH2O, double distilled water)

3.2.3 สารเคมส าหรบวเคราะหเจลอเลกโทรโฟรซส สารเคมทใช ไดแก (1) เจลอะกาโรส (agarose gel), (2) สารละลายบฟเฟอร

DNA loading ความเขมขน 6 เท า , (3) สารละลายบฟเฟอร TAE ความเขมขน 0.5 เท า , (4) เอธ เดยมโบรไมด (ethidium bromide) ความเขมขน 10 มลลกร มตอมลล ลตร , และ (5) สารละลายดเอนเอมาตรฐาน (DNA Ladder) ความเขมขน 0.1 ไมโครกรมตอไมโครลตร

3.3 วธการวจย

3.3.1 การเกบตวอยาง เกบตวอยางใบทเรยนรวม 40 พนธ รวบรวมจากสวนทเรยน “สวนบานเรา”

สถานทตง คอ 324 หม 8 ต าบลกระแสบน อ าเภอแกลง จงหวดระยอง 21110 พกดสวน ละตจด 12 องศา 50 ลปดา 47.2 ฟลปดา เหนอ ลองจจด 101 องศา 36 ลปดา 31.9 ฟลปดา ตะวนออก สงจากระดบน าทะเล 762 เมตร (ภาพท 3.1) ตวอยางพนธทเรยนแบงออกเปน 6 กลม ตามการจดกลมของพนธทเรยนในประเทศไทย ดงตารางท 3.1

Ref. code: 25605809032146MLB

26

ภาพท 3.1 ทตงสวนทเรยน “สวนบานเรา” จงหวดระยอง (ทมา : https://www.google.co.th/maps)

ตารางท 3.1 พนธทเรยนรวม 40 พนธ

กลม รายชอพนธทเรยน กลมกบ (1) กบวดกลวย (2) กบเจาคณ (3) กบชายน า (4) กบหนาศาล (5) กบรศม

(6) กบพกล และ (7) กบสวรรณ กลมกานยาว (1) กานยาววดสก (2) กานยาวสนาค (3) กานยาว (4) ทองสก และ (5) ตนใหญ

กลมก าปน (1) ก าปนเหลอง (2) ก าปนเดม (3) หมอนทอง และ (4) ก าปนพวง กลมลวง (1) ลวงทอง (2) ย ามะหวาด (3) ชะน (4) ชะนน าตาลทราย (5) ชมพพาน และ

(6) ชมพศร

กลมทองยอย (1) นกหยบ (2) ทองยอยฉตร (3) ฉตรสทอง (4) ธรณไหว และ (5) ทบทม กลมเบดเตลด (1) หาลกไมถงผว (2) ทองแดง (3) พวงมณ (4) หลงลบแล (5) หลนลบแล

(6) สาล กา (7) กะเทย เน อขาว (8) อลบนายทพย (9) เม ด ในก านยาว

(10) จอกลอย (11) เมลดอารย (12) กานสน และ (13) กะเทยขวสน

Ref. code: 25605809032146MLB

27

ตารางท 3.2 ใบทเรยนจ านวน 40 พนธ

กบวดกลวย กบเจาคณ

กบชายน า กบหนาศาล

กบรศม กบพกล

Ref. code: 25605809032146MLB

28

ตารางท 3.2 (ตอ)

กบสวรรณ กานยาววดสก

กานยาวสนาค กานยาว

ทองสก ตนใหญ

Ref. code: 25605809032146MLB

29


ก าปนเหลอง ก าปนเดม

หมอนทอง ก าปนพวง

ลวงทอง ย ามะหวาด

Ref. code: 25605809032146MLB

30


ชะน ชะนน าตาลทราย

ชมพพาน ชมพศร

นกหยบ ทองยอยฉตร

Ref. code: 25605809032146MLB

31


ฉตรสทอง ธรณไหว

ทบทม หาลกไมถงผว

ทองแดง พวงมณ

Ref. code: 25605809032146MLB

32


หลงลบแล หลนลบแล

สาลกา กะเทยเนอขาว

อลบนายทพย เมดในกานยาว

Ref. code: 25605809032146MLB

33


จอกลอย เมลดอารย

กานสน กะเทยขวสน

Ref. code: 25605809032146MLB

34

3.3.2 การสกดดเอนเอ การสกดดเอนเอจากใบทเรยน ดวยการประยกตวธจาก Doyle และ Doyle

(1987) โดยชงน าหนกใบทเรยนประมาณ 3 กรม เตมพอลไวนลไพโรลโดนประมาณ 0.3 กรม และตามดวยบฟเฟอรสกด (extraction buffer ประกอบดวย 4 % CTAB, 2.5 โมลาร Nacl,0.6 % SDS, 20 มลล โมลาร EDTA (pH8), 100 มลล โมลาร Tris-HCl (pH8), 0.1 % sodium metabisufite) ปรมาตร 20 มลลลตร กอนใสบฟเฟอรสกดใหน าไปอนไวทอณหภม 60 องศาเซลเซยส เพอใหละลายผสมเปนเนอเดยวกน แลวคอยใสบฟเฟอรสกดลงในโกรงผสมบดใบไมใหละเอยด จากนนเทสวนผสมทงหมดลงในหลอดเซนตรฟวจขนาด 50 มลลลตร เตมเบตาเมอแคปโตน (β–mercaptoethonol) ปรมาตร 20 ไมโครลตร บมทอณหภม 65 องศาเซลเซยส เปนเวลา 1 ชวโมง วางทงไวทอณหภมหองเปนเวลา 5 นาท เตมคลอโรฟอรม : ไอโซเอมลแอลกอฮอล (24:1) ปรมาตร 1 เทาของสารละลาย ผสมใหเปนเนอเดยวกนดวยการพลกหลอดกลบไปกลบมาประมาณ 3 นาท น าไปหมนเหวยงดวยความเรวรอบ 12,000 รอบตอนาท เปนเวลา 10 นาท ใชออโตปเปตตดดสารละลายใสสวนบนถายใสหลอดเซนตรฟวจขนาด 50 มลลลตรใหม เตมลเนยรพอลอะครลาไมด ปรมาตร 100 ไมโครลตร และไอโซโพรพานอล ปรมาตร 1 เทาของสารละลาย ผสมใหเปนเนอเดยวกนกลบหลอดไปมา บมทอณหภม -20 องศาเซลเซยส เปนเวลา 30 นาท น าไปหมนเหวยงดวยความเรวรอบ 12,000 รอบตอนาท เปนเวลา 15 นาท เทสารละลายใสดานบนทงโดยใหเหลอแตตะกอนดานลาง ลางตะกอน ดเอนเอดวยเอทานอล 70 เปอรเซนต ท าตะกอนใหแหงดวยการระเหยเอทานอลท อณหภม 60 องศาเซลเซยส เปนเวลา 10 นาท (เปดฝาหลอด) ละลายตะกอนดวยสารละลายบฟเฟอร TE ปรมาตร 500 ไมโครลตร แลวถายลงสหลอดเซนตรฟวจขนาด 1.5 มลลลตร เตม RNase A (10 มลลกรมตอมลลลตร) ปรมาตร 2.5 ไมโครลตร บมทอณหภม 37 องศาเซลเซยส เปนเวลา 1 ชวโมง เตมฟนอล : คลอโรฟอรม : ไอโซเอมลแอลกอฮอล (25:24:1) ปรมาตร 500 ไมโครลตร ผสมใหเปนเนอเดยวกน น าไปหมนเหวยงดวยความเรวรอบ 12,000 รอบตอนาท เปนเวลา 10 นาท ดดสารละลายใสสวนบนถายลงสหลอดเซนตรฟวจขนาด 1.5 มลลลตรใหม เตมคลอโรฟอรม : ไอโซเอมลแอลกอฮอล ปรมาตร 500 ไมโครลตร ผสมใหเปนเนอเดยวกน น าไปหมนเหวยงดวยความเรวรอบ 12,000 รอบตอนาท เปนเวลา 10 นาท ดดสารละลายใสสวนบนใสหลอดเซนตรฟวจขนาด 1.5 มลลลตร ของหลอดใหม แลวเตมลเนยรพอลอะครลาไมด ปรมาตร 5 ไมโครลตร ผสมใหเปนเนอเดยวกนกลบหลอดไปมา เตมสารละลายโซเดยมอะซเตต ความเขมขน 3 โมลาร คา pH 5.2 เปนปรมาตร 10 เปอรเซนตของปรมาตรทงหมด ผสมใหเปนเนอเดยวกนกลบหลอดไปมา เตมไอโซโพรพานอล ปรมาตร 1 เทาของสารละลาย ผสมใหเปนเนอเดยวกนกลบหลอดไปมา บมทอณหภม -20 องศาเซลเซยส เปนเวลา 30 นาท น าไปหมนเหวยงดวยความเรวรอบ 12,000 รอบตอนาท เปนเวลา 15 นาท จากนนเทสารละลาย

Ref. code: 25605809032146MLB

35

สวนใสทงแลวลางตะกอนดวยเอทานอล 70 ระเหยเอทานอลทอณหภม 60 องศาเซลเซยส เปนเวลา 10 นาท (เปดฝาหลอด) เพอท าใหตะกอนแหง ละลายตะกอนดวยสารละลายบฟเฟอร TE ปรมาตร 100 ไมโครลตร เกบสารละลายดเอนเอไวทอณหภม -20 องศาเซลเซยส

3.3.3 การตรวจสอบคณภาพและปรมาณของดเอนเอ 3.3.3.1 การวดคาการดดกลนแสงอลตราไวโอเลต (ultraviolet)

ใชเครองสเปกโตรโฟโตมเตอรทความยาวคลน 260 นาโนเมตร ในการหาปรมาณดเอนเอจะน าตวอยางดเอนเอสกดไดทมความเขมขน 50 ไมโครกรมตอมลลลตร คาการดดกลนแสงของตวอยางดเอนเอท OD260 เทากบ 1 จากการตรวจสอบคณภาพดเอนเอโดยการเปรยบเทยบคาการดดกลนแสงท OD260 และ OD280 สารละลายดเอนเอทบรสทธจะมคาอตราสวนระหวาง OD260/OD280 ประมาณ 1.7-1.8 ถามคานอยกวา 1.7-1.8 แสดงวามการปนเปอนของโปรตนหรอฟนอลและถามคามากกวา 1.7-1.8 แสดงวามการปนเปอนของอารเอนเอ (Sambrook et al., 1989)

3.3.3.2 การวดการเรองแสงรวมกบเอธเดยมโบรไมด น าดเอนเอมาท าอเลกโตรโฟรซสในเจลอะกาโรสความเขมขน 0.8

เปอรเซนต โดยมวลตอปรมาตร แลวยอมดวยเอธเดยมโบรไมดความเขมขน 0.5 ไมโครกรมตอมลลลตร โมเลกลของเอธเดยมโบรไมดจะเขาแทรกในเกลยวค น าไปสองดวยแสงอลตราไวโอเลต จะเกดการเรองแสง (Sambrook et al., 1989)

3.3.4 การสรางเครองหมายดเอนเอ 3.3.4.1 เครองหมายสกอต

(1) ตรวจหาไพรเมอรทตอบสนองตอปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส เลอกดเอนเอทเรยนจ านวน 30 พนธ มาเจอจางใหมความเขมขน 100

นาโนกรมตอไมโครลตร แลวดดตวอยางดเอนเอ ปรมาตร 10 ไมโครลตร ในดเอนเอแตละหลอด ผสมลงในหลอดเดยวกน ส าหรบใชเปนดเอนเอแมแบบท าปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส เพอคดเลอก ไพรเมอร ดเอนเอผสมจะน ามาทดสอบกบไพรเมอรทงหมด 80 ชนด โดยไพรเมอรสกอตท 1-45 ไดมาจากงานวจยของ Wu และคณะ (2013) และไพรเมอรสกอตท 47-80 ไดมาจากงานวจยของ Luo และคณะ (2010) ดงแสดงในตารางท 3.3

Ref. code: 25605809032146MLB

36

ตารางท 3.3 ไพรเมอรทใชเพมปรมาณดเอนเอของเครองหมายสกอต

ชอไพรเมอร ล าดบเบส 5’ 3’ ชอไพรเมอร ล าดบเบส 5’ 3’

SCoT 1 CAACAATGGCTACCACCA SCoT 41 ACGACATGGCGACCGCGG SCoT 2 CAACAATGGCTACCACCC SCoT 42 ACCATGGCTACCACCGAT

SCoT 3 CAACAATGGCTACCACCG SCoT 43 ACCATGGCTACCACCGGT SCoT 4 CAACAATGGCTACCACCT SCoT 44 GCAACAATGGCTACCACG

SCoT 5 CAACAATGGCTACCACGA SCoT 45 CATGGCTACCACCGGCCG

SCoT 6 CAACAATGGCTACCACGC SCoT 46 CCATGGCTACCACCGGCA SCoT 7 CAACAATGGCTACCACGG SCoT 47 ACAATGGCTACCACTGCC

SCoT 8 CAACAATGGCTACCACGT SCoT 48 ACAATGGCTACCACTGGC

SCoT 9 CAACAATGGCTACCAGCA SCoT 49 ACAATGGCTACCACTGCG SCoT 10 CAACAATGGCTACCAGCC SCoT 50 ACAATGGCTACCACTGGG

SCoT 11 AAGCAATGGCTACCACCA SCoT 51 ACAATGGCTACCACTGTC SCoT 12 ACGACATGGCGACCAACG SCoT 52 ACAATGGCTACCACTGCA

SCoT 13 ACGACATGGCGACCATCG SCoT 53 ACAATGGCTACCACCGAC

SCoT 14 ACGACATGGCGACCACGC SCoT 54 ACAATGGCTACCACCAGC SCoT 15 ACGACATGGCGACCGCGA SCoT 55 ACAATGGCTACCACTACC

SCoT 16 ACCATGGCTACCACCGAC SCoT 56 ACAATGGCTACCACTAGC

SCoT 17 ACCATGGCTACCACCGAG SCoT 57 ACAATGGCTACCACTACG SCoT 18 ACCATGGCTACCACCGCC SCoT 58 ACAATGGCTACCACTAGG

SCoT 19 ACCATGGCTACCACCGGC SCoT 59 ACAATGGCTACCACCATC

SCoT 20 ACCATGGCTACCACCGCG SCoT 60 ACAATGGCTACCACCACA SCoT 21 ACGACATGGCGACCCACA SCoT 61 CAACAATGGCTACCACCG

SCoT 22 AACCATGGCTACCACCAC SCoT 62 ACCATGGCTACCACGGAG SCoT 23 CACCATGGCTACCACCAG SCoT 63 ACCATGGCTACCACGGGC

SCoT 24 CACCATGGCTACCACCAT SCoT 64 ACCATGGCTACCACGGTC

SCoT 25 ACCATGGCTACCACCGGG SCoT 65 ACCATGGCTACCACGGCA SCoT 26 ACCATGGCTACCACCGTC SCoT 66 ACCATGGCTACCAGCGAG

SCoT 27 ACCATGGCTACCACCGTG SCoT 67 ACCATGGCTACCAGCGGC

Ref. code: 25605809032146MLB

37


(2) เพมปรมาณดเอนเอดวยปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส

เลอกไพรเมอรจากทงหมด 80 ชนด ทสามารถเพมปรมาณดเอนเอดวยปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส และใหลายพมพดเอนเอชดเจน มาตรวจสอบกบดเอนเอทเรยนจ านวน 30 พนธ การเพมปรมาณดเอนเอของทเรยนดวยปฏกรยาลกโซพอล เมอเรส ปรมาตรรวม 20 ไมโครลตร มองคประกอบดงตารางท 3.4 และขนตอนของปฏกรยา แสดงดงตารางท 3.5 ตารางท 3.4 องคประกอบสารในการเพมปรมาณดเอนเอดวยปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส

ชอไพรเมอร ล าดบเบส 5’ 3’ ชอไพรเมอร ล าดบเบส 5’ 3’

SCoT 28 CCATGGCTACCACCGCCA SCoT 68 ACCATGGCTACCAGCGTC SCoT 29 CCATGGCTACCACCGGCC SCoT 69 ACCATGGCTACCAGCGCA

SCoT 30 CCATGGCTACCACCGGCG SCoT 70 ACCATGGCTACCAGCGCG

SCoT 31 CCATGGCTACCACCGCCT SCoT 71 CCATGGCTACCACCGCCG SCoT 32 CCATGGCTACCACCGCAC SCoT 72 CCATGGCTACCACCGCCC

SCoT 33 CCATGGCTACCACCGCAG SCoT 73 CCATGGCTACCACCGGCT

SCoT 34 ACCATGGCTACCACCGCA SCoT 74 CCATGGCTACCACCGGCA SCoT 35 CATGGCTACCACCGGCCC SCoT 75 CCATGGCTACCACCGGAG

SCoT 36 GCAACAATGGCTACCACC SCoT 76 CCATGGCTACCACTACCG SCoT 37 CAACAATGGCTACCAGCG SCoT 77 CCATGGCTACCACTACCC

SCoT 38 AAGCAATGGCTACCACCG SCoT 78 CCATGGCTACCACTAGCA

SCoT 39 ACGACATGGCGACCAGCG SCoT 79 CCATGGCTACCACTAGCT SCoT 40 ACGACATGGCGACCACGT SCoT 80 CCATGGCTACCACTAGCG

สาร ความเขมขนในปฏกรยา ปรมาตร (ไมโครลตร) ดเอนเอทเรยน 100 นาโนกรมตอไมโครลตร 1.000

ไพรเมอร 5 ไมโครโมลาร 1.000

บฟเฟอร 10X 2.000 dNTP 2 มลลโมลาร 2.000

Ref. code: 25605809032146MLB

38


ตารางท 3.5 อณหภม เวลา และจ านวนรอบในแตละขนตอนของปฏกรยา

ขนตอน อณหภม

(องศาเซลเซยส) ระยะเวลา (นาท) จ านวนรอบ

Initial Denaturation 94 3.00 -

Denaturation 94 0.30 40 Annealing 46 0.40

Extension 72 1.00 Final Extension 72 5.00 -

3.3.4.2 เครองหมายแฮตอารเอพด

(1) ตรวจหาไพรเมอรทตอบสนองตอปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส เลอกดเอนเอทเรยนจ านวน 30 พนธ มาเจอจางใหมความเขมขน 100

นาโนกรมตอไมโครลตร แลวดดตวอยางดเอนเอ ปรมาตร 10 ไมโครลตร ในดเอนเอแตละหลอด ผสมลงในหลอดเดยวกน ส าหรบใชเปนดเอนเอแมแบบท าปฏกรยาลกโซพอลเมอเรสเพอคดเลอก ไพรเมอร ดเอนเอผสมจะน ามาทดสอบกบไพรเมอรทงหมด 72 ชนด (Wako Company, Japan) ดงแสดงในตารางท 3.6

สาร ความเขมขนในปฏกรยา ปรมาตร (ไมโครลตร)

MgCl2 25 มลลโมลาร 2.000 Taq DNA polymerase 5 ยนตตอไมโครลตร 0.125

ddH2O - 11.875

ปรมาตรรวม - 20.000

Ref. code: 25605809032146MLB

39

ตารางท 3.6 ไพรเมอรทใชเพมปรมาณดเอนเอของเครองหมายแฮตอารเอพด

ชอชดไพรเมอร ชอไพรเมอร ล าดบเบส (5´ 3´)

A

A21 AGAATTGGACGA A22 GCCTGCCTCACG

A23 ACTGACCTAGTT

A24 CTCCTGCTGTTG A25 CTCAGCGATACG

A26 ACTGAGAAAATA A27 ATCGCGGAATAT

A28 ATTTGGATAGGG

A29 GGTTCGGGAATG A30 GACCTGCGATCT

A31 AAGGCGCGAACG

A32 TTGCCGGGACCA B

B21 AAGCCTATACCA

B22 GGTGACTGGTGG

B23 GGTGCCGGAGCA B24 CACACTACTTAT

B25 AGCACTGAATCT B26 ATGAGAAAGGAA

B27 GGCGGTTATGAA

B28 GTCATTAAAGCT B29 GCCATCGAAAAA

B30 CTTAGGTTACGT

B31 CACAAGGAACAT B32 ATCGCGGCTTAT

Ref. code: 25605809032146MLB

40



C

C21 GGAGAGCGGACG C22 GGTCACCGATCC

C23 CCGTCTTTTCTG

C24 CCTTGGCATCGG C25 AGATTCTTACTG

C26 GCGTTCGAACGA C27 GCATTGCAATCG

C28 GTCGACGCATCA

C29 GTCGCCTTACCA C30 TATTGGGATTGG

C31 TCTGCTGACCGG

C32 TCTACACGAAGT

D

D21 GGCGATTCTGCA

D22 TGCCCACTACGG

D23 ACCATCAAACGG D24 GTGCAATTTGGC

D25 GTTTTGTCACCG D26 GATGAGCTAAAA

D27 AGAATGTCCGTA

D28 ACTGAGGGGGGA D29 ATCAAGTATCCA

D30 GAGACTACCGAA

D31 GGAGGTCGACCA D32 AAGCTGGGGGGA

Ref. code: 25605809032146MLB

41



E

E21 TGCTTCGTATTA E22 GGAATGGAACCG

E23 AGGTACGCCGCA

E24 CCGGAGTGGATG E25 ATCGTTACAGTA

E26 CTGCCTGTACCA E27 CCATTGTCGGTA

E28 CGCCCTGCAGTA

E29 GTTATGCAAGGG E30 TACCTGGTTGAT

E31 GAGGACAGCAA

E32 CAGGAACAGCAA F

F21 AACCTTTAGGGC

F22 AAGAGGGTTGAC

F23 CCATCCGCACGA F24 ACTGTTATAACG

F25 CCAGATCCGAAT F26 CTCAGCATTGAT

F27 CAGGTGGGAGTA

F28 CCAAGATCCATT F29 GCCGCTAATATG

F30 ACTTTCGCCGAA

F31 ATCGTGACGCCG F32 TTCAACATCGAC

Ref. code: 25605809032146MLB

42

(2) เพมปรมาณดเอนเอดวยปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส เลอกไพรเมอรจากทงหมด 72 ชนด ทสามารถเพมปรมาณดเอนเอดวย

ปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส และใหลายพมพดเอนเอชดเจน มาตรวจสอบกบดเอนเอทเรยนจ านวน 30 พนธ การเพมปรมาณดเอนเอของทเรยนดวยปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส ปรมาตรรวม 20 ไมโครลตร มองคประกอบดงตารางท 3.7 และขนตอนของปฏกรยา แสดงดงตารางท 3.8 ตารางท 3.7 องคประกอบสารในการเพมปรมาณดเอนเอดวยปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส




Initial Denaturation 94 3.00 - Denaturation 94 0.30

40 Annealing 50 0.40 Extension 72 1.00

Final Extension 72 5.00 -

สาร ความเขมขนในปฏกรยา ปรมาตร (ไมโครลตร)

ดเอนเอทเรยน 100 นาโนกรมตอไมโครลตร 1.000 ไพรเมอร 5 ไมโครโมลาร 1.000

บฟเฟอร 10X 2.000

dNTP 2 มลลโมลาร 2.000 MgCl2 25 มลลโมลาร 2.000

Taq DNA polymerase 5 ยนตตอไมโครลตร 0.125

ddH2O - 11.875 ปรมาตรรวม - 20.000

Ref. code: 25605809032146MLB

43 3.3.4.3 ล าดบนวคลโอไทดต าแหนงจ าเพาะ

เ พมปรมาณด เอนเอทเรยนจ านวน 40 พนธ ดวยปฏกรยาลกโซ - พอลเมอเรสบรเวณยน rbcL และยน rpoC1 ซงเปนไพรเมอรล าดบสากล (universal primer) ดงตารางท 3.9 โดยน าดเอนเอทเรยนมาเจอจางใหดเอนเอมความเขมขน 100 นาโนกรมตอไมโครลตร แลวน ามาเพมปรมาณดเอนเอ ตามองคประกอบของปฏกรยาดงตารางท 3.10 และขนตอนของปฏกรยา แสดงดงตารางท 3.11 ตารางท 3.9 ไพรเมอรทใชเพมปรมาณดเอนเอของล าดบนวคลโอไทดต าแหนงจ าเพาะ

ยน ชอไพรเมอร ล าดบเบส (5´ 3´) อางอง

rbcL rbcL _F TCACCACAAACAGAAACTAAAGC CBOL, 2005

rbcL _R GGCACAAAATAAGAAACGATCTC CBOL, 2005

rpoC1 rpoC1_F GTGGATACACTTCTTGATAATGG CBOL, 2009

rpoC1_R TGAGAAAACATAAGTAAACGGGC CBOL, 2009

ตารางท 3.10 องคประกอบสารในการเพมปรมาณดเอนเอดวยปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส

สาร ความเขมขนในปฏกรยา ปรมาตร (ไมโครลตร) ดเอนเอทเรยน 100 นาโนกรมตอไมโครลตร 2.00

ไพรเมอรแบบไปขางหนา 5 ไมโครโมลาร 2.00

ไพรเมอรแบบยอนกลบ 5 ไมโครโมลาร 2.00 บฟเฟอร 10X 4.00

dNTP 2 มลลโมลาร 4.00 MgCl2 25 มลลโมลาร 4.00

Taq DNA polymerase 5 ยนตตอไมโครลตร 0.25

ddH2O - 21.75 ปรมาตรรวม - 40.00

Ref. code: 25605809032146MLB

44




Initial Denaturation 94 3.00 -

Denaturation 94 0.30 35 Annealing 52-57 0.40

Extension 72 1.00

Final Extension 72 5.00 -

3.3.5 การตรวจสอบขนาดชนดเอนเอ ตรวจสอบขนาดช นด เ อน เอท ได จากปฏก ร ยาล ก โซพอล เมอเรส ด วย

เครองหมายสกอต เครองหมายแฮตอารเอพด และล าดบนวคลโอไทดต าแหนงจ าเพาะ โดยการเปรยบเทยบกบดเอนเอมาตรฐาน เพอเปนตวบอกขนาดของชนดเอนเอดวยวธอเลกโทรโฟรซสในเจลอะกาโรสความเขมขน 1.5 เปอรเซนต โดยมวลตอปรมาตร ผสมรวมกบสารละลายบฟเฟอร TAE ความเขมขน 0.5 เทา ละลายผงเจลดวยการใหความรอนและทงไวบนถาดเจลประมาณ 30 นาท น าดเอนเอทเพมปรมาณแลวจากปฏกรยาลกโซพอลเมอเรสหยอดลงไปในหลมเจล โดยใชแรงไฟฟา 100 โวลต แลวน าไปยอมแถบดเอนเอดวยเอธเดยมโบรไมดความเขมขน 0.5 ไมโครกรมตอมลลลตร เปนเวลาประมาณ 5 นาท ตรวจสอบภายใตแสงอตราไวโอเลตและถายภาพเกบไวเพอใชในการวเคราะหตอไป

3.3.6 การวเคราะหผล 3.3.6.1 เครองหมายสกอตและเครองหมายแฮตอารเอพด

หาความสมพนธของทเรยนแตละพนธโดยการเปรยบเทยบความเหมอนความแตกตางของแถบดเอนเอทเกดขนในทเรยนรวม 30 พนธ ถาปรากฏแถบดเอนเอจะใหสญลกษณเปน 1 สวนทไมปรากฏแถบดเอนเอจะใหสญลกษณเปน 0 จากนนเปรยบเทยบแถบดเอนเอทเกดขนทงหมดของทกพนธ โดยค านวณดชนความเหมอน (similarity coefficient) แลวสรางแผนภมความสมพนธ (dendrogram) ดวยโปรแกรม NTSYS-pc รน 2.0e เลอกวธการจดกลมแบบ UPGMA (unweighted pair group method with arithmetic mean) (Rohlf, 2002)

Ref. code: 25605809032146MLB

45 3.3.6.2 ล าดบนวคลโอไทดต าแหนงจ าเพาะ

ล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL และยน rpoC1 ทไดจากผลผลตดเอนเอดวยปฏกรยาลกโซพอลเมอเรสจากการหาล าดบนวคลโอไทดโดยบรษท Bioneer ประเทศเกาหลใต น าเอาล าดบนวคลโอไทดของทเรยนจ านวน 40 พนธ มาเรยงเปรยบเทยบ (alignment) โดยใชโปรแกรม ClustalW2 (http://www.genome.jp/tools-bin/clustalw) วเคราะหความแตกตางทางพนธกรรมของทเรยนในแตละพนธ แลวน าขอมลมาสรางแผนภมความสมพนธทางพนธกรรม (phylogenetic tree) ด ว ย โ ป รแกรม MEGA7 (Molecular evolutionary genetics analysis version 7.0) โดยเลอกการจดกลมแบบ Maximum likelihood (ML) ก าหนดคา bootstrap เปน 1,000 รอบ

3.3.6.3 เปรยบเทยบผลจากเครองหมายดเอนเอ เปรยบเทยบประสทธภาพของ เคร องหมายสกอต เคร องหมาย

แฮตอารเอพด และเครองหมายสกอตรวมกบเครองหมายแฮตอารเอพด โดยวเคราะหจากแผนภมความสมพนธ และประสทธภาพการจ าแนกทเรยนดวยล าดบนวคลโอไทดต าแหนงจ าเพาะบรเวณ ยน rbcL และยน rpoC1 โดยวเคราะหจากแผนภมความสมพนธทางพนธกรรม

Ref. code: 25605809032146MLB

46

บทท 4 ผลการวจยและอภปรายผล

4.1 เครองหมายสกอต

4.1.1 การคดเลอกไพรเมอรทใชเพมปรมาณดเอนเอ

การตรวจสอบไพรเมอรเบองตนของเครองหมายสกอต โดยการใชไพรเมอร แบบสมจ านวน 80 ชนด กบดเอนเอทเรยนจ านวน 30 พนธ ดวยปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส พบวาไพรเมอรทสามารถเพมปรมาณดเอนเอของทเรยนม 46 ชนด คดเปน 57.5 เปอรเซนต จากนนคดเลอกไพรเมอรทสามารถเพมผลผลตดเอนเอไดในปรมาณสงและมความชดเจน คดเลอกได 19 ชน ด ไ ด แ ก SCoT22, SCoT23, SCoT31, SCoT35, SCoT46, SCoT47, SCoT48, SCoT52, SCoT53, SCoT54, SCoT66, SCoT67, SCoT68, SCoT71, SCoT72 SCoT73, SCoT74, SCoT76 และ SCoT77 น าไพรเมอร 19 ชนด มาทดสอบกบดเอนเอตวอยางทง 30 พนธ สามารถเพมปรมาณ ดเอนเอของทเรยนปรากฏแถบดเอนเอทงหมด 277 แถบ มขนาดอยระหวางประมาณ 200 ถง 2750 คเบส พบแถบดเอนเอทมความหลากรปจ านวน 219 แถบ คดเปน 79.06 เปอรเซนต แสดงดงภาพท 4.1-4.1

Ref. code: 25605809032146MLB

47

ภาพท 4.1 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายสกอตโดยใชไพรเมอร SCoT22 [M คอ ดเอนเอมาตรฐาน 100 bp Plus DNA Ladder (Vivantis, Vivantis

technologies Sdn. Bhd., Malaysia), 1-30 คอ (1) กบวดกลวย (2) กบเจาคณ (3) หาลกไมถงผว (4) ลวงทอง (5) นกหยบ (6) ก าปนเหลอง (7) ก าปนเดม (8) ทองแดง (9) ทองยอยฉตร (10) พวงมณ (11) หลงลบแล (12) ทองสก (13) ตนใหญ (14) กานยาว (15) ชะน (16) ชะนน าตาลทราย (17) หลนลบแล (18) ฉตรสทอง (19) ชมพพาน (20) กะเทยเนอขาว (21) ชมพศร (22) ก าปนพวง (23) ธรณไหว (24) อลบนายทพย (25) กบพกล (26) ทบทม (27) กบรศม (28) เมดในกานยาว (29) กานสน และ (30) กบสวรรณ]

Ref. code: 25605809032146MLB

48



Ref. code: 25605809032146MLB

49



Ref. code: 25605809032146MLB

50



Ref. code: 25605809032146MLB

51



Ref. code: 25605809032146MLB

52



Ref. code: 25605809032146MLB

53



Ref. code: 25605809032146MLB

54



Ref. code: 25605809032146MLB

55



Ref. code: 25605809032146MLB

56



Ref. code: 25605809032146MLB

57



Ref. code: 25605809032146MLB

58



Ref. code: 25605809032146MLB

59



Ref. code: 25605809032146MLB

60



Ref. code: 25605809032146MLB

61



Ref. code: 25605809032146MLB

62



Ref. code: 25605809032146MLB

63



Ref. code: 25605809032146MLB

64



Ref. code: 25605809032146MLB

65



Ref. code: 25605809032146MLB

66

66

ผลการสรางลายพมพดเอนเอดวยไพรเมอรของเครองหมายสกอตจ านวน 19 ชนด ไพรเมอร SCoT68 ใหจ านวนแถบดเอนเอมากทสด คอ 32 แถบ และไพรเมอร SCoT23, SCoT46 และ SCoT47 ใหจ านวนแถบดเอนเอนอยทสด คอ 9 แถบ นอกจากนพบแถบดเอนเอทจ าเพาะกบทเรยนแตละพนธ ดงน

ไพรเมอร SCoT22 พบแถบดเอนเอขนาด 2000 คเบส จ าเพาะกบพนธนกหยบ แถบดเอนเอขนาด 1800 และ 390 คเบส จ าเพาะกบพนธกบรศม และแถบดเอนเอขนาด 520 คเบส จ าเพาะกบพนธอลบนายทพย

ไพรเมอร SCoT31 พบแถบดเอนเอขนาด 1000 คเบส จ าเพาะกบพนธกานยาวและแถบดเอนเอขนาด 520 คเบส จ าเพาะกบพนธเมดในกานยาว

ไพรเมอร SCoT35 พบแถบดเอนเอขนาด 580 และ 380 ค เบส จ าเพาะกบ พนธหาลกไมถงผว

ไพรเมอร SCoT47 พบแถบดเอนเอขนาด 1700 และ 1400 คเบส จ าเพาะกบ พนธฉตรสทอง

ไพรเมอร SCoT48 พบแถบดเอนเอขนาด 1200 คเบส จ าเพาะกบพนธพวงมณ ไพรเมอร SCoT52 พบแถบดเอนเอขนาด 900 คเบส จ าเพาะกบพนธนกหยบ และ

แถบดเอนเอขนาด 500 คเบส จ าเพาะกบพนธฉตรสทอง ไพรเมอร SCoT53 พบแถบดเอนเอขนาด 1200 คเบส จ าเพาะกบพนธหลนลบแล

และแถบดเอนเอขนาด 700 คเบส จ าเพาะกบพนธฉตรสทอง ไ พ ร เ ม อ ร SCoT66 พ บ แ ถ บ ด เ อ น เ อ ข น า ด 2000 ค เ บ ส จ า เ พ า ะ ก บ

พนธทองยอยฉตร ไพรเมอร SCoT68 พบแถบดเอนเอขนาด 1000 คเบส จ าเพาะกบพนธหลนลบแล

แถบดเอนเอขนาด 580 จ าเพาะกบพนธฉตรสทอง และแถบดเอนเอขนาด 420 คเบส จ าเพาะกบพนธก าปนเดม

ไพรเมอร SCoT73 พบแถบดเอนเอขนาด 1600 คเบส จ าเพาะกบพนธพวงมณ แถบดเอนเอขนาด 720 คเบส จ าเพาะกบพนธฉตรสทอง และแถบดเอนเอขนาด 400 คเบส จ าเพาะกบพนธเมดในกานยาว

ไพรเมอร SCoT74 พบแถบดเอนเอขนาด 800 คเบส จ าเพาะกบพนธก าปนเหลอง และแถบดเอนเอขนาด 350 คเบส จ าเพาะกบพนธทองยอยฉตร

ไพรเมอร SCoT76 พบแถบดเอนเอขนาด 1350 คเบส จ าเพาะกบพนธหลงลบแล และแถบดเอนเอขนาด 400 และ 350 คเบส จ าเพาะกบพนธทบทม

Ref. code: 25605809032146MLB

67

67

4.1.2 การวเคราะหความสมพนธ

โปรแกรมทใชวเคราะหความสมพนธทางพนธกรรมทเรยน คอ โปรแกรม NTSYS-pc รน 2.01e และเลอกการจดกลมแบบ UPGMA ผลของการสรางแผนภมความสมพนธ ทางพนธกรรมทไดจากการปรากฏของแถบดเอนเอ (ใหคาคะแนน 1) และการไมปรากฏของแถบ ดเอนเอ (ใหคาคะแนน 0) ดวยการใชไพรเมอรเครองหมายสกอต สามารถค านวณใหคาดชนความเหมอนอยระหวาง 0.67-0.89 (ภาพท 4.20) และสรางแผนภมความสมพนธทางพนธกรรม (ภาพท 4.21) เมอพจารณาคาดชนความเหมอนทต าแหนง 0.745 สามารถแยกทเรยนออกเปน 2 กลม คอ กลมท 1 เปนกลมใหญมสมาชก ไดแก กบวดกลวย กบเจาคณ ทองแดง ตนใหญ ก าปนเดม ลวงทอง นกหยบ พวงมณ กะเทยเนอขาว ธรณไหว ก าปนพวง อลบนายทพย กบพกล กบรศม ทบทม เมดในกานยาว กบสวรรณ กานสน หลนลบแล ชะน ชะนน าตาลทราย ชมพบาน ก าปนเหลอง ทองยอยฉตร กานยาว ชมพศร และฉตรสทอง กลมสอง มสมาชก 3 พนธ คอ ทองสก หลงลบแล และหาลกไมถงผว ส าหรบพนธทเรยนทมความสมพนธใกลชดมากทสด คอ กบพกลกบกบรศม มคาดชนความเหมอน 0.89 สวนพนธทเรยนทมความสมพนธใกลชดนอยทสด คอ ฉตรสทองกบกานยาว มคาดชนความเหมอน 0.67

Ref. code: 25605809032146MLB

68

ภาพท 4.20 คาดชนความเหมอนของทเรยนดวยเครองหมายสกอต

Ref. code: 25605809032146MLB

69

ภาพท 4.21 แผนภมความสมพนธของทเรยนดวยเครองหมายสกอต

Ref. code: 25605809032146MLB

70

70

4.2 เครองหมายแฮตอารเอพด

4.2.1 การคดเลอกไพรเมอรทใชเพมปรมาณดเอนเอ การตรวจสอบไพรเมอรเบองตนของเครองหมายแฮตอารเอพดโดยการใช

ไพรเมอรแบบสมจ านวน 6 ชด รวม 72 ชนด กบดเอนเอทเรยนจ านวน 30 พนธ ดวยปฏกรยา ลกโซพอลเมอเรส พบวาไพรเมอรทสามารถเพมปรมาณดเอนเอของทเรยนม 26 ชนด คดเปน 36.11 เปอรเซนต จากนนคดเลอกไพรเมอรทสามารถเพมผลผลตดเอนเอไดในปรมาณสงและมความชดเจน คดเลอกได 20 ชนด ไดแก A22, A24, A30, A31, A32, B22, B23, C21, C22, C28, C31, D31, E22, E23, E24, E26, E31, E32 และ F31 เมอน าไพรเมอร 20 ชนด มาทดสอบกบดเอนเอตวอยางทง 30 พนธ สามารถเพมปรมาณดเอนเอของทเรยนปรากฏแถบดเอนเอทงหมด 240 แถบ มขนาดอยระหวางประมาณ 300 ถง 2500 คเบส พบแถบดเอนเอทมความหลากรปจ านวน 205 แถบ คดเปน 85.42 เปอรเซนต แสดงดงภาพท 4.1-4.19

Ref. code: 25605809032146MLB

71

ภาพท 4.22 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายแฮตอารเอพดโดยใชไพรเมอร A22 [M คอ ดเอนเอมาตรฐาน 100 bp Plus DNA Ladder (Vivantis, Vivantis


Ref. code: 25605809032146MLB

72



Ref. code: 25605809032146MLB

73



Ref. code: 25605809032146MLB

74



Ref. code: 25605809032146MLB

75



Ref. code: 25605809032146MLB

76

ภาพท 4.27 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายแฮตอารเอพดโดยใชไพรเมอร B22 [M คอ ดเอนเอมาตรฐาน 100 bp Plus DNA Ladder (Vivantis, Vivantis


Ref. code: 25605809032146MLB

77



Ref. code: 25605809032146MLB

78



Ref. code: 25605809032146MLB

79

ภาพท 4.30 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายแฮตอารเอพดโดยใชไพรเมอร C21 [M คอ ดเอนเอมาตรฐาน 100 bp Plus DNA Ladder (Vivantis, Vivantis


Ref. code: 25605809032146MLB

80



Ref. code: 25605809032146MLB

81



Ref. code: 25605809032146MLB

82



Ref. code: 25605809032146MLB

83

ภาพท 4.34 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายแฮตอารเอพดโดยใชไพรเมอร D31 [M คอ ดเอนเอมาตรฐาน 100 bp Plus DNA Ladder (Vivantis, Vivantis


Ref. code: 25605809032146MLB

84

ภาพท 4.35 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายแฮตอารเอพดโดยใชไพรเมอร E22 [M คอ ดเอนเอมาตรฐาน 100 bp Plus DNA Ladder (Vivantis, Vivantis


Ref. code: 25605809032146MLB

85



Ref. code: 25605809032146MLB

86



Ref. code: 25605809032146MLB

87



Ref. code: 25605809032146MLB

88



Ref. code: 25605809032146MLB

89



Ref. code: 25605809032146MLB

90

ภาพท 4.41 ลายพมพดเอนเอจากเครองหมายแฮตอารเอพดโดยใชไพรเมอร F31 [M คอ ดเอนเอมาตรฐาน 100 bp Plus DNA Ladder (Vivantis, Vivantis


Ref. code: 25605809032146MLB

91

91

ผลการสรางลายพมพดเอนเอดวยไพรเมอรของเครองหมายแฮตอารเอพดจ านวน 20 ชนด พบวาไพรเมอร C21 ใหจ านวนแถบดเอนเอมากทสด คอ 20 แถบ และไพรเมอร A30 ใหจ านวนแถบดเอนเอนอยทสด คอ 1 แถบ นอกจากนพบแถบดเอนเอทจ าเพาะกบทเรยนแตละพนธ ดงน

ไพรเมอร A22 พบแถบดเอนเอขนาด 1800 คเบส จ าเพาะกบพนธหลนลบแล ไพรเมอร A31 พบแถบดเอนเอขนาด 2500 คเบส จ าเพาะกบพนธหลนลบแล และ

แถบดเอนเอขนาด 670 คเบส จ าเพาะกบพนธหลงลบแล ไพรเมอร A32 พบแถบดเอนเอขนาด 1900 คเบส จ าเพาะกบพนธนกหยบ ไพร เมอร B22 พบแถบด เ อนเอขนาด 640 ค เบส จ า เพาะกบพนธทบทม

แถบดเอนเอขนาด 600 คเบส จ าเพาะกบพนธกบวดกลวย และแถบดเอนเอขนาด 450 คเบส จ าเพาะกบพนธกบเจาคณ

ไพรเมอร B23 พบแถบดเอนเอขนาด 950 คเบส จ าเพาะกบพนธหลงลบแล ไพรเมอร C21 พบแถบดเอนเอขนาด 1700 คเบส จ าเพาะกบพนธพวงมณ และ

แถบดเอนเอขนาด 1500 คเบส จ าเพาะกบพนธนกหยบ ไพรเมอร C28 พบแถบดเอนเอขนาด 1600 คเบส จ าเพาะกบพนธหลงลบแล

แถบดเอนเอขนาด 800 คเบส จ าเพาะกบพนธทองยอยฉตร และแถบดเอนเอขนาด 750 คเบส จ าเพาะกบพนธชะน

ไพรเมอร D31 พบแถบดเอนเอขนาด 2000 คเบส จ าเพาะกบพนธทองแดง และแถบดเอนเอขนาด 1500 คเบส จ าเพาะกบพนธนกหยบ

ไพรเมอร E22 พบแถบดเอนเอขนาด 600 คเบส จ าเพาะกบพนธชะนน าตาลทราย ไพรเมอร E24 พบแถบดเอนเอขนาด 1750 คเบส จ าเพาะกบพนธหลนลบแล

แถบดเอนเอขนาด 1180 คเบส จ าเพาะกบพนธชะน แถบดเอนเอขนาด 950 คเบส จ าเพาะกบ พนธชมพพาน และแถบดเอนเอขนาด 300 คเบส จ าเพาะกบพนธทองยอยฉตร

ไพรเมอร E31 พบแถบดเอนเอขนาด 550 คเบส จ าเพาะกบพนธหาลกไมถงผว ไพรเมอร E32 พบแถบดเอนเอขนาด 300 คเบส จ าเพาะกบพนธทองยอยฉตร ไพรเมอร F31 พบแถบดเอนเอขนาด 1350 คเบส จ าเพาะกบพนธหลนลบแล

แถบดเอนเอขนาด 1320 คเบส จ าเพาะกบพนธชะน แถบดเอนเอขนาด 930 คเบส จ าเพาะกบ พนธพวงมณ และแถบดเอนเอขนาด 900 คเบส จ าเพาะกบพนธหลงลบแล

Ref. code: 25605809032146MLB

92

92

4.2.2 การวเคราะหความสมพนธ วเคราะหความสมพนธของทเรยนดวยการใชไพรเมอรเครองหมายแฮตอารเอพด

สามารถค านวณคาดชนความเหมอนอยระหวาง 0.59-0.89 (ภาพท 4.42) และสรางแผนภมความสมพนธทางพนธกรรม (ภาพท 4.43) เมอพจารณาคาดชนความเหมอนทต าแหนง 0.69 สามารถแบงทเรยนออกเปน 2 กลม คอ กลมท 1 เปนกลมใหญมสมาชก ไดแก กบวดกลวย กบเจาคณ กบพกล กบรศม กบสวรรณ หลนลบแล อลบนายทพย ฉตรสทอง ธรณไหว ทบทม เมดในกานยาว กานสน ลวงทอง ก าปนเหลอง ก าปนเดม ทองแดง นกหยบ กะเทยเนอขาว ก าปนพวง ชะน ชะนน าตาลทราย ชมพศร ชมพบาน หาลกไมถงผว พวงมณ และทองยอยฉตร กลมท 2 มสมาชก 4 พนธ คอ หลงลบแล ทองสก ตนใหญ และกานยาว ส าหรบพนธทเรยนทมความสมพนธใกลชดมากทสด คอ กบเจาคณกบกบวดกลวย มคาดชนความเหมอน 0.89 สวนพนธทเรยนทมความสมพนธใกลชดนอยทสด คอ กานยาวกบกบพกล มคาดชนความเหมอน 0.59

Ref. code: 25605809032146MLB

93

ภาพท 4.42 คาดชนความเหมอนของทเรยนดวยเครองหมายแฮตอารเอพด

Ref. code: 25605809032146MLB

94

ภาพท 4.43 แผนภมความสมพนธของทเรยนดวยเครองหมายแฮตอารเอพด

Ref. code: 25605809032146MLB

95

95

4.3 การวเคราะหเครองหมายสกอตรวมกบเครองหมายแฮตอารเอพด วเคราะหความสมพนธของทเรยนดวยสกอตรวมกบเครองหมายแฮตอารเอพด

สามารถค านวณใหคาดชนความเหมอนอยระหวาง 0.65-0.87 (ภาพท 4.2) และสรางแผนภมความสมพนธทางพนธกรรม (ภาพท 4.2) เมอพจารณาคาดชนความเหมอนทต าแหนง 0.729 สามารถแยกทเรยนออกเปน 2 กลม คอ กลมท 1 เปนกลมใหญมสมาชก ไดแก กบวดกลวย กบเจาคณ ทองแดง ก าปนเหลอง ก าปนเดม ลวงทอง นกหยบ หลนลบแล อลบนายทพย กะเทยเนอขาว ก าปนพวง ธรณไหว กบพกล กบรศม เมดในกานยาว กบสวรรณ กานสน ทบทม ฉตรสทอง ชะน ชะนน าตายทราย ชมพพาน ชมพศร พวงมณ ทองยอยฉตร ตนใหญ และกานยาว กลม 2 มสมาชก 3 พนธ คอ หาลกไมถงผว หลงลบแล และทองสก ส าหรบพนธทเรยนทมความสมพนธใกลชดมากทสดพบ 2 ค คอ กบเจาคณกบกบวดกลวย และกบพกลกบกบรศม โดยมคาดชนความเหมอน 0.87 สวนพนธทเรยนทมความสมพนธใกลชดนอยทสด คอ ฉตรสทองกบกานยาว มคาดชนความเหมอน 0.65

Ref. code: 25605809032146MLB

96

ภาพท 4.44 คาดชนความเหมอนของทเรยนดวยเครองหมายสกอตรวมกบแฮตอารเอพด

Ref. code: 25605809032146MLB

97

ภาพท 4.45 แผนภมความสมพนธของทเรยนดวยเครองหมายสกอตรวมกบแฮตอารเอพด

Ref. code: 25605809032146MLB

98

98

4.4 ล าดบนวคลโอไทดต าแหนงจ าเพาะ

4.4.1 การเพมปรมาณชนดเอนเอบรเวณยนทเปนต าแหนงจ าเพาะ จากการเพมปรมาณดเอนเอของทเรยนดวยปฏกรยาลกโซพอรเมอเรส บรเวณยน

ทเปนต าแหนงจ าเพาะ 2 ยน คอ บรเวณยน rbcL และยน rpoC1 โดยใชไพรเมอรทเปนล าดบสากล พบวาสามารถเพมปรมาณชนดเอนเอทเรยนจ านวน 40 พนธ และผลล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL มขนาด 661 คเบส เทากนทก 40 พนธ (ภาพท 4.46) และยน rpoC1 มขนาด 556 คเบส เทากนทก 40 พนธ (ภาพท 4.47) เชนเดยวกน

ภาพท 4.46 การเพมปรมาณดเอนเอดวยยน rbcL [M คอ ดเอนเอมาตรฐาน 100 bp Plus DNA

Ladder (Vivantis, Vivantis technologies Sdn. Bhd., Malaysia), 1-40 ค อ (1) กบวดกลวย (2) กบเจ าคณ (3) หาลกไมถ งผว (4) ลวงทอง (5) นกหยบ (6) ก าปนเหลอง (7) ก าปนเดม (8) ทองแดง (9) กานยาววดสก (10) กบชายน า (11) ทองยอยฉตร (12) พวงมณ (13) หลงลบแล (14) ทองสก (15) ย ามะหวาด (16) สาลกา (17) ตน ใหญ (18) ก านยาว (19) ชะน (20) ชะนน าตาลทราย (21) หลนลบแล (22) ฉตรสทอง (23) ชมพพาน (24) หมอนทอง(25) กะเทยเนอขาว (26) ชมพศร (27) ก าปนพวง (28) กบหนาศาล (29) ธรณไหว (30) กานยาวสนาค (31) อลบนายทพย (32) กบพกล (33) ทบทม (34) กบรศม (35) เมดในกานยาว (36) จอกลอย (37) เมลดอารย (38) กานสน (39) กบสวรรณ และ (40) กะเทยขวสน]

Ref. code: 25605809032146MLB

99

99

ภาพท 4.47 การเพมปรมาณดเอนเอดวยยน rpoC1 [M คอ ดเอนเอมาตรฐาน 100 bp Plus DNA

Ladder (Vivantis, Vivantis technologies Sdn. Bhd., Malaysia), 1-40 ค อ (1) กบวดกลวย (2) กบเจ าคณ (3) หาลกไมถ งผว (4) ลวงทอง (5) นกหยบ (6) ก าปนเหลอง (7) ก าปนเดม (8) ทองแดง (9) กานยาววดสก (10) กบชายน า (11) ทองยอยฉตร (12) พวงมณ (13) หลงลบแล (14) ทองสก (15) ย ามะหวาด (16) สาลกา (17) ตน ใหญ (18) ก านยาว (19) ชะน (20) ชะนน าตาลทราย (21) หลนลบแล (22) ฉตรสทอง (23) ชมพพาน (24) หมอนทอง(25) กะเทยเนอขาว (26) ชมพศร (27) ก าปนพวง (28) กบหนาศาล (29) ธรณไหว (30) กานยาวสนาค (31) อลบนายทพย (32) กบพกล (33) ทบทม (34) กบรศม (35) เมดในกานยาว (36) จอกลอย (37) เมลดอารย (38) กานสน (39) กบสวรรณ และ (40) กะเทยขวสน]

4.4.2 การตรวจสอบล าดบนวคลโอไทดต าแหนงจ าเพาะ

จากการหาล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL และยน rpoC1 ในทเรยนกบบรษทในเกาหล เมอน าไปขอมลเทยบกบล าดบนวคลโอไทดทอยในฐานขอมล GenBank ของ NCBI พบวาล าดบนวคลโอไทดของ 2 ยน ตรงกบบรเวณทเปนยนเดยวกนกบพชชนดอน โดยเปอรเซนตความเหมอนของยน rbcL คดเปน 98.94 ในขณะทเปอรเซนตความเหมอนของยน rpoC1 คดเปน 100 เปอรเซนตจากนนไดฝากเกบขอมลล าดบนวคลโอไทดลงในฐานขอมล GenBank ของ NCBI และไดรบหมายเลขจ าเพาะของล าดบนวคลโอไทด (accession number) ดงตารางท 4.1 และตารางท 4.2

Ref. code: 25605809032146MLB

100

100

ตารางท 4.1 หมายเลขจ าเพาะของล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL

พนธทเรยน

หมายเลขล าดบ นวคลโอไทด



rbcL rbcL 1 พนธกบวดกลวย MF139672 21 พนธหลนลบแล MF139692 2 พนธกบเจาคณ MF139673 22 พนธฉตรสทอง MF139693

3 พนธหาลกไมถงผว MF139674 23 พนธชมพพาน MF139694 4 พนธลวงทอง MF139675 24 พนธหมอนทอง MF139695

5 พนธนกหยบ MF139676 25 พนธกะเทยเนอขาว MF139696

6 พนธก าปนเหลอง MF139677 26 พนธชมพศร MF139697 7 พนธก าปนเดม MF139678 27 พนธก าปนพวง MF139698

8 พนธทองแดง MF139679 28 พนธกบหนาศาล MF139699

9 พนธกานยาววดสก MF139680 29 พนธธรณไหว MF139700 10 พนธกบชายน า MF139681 30 พนธกานยาวสนาค MF139701

11 พนธทองยอยฉตร MF139682 31 พนธอลบนายทพย MF139670 12 พนธพวงมณ MF139683 32 พนธกบพกล MF139702

13 พนธหลงลบแล MF139684 33 พนธทบทม MF139703

14 พนธทองสก MF139685 34 พนธกบรศม MF139704 15 พนธย ามะหวาด MF139686 35 พนธเมดในกานยาว MF139705

16 พนธสาลกา MF139687 36 พนธจอกลอย MF139706

17 พนธตนใหญ MF139688 37 พนธเมลดอารย MF139707 18 พนธกานยาว MF139689 38 พนธกานสน MF139671

19 พนธชะน MF139690 39 พนธกบสวรรณ MF139708

20 พนธชะนน าตาลทราย MF139691 40 พนธกะเทยขวสน MF139709

Ref. code: 25605809032146MLB

101

101

ตารางท 4.2 หมายเลขจ าเพาะของล าดบนวคลโอไทดของยน rpoC1





rpoC1 rpoC1 1 พนธกบวดกลวย MF139630 21 พนธหลนลบแล MF139650 2 พนธกบเจาคณ MF139631 22 พนธฉตรสทอง MF139651 3 พนธหาลกไมถงผว MF139632 23 พนธชมพพาน MF139652 4 พนธลวงทอง MF139633 24 พนธหมอนทอง MF139653 5 พนธนกหยบ MF139634 25 พนธกะเทยเนอขาว MF139654 6 พนธก าปนเหลอง MF139635 26 พนธชมพศร MF139655 7 พนธก าปนเดม MF139636 27 พนธก าปนพวง MF139656 8 พนธทองแดง MF139637 28 พนธกบหนาศาล MF139657 9 พนธกานยาววดสก MF139638 29 พนธธรณไหว MF139658 10 พนธกบชายน า MF139639 30 พนธกานยาวสนาค MF139650 11 พนธทองยอยฉตร MF139640 31 พนธอลบนายทพย MF139660 12 พนธพวงมณ MF139641 32 พนธกบพกล MF139661 13 พนธหลงลบแล MF139642 33 พนธทบทม MF139662 14 พนธทองสก MF139643 34 พนธกบรศม MF139663 15 พนธย ามะหวาด MF139644 35 พนธเมดในกานยาว MF139664 16 พนธสาลกา MF139645 36 พนธจอกลอย MF139665 17 พนธตนใหญ MF139646 37 พนธเมลดอารย MF139666 18 พนธกานยาว MF139647 38 พนธกานสน MF139667 19 พนธชะน MF139648 39 พนธกบสวรรณ MF139668 20 พนธชะนน าตาลทราย MF139649 40 พนธกะเทยขวสน MF139669

Ref. code: 25605809032146MLB

102

102

4.4.3 การวเคราะหล าดบนวคลโอไทดต าแหนงจ าเพาะ 4.4.3.1 ล าดบนวคลโอไทดต าแหนงจ าเพาะของยน rbcL

เปรยบเทยบล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL ในทเรยนจ านวน 40 พนธ เพอสรางแผนภมความสมพนธทางพนธกรรมดวยวธ alignment โดยเลอกใช ClustalW จากโปรแกรม MEGA7 แสดงดงภาพท 4.48 แลววเคราะหต าแหนงของล าดบนวคลโอไทดทเกดการเปลยนแปลง (ตารางท 4.3) พบวาการเปลยนแปลงของล าดบนวคลโอไทดท าใหเกดการเปลยนแปลงของกรดอะมโนซงอาจสงผลใหบรเวณยน rbcL เกดการท างานทเปลยนแปลงไป (ตารางท 4.4) และผลการสรางแผนภมความสมพนธทางพนธกรรมเลอกการจดกลมแบบ Maximum likelihood เปนดงภาพท 4.49 ....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|

10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

1 TCACCACAAACAGAAACTAAAGCAAGTGTTGGATTCAAAGCTGGTGTTAAAGAGTATAAATTGACTTATTATACTCCTGAATATGAAGTCAAAGATACTG


3 TCACCACAAACAGAAACTAAAGCAAGGGGTGGGTTCAAAGCTGGTGTTAAAGAGTATAAATTGACTTATTATACTCCTGAATATGAAGTCAAAGATACTG
































35 TCACCACAAACAGAAACTAAAGCAAGGGTGGGATTCAAAGGGGGGGTTAAAGAGTATAAATTGACTTATTATACTCCTGAATATGAAGTCAAAGATACTG

36 TCACCACAAACAGAAACTAAAGCAAGGGGTGGATTCAAAGCTGGTGTTAAAGAGTATAAATTGACTTATTATACTCCTGAATATGAAGTCAAAGATACTG

37 TCACCACAAACAGAAACTAAAGCAAGGGGTGGATTCAAAGCTGGTGTTAAAGAGTATAAATTGACTTATTATACTCCTGAATATGAAGTCAAAGATACTG

38 TCACCACAAACAGAAACTAAAGCAAGGGTGGGATTCAAAGCTGGTGTTAAAGAGTATAAATTGACTTATTATACTCCTGAATATGAAGTCAAAGATACTG


40 TCACCACAAACAGAAACTAAAGCAAGGGTTGGATTCAAAGCTGGTGTTAAAGAGTATAAATTGACTTATTATACTCCTGAATATGAAGTCAAAGATACTG

************************** * ** ******* ** *******************************************************

Ref. code: 25605809032146MLB

103

103

....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|

110 120 130 140 150 160 170 180 190 200

1 ATATCTTGGCAGCCTTCCGAGTAACTCCTCAACCCGGAGTTCCGCCCGAGGAAGCAGGGGCAGCAGTAGCTGCTGAATCTTCTACTGGTACATGGACAAC








































****************************************************************************************************

....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|

210 220 230 240 250 260 270 280 290 300

1 CGTGTGGACCGATGGGCTTACCAGCCTTGATCGTTACAAAGGGCGATGCTACCACATTGAGCCCGTTGCTGGAGAAGAAAATCAATATATATGTTATGTA








































****************************************************************************************************

Ref. code: 25605809032146MLB

104

104

....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|

310 320 330 340 350 360 370 380 390 400

1 GCTTACCCCTTAGACCTTTTTGAAGAAGGTTCTGTTACTAACATGTTTACTTCCATTGTGGGTAATGTATTTGGGTTCAAAGCCCTGCGCGCTCTACGTC








































***************************************************************************************************

....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|

410 420 430 440 450 460 470 480 490 500

1 TAGAGGATCTGCGAATCCCTCCTTCTTATACTAAAACTTTCCAAGGCCCGCCTCATGGCATCCAGGTTGAAAGAGATAAATTGAACAAGTACGGTCGCCC








































****************************************************************************************************

Ref. code: 25605809032146MLB

105

105

....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|

510 520 540 540 550 560 570 580 590 600

1 CCTATTAGGATGTACTATTAAACCTAAATTGGGGTTATCCGCTAAGAACTACGGTAGAGCAGTTTATGAATGTCTACGTGGTGGACTTGATTTTACCAAA








































****************************************************************************************************

....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|.

610 620 630 640 650 661

1 GATGATGAGAATGTGAACTCCCAACCATTTATGCGTTGGAGATCGTTTCTTATTTTGTGCC








































*************************************************************

Ref. code: 25605809032146MLB

106

106

ภาพท 4.48 การเปรยบเทยบล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL [1-40 คอ ตวอยางพนธทเรยนตามตารางภาคท 2 ของภาคผนวก, สญลกษณล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL ทเกดการเปลยนแปลง 1 คอ ทรานสเวอรชน 1 คอ พวรนทรานสชน]

ตารางท 4.3 ต าแหนงล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL ทเกดการเปลยนแปลง

ต าแหนงนวคลโอไทดทเกดการเปลยนแปลง

รปแบบการกลาย รปแบบทเปลยน พนธทเรยน*

27 ทรานสเวอรชน T ไปเปน G 3,35,36,37,38,40 29 ทรานสเวอรชน T ไปเปน G 3,36,37

30 ทรานสเวอรชน T ไปเปน G 35,38 33 พวรนทรานซชน A ไปเปน G 3 41 ทรานสเวอรชน C ไปเปน G 35 42 ทรานสเวอรชน T ไปเปน G 35 45 ทรานสเวอรชน T ไปเปน G 35

ตารางท 4.4 การเปลยนแปลงล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL ทมผลตอการสรางกรดอะมโน ต าแหนง พนธทเรยน* การเปลยนแปลงนวคลโอไทด การเปลยนแปลงกรดอะมโน

27 3,35,36,37,38,40 T เปน G Ser เปน Arg 29 3,36,37 T เปน G Val เปน Gly

41,42 35 C เปน G และ T เปน G Ala เปน Gly

* หมายเลขพนธท เรยนทล าดบนวคล โอไทด เกดการเปลยนแปลง คอ (3) หาลกไมถ งผว , (35) เมดในกานยาว, (36) จอกลอย, (37) เมลดอารย, (38) กานสน, (40) กะเทยขวสน

Ref. code: 25605809032146MLB

107

107

ภาพท 4.49 แผนภมความสมพนธทางพนธกรรมของทเรยน จดกลมแบบ Maximum likelihood

(ML) ดวยโปรแกรม MEGA7

Ref. code: 25605809032146MLB

108

108

จากผลการวเคราะหล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL ในทเรยน 40 พนธ พบวาเมอเปรยบเทยบล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL ดวยโปรแกรม MEGA7 พบต าแหนงเกดการเปลยนแปลงทท าใหเกดความหลากรป 7 ต าแหนง จากล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL ทงหมด 661 ต าแหนง คดเปน 1.06 เปอรเซนต โดยเกดการเปลยนแปลง 2 แบบ คอ ทรานสเวอรชน และ พวรนทรานซชน สวนการวเคราะหแผนภมความสมพนธทางพนธกรรมดวยการจดกลมแบบ Maximum likelihood แผนภมทไดไมสามารถแยกพนธทเรยนออกจากกนไดทงหมด โดยสามารถแยกได 4 พนธ คอ กานสน หาลกไมถงผว กะเทยขวสน และเมดในกานยาว พนธทแยกไดจดอยในกลมเบดเตลดตามการจดกลมพนธทเรยนของประเทศไทยโดยส านกคมครองพนธพชแหงชาตทไดจดกลมตามลกษณะสณฐานวทยา

4.4.3.2 การวเคราะหล าดบนวคลโอไทดต าแหนงจ าเพาะของยน rpoC1 เปรยบเทยบล าดบนวคลโอไทดของยน rpoC1 ในทเรยนจ านวน 40 พนธ

เพอสรางแผนภมความสมพนธทางพนธกรรมดวยวธ alignment โดยเลอกใช ClustalW จากโปรแกรม MEGA7 แสดงดงภาพท 4.50 แลววเคราะหต าแหนงของล าดบนวคลโอไทดทเกดการเปลยนแปลง พบวาไมมการเปลยนแปลงของล าดบนวคลโอไทด ทกพนธมล าดบนวคลโอไทดของยน rpoC1 เหมอนกนโดยสมบรณ ....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|

10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

1 GTGGATACACTTCTTGATAATGGAACCCGCGGACAACCAATGAGGGACGGTCATAATCATAATAAGGTTTACAAGTCGTTTTCAGATGTAATTGAAGGCA








































****************************************************************************************************

Ref. code: 25605809032146MLB

109

109

....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|

110 120 130 140 150 160 170 180 190 200

1 AAGAGGGAAGATTTCGTGAGACTTTGCTTGGCAAACGAGTCGATTATTCGGGACGTTCTGTCATTCTTGTTGGCCCCTCACTTTCATTACATCGCTGTGG








































****************************************************************************************************

....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|

210 220 230 240 250 260 270 280 290 300

1 ATTGCCTCGCGAAATAGCAATAGAGCTTTTCCAGACATTTGTAATTCGCGGTCTAATTAGACAACATCTTGCGCCGAACATAGGAGTTGCTAAGAGTAAA








































****************************************************************************************************

Ref. code: 25605809032146MLB

110

110

...|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|

310 320 330 340 350 360 370 380 390 400

1 ATTCGGGAACGGGAAAAAGGGCCGATTGTATGGGAAATACTGCAAGAAGTTATGCAGGGACATCCTGTATTGCTGAATAGAGCGCCTACTCTGCATAGAT








































****************************************************************************************************

....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|

410 420 430 440 450 460 470 480 490 500

1 TAGGTATACAGGCATTCCAACCTATTTTAGTGGAAGGACGCGCTATTTGTTTACATCCATTAGTTTGTAAGGGATTCAATGCAGACTTTGATGGGGATCA








































****************************************************************************************************

Ref. code: 25605809032146MLB

111

111

....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|.

510 520 540 540 550 560 566

1 AATGGCTGTTCATGTACCTTTATCTTTAGAGGCGCAAGCGGAGGCCCGTTTACTTATGTTTTCTCA








































******************************************************************

ภาพท 4.50 การเปรยบเทยบล าดบนวคลโอไทดของยน rpoC1 [1-40 คอ ตวอยางพนธทเรยนตาม ตารางภาคท 2 ของภาคผนวก]

จากผลการวเคราะหล าดบนวคลโอไทดของยน rpoC1 ในทเรยน 40 พนธ พบวาเมอ

เปรยบเทยบล าดบนวคลโอไทดของยน rpoC1 ดวยโปรแกรม MEGA7 ไมพบต าแหนงทเกดการเปลยนแปลง ซงไมสามารถแยกพนธทเรยนออกจากกนไดสมบรณ ท าใหผลของล าดบนวคลโอไทดของยน rpoC1 ในทเรยนทกพนธเหมอนกน 100 เปอรเซนต

Ref. code: 25605809032146MLB

112

112

4.5 การอภปรายผล การประเมนความสมพนธของทเรยน 30 พนธดวยเครองหมายดเอนเอ 2 ชนด คอ

เครองหมายสกอตและเครองหมายแฮตอารเอพด พบวาแตละพนธปรากฏความหลากรปของแถบ ดเอนเอทแตกตางกนออกไป จากแผนภมความสมพนธทสรางจากโปรแกรม NTSYS-pc รน 2.01e ดวยการจดกลมแบบ UPGMA พบวาถาวเคราะหเปอรเซนตความหลากรปทไดจะพบวาเครองหมายแฮตอารเอพดมความหลากรปมากกวาเครองหมายสกอตคดเปน 85.42 เปอรเซนต ในขณะทเปอรเซนตของเครองหมายสกอตคดเปน 79.06 เปอรเซนต แตไมไดหมายความวาการใชเครองหมายแฮตอารเอพดกบสงมชวตอนจะดกวาเครองหมายสกอตเสมอไป

ส าหรบการจดกลมทเรยนตามลกษณะสณฐานในประเทศไทยของส านกคมครองพนธพชแหงชาต ไดแบงทเรยนออกเปน 6 กลม โดยดจากลกษณะใบ รปรางดอก รปทรงผล และลกษณะหนาม ผลการจดกลมในลกษณะนเปนเพยงแคการสงเกตลกษณะทเหนจากภายนอกของผเชยวชาญ แตถาศกษาในระดบชวโมเลกลอาจจะไมสอดคลองกบผลการแบงกลมดวยลกษณะสณฐาน

ผลการจดกลมแผนภมความสมพนธดวยเครองหมายสกอต เมอพจารณาทต าแหนง 0.745 สามารถแบงออกไดเปน 2 กลม คอ กลมท 1 เปนกลมใหญ ภายในกลมใหญจะแบงเปนกลมยอย และบางพนธไมมการจดกลมเลย เชน พนธหลนลบแล เปนพนธทมความส าคญในจงหวดอตรดตถ และมลกษณะพเศษ คอ เปลอกผลบาง เนอละเอยดมาก แหง มสเหลองออน รสชาตหวานมน กลนออน เมลดเลกและลบ (มนส, 2545; พชย, 2556; พชย, 2558) ในกลมยอยของกลม 1 ทมความใกลชดกนและมการจดกลมตามลกษณะสณฐาน เชน ชมพพาน ชะน และชะนน าตาลทราย ซงเปนพนธทเรยนในกลมลวง โดยมลกษณะรปทรงใบเปนแบบปอมปลายใบ และรปไขขอบขนาน ปลายใบเรยวแหลม ฐานใบเรยว ทรงผลกลมร และทรงกระบอก หนามนนปลายแหลม แตวาไมเสมอไปเพราะจากแผนภมความสมพนธ พนธทเรยนทมลกษณะสณฐานแตกตางกนแตมความสมพนธใกลชดกน ตวอยางเชน กานยาวกบชมพศร มคาดชนความเหมอน 0.80 ซงกานยาวอยในกลมกานยาว และชมพศรอยในกลมลวง แสดงวาผลของแผนภมความสมพนธไมไดจดกลมตามลกษณะสณฐานทงหมด

กลมท 2 มสมาชก 3 พนธ คอ ทองสก หลงลบแล และหาลกไมถงผว แสดงวามลกษณะทแตกตางจากกลมแรก ถาพจารณาในแตละพนธ จะพบวา พนธหลงลบแลเปนพนธทเรยนทมรสชาตโดดเดนและมเอกลกษณเฉพาะตว เปนพนธเฉพาะถนทสรางชอเสยงใหกบจงหวดอตรดตถ และพนธหาลกไมถงผว จดเปนทเรยนพนธเลก และมรสชาตอรอย พนธทองสกเปนทเรยนพนธด

Ref. code: 25605809032146MLB

113

113

เหมาะส าหรบใชเพาะปลก แตเนองจากเกษตรกรหากงพนธตอนไมไดจงใชการปลกจากเมลดแทน ท าใหเกดความผนแปรในทเรยน (หรญ และคณะ, 2531) ซงในความเปนจรงพนธทเรยนแตกตางกนทเกดขน ไมไดเกดจากการกลายพนธแตเกดจากการผสมขาม เมลดจงมการกระจายตวแตกตางจากพนธพอพนธแม และยงแสดงวาพนธทเรยนทปลกกนทวไปสวนใหญไมใชพนธแท จงไมนยมปลกจากเมลดเพราะจะท าใหไดลกษณะทไมเหมอนตนเดม

ผลการจดกลมแผนภมความสมพนธดวยเครองหมายแฮตอารเอพด เมอพจารณาทต าแหนง 0.69 สามารถแบงกลมได 2 กลม กลมท 1 เปนกลมใหญ ซงจะแบงเปนกลมยอย และบางพนธไมมการจดกลมในสวนของกลมยอย เชน กลมยอยของกลมกบ ไดแก กบวดกลวย กบเจาคณ กบพกล กบรศม และกบสวรรณ โดยมลกษณะรปทรงใบเปนแบบปอมปลายใบและขอบขนาน ปลายใบเรยวแหลม ฐานใบเรยวและกลมมน ทรงผลกลมแปน หรอรปรและทรงกระบอก หนามโคงงอและแหลม กลมยอยของกลมลวง ไดแก ชมพศร ชะน ชะนน าตาลทราย และชมพพาน โดยมลกษณะรปทรงใบเปนแบบปอมปลายใบ และรปไขขอบขนาน ปลายใบเรยวแหลม ฐานใบเรยว ทรงผลกลมรและทรงกระบอก หนามนนปลายแหลม สวนภายในกลมใหญทบางพนธไมมการจดกลมเลย เชน พนธหาลกไมถงผว จดอยในกลมเบดเตลด จากแผนภมความสมพนธจะเหนวา พนธทเรยนทอยกลมลกษณะสณฐานเดยวกนสวนใหญจะมความสมพนธใกลชดกน แตมบางพนธทมการแตกกลมแยกออกไปเปนกลมยอยทไมเปนไปตามลกษณะสณฐาน เชน ลวงทอง ในกลมลวง อยในกลมยอยเดยวกบกลมก าปน

กลมท 2 เปนกลมเลก ประกอบไปดวยพนธทองสก ตนใหญ และกานยาว ทง 3 พนธ จดอยในกลมกานยาวทงหมด โดยมลกษณะรปทรงใบเปนแบบปอมปลายใบ รปไขขอบขนาน และยาวเรยว ปลายใบเรยวแหลม ฐานใบเรยวแหลม ทรงผลกลมรและขอบขนาน หนามนน แหลม และเวา สวนพนธหลงลบแลจดอยในกลมเบดเตลด โดยลกษณะสณฐานของกลมเบดเตลดถอวาเปนกลมทปรากฏลกษณะของทรงใบ บรเวณปลายใบ ฐานใบ ทรงผล และหนามผลไมชดเจน บางลกษณะอาจเหมอนกลมใดกลมหนงจากใน 5 กลม และขณะเดยวกนกมลกษณะทผนแปรออกไป (หรญ และคณะ, 2530) จากการจดกลมของกลมเลกแสดงใหเหนวา ทเรยนพนธหลงลบแลมความสมพนธใกลชดกบทเรยนกลมกานยาว

จากภาพแผนภมความสมพนธของทเรยนดวยเครองหมายสกอตและเครองหมายแฮตอารเอพดในกลมเลก จะเหนวาพนธทองสก และพนธหลงลบแล อยในกลมเลกเดยวกน มรายงานวาพนธทเรยนพนธด 3 พนธ คอ อบาตร ทองสก และการะเกด ท าใหมผคนหากงตอน 3 พนธ แตส าหรบผทหากงตอน 3 พนธ ไมได จงใชการปลกจากเมลดแทน ท าใหทเรยนเกดการผนแปรไดลกผสมขนใหมมากมาย (หรญ และคณะ, 2531)

Ref. code: 25605809032146MLB

114

114

ผลการจดกล มท เรยน 30 พนธ ด วยเคร องหมายสกอตและเคร องหมาย แฮตอารเอพด เปนไปในแนวทางเดยวกนกบงานวจยจ าแนกทเรยนจากการรวบรวมพนธของสวนวจยพชสวนจนทบร จงหวดจนทบร จ านวน 130 ตวอยาง ดวยเทคนคเอเอฟเอลพ (AFLP, amplified fragment length polymorphism DNA) สามารถจดกลมของทเรยนได 2 กลม โดยกลมท 1 และกลมท 2 เปนกลมใหญทสามารถแบงเปนกลมยอยไดหลายกลมยอย และบางพนธไมมการจบกลมเลย แสดงวามความหลากหลายทางพนธกรรมคอนขางสงแตกยงมความใกลชดกนทางพนธกรรม และไดใหเหตผลวาชาวสวนมกจะน าเมลดทเรยนมาปลกใหมเนองจากกงพนธดหายาก ท าใหการปลกทเรยนจากเมลดเกดลกษณะใหมของทเรยนและมการตงชอเปนพนธใหมขนมา (ฐตาภรณ และคณะ, 2549) ท าใหในประเทศไทยพบพนธทเรยนมากกวา 200 พนธ

นอกจากนนยงมงานวจยกอนหนาเรองการศกษาความสมพนธทเรยนในจงหวดนนทบร 14 พนธ ดวยเครองหมายอารเอพด สามารถแบงกลมไดเปน 2 กลม ไดแก กลมแรกคอกลมกบทงหมด และกลมสอง ประกอบดวย กลมยอย 2 กลม คอ กลมยอยแรก มกลมลวงและกลมทองยอย สวนกลมยอยทสอง มกลมกานยาว กลมทองยอย และกลมก าปน ซงพนธทเรยนในกลมลวงกบกลมก าปนเปนกลมยอยทจดอยในกลมเดยวกน (Vanijajiva, 2011) ซงสอดคลองกบการวเคราะหดวยเครองหมายแฮตอารเอพด คอกลมลวงกลมก าปน และกลมทองยอย จดอยในกลมใหญเดยวกน แตท ไมสอดคลองกนคอทเรยนในจงหวดนนทบรของกลมกบอยกนคนละกลมกบกลมลวง กลมทองยอย และกลมก าปน ซงแตกตางจากการวเคราะหดวยเครองหมายแฮตอารเอพด คอกลมกบอยรวมกบกลมอนและกลมกานยาวทงหมดเปนกลมเลกทแยกออกจากกลมใหญแทน

นอกจากงานวจยทเรยนทศกษาดวยเทคนคเอเอฟแอลพ และเครองหมายอารเอพด ยงมการวเคราะหดวยเครองหมายอน ตวอยางเชนวเคราะหพนธกรรมของทเรยนพนบานในภาคใตโดยใชเครองหมายไมโครแซทเทลไลท (microsatellite) จ านวน 67 ตน โดยใชโปรแกรม NTSYS-pc รน 2.01e และจดกลมดวยวธ UPGMA สามารถแบงกลมทเรยนพนบานภาคใตเปน 6 กลม มคาดชนความเหมอน 0.52-0.95 ผลของแผนภมความสมพนธแตละกลมมความสมพนธกบแหลงทมาของตวอยาง คอพนทเดยวกนจะอยกลมเดยวกน แตมบางตวอยางถกจดอยในกลมพนทอน (ฮดา และคณะ, 2557) การศกษาความหลากหลายของพนธทเรยนพนเมองในจงหวดนนทบรดวยเครองหมายโมเลกลเอสเอสอาร (SSR, Simple Sequence Repeats) จ านวน 47 ตวอยาง ใชไพรเมอรจ านวน 20 ชนด พบวาสามารถเพมปรมาณดเอนเอได 16 ไพรเมอร มขนาดดเอนเอระหวาง 142-274 คเบส ผลการจดกลมดวยวธ UPGMA สามารถจ าแนกพนธทเรยนไดเปนกลมใหญ ๆ แตไมสอดคลองกบการจ าแนกดวยลกษณะสณฐานทเคยรายงานมากอน (เอมอร และคณะ, 2556)

Ref. code: 25605809032146MLB

115

115

เครองหมายสกอตและเครองหมายแฮตอารเอพด เปนเครองหมายดเอนเอทใช ไพรเมอรแบบสม และแถบดเอนเอทปรากฏจะมความหลากรปมากและท าซ าไดผลเหมอนเดม (Sripalwit et al., 2007) อกทงขนตอกการศกษาไมซบซอน ยงยาก มความสะดวกรวดเรว และคาใชจายไมสงมาก จงมผวจยหลายคนเลอกศกษาเครองหมายชนดนกบสงมชวตหลายชนด

งานวจยทศกษาดวยเทคนคแฮตอารเอพดในสปชสเดยวกน ไดแก การศกษา ใน แพรเซยงไฮ (Portulaca grandiflora) 8 สายพนธ ซงมลกษณะสสนสวยงาม จากการคดเลอก ไพรเมอร พบวาไพรเมอร 15 ชนด สามารถเพมปรมาณดเอนเอได เมอสรางแผนภมความสมพนธ ใหคาดชนความเหมอนอยระหวาง 0.80-0.93 และแบงได 2 กลม โดยทดอกสายพนธสชมพมลกษณะทแตกตางจากสายพนธอนมากทสด (เกยรตชย และคณะ, 2556) การศกษาความสมพนธของพชวงศจ าปา 4 สกล 7 ชนด จากการคดเลอกไพรเมอร พบวาไพรเมอร 57 ชนด สามารถเพมปรมาณดเอนเอได เมอสรางแผนภมความสมพนธ ใหคาดชนความเหมอนอยระหวาง 0.38- 0.78 และแบงได 4 กลม คอ คอ กลม 1 ไดแก จ าปสรนธร จ าปปา จ าปา และจ าป กลม 2 ไดแก จ าปแขก กลม 3 ไดแก ยหบ และกลม 4 ไดแก มณฑา (วรสรา และคณะ, 2556) สวนงานวจยทศกษาในสปชสตางกน เชน การศกษาความสมพนธทางพนธกรรมของกลวยไมสกลหวาย หมไนโกรเฮอรซเธ และลกผสม ของสกล Dendrobium 15 พนธ พบวาไพรเมอร 39 ชนด สามารถเพมปรมาณด เอนเอได แลวคดเลอกไพรเมอร 17 ชนด ทใหลายพมพดเอนเอชดเจนมาสรางลายพมพดเอน เมอน ามาสรางแผนภมความสมพนธ สามารถแบงกลมเปน 7 กลม มดชนความเหมอนอยระหวาง 0.20-0.78 (จฑาทพย และคณะ, 2559)

งานวจยทศกษาดวยเทคนคสกอตในสปชสเดยวกน ไดแก การศกษาในกลวย 25 พนธ โดยคดเลอกไพรเมอร 15 ชนด ทสามารถเพมปรมาณดเอนเอได เมอสรางแผนภมความสมพนธ พบวามคาดชนความเหมอนอยระหวาง 0.427-0.854 และแบงกลมเปน 2 กลม ซงสอดคลองกบจโนมของกลวย โดยกลมท 1 เปนจโนม AAB, ABB, BBB และ ABBB ลกษณะคอ มจโนม B อยดวย สวนกลมท 2 เปนจโนม AA และ AAA ลกษณะคอ มเฉพาะจโนม A (พรประภา และคณะ, 2560) การศกษาในพนธขาวปลกจ านวน 24 พนธ โดยคดเลอกไพรเมอร 22 ชนด ทสามารถเพมปรมาณ ดเอนเอได เมอสรางแผนภมความสมพนธ พบวามคาดชนความเหมอนอยระหวาง 0.60-0.91 และแบงกลมเปน 3 กลม จะเหนวาการแบงกลมนนถาพนธขาวทเกดจากการผสมกนของพอแมเดยวกนจะจดอยในกลมเดยวกน สวนพอแมตางกนจะจดอยในคนละกลม สวนงานวจยทศกษาในสปชสตางกน เชน การศกษาในกลวยไมสกลกานกอ (สกล Eria) 15 ชนด โดยคดเลอกไพรเมอร 21 ชนด ทสามารถเพมปรมาณดเอนเอได เมอสรางแผนภมความสมพนธ พบวามคาดชนความเหมอนอยระหวาง 0.37-0.64 และแบงกลมเปน 3 กลม ซงสอดคลองกบลกษณะทางสณฐาน

Ref. code: 25605809032146MLB

116

116

การประเมนความสมพนธทางพนธกรรมในทเรยน 40 พนธ ดวยล าดบนวคลโอไทดต าแหนงจ าเพาะของยน rbcL และยน rpoC1 โดยการศกษาแผนภมความสมพนธทางพนธกรรมดวยโปรแกรม MEGA7 จะเหนวาทง 2 ยน ไมสามารถแยกความแตกตางของทเรยนไดทงหมด มเพยงบางพนธเทานนทสามารถแยกได ซงล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL สามารถแยกทเรยนได 4 พนธ คอ กะเทยขวสน หาลกไมถงผว กานสน และเมดในกานยาว เมอเปรยบเทยบล าดบนวคลโอไทดพบวามต าแหนงทแตกตางกน 7 ต าแหนง และพบ 2 รปแบบทท าใหเกดความหลากรป คอ ทรานสเวอรชน และพวรนทรานซชน และมผลตอการเปลยนแปลงของกรดอะมโนดวย ต าแหนงล าดบนวคลโอไทดทเกดการกลายในทเรยนทแยกได 4 พนธ ถาจ าแนกตามลกษณะสณฐานคออยในกลมเบดเตลดทงหมดคดเปน 30.8 เปอรเซนต ทสามารถแยกไดจาก 13 พนธ ของกลมเบดเตลดทน ามาศกษา สวนภายในกลมอน 5 กลม (กลมกบ กลมลวง กลมกานยาว กลมก าปน และกลมทองยอย) พบวาบรเวณยน rbcL เหมอนกน 100 เปอรเซนต ทงภายในกลมและระหวางกลม คอไมสามารถจ าแนกทเรยน 5 กลม ส าหรบลกษณะสณฐานของทเรยนในกลมเบดเตลดถอวาเปนกลมทมลกษณะไมแนชด บางลกษณะอาจเหมอนในกลมใดกลมหนงใน 5 กลม และในขณะเดยวกนกมลกษณะทผนแปรออกไป (หรญ และคณะ, 2530) อาจเปนไปไดทต าแหนงล าดบนวคลโอไทดทเกดการกลายสงผลใหลกษณะภายนอกของทเรยนเกดความแตกตาง เชน ทเรยนพนธหาลกไมถงผวทไดชอวาเปนทเรยนพนธเลกทมรสชาตอรอย

สวนการศกษาล าดบนวคลโอไทดของยน rpoC1 จะเหนวาล าดบนวคลโอไทดไมมความแตกตางกน ท าใหไมสามารถแยกพนธทเรยนออกจากกนได จากการศกษานแสดงใหเหนวาการแยกพนธทเรยนโดยใชบรเวณของยน rbcL และ ยน rpoC1 ยงไมเหมาะสมตอการน ามาใชศกษาความสมพนธทางพนธกรรมในพชชนดน เนองจากยนทง 2 ยน ทน ามาใชเปนดเอนเอมาตรฐานมขนาดเลกความยาวประมาณ 500-700 คเบส ถาเทยบกบขนาดจโนมทงหมด ท าใหพบความผนแปรเลกนอยในพช (Kress และ Erickson, 2007) อกทงยงเปนยนทสามารถแปลรหสเปนโปรตนไดทงหมด เพราะไมมชองวาง (gap) (Wynns และ Lange, 2014)โอกาสการเปลยนแปลงของล าดบ นวคลโอไทดชนดนจงต ากวาล าดบนวคลโอไทดของยนทมขนาดใหญ อกทงพชทเลอกน ามาศกษาจดเปนพชสปชสเดยวกนทงหมด ความใกลชดทางพนธกรรมจงมมากกวาพชตางสปชส

งานวจยทเรยนในประเทศสงคโปรเพอวเคราะหจโนมและศกษายนทท าใหเกดกลน พบวา จโนมของทเรยนมขนาดประมาณ 800 Mb และยนมประมาณ 45,000 ยน ในขณะทมนษยมประมาณ 25,000 ยน (Pennisi, 2005) โดยความยาวเฉลยของยนทสามารถถอดรหสเปนโปรตนไดมขนาดประมาณ 1,700 Kb และเมอศกษาการเปรยบเทยบจโนมของทเรยนกบพช 9 ชนด พบวาทเรยนมบรรพบรษรวมกบฝาย (Gossypium raimondii, G. arboreum) และโกโก (Theobroma cacao) ซงสอดคลองกบงานวจยน คอเมอน าล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL และ rpoC1 ในทเรยน

Ref. code: 25605809032146MLB

117

117

มาเปรยบเทยบกบฐานขอมล BLAST พบวา ล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL และ rpoC1 ระหวางทเรยนกบฝาย มเปอรเซนตความเหมอนเทากน คอ 97 เปอรเซนต ในขณะททเรยนกบโกโก มเปอรเซนตความเหมอน 98 และ 96 เปอรเซนต ตามล าดบ สวนการศกษายนทท าใหทเรยนมกลนแรง คอ ยน MGL ซงท าหนาทผลตสารระเหยประเภทก ามะถน ในทเรยนพบถง 4 ชด ในขณะทพชชนดอนมเพยง 1 หรอ 2 ชด เชน ขาวและโกโกพบ 1 ชด และยนนจะแสดงออกมากขนเมอทเรยนเรมสก เมอเทยบการแสดงออกของยนระหวางพนธทเรยน พบวาทเรยนพนธมซงคงสมการแสดงออกของยน MGL มากกวาพนธหมอนทองและพวงมณ จงเปนเหตผลวาท าไมทเรยนมซงคงสจากประเทศมาเลเซยมกลนรนแรงมากกวาหมอนทองและพวงมณ (Teh et al., 2017)

CBOL Plant Working Group เสนอวาใหวเคราะหรวมกบบรเวณอน ตวอยางงานวจยทเคยศกษาในพชชนดอนแลวพบวามประสทธภาพมากกวาการวเคราะหเพยงบรเวณเดยว ไดแก การศกษาล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL และ matK ในการระบพนธกลวยไมสกลหวาย หมไนโกรเฮอรซเธ และลกผสม จ านวน 21 ชนด/พนธ พบวาเมอเลอกศกษาล าดบนวคลโอไทดของล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL พบการกลาย 16 ต าแหนง คดเปน 2.41 เปอรเซนต ในขณะทการศกษาในยน matK เกดการกลาย 339 ต าแหนง คดเปน 35.53 เปอรเซนต และเมอน าล าดบ นวคลโอไทดของทง 2 ยน วเคราะหรวมกนสามารถเพมประสทธภาพการจ าแนกมากถง 71.4 เปอรเซนต (ธระชย และคณะ, 2560) และ การศกษาจ าแนกกลวยไมสกลเอองเทยนโดยใชยน matK รวมกบยน rbcL พบวาสามารถจ าแนกกลวยไมสกลเอองเทยนไดดขนกวาการใชยนเพยงบรเวณเดยว (นฤมล และคณะ, 2559) เชนเดยวกน

การเพมปรมาณชนดเอนเอบรเวณทสนใจในการใชเปนดเอนเอมาตรฐาน ควรเลอก ดเอนเอมาตรฐานทดและมความเหมาะสมกบงานล าดบนวคลโอไทดของต าแหนงจ าเพาะซงเปนสงส าคญมาก เพราะจะมผลตอการน าไปใชระบชนดของสงมชวตใหมความนาเชอถอและถกตอง มงานวจยทไดศกษาเลอกใชบรเวณยน COI ในการจ าแนกสตวแลวประสบความส าเรจ ท าใหการใชล าดบนวคลโอไทดของยน COI ไดรบความนยมแพรหลายในกลมสตว แตกลบไมประสบความส าเรจในกลมพช เนองจากยนบรเวณนมอตราการเปลยนแปลงของล าดบนวคลโอไทดต ามาก จงไมเพยงพอทจะน ามาใชระบและแยกชนดพชทมความสมพนธทางววฒนาการหางไกลกน (ตางสกลหรอวงศ) (Ford et al., 2009) ดงนนจงตองคนหาบรเวณดเอนเอมาตรฐานทมความเหมาะสมกบสงมชวตนน เพอเพมประสทธภาพตอการระบและจ าแนกชนดของสงมชวต

เนองจากพนธทเรยนทน ามาศกษาเปนพชสปชสเดยวกนคอ Durio Zibethinus ดงนนความใกลชดทางพนธกรรมจงมมากกวาพชตางสปชร มงานวจยท ใชล าดบนวคลโอไทดของต าแหนงจ าเพาะศกษาในพชสปชส เดยวกนอยางขาวมส (Oryza sativa) ดวยยน rbcL และ

Ref. code: 25605809032146MLB

118

118

ยน rpoC1 พบต าแหนงความหลากรปซงเกดจากการกลายมจ านวน 50 และ 6 ต าแหนง คดเปน 8.03 และ 1.16 เ ปอร เ ซ นต ต ามล าด บ (นฤมล และคณะ , 2557) และศ กษา ในมะม ว ง (Mangifera indica) ดวยยน rbcL และยน rpoC1 พบต าแหนงความหลากรป 5 และ 3 ต าแหนง คดเปน 0.77 และ 0.54 เปอรเซนต ตามล าดบ (ปยดา และคณะ, 2558) นอกเหนอจากการศกษาในพชสปชสเดยวกน ยงมการศกษาในพชตางสปชส ไดแก ศกษาบรเวณยน rpoC1 ในกลวยไมสกล Dendrobium และกลวยไมสกล Coelogyne พบต าแหนงความหลากรปคดเปน 4.32 เปอรเซนต และ 29 เปอรเซนต ตามล าดบ (นฤมล และคณะ, 2560) ศกษาบรเวณยน rpoC1 ในกลวยไมสกลกานกอจ านวน 30 ชนด สามารถจ าแนกได 12 ชนด พบต าแหนงความหลากรป 61 ต าแหนง คดเปน 9.2 เปอรเซนต (จฑามาศ และคณะ, 2560) ศกษาบรเวณยน rpoC1 ในกลวยไมสกลรองเทานารกลมใบสเขยวจ านวน 20 ชนด สามารถจ าแนกได 3 ชนด พบต าแหนงความหลากรป 4 ต าแหนง คดเปน 0.7 เปอรเซนต (พรประภา และคณะ, 2560) ศกษาบรเวณยน rpoC1 ในกลวยไมสกลรองเทานารกลมใบลายจ านวน 20 ชนด สามารถจ าแนกได 5 ชนด พบต าแหนงความหลากรป 16 ต าแหนง คดเปน 2.9 เปอรเซนต (ทปกา และคณะ, 2560) และการศกษาบรเวณยน rbcL ในพชเขตรอนในทองถน 436 สปชส พบวาสามารถแยกความแตกตางของพชไดคดเปน 79.8 เปอรเซนต แตเมอน ามาวเคราะหรวมกบยน matK สามารถแยกได 100 เปอรเซนต (Burgess et al., 2011) แสดงใหเหนวาการวเคราะหกบพชตางสปชสสามารถจ าแนกสงมชวตไดดกวาพชสปชสเดยวกนและการวเคราะหล าดบนวคลโอไทดมากกวาหนงบรเวณสามารถใหผลการทดลองไดดกวาการวเคราะหเพยงยนเดยว

การวเคราะหความสมพนธทางพนธกรรมดวยล าดบนวคลโอไทดของต าแหนงจ าเพาะถอเปนวธทงายและมประสทธภาพในการแยกสงมชวต แตตองเลอกใชใหเหมาะสมกบชนดของสงมชวต จากทกลาวมาขางตนจะเหนวาประสทธภาพในการแยกพชสปชสเดยวกนของยน rbcL และยน rpoC1 ต ากวาพชตางสปชส ดงนนการเลอกศกษาล าดบนวคลโอไทดของ 2 ยน ไมควรเลอกศกษาในพชสปชสเดยวกน นอกจากการศกษาความสมพนธทางพนธกรรมดวยล าดบนวคลโอไทดของต าแหนงจ าเพาะบรเวณอนแลว ยงสามารถเลอกวเคราะหดวยเครองหมายอนอกได คอ เครองหมาย ดเอนเอ ทจะชวยวเคราะหจ าแนกชนดของสงมชวตใหมประสทธภาพมากขน และลดคาใชจายในหองปฏบตการ

Ref. code: 25605809032146MLB

119

119

บทท 5 สรปผลการวจยและขอเสนอแนะ

5.1 เครองหมายสกอต เครองหมายแฮตอารเอพด และล าดบนวคลโอไทดต าแหนงจ าเพาะ

การประเมนความสมพนธของทเรยน 30 พนธ ดวยเครองหมายสกอตและเครองหมายแฮตอารเอพด โดยเรมจากสกดดเอนเอจากใบทเรยน แลวคดเลอกไพรเมอรทสามารถเพมผลผลตดเอนเอไดในปรมาณสงและมความชดเจน จากนนน าไปเพมปรมาณดเอนเอ พบวาแตละพนธมรปแบบปรากฎของแถบดเอนเอแตกตางกน ซงถาเปรยบเทยบเปอรเซนตความหลากรปของทง 2 เครองหมาย เครองหมายแฮตอารเอพดมความหลากรปมากกวาเครองหมายสกอต โดยทเครองหมายแฮตอารเอพดมความหลากรปคดเปน 85.42 เปอรเซนต ในขณะทเครองหมายสกอตมความหลากรป คดเปน 79.06 เปอรเซนต โดยเครองหมายแฮตอารเอพดจดเปนเครองหมายแบบสม ลกษณะของ ไพรเมอรจบกบดเอนเอแมแบบกระจายทวจโนม ท าใหมความหลากรปส ง สวนเครองหมายสกอต ลกษณะการออกแบบไพรเมอรจะมต าแหนงเรมตนของการถอดรหสดเอนเอ เพราะฉะนนการจบกบ ดเอนเอแมแบบจะจบเฉพาะบรเวณทเปนยนเทานน ซงในจโนมของสงมชวตพบบรเวณทเปนยนนอยมาก สงผลใหการกระจายตวของการจบไพรเมอรกบดเอนเอแมแบบเกดนอยกวาเครองหมาย แฮตอารเอพด

การสรางแผนภมความสมพนธเมอน าแถบดเอนเอมาสรางคาคะแนนและวเคราะหดวยโปรแกรม NTSYS-pc รน 2.01e โดยจดกลมแบบ UPGMA พบวาการจดกลมของเครองหมาย สกอต เครองหมายแฮตอารเอพด และเครองหมายสกอตรวมกบเครองหมายแฮตอารเอพด ใหผลคลายคลงกน โดยลกษณะการแบงกลมจะแบงเปน 2 กลม คอ กลมท 1 เปนกลมใหญ ในกลมใหญมการจดกลมเปนกลมยอยและบางพนธไมมการจดกลม และกลมท 2 เปนกลมเลก ซงจากการประเมนความสมพนธทเรยนดวยเครองหมายดเอนเอ สามารถจ าแนกพนธทเรยนแตละพนธได

การประเมนความสมพนธทางพนธกรรมของทเรยน 40 พนธ ดวยการใชล าดบ นวคลโอไทดต าแหนงจ าเพาะของยน rbcL และยน rpoC1 เมอเพมปรมาณชนดเอนเอของยน rbcL และยน rpoC1 พบวาสามารถเพมปรมาณชนดเอนเอไดขนาด 661 และ 566 คเบส ตามล าดบ และเมอน าล าดบนวคลโอไทดบรเวณต าแหนงจ าเพาะทง 2 ยน มาเปรยบเทยบในฐานขอมล NCBI พบวาตรงกบบรเวณยนต าแหนงนน ๆ ของพชชนดอน จากนนน าเอาขอมลล าดบนวคลโอไทดมาสรางแผนภมความสมพนธทางพนธกรรมดวยโปรแกรม MEGA7 โดยใช ClustalW เลอกการจดกลมแบบ Maximum likelihood พบวาทง 2 ยน ไมสามารถแยกพนธทเรยนทงหมดออกจากกนได ในล าดบ

Ref. code: 25605809032146MLB

120

120

นวคลโอไทดของยน rbcL สามารถแยกไดเพยง 4 พนธ โดยเปอรเซนตความเหมอนคดเปน 98.94 เปอรเซนต สวนในล าดบนวคลโอไทดของยน rpoC1 พบวาไมสามารถแยกพนธทเรยนออกจากกนได โดยเปอรเซนตความเหมอนคดเปน 100 เปอรเซนต

การประเมนความสมพนธของทเรยนของ 3 เครองหมาย สรปไดวาการใชเครองหมายดเอนเอดวยเครองหมายสกอตและเครองหมายแฮตอารเอพด สามารถจ าแนกและระบพนธทเรยนไดทงหมดโดยดจากลกษณะของแถบดเอนเอทเพมปรมาณดเอนเอดวยปฏกรยา ลกโซพอรเมอเรส ซงประสทธภาพการจ าแนกพนธทเรยนดวยการใชเครองหมายดเอนเอมสงกวาการใชล าดบนวคลโอไทดต าแหนงจ าเพาะของยน rbcL และยน rpoC1 และถาเปรยบเทยบการจดกลมระหวางเครองหมายสกอตกบเครองหมายแฮตอารเอพด ทง 2 เครองหมาย ใหผลการจดกลมเหมอนกนคอ แบงไดเปน 2 กลม ซงผลของการจดกลมของเครองหมายแฮตอารเอพดสอดคลองกบลกษณะสณฐานของทเรยนมากทสด และมความหลากรปมากกวาเครองหมายสกอต

5.2 ขอเสนอแนะ

จากการใชเครองหมายดเอนเอ 2 ชนด ประเมนความสมพนธของทเรยน คอ

เครองหมายสกอต และเครองหมายอารเอพด สามารถจ าแนกทเรยนจ านวน 40 พนธไดจากการปรากฏของแถบดเอนเอ แตการแบงกลมอาจยงไมชดเจน ดงนนการศกษาเครองหมายดเอนเอดวยเทคนคอนเพมเตมสามารถท าได และการเพมปรมาณดเอนเอดวยปฏกรยาลกโซพอพอรเมอเรสควรท าอยางนอย 3 ครง เพอผลของแถบดเอนเอทเกดขนใหมความคงท อกทงวธนเปนเทคนคสะดวก รวดเรว และใชดเอนเอปรมาณนอย สามารถน าเครองหมายนมาใชศกษาในสงมชวตชนดอนได

การเลอกใชล าดบนวคลโอไทดต าแหนงจ าเพาะของยน rbcL และยน rpoC1 ในการวเคราะหความสมพนธทางพนธกรรมของทเรยนยงไมมความเหมาะสม และไมควรน ามาใชศกษาในพชชนดน เนองจากเปนพชสปชสเดยวกน และขนาดของล าดบนวคลโอไทดต าแหนงจ าเพาะทเลอกใชมขนาดสน ท าใหความแตกตางในระหวางพนธเกดขนนอย ดงนนการศกษาล าดบนวคลโอไทดต าแหนงจ าเพาะสามารถวเคราะหดวยล าดบนวคลโอไทดไดในบรเวณอน หรอศกษาเทคนคเครองหมายดเอนเออนทเหมาะสมเพอเพมประสทธภาพการจ าแนกพนธทเรยนใหดขน

Ref. code: 25605809032146MLB

121

121

รายการอางอง

1. เกยรตชย แซไต, เปรมณช ขนปกษ, ธระชย ธนานนต และนฤมล ธนานนต. (2556). การประเมนความสมพนธทางพนธกรรมของแพรเซยงไฮ (Portulaca grandiflora) ดวยเครองหมายแฮตอารเอพด, Thai J. Genet. Spec(1): 226-229.

2. จาตรงค สมฤทธ. (2556). การจ าแนกพนธและการวเคราะหความสมพนธทางพนธกรรมของขาวมสดวยเครองหมายดเอนเอ. สาขาเทคโนโลยชวภาพ. คณะวทยาศาสตรและเทคโนโลย. มหาวทยาลยธรรมศาสตร. ปทมธาน.

3. จฑาทพย พนธรปทาว, ธระชย ธนานนต และนฤมล ธนานนต . (2559) . การศกษาความสมพนธทางพนธกรรมของกลวยไมสกลหวาย หมไนโกรเฮอรซเธ และลกผสมดวย แฮตอารเอพด, Thai J. Sci. Technol. 5(1): 78-87.

4. จฑามาศ เจยมเจอจนทร, ธระชย ธนานนต และนฤมล ธนานนต. (2560). การประเมนความสมพนธทางพนธกรรมและการจ าแนกกลวยไมสกลกานกอดวยล าดบนวคลโอไทดของยน rpoC1 และชนดเอนเอทอยระหวางยน trnH กบ psbA, Thai J. Sci. Technol. 6(4): 325-337.

5. ชม บญยาคม. (2498) . ความร เ ก ยวกบท เ ร ยน . กร ง เทพมหานคร : ส านก พมพมหาวทยาลยเกษตรศาสตร.

6. ชยสทธ ชนวตร. (2548). การปลกทเรยน. กรงเทพมหานคร: ส านกพมพ ยทไลซ จ ากด. 7. ชนวฒน ยพวฒนพนธ. (2551). โครงการผลตเอกสารวชาการเผยแพรแกเกษตรกร ใน เออม

พร วสมหมาย (บรรณาธการ), เรองท 5 : ทเรยน [หนงสออเลกทรอนกส]. กรงเทพมหานคร : ภาควชาพชสวน คณะเกษตร มหาวทยาลยเกษตรศาสตร วทยาเขตบางเขน.

8. ฐตาภรณ สขโหต, อนทรา จารเพง, ประไพ โมจรนทร, อภรด เพมผล, อรณน สระเกา, ศรวรรณ เทยนมงคล, ปยรษฏ ปรญญาพงษ และพรชย จฑามาศ. (2549). การจดจ าแนกทเรยน (Durio zibethinus Merr.) โดยใชเทคนค AFLP, การประชมวชาการทรพยากรไทย : สรรพสงลวนพนเกยว. 405-410.

9. ดจฤด ปานพรหมมนทร และนนทร ปานพรหมมนทร . (2557). ดเอนเอบารโคดเพอการจ าแนกชนดปลาวงศเสอตอ, วารสารแกนเกษตรฉบบพเศษ. 42(1): 743-748.

10. ทรงพล สมศร. (2551). ทเรยนไทยและการปรบปรงพนธ : กรณศกษาพนธจนทบร 1 จนทบร 2 จนทบร 3. กรงเทพมหานคร: กรมวชาการเกษตร.

Ref. code: 25605809032146MLB

122

122

11. ทรงพล สมศร, พะยงค เกงกาจ, ภรมย ขนจนทก, ณชชา แหลมเพชร, นาตยา ด าอ าไพ, สชาต วจตรานนท, สมนก ฉวนฉม, เสาวนย ศรสมา, เสรมสข สลกเพชร, ศจรตน สงวนรงศรกล, วนดา งามเงน และธรวฒ วงศวรตน. (2549). การปรบปรงพนธทเรยนเพอผลตพนธลกผสมตนฤดทมคณภาพดและการศกษาจ าแนกชนด พนธ สายพนธลกผสมดเดนดวยเทคนคดานชวโมเลกล. กรงเทพมหานคร: สถาบนวจยพชสวน กรมวชาการเกษตร.

12. ทศนย สงหศลารกษ , จฑามาศ เจยมเจอจนทร, เปรมณช ขนปกษ, ธระชย ธนานนต และนฤมล ธนานนต. (2560). การประเมนความสมพนธทางพนธกรรม และการจ าแนกขาวปลกบางพนธดวยเครองหมายสกอต, Thai J. Sci. Technol. 6(3): 253-261.

13. ทปกา มเสงยม, ธระชย ธนานนต และนฤมล ธนานนต. (2560). การประเมนความสมพนธทางพนธกรรมและการจ าแนกกลวยไมสกลรองเทานารกลมใบลายดวยล าดบนวคลโอไทดของยน rpoC1 และชนดเอนเอทอยระหวางยน trnH กบ psbA, Thai J. Sci. Technol. 6(4): 347-355.

14. ธระชย ธนานนต, จฑาทพย พนธรปทาว และนฤมล ธนานนต . (2560). การประเมนความสมพนธทางพนธกรรมและการระบพนธ กลวยไมสกลหวาย หมไนโกรเฮอรซเธ และลกผสม ดวยล าดบนวคลโอไทดของยน matK และ rbcL, วารสารวทยาศาสตรและเทคโนโลย. 25(4): 579-590.

15. นฤมล ธนานนต, จาตรงค สมฤทธ และธระชย ธนานนต. (2557). การวเคราะหความสมพนธทางพนธกรรมของขาวมสโดยใชล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL และ rpoC1, วารสารวทยาศาสตรและเทคโนโลย. 22(5): 674-682.

16. นฤมล ธนานนต, จฑาทพย และธระชย ธนานนต. (2560). การประเมนความสมพนธทางพนธกรรมและการระบพนธของกลวยไมสกลหวาย หมไนโกรเฮอรซเธ และลกผสมดวยล าดบนวคลโอไทดของยน rpoC1 และชนดเอนเอทอยระหวางยน trnH กบ psbA, Thai J. Sci. Technol. 6(1): 33-43.

17. นฤมล ธนานนต, จฑามาศ เจยมเจอจนทร และธระชย ธนานนต. (2560). การประเมนความสมพนธทางพนธกรรมและการระบชนดของกลวยไมสกลกานกอดวยเครองหมายสกอต, Thai J. Sci. Technol. 6(3): 153-160.

18. นฤมล ธนานนต, ภทรา หงษทองด และธระชย ธนานนต. (2559). การประเมนความสมพนธทางพนธกรรมและการจ าแนกกลวยไมสกลเอองเทยนดวยล าดบนวคลโอไทดของยน matK และ rbcL, Thai J. Sci. Technol. 5(2): 169-180.

Ref. code: 25605809032146MLB

123

123

19. นฤมล ธนานนต, ภทรา หงษทองด, วรณธร เชอบญม และธระชย ธนานนต . (2560). การประเมนความสมพนธทางพนธกรรมและการระบชนดของกลวยไมสกลเอองเทยนดวยล าดบนวคลโอไทดของยน rpoC1 และชนดเอนเอทอยระหวางยน trnH กบ psbA, Thai J. Sci. Technol. 6(1): 22-32.

20. นฤมล ธนานนต, วรสรา แทนสงา และธระชย ธนานนต. (2557). การประเมนความหลากหลายทางพนธกรรมของกลวยไมสกลกหลาบดวยเครองหมายแฮตอารเอพด, วารสารวทยาศาสตรและเทคโนโลย. 22(3): 317-326.

21. นฤมล ธนานนต, วรสรา แทนสงา และธระชย ธนานนต. (2557). การจ าแนกพนธและการวเคราะหความสมพนธทางพนธกรรมของกลวยไมสกลกหลาบดวยล าดบนวคลโอไทดของต าแหนงจ าเพาะ, วารสารวทยาศาสตรและเทคโนโลย. 22(5): 664-673.

22. นฤมล ธนานนต, สรยพร พมเอยม และธระชย ธนานนต . (2556). การจ าแนกพนธและความสมพนธทางพนธกรรมของกลวยไมชางและลกผสมดวยเครองหมายแฮตอารเอพด, วารสารวทยาศาสตรและเทคโนโลย. 21(4): 360-370.

23. บรรณ บรณะชนบท. (2542). สวนทเรยน. นนทบร: ส านกพมพฐานเกษตรกรรม. 24. ปยดา บสด, ธระชย ธนานนต และนฤมล ธนานนต. (2558). การจ าแนกพนธมะมวงใน

ประเทศไทยจากล าดบดเอนเอของยน rbcL และ rpoC1, วารสารวทยาศาสตรและเทคโนโลย. 23(6): 983-993.

25. พรประภา ศรเทพทว, ฐตาพร มณเนตร, เปรมณช ขนปกษ, ธระชย ธนานนต และนฤมล ธนานนต. (2560). การประเมนความสมพนธทางพนธกรรม และการจ าแนกกลวยดวยเครองหมายสกอต, Thai J. Sci. Technol. 6(3): 272-278.

26. พรประภา ศรเทพทว , ธระชย ธนานนต และนฤมล ธนานนต . (2560). การประเมนความสมพนธทางพนธกรรมและการจ าแนกกลวยไมสกลรองเทานารกลมใบสเขยวดวยล าดบนวคลโอไทดของยน rpoC1 และชนดเอนเอทอยระหวางยน trnH กบ psbA, Thai J. Sci. Technol. 6(4): 338-346.

27. พจตร โชควฒนา. (2540). ทเรยน. กรงเทพมหานคร: มหาวทยาลยเกษตรศาสตร.

28. พชย ใจกลา. (2556). สณฐานวทยาและสณฐานวทยาเรณของทเรยนพนธหลงลบแล , วารสารเกษตร. 29(3): 187-194.

29. พชย ใจกลา. (2558). การตดผลและลกษณะของทเรยนทเกดจากการผสมเกสรในจงหวดอตรดตถ, วารสารเกษตรพระจอมเกลา. 33(2): 29-37.

Ref. code: 25605809032146MLB

124

124

30. มนส ดาเกลยง. (2545). เอกสารทางวชาการ เรอง พนธทเรยนเมองลบแล. อตรดตถ: สถาบนราชภฏอตรดตถ.

31. โรสต สมทธสวสด. (2530). ผลไม: ทองค าเขยวของประเทศไทย. กรงเทพมหานคร: จลสารธนาคารกรงเทพ.

32. วรสรา แทนสงา , เปรมณช ขนปกษ , ธระชย ธนานนต และนฤมล ธนานนต . (2556). การศกษาความหลากหลายทางพนธกรรมของพชในวงศจ าปาดวยเทคนคแฮตอารเอพด , Thai J. Sci. Technol. Spec(1): 196-200.

33. ว จ ต ร ว ง ใน . (2519) . ร ายช อผล ไม ไทย . กร ง เทพมหานคร : ภาคว ช า พชสวน มหาวทยาลยเกษตรศาสตร.

34. ว จ ต ร ว ง ใน . (2526) . ร ายช อผล ไม ไทย . กร ง เทพมหานคร : ภาคว ช า พชสวน มหาวทยาลยเกษตรศาสตร.

35. สรพงศ เบญจศร . (2554). เครองหมายโมเลกลสาหรบการปรบปรงพนธพช , วารสารวทยาศาสตร. 39: 350-363.

36. ส านกคมครองพนธพชแหงชาต . (2544). ฐานขอมลเชอพนธทเรยน. กรงเทพมหานคร : มหาวทยาลยเกษตรศาสตร.

37. สรนทร ปยะโชคณากล. (2545). จโนมและเครองหมายดเอนเอ : ปฏบตการอารเอพดและเอเอฟแอลพ. กรงเทพมหานคร: มหาวทยาลยเกษตรศาสตร.

38. สรพร เกตงาม. (2546). เครองหมายดเอนเอในงานปรบปรงพนธพช , วารสารวชาการมหาวทยาลยอบลราชธาน. 5: 37-59.

39. แสวง ภศร. (2513). ทเรยนในประเทศไทย. กรงเทพมหานคร: มหาวทยาลยเกษตรศาสตร. 40. แสวง ภศร. (2527). ทเรยน. ตรง: วทยาลยเกษตรกรรมตรง. 41. หรญ หรญประดษฐ. (2547). ทเรยน. สารานกรมไทยส าหรบเยาวชน โดยพระราชประสงค

ในพระบาทสมเดจพระเจาอยหว, 28: 89-125. 42. หรญ หรญประดษฐ, และทรงพล สมศร. (2530). การคด clone ทเรยนพนธทปลกเปน

การคาในปจจบน ในรายงานผลการคนควาและวจยป 2530. กรงเทพมหานคร: สถาบนวจยพชสวน กรมวชาการเกษตร.

43. หรญ หรญประดษฐ, นลวรรณ ลองกรเสถยร, สงวน จนทรจ, ทรงพล สมศร, บญม เลศรตนเดชากล, ไพโรจน มาสผล, ไพโรจน ผลประสทธ และประกจ ดวงพกล. (2531). การรวบรวมพนธทเรยนทจะสญพนธ. จนทบร: ศนยวจยพชสวนจนทบร.

Ref. code: 25605809032146MLB

125

125

44. หรญ หรญประดษฐ, สขวฒน จนทรปราณก และเสรมสข สลกเพชร. (2541). เทคโนโลยการผลตทเรยน. กรงเทพมหานคร: มหาวทยาลยเกษตรศาสตร.

45. อรรตน มงคลพร. (2548). เครองหมายโมเลกลเพอการปรบปรงพนธพช. กรงเทพมหานคร: มหาวทยาลยเกษตรศาสตร.

46. อรอนงค หนชเชอ. (2549). การวเคราะหลายพมพดเอนเอรวมกบองคประกอบพอลแซคคาไรดในทเรยนตางสายพนธ. สาขาวชาชวเวชเคม. ภาควชาชวเคม. คณะเภสชศาสตร. มหาวทยาลยจฬาลงกรณมหาวทยาลย.

47. เอมอร รงแจงสวรรณ, ปยรษฎ เจรญทรพย, วษวต สงนวล, อษณษ พชกรรม, และศศวมล แสวงผล. (2556). การศกษาความหลากหลายของพนธทเรยน (Durio zibethinus L.) ในจงหวดนนทบรโดยใชเครองหมายโมเลกลเอสเอสอาร, การประชมวชาการพฤกษศาสตรแหงประเทศไทย ครงท 7. 45.

48. ฮดา แกวศรสม, กรกช นาคคนอง, และจรสศร นวลศร. (2557). การวเคราะหพนธกรรมของทเรยนพนบานในภาคใตโดยใชเครองหมายไมโครแซทเทลไลท , วารสารแกนเกษตร ฉบบพเศษ. 42(3): 271-276.

49. Abidin, Z., Idris, S. and Aman, M.R. (1996). Status report on genetic resources of durian in Malaysia. India. IPGRI office for South Asia. 29.

50. Ahmad, S., Sepideh, T., and Mahmood, K. (2014). Efficiency of SCoT and ISSR markers in assessment of tomato (Lycopersicum esculentum Mill.) genetic diversity. Int. J. Biosci. 5(2): 14-22.

51. Anuntalabhochai, S., Chandet, R., Chiangda, J. and Apavatjrut, P. (2000). Genetic diversity within Lychee (Litchi chinensis Sonn.) based on RAPD analysis. Acta Hort. 575: 253-259.

52. Burgess, K.S., Fazekas, A.J., Kesanakurti, P.R., Kesanakurti, P.R., Graham S.W., Husband B.C., Newmaster, S.G., Percy D.M., Hajibabaei M. and Barrett, S.C.H. (2011). Discriminating plant species in a local temperate flora using the rbcL+ matK DNA barcode. Met. Ecol. Evol. 2: 333-340.

53. Collard, B.C.Y. and Mackill, D.J. (2009). Start Codon Targeted (SCoT) Polymorphism: a simple novel DNA marker technique for generating gene-targeted markers in plants. Pla. Mol. Bio. 27: 86-93.

Ref. code: 25605809032146MLB

126

126

54. Deng, L.B., Liang, Q.Z., He, X.H., Lou, C., Chen, H., and Qin, Z.S. (2015). Investigation and analysis of genetic diversity of diospyros germplasms using SCoT molecular markers in Guangxi. PLoS ONE. 10(8).

55. Don, G. (1831). A general history of dichlamydeous plants. London. J.G. Rivingdon. 513-514.

56. Doyle, J.J., and Dolye, J.L. (1987 ) . A rapid DNA isolation procedure for small quantities of fresh leaf tissue. Phyt. Bu. 19: 11-15.

57. Fazekas, A.J., Burgess, K.S., Kesanakurti, P.R., Graham, S.W., Newmaster, S.G., Husband, B.C., Percy, D.M., Hajibabaei, M., and Barrett, S.C. (2008). Multiple multilocus DNA barcodes from the plastid genome discriminate plant species equally well. PLoS ONE. 3(7).

58. Ford, C.S., Ayres, K.L., Toomey, N., Haider, N., Van-Alpen-Stohl, J., Kelly, L.J., Wikstrom, N., Hollingsworth, P.M., Duff, R.J., Hoot, S.B., Cowan, R.S., Chase, M.W. and Wilkinson, M.J. (2009). Selection of candidate DNA barcoding regions for use on land plants, Bot. J. Linn. Soc. 159: 1-11.

59. Guo, D.L., Zhang J.Y., and Liu C.H. (2012). Genetic diversity in some grape varieties revealed by SCoT analyses. Mol. Bio. 39: 5307-5313.

60. Hebert, P.D.N., Cywinska, A., Ball, S.L., and Dewaard, J.R. (2003). Biological identification through DNA barcodes, Proc. R. Soc. B Bio. Sci. 270: 313-321.

61. Ismi, R., Supriyadi, and Parjanto. (2009). Variability analysis of Sukun durian plant (Durio zibethinus) based on RAPD marker. Biosci. J. 1(2): 84-91.

62. Kostermans, A.J.G.H. (1958). The genus Durio Adans. (Bombacaceae). Reinwardtia. Indonesia. 4(3): 357-460.

63. Kress, J.W. and Erickson, D.L. (2007). A two-locus global DNA barcode for land plants: the coding rbcL gene complements the non-coding trnH-psbA spacer region, PLoS One. 2: e508.

64. Li, W.H. and Graur, D. (1991). Fundamentals of molecular evolution. United States of America. Sinauer Associates, Inc.

65. Lim, T.K. (1990). Durian: diseases and disorders. Malaysia, 95.

Ref. code: 25605809032146MLB

127

127

66. Lou, C.., He, X.H., Chen, H., Ou S.J., and Gao M.P. (2010). Analysis of diversity and relationships among mango cultivars using Start Codon Targeted (SCoT) markers. Biochem. Syst. Ecol. 38: 1176–1184.

67. Macmillan, H.F. (1949). Tropical planting and gardening. 5th edition. London. 68. Mendoza, D.R. (1941). Natural distribution of durians in the Philippines. Philip.

J. For. 4(1): 27-35. 69. Muhammad, S., jasim, A., Maria, G.L., and Ferhan, U. (2012). Tropical and

subtropical fruits. India. John Wiley and Sons. Ins. 590-592 70. Paliwal, R., Singh, R., Singh, A.M., Kumar, S., Kumar, A., and Singh, R.M. (2013).

Molecular characterization of Giloe (Tinospora cordifolia (Willd. Miers ex Hook. F. and Thoms.) accessions using Start Codon Targeted (SCoT) markers. Int. J. Med. Arom. Plants. 3(4): 413-422.

71. Pennisi, E. (2005). Why do humans have so few genes?. Sci. 309(5731): 80. 72. Rohlf, F.J. (2002). NTSYS-pc. Numerical taxonomy and multivariate analysis

system. New York. Applied Biostatistics, Inc. 73. Sambrook, J., Fritsch, E.F., and Maniatis, T. (1989). Molecular Cloning: A

Laboratory Manual. 2nd Edition. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press. 74. Seogeng-Reksodihardjo, W. (1962). The species of Durio with edible fruits. Eco.

Bot. 16(4): 270-282. 75. Sripalwit, P., Wongsawad, C., Wongsawad, P. and Anuntalabhochai, S. (2007).

High annealing temperature-random amplified polymorphic DNA (HAT-RAPD) analysis of three paramphistome flukes from Thailand. Exp. Para. 115: 98-102.

76. Teh, B.T., Lim, K., Yong, C.H., Ng, C.C.Y., Rao, S.R., Rajasegaran, V., Lim, W.K., Ong, C.K., Chan, K., Cheng, V.K.Y., Soh, P.S., Swarup, S., Rozen, S.G., Nagarajan, N., Tan, P. (2017). The draft genome of tropical fruit durian (Durio zibethinus). Nat. Genet. 49(11): 1633–1641.

77. Vangnai, V. (1996). Status report on genetic resources of mango in Thailand. Bangkok. Kasetsart University. 23.

Ref. code: 25605809032146MLB

128

128

78. Vanijajiva, O. (2011) Genetic variability among durian (Durio zibethinus Murr.) cultivars in the Nonthaburi province, Thailand detected by RAPD analysis. J. Agric. Technol. 7(4): 1107-1116.

79. Weising, K., Nybom, H., Wolf, K., and Kahl, G. (2005). DNA Finger Printing in Plants, 2nd Edition. United States of America. CRS Press, Boca Raton, F.L.

80. Welsh, J., and McClelland, M. (1990). Fingerprinting genomes using PCR with arbitrary primers. Nucl. Acids Res. 18: 7213-7218.

81. Williams, J.G., Kubelik, A.R., Livak, K.J., Rafalski, J.A. and Tingey, S.V. (1990). DNA polymorphisms amplified by arbitrary primers are useful as genetic markers. Nucl. Acids Res. 18: 6531-6535.

82. Wilson, T.B. (1954). The marketing of durian (Durio zibethinus Murr.) fruits from Parit District, Perak. Malay. Agric. J. 37(4): 211-217.

83. Wu, J. M., Li, Y.R., Yang, L.T., Fang, F.X., Song H.Z., Tang, H.Q., Wang, M., and Weng, M.L. (2013). cDNA-SCoT: a novel rapid method for analysis of gene differential expression in sugarcane and other plants. Aust. J. Crop Sci. 7: 659-664.

84. Wynns, J.T. and Lange, C.B.A. (2014). A comparison of 16 DNA regions for use as phylogenetic markers in the pleurocarpous moss genus Plagiothecium (Hypnales). Amer. J. Bot. 101(4): 652-669.

85. Zeven, A.C. and Zhukovsky. (1975). Dictionary of cultivated plants and their centres of diversity. Netherlands. PUDOC. 9-26.

Ref. code: 25605809032146MLB

129

129

ภาคผนวก

Ref. code: 25605809032146MLB

130

130

ภาคผนวก ก แบบค าขอรบอนญาต

ส า ข า ว ช า เ ท ค โ น โ ล ย ช ว ภ า พ คณะวทยาศาสตรและเทคโนโลย มหาวทยาลยธรรมศาสตร ศนยรงสต ต าบลคลองหนง อ าเภอคลองหลวง จงหวดปทมธาน 12120

วนท ...... เดอน .................. พ.ศ. ...........

เรยน เจาของสวนบานเรา จงหวดระยอง เรอง ขอรบอนญาตการเขาถงทรพยากรชวภาพ

ขาพเจานางสาวทศนย สงหศลารกษ นกศกษาปรญญาโท มหาวทยาลยธรรมศาสตร ศนยรงสต ขอยนค าขอฉบบน เพอรบอนญาตการเขาถงทรพยากรชวภาพ ขาพเจามความประสงคจะขอเขาถงทรพยากรชวภาพ อนไดแก ทเรยนรวม 40 พนธ ภายในสวนบานเรา ต าบลกระแสบน อ าเภอแกลง จงหวดระยอง การเขาถงทรพยากรชวภาพตามค าขอฉบบน มวตถประสงคเพอการศกษาวจย คนควา ทดลอง และไมไดมวตถประสงคเพอการพาณชยหรอมไดมงเอาประโยชนในทรพยสนทางปญญาเหนอ การศกษาวจย คนควา ทดลอง หรอสงประดษฐทไดใชหรอไดรบจากทรพยากรชวภาพ

ขาพเจาขอรบรองวา ขอความทไดแสดงไวขางตนเปนความจรงทกประการ และขาพเจายนดจะปฏบตตามกฎหมาย กฎระเบยบ ประกาศ และหลกเกณฑอนใดทคณะกรรมการอนรกษและใชประโยชนความหลากหลายทางชวภาพแหงชาตและหนวยราชการทเกยวของก าหนด

จงเรยนมาเพอโปรดพจารณาความอนเคราะห และขอขอบพระคณมา ณ โอกาสนดวย ลงชอ...............................................................ผขออนญาต (นางสาวทศนย สงหศลารกษ) นกศกษาปรญญาโท สาขาเทคโนโลยชวภาพ มหาวทยาลยธรรมศาสตร

ลงชอ...................................................................ผอนญาต (นายขจร พฤฒสขนรนดร) เจาของสวนบานเรา

Ref. code: 25605809032146MLB

131

131

ภาคผนวก ข ดเอนเอมาตรฐาน

ดเอนเอมาตรฐาน : 100 bp plus DNA Ladder (Vivantis, Vivantis technologies

Sdn. Bhd., Malaysia) แสดงขนาดของดเอนเอตงแต 100-3000 คเบส

ภาคผนวกท 1 ด เ อ น เ อม าต ร ฐ าน 100 bp plus DNA Ladder ท ม า : Vivantis, Vivantis technologies Sdn. Bhd., Malaysia

Ref. code: 25605809032146MLB

132

ภาคผนวก ค คาคะแนนของลายพมพดเอนเอ

ตารางภาคท 1 คาคะแนนเครองหมายสกอตแตละไพรเมอร

ไพรเมอร SCoT22

ขนาด (คเบส) พนธทเรยน

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 2600 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0

2350 1 1 0 0 1 1 1 1 0 1 1 0 1 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 1 0 1 0 0 0 2000 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1800 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1700 0 0 0 0 1 0 0 1 0 1 0 0 1 0 0 1 1 1 0 0 1 0 0 1 0 1 0 0 1 0 1600 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1350 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1200 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 0 0 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0

950 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

Ref. code: 25605809032146MLB

133

ตารางภาคท 1 (ตอ) ไพรเมอร SCoT22 (ตอ)


1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 850 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 680 1 0 0 0 1 1 1 0 1 1 0 0 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 610 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

520 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 500 1 0 0 0 1 0 0 0 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0

390 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 ไพรเมอร SCoT23

ขนาด (คเบส) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 1900 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1500 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1380 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

1250 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1050 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

950 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 790 1 1 0 1 0 1 1 1 0 0 1 1 1 0 1 0 1 0 1 1 0 1 0 0 1 0 1 0 1 0

Ref. code: 25605809032146MLB

134



1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

700 0 0 1 1 1 0 0 0 1 1 0 0 0 0 1 0 0 1 0 0 0 0 1 1 0 1 0 1 0 1 550 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1


ขนาด (คเบส) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 1350 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1200 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 1 1 1 1 0 1 1 0 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1050 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 1 1 1000 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 950 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 0 1 1 0 0 1 0 1 0 1 850 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1 0 0 1 1 0 0 1 0 0 0 1 1 0 0 0 1 0 0 710 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 0 0 1 0 0 0 0 1 1 0 1 1 1 650 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 580 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1

550 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1 0 0 0 520 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0

Ref. code: 25605809032146MLB

135



1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

500 1 1 0 0 0 1 1 1 1 0 1 0 0 0 1 0 1 1 1 1 0 1 1 1 0 0 0 0 0 1 420 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1


ขนาด (คเบส) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 1750 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1400 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1250 1 1 0 1 0 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1100 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 0 1000 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 850 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 750 1 1 0 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 0 1 1 1 1 0 0 0 1 1 0 0 0 0 600 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 580 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

450 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 400 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

Ref. code: 25605809032146MLB

136



1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

380 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 ไพรเมอร SCoT46

ขนาด (คเบส) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 1900 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 1 0 0 1 1 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1550 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1500 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1150 0 0 0 1 1 0 0 0 1 1 1 1 0 1 0 0 1 1 0 0 0 0 0 1 0 1 0 0 0 0 1050 0 0 0 1 1 0 0 0 1 0 0 1 0 0 1 1 1 1 0 0 0 0 0 1 1 0 0 1 0 0 900 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 850 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 700 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 550 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0


ขนาด (คเบส) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 1900 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 0 1 1 0 1 1 1 1 1 1 0 0 1 1 1 1 1 1 0 1

Ref. code: 25605809032146MLB

137



1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

1700 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1400 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1300 1 1 1 1 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1 0 0 1 1 1 1 0 1 0 1

1180 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 0 1 980 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

900 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 700 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

520 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 0 0 1 1 1 0 1 1 0 0 ไพรเมอร SCoT48

ขนาด (คเบส) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 1950 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 0 0 0 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1700 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1500 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 0 1 1 0 0 1 1 1 1 0 0 0 0 1 1 1 0 1 0 1

1400 0 0 0 1 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1300 1 1 0 1 1 0 1 1 0 0 1 1 0 0 1 1 1 0 0 0 0 0 0 1 0 1 1 0 0 1

Ref. code: 25605809032146MLB

138



1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

1200 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1100 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1000 1 1 0 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 0 1 0 1 1 1 1 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0

850 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 700 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

650 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 ไพรเมอร SCoT52

ขนาด (คเบส) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 1700 1 1 0 1 1 1 0 1 1 1 0 0 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1500 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1300 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1100 0 0 0 0 1 1 0 0 1 1 1 0 1 1 1 1 0 0 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 1000 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

900 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 850 0 1 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1 1 1 0 0 0 0 1 1 1 1 1 1

Ref. code: 25605809032146MLB

139



1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

780 0 1 0 1 0 0 0 1 0 0 0 1 0 0 1 1 0 1 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 700 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 650 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

600 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 500 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

400 0 1 1 1 0 1 1 1 1 1 0 0 1 1 0 0 0 1 1 1 0 1 1 0 0 1 1 1 1 1 ไพรเมอร SCoT53

ขนาด (คเบส) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 1900 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1800 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1500 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1400 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1350 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0

1200 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1150 1 0 0 0 0 1 0 0 1 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

Ref. code: 25605809032146MLB

140



1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

1100 0 0 1 0 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 1 0 1 0 1 0 0 0 1 1 1 0 0 0 0 950 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 850 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

750 1 0 0 0 1 1 0 0 1 1 1 1 1 0 0 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 700 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

ไพรเมอร SCoT54 ขนาด (คเบส) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

1500 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1350 0 0 0 0 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 0 1 1 0 0 0 0 0 1 1 1300 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1150 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 0 1 1000 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 900 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 0 1 0 0 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1

800 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 700 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0

Ref. code: 25605809032146MLB

141



1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

600 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 500 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 450 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

400 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 350 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 1 1 1


2000 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1500 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 1 0 0 0 1 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1400 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1200 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1150 1 1 0 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 0 1 1 0 1 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1000 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

900 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 0 1 0 1 1 1 1 1 0 0 0 0 1 0 1 880 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

Ref. code: 25605809032146MLB

142



1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

840 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 800 0 0 0 1 1 0 0 0 1 1 1 1 0 1 1 0 1 1 1 0 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 700 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 0 1 0 1 0 1 1 0 0 1 1 1 1 0 1 1 1

650 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 600 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

500 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 0 1 1 0 0 0 1 0 0 1 1 1 1 1 1 0 0 400 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1


1520 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1500 1 0 1 1 1 0 1 1 0 1 0 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1480 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1350 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0

1200 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1100 1 0 1 0 1 0 0 0 0 1 1 1 0 0 1 1 1 1 1 0 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0

Ref. code: 25605809032146MLB

143



1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

1050 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1 0 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1000 0 0 0 0 0 1 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 950 0 0 1 0 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

900 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 850 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

700 1 0 1 0 1 0 0 1 1 0 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 0 0 0 1 0 1 0 0 1 650 0 0 1 0 0 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

600 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 550 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

480 0 1 1 0 0 1 0 0 0 1 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 420 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 400 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 360 0 0 0 1 1 1 1 1 1 1 0 1 0 0 1 0 0 1 0 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 0 300 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

230 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

Ref. code: 25605809032146MLB

144

ตารางภาคท 1 (ตอ) ไพรเมอร SCoT68


1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

2500 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1 0 0 1 1 1 0 1 1 0 0 2250 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 2000 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

1850 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 1 1 0 0 0 0 0 0 1750 0 1 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1 0 1 0 0 0 0 0 0 1 1 0 1 0 1 0

1600 1 0 0 0 1 0 1 1 1 0 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1500 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1 1 0 0 0 0 1 1 1 0 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1

1400 0 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1 1 0 0 0 0 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 1300 1 1 0 1 1 1 0 1 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 0 1 0 1 1 1 1 1 1 1

1220 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 0 0 1 0 0 0 1 1 0 0 0 1200 1 1 0 1 0 1 0 1 1 1 0 0 0 0 1 1 0 0 1 0 1 0 1 1 0 0 0 1 1 0 1180 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 1 0 1 1 1 0 0 1 0 0 1 1100 0 0 0 0 1 1 1 1 0 0 1 0 0 0 1 0 1 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1050 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 0 0 1 0 1 0 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 1 0 1 0

1000 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

Ref. code: 25605809032146MLB

145



1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

970 0 0 1 0 1 1 1 0 0 0 1 1 0 0 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1 950 0 1 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 0 1 0 1 0 0 0 0 0 900 0 0 0 0 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 1 0 1 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1 0 0 0

850 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 0 1 1 1 1 0 1 1 1 1 0 1 1 0 1 0 0 0 1 820 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0

790 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 720 0 1 0 0 0 0 0 1 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0

700 0 0 0 0 0 0 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1 0 1 0 0 0 690 0 0 0 1 1 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1 0 0 0

650 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1 600 0 0 0 1 1 1 0 1 0 1 0 1 0 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 0 0 0 580 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 550 0 0 0 0 0 0 1 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 500 0 0 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0

440 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 0 0

Ref. code: 25605809032146MLB

146



1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

420 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 400 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 0 1 1 1 1 0 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1


ขนาด (คเบส) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 2250 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 0 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 0 1 1 1500 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1200 1 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 0 1 1 1 1 0 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1150 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1000 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 950 0 0 1 0 0 0 0 0 1 1 1 0 1 0 1 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 800 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 650 0 0 1 0 0 0 0 0 0 1 1 0 0 0 0 1 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 550 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

450 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 300 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

Ref. code: 25605809032146MLB

147



1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

250 0 1 1 0 1 1 1 1 1 1 0 0 1 0 0 0 1 1 0 0 0 1 0 1 1 1 0 0 0 0 ไพรเมอร SCoT72

ขนาด (คเบส) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 2750 0 0 0 1 1 0 1 1 0 1 1 1 1 0 1 0 1 1 0 1 0 0 0 0 1 0 0 1 1 0 1450 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1180 0 1 1 1 1 0 1 1 0 0 0 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 1 0 0 0 0 1 0 1 1140 0 1 1 1 1 0 1 1 0 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 0 1 1 960 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 730 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 600 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 520 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 500 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 440 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

380 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 330 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

Ref. code: 25605809032146MLB

148



1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

250 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 ไพรเมอร SCoT73

ขนาด (คเบส) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 2000 1 1 0 1 1 0 1 1 0 1 0 1 1 0 1 0 1 1 0 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1650 0 0 1 0 1 0 0 0 0 0 1 1 1 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1600 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1450 1 1 0 0 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1400 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1350 0 0 0 1 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1300 1 1 1 1 1 1 0 1 1 0 1 1 0 0 1 1 0 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1150 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 0 0 1 0 1 0 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1050 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 1 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1000 1 1 0 1 1 1 0 0 0 1 0 0 1 0 1 0 1 0 1 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0

950 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 0 0 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 870 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

Ref. code: 25605809032146MLB

149



1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

780 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 720 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 700 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

670 1 1 1 1 0 1 1 1 0 1 0 1 1 1 1 0 1 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 650 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

600 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 550 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0

540 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 460 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 0 1 1

400 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 350 0 0 0 0 0 1 0 0 1 0 0 0 1 0 1 0 0 0 0 0 1 1 0 1 0 0 0 0 0 0 300 0 0 0 0 0 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0


2500 0 0 0 0 1 1 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

Ref. code: 25605809032146MLB

150



1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

1850 0 0 1 1 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1750 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1500 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

1350 0 0 0 0 0 1 1 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1200 0 1 0 1 1 1 1 0 1 1 1 1 0 1 0 0 1 1 0 0 0 0 0 1 0 1 0 0 1 0

1100 1 1 1 1 1 0 0 1 1 0 0 1 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 1 1 1 1 1 1 0 980 0 0 0 0 0 1 1 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1 0 0

900 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 800 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

780 0 0 0 0 0 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 720 1 1 0 1 1 0 0 1 1 1 1 1 0 0 0 1 0 1 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1 1 1 600 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 550 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 0 1 1 0 1 1 0 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 400 0 0 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0

350 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

Ref. code: 25605809032146MLB

151



1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

300 0 0 0 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 200 0 0 0 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0


ขนาด (คเบส) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 1520 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1480 1 0 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1 0 0 0 1 0 0 1 1 0 1 0 0 1 1350 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1220 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1080 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1000 1 0 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 1 1 0 1 0 0 1 970 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 1 0 0 880 0 0 1 0 0 1 0 0 0 1 1 0 0 0 0 1 1 1 1 0 1 0 1 1 1 1 1 1 0 0 750 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

600 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 550 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0

Ref. code: 25605809032146MLB

152



1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

500 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 480 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 400 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0

350 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 ไพรเมอร SCoT78

ขนาด (คเบส) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 1600 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 1 0 0 1 1 0 1 0 1 1 1500 1 0 0 1 1 0 0 0 1 1 1 0 0 0 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1300 1 1 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1250 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1150 0 0 0 0 1 1 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 1 0 0 1 1 1 0 0 0 0 0 950 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 0 1 0 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 0 1 1 1 1 900 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1 0 0

850 0 0 0 1 1 1 0 1 1 1 0 0 0 0 0 1 1 0 0 1 0 1 1 1 0 0 0 1 0 1 750 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

Ref. code: 25605809032146MLB

153



1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

700 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 0 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 600 0 0 0 0 0 1 0 0 1 0 1 0 0 0 0 1 1 1 1 1 0 1 1 0 1 1 1 1 0 1

Ref. code: 25605809032146MLB

154

ตารางภาคท 2 คาคะแนนเครองหมายแฮตอารเอพดแตละไพรเมอร

ไพรเมอร A22


1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 2300 1 1 0 1 1 1 1 1 0 1 1 0 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 2100 1 1 0 1 1 1 1 1 0 1 1 0 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1800 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1500 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

1350 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 1150 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

850 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 800 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 740 0 0 1 0 0 1 1 1 1 1 1 0 0 0 0 0 1 1 1 1 0 1 1 1 1 0 1 1 1 0 630 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

450 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 0 0 0 0 1 1 1 1 0 1 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1 ไพรเมอร A24

ขนาด (คเบส) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 2000 0 0 0 0 1 0 1 1 1 1 1 1 1 0 0 0 1 1 0 0 0 0 1 1 1 0 1 1 1 1

Ref. code: 25605809032146MLB

155

ตารางภาคท 2 (ตอ) ไพรเมอร A24 (ตอ)


1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

1550 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1500 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1250 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

1000 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 950 0 0 0 0 0 1 1 1 0 1 0 0 1 1 0 1 0 0 1 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0

800 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 700 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

600 0 0 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 500 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

ไพรเมอร A30 ขนาด (คเบส) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

550 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 ไพรเมอร A31

ขนาด (คเบส) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 2500 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

Ref. code: 25605809032146MLB

156



1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

2000 1 1 0 1 1 1 1 1 0 1 0 0 0 0 0 0 1 1 0 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1600 0 0 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1 0 1 1 0 0 0 1 0 0 1 1550 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 1 0 0 0 0 0 0 1 0 0 1

1450 1 1 0 1 1 1 1 1 0 1 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 0 0 0 1300 1 1 1 1 1 1 1 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 0 0 0 0

1250 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 1 0 0 1 1150 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 1 0 0 1 0 0 0 1 0 1 0 0 0 0

1050 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 0 1 0 1 0 980 0 1 0 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 1

920 1 0 0 1 1 1 0 1 1 0 1 0 0 0 1 0 1 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 850 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 780 0 1 1 0 1 0 0 0 0 1 0 1 0 0 1 1 0 1 0 0 1 0 0 1 1 0 0 0 0 0 720 1 0 0 0 0 0 0 1 0 0 1 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 0 680 0 0 1 1 1 1 1 0 0 1 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0

670 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

Ref. code: 25605809032146MLB

157



1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

590 0 0 0 1 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 500 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 0 450 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

ไพรเมอร A32 ขนาด (คเบส) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

1900 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1500 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1 1 1 0 0 0 1 1 0 1350 1 0 1 1 0 1 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 1300 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 1 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1200 0 0 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1000 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 950 0 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 0 800 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

700 1 1 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 600 1 0 0 1 0 1 1 1 1 1 0 0 1 1 1 1 1 0 1 0 1 1 0 0 1 0 0 1 1 0

Ref. code: 25605809032146MLB

158



1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

580 0 0 1 0 0 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 1 0 0 0 0 500 1 1 0 1 1 0 0 1 1 1 0 1 0 1 1 0 0 0 1 1 0 0 0 1 1 0 1 1 1 1

ไพรเมอร B22

ขนาด (คเบส) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 1850 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 1 1 0 1 1 0 1 1500 0 0 0 1 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1 1 0 1 1200 0 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1050 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 950 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 860 1 1 1 1 0 0 1 0 1 0 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 0 1 1 1 0 1 1 1 1 700 0 0 0 1 1 1 1 0 1 0 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 0 1 1 0 0 640 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 600 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

500 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 450 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

Ref. code: 25605809032146MLB

159

ตารางภาคท 2 (ตอ) ไพรเมอร B23


1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

2500 0 0 0 1 1 1 1 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 2100 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1850 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 0 1 1 1 1

1750 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1550 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

1350 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1250 0 0 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

1150 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1000 0 0 0 1 1 1 1 1 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 0 1 0 1 1 1 1 0 1 1

950 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 880 0 1 0 1 1 1 1 0 0 0 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1 1 0 0 0 1 1 800 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 650 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 550 1 0 1 1 1 0 0 1 0 1 0 0 1 1 0 0 1 0 1 0 0 0 1 1 0 1 0 1 1 1

Ref. code: 25605809032146MLB

160

ตารางภาคท 2 (ตอ) ไพรเมอร B32


1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

1700 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 0 1 1 0 0 1 1 1 1 0 0 1 1 1 1 1 1 1400 1 1 0 1 1 1 1 1 0 1 1 1 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1220 1 1 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 0 1 0 0 1 1 1 1 1 0 1 1

1100 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1000 1 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1

970 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 850 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 0 0 1 1 1 1 1 1 0 1 0 1 1 1 0 0 0

750 1 1 1 0 1 1 1 1 0 1 0 0 1 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 680 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0

580 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 400 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 0 1 1 0 1 0 0

ไพรเมอร C21 ขนาด (คเบส) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

1950 1 1 1 1 1 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 0 1 1800 1 0 1 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 1 0 0 0

Ref. code: 25605809032146MLB

161

ตารางภาคท 2 (ตอ) ไพรเมอร C21 (ตอ)


1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

1700 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1600 0 0 1 1 1 1 0 0 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0 1 0 1500 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

1450 0 1 0 1 0 1 1 0 1 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 0 1400 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0

1200 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 0 1 0 0 1150 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 0 0 0 1 1 0 0 1 0

1050 0 0 1 0 1 1 0 0 0 1 1 1 1 1 0 1 0 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1000 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1 1 1

950 1 1 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 0 0 850 0 0 1 1 1 1 0 1 0 0 1 1 1 1 1 0 1 0 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 800 1 1 0 1 1 1 1 0 1 0 1 0 1 0 0 0 0 1 0 0 0 1 1 0 1 1 1 1 1 1 750 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1 0 0 0 0 1 0 0 1 0 0 0 700 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0

680 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 1 0 0

Ref. code: 25605809032146MLB

162



1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

650 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 590 0 0 1 0 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 1 0 0 1 0 1 0 0 1 1 1 1 1 1 1 470 1 1 0 1 0 0 0 1 1 0 0 0 1 1 1 1 0 1 1 0 1 0 1 0 1 1 1 1 1 1

ไพรเมอร C22 ขนาด (คเบส) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

2500 0 0 0 1 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 1750 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1300 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1200 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1150 1 1 1 0 1 1 1 0 1 1 0 0 1 0 1 0 1 1 0 1 0 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1050 0 0 0 0 0 1 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 0 950 0 0 1 0 1 0 0 0 0 1 1 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 900 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 0 0 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

860 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 820 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0

Ref. code: 25605809032146MLB

163



1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

750 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 650 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 0 0

ไพรเมอร C28

ขนาด (คเบส) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 1600 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1500 0 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1300 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1150 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1050 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 950 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 800 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 750 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 650 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

450 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 0 1

Ref. code: 25605809032146MLB

164

ตารางภาคท 2 (ตอ) ไพรเมอร C31


1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

1500 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 1 0 1 0 0 0 0 1 0 0 0 1 0 1200 0 0 0 0 0 1 1 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 1050 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

900 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 800 1 1 0 1 0 1 1 1 0 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 0 1 1 0 1 1 1 1 1 1

700 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 580 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1

500 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1 1 0 430 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 1 0 0 0 1 1 0 1 1 0 1 0 0 0 0 1 0 1 1 0

380 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 ไพรเมอร D31

ขนาด (คเบส) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 2000 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

1750 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 0 1500 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

Ref. code: 25605809032146MLB

165

ตารางภาคท 2 (ตอ) ไพรเมอร D31 (ตอ)


1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

1275 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 0 0 1 1 0 1 0 1 0 1 1 1 1150 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 0 1 1 1 1 1000 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1

850 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 800 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 1 1 0 1 1 1 1

700 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 610 1 1 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

500 1 1 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0 1 1 1 0 0 0 470 0 0 1 0 1 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0

400 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 ไพรเมอร E22

ขนาด (คเบส) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 1480 1 1 1 1 0 1 0 1 0 1 1 1 0 0 1 1 1 1 1 0 1 1 0 1 1 0 1 0 0 1

1300 1 1 0 0 0 1 0 1 0 0 1 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 1 1 0 1 0 0 1 1100 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

Ref. code: 25605809032146MLB

166

ตารางภาคท 2 (ตอ) ไพรเมอร E22 (ตอ)


1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

1000 1 1 1 1 0 0 0 1 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 1 1 1 0 0 1 1 1 1 0 1 1 850 1 1 1 1 0 1 0 1 1 1 1 1 0 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 700 0 1 0 1 0 1 0 1 0 0 0 0 1 1 0 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1

600 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 480 0 0 0 1 0 0 0 0 1 0 0 1 0 0 0 1 0 1 1 0 1 1 0 1 1 0 1 1 0 1

350 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 ไพรเมอร E23

ขนาด (คเบส) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 1900 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 1 0 1 0 1 0 0 1750 1 1 0 1 1 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1500 0 0 0 0 1 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 1 1350 1 1 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1200 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1 1 0 0 0 0 1 1 0 1 0 0 0 0

1120 1 1 1 0 0 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1000 0 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

Ref. code: 25605809032146MLB

167



1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

950 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 0 1 1 0 0 1 0 1 1 0 0 0 0 1 0 900 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 0 1 1 1 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 850 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 0 0 1 1 0

800 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 1 1 0 1 0 0 750 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 0 1 0 0 1 0 1 1

650 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 1 0 0 0 0 0 600 1 0 0 1 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 0 0 0 0 0 1 1 0 1

540 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 500 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

440 0 0 1 1 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 1 0 0 1 0 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 ไพรเมอร E24

ขนาด (คเบส) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 2100 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1

1750 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1600 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

Ref. code: 25605809032146MLB

168



1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

1350 0 0 0 0 0 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 0 0 1 1 1 1 1 0 1 1 1180 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1150 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

1130 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 0 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 950 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

800 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 750 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 0 1 1 0 1 1 1 1 0 0 1 1

680 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 650 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 0 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1

600 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 1 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 500 0 0 1 0 0 0 0 1 1 1 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 0 0 1 1 0 1 1 0 400 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 1 0 1 1 0 350 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 300 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

Ref. code: 25605809032146MLB

169

ตารางภาคท 2 (ตอ) ไพรเมอร E26


1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

2000 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 0 0 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1500 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 0 0 0 0 1350 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1 0 1 0 1 1 0 0 0 0 1 1 1 0 1 1 0 0

1300 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 0 0 0 1 0 1 0 0 1 1 0 1 0 0 0 0 0 0 1 1 1150 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

1000 0 0 0 0 0 1 1 0 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 950 0 0 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

800 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 0 1 0 1 1 1 1 1 500 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0

ไพรเมอร E31 ขนาด (คเบส) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

1500 1 1 0 1 1 1 1 0 0 0 1 0 0 0 1 1 1 0 0 1 1 1 1 1 1 1 0 0 1 1 1300 0 0 1 1 0 1 1 0 0 1 1 0 0 0 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 0 1 0 1 1 1

1200 1 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 0 0 0 0 1150 0 0 1 1 1 1 1 0 1 1 1 0 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1

Ref. code: 25605809032146MLB

170



1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

1000 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 1 0 1 0 0 0 0 750 0 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 0 1 1 1 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1 0 1 650 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

550 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 470 0 0 1 1 0 0 0 1 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0

400 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 0 1 1 0 0 0 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 0 ไพรเมอร E32

ขนาด (คเบส) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 1500 1 1 1 0 1 1 1 0 1 1 1 0 0 0 0 1 1 1 1 0 0 1 1 0 0 1 1 1 0 1 1300 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 0 0 0 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1100 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1050 1 1 0 1 1 1 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 0 0 0 0 1 1 0 0 0 0 0 1000 0 0 1 1 1 1 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 0 0 0 1 0 0 0 0 1 0 1

900 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 750 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

Ref. code: 25605809032146MLB

171



1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

600 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 400 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 300 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

ไพรเมอร F31 ขนาด (คเบส) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

1350 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1320 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1150 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1050 0 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1000 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 950 0 1 1 1 1 1 1 1 1 0 0 1 0 0 0 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 930 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 900 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

890 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1 1 0 1 1 1 0 0 0 0 0 1 1 1 1 0 850 0 0 0 1 1 1 0 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

Ref. code: 25605809032146MLB

172

ตารางภาคท 2 (ตอ) ไพรเมอร F31 (ตอ)


1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

800 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 750 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 700 0 0 0 0 1 0 1 0 0 1 1 1 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

550 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

Ref. code: 25605809032146MLB

173

115

ประวตผเขยน

ชอ นางสาวทศนย สงหศลารกษ วนเดอนปเกด 26 มนาคม พ.ศ. 2536 ต าแหนง ปการศกษา 2558 วทยาศาสตรบณฑต

(เทคโนโลยชวภาพ) มหาวทยาลยธรรมศาสตร ทนการศกษา พ.ศ. 2560 : ทนสนบสนนงานวจย ประเภททนวจย

ทวไปส าหรบนกศกษาบณฑตศกษา พ.ศ. 2560 : ทนน าเสนอผลงานวทยานพนธ/สารนพนธ ภายในประเทศ

ผลงานทางวชาการ

ทศนย สงหศลารกษ, จฑามาศ เจยมเจอจนทร, เปรมณช ขนปกษ, ธระชย ธนานนต และนฤมล ธนานนต. 2560 . การประเมนความสมพนธทางพนธกรรมและการจ าแนกขาวปลกบางพนธดวยเครองหมายสกอต. Thai Journal of Science and Technology. 6(3): 252-261.

ทศนย สงหศลารกษ, ธระชย ธนานนต และนฤมล ธนานนต. 2561 . การประเมนความสมพนธทางพนธกรรมและการจ าแนกทเรยนดวยเครองหมายแฮตอารเอพด . Thai Journal of Science and Technology. 7(1): 89-98.

ทศนย สงหศลารกษ, ธระชย ธนานนต และนฤมล ธนานนต. 2561 . การประเมนความสมพนธทางพนธกรรมและการจ าแนกทเรยนดวยล าดบนวคลโอไทดของยน rpoC1. Thai Journal of Science and Technology. 7(2): 190-200.

ทศนย สงหศลารกษ, ธระชย ธนานนต และนฤมล ธนานนต. 2561 . การประเมนความสมพนธทางพนธกรรมและการจ าแนกทเรยนดวยล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL. Thai Journal of Science and Technology. 7(2): 201-210.

Öøðø ö îÙüöÿöóîídìÜóîí Öøøö úÖøøï ó îí dì ø÷î...

Documents