· 전구이온 (m/z) 선택이온 (m/z) 조각이온화에너지 (v) 정량 이온 확인 이온...

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제9부 방부제류

(Preservative)

1. 일반사항

1.1. 적용범위

이 시험방법은 위해우려제품에 함유되어 있는 메틸아이소티아졸린(Methylisothiazolinon,

MIT), 클로로메틸아이소티아졸린(Chloromethylisothiazolione, CMIT), 벤즈아이조티아졸

린(Benzisothiazolione, BIT)의 분석방법으로 전처리과정 및 기기분석에 대해 자세히 기술

하였다. 이 시험방법은 섬유유연제 등에 적용할 수 있다.

2. 고성능액체크로마토그래피법(HPLC)

2.1. 측정원리



린(Benzisothiazolione, BIT)의 측정방법으로서, 시료를 메탄올로 초음파 추출하여 액체크로

마토그래프-UV검출기로 분석하는 방법이다.

2.2. 분석기기 및 기구

2.2.1. 고성능액체크로마토그래프(HPLC/UV)

2.2.2. 볼텍스 믹서(vortex mixer)

2.2.3. 초음파추출기(Ultrasonic bath)

2.2.4. 원심분리기

2.2.5. 질소농축기

2.2.6. 회전감압농축기

2.2.7. 부피플라스크 50 ～ 1000 mL의용량으로유리또는폴리테트라플루오로에틸렌(PTFE) 재질의것

2.2.8. 피펫 0.1 ～ 10 mL 의 용량으로 유리 또는 폴리테트라플루오로에틸렌(PTFE) 재질의 것

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2.3. 시약 및 표준용액

이 시험방법에 사용되는 시약들은 특별히 순도와 등급이 명시된 경우를 제외하고는

HPLC 또는 잔류농약급을 사용하여야 하며, 다른 시약의 경우는 특급 (GR 또는 ACS 등

급) 이상을 사용한다.

2.3.1. 메탄올 (Methanol, CH3OH)

2.3.2. 아세토니트릴 (Acetonitrile, C2H3N)

2.3.3. 헥산(n-Hexane, C6H14)

2.3.4. 아세톤(Acetone, CH3COCH3)

2.3.5. 표준용액

방부제류 분석에 사용되는 표준용액 메틸아이소티아졸린(MIT), 클로로메틸아이소티아졸

린(CMIT), 벤즈아이조티아졸린(BIT)이 각각 1000 mg/L의 농도수준으로 혼합된 표준용액

으로서 표준물질생산기관에서 제조되어 시판되는 표준용액을 구입하여 사용할 수 있다.

표준원액은 최대 1년 또는 표시된 사용기한까지 사용할 수 있으나 10 mg/L이하의 표

준용액은 최소한 1개월 마다 새로 조제해야 한다.

번호 IUPAC 명 관용명 약어 CAS 번호1)

1 2Methylisothiazol3(2H)-one Methylisothiazolinone MIT 2682204

2 5Chloro2methyl4isothiazolin3one Chloromethylisothiazolione CMIT 26172554

3 1,2Benzisothiazol3(2H)one Benzisothiazolione BIT 2634335

1) CAS 번호 : Chemical Abstracts Service registry number

2.4. 시료채취 및 준비

시료를 채취하기 전에 시료를 잘 혼합하여야 하며 이것이 불가능할 경우에는 전체의 성

질을 대표할 수 있도록 서로 다른 곳에서 채취하여야 한다. 다만, 서로 다른 종류의 시료가

혼재되어 있다고 판단될 때에는 혼재된 시료의 성분별로 각각에 대해 시료를 채취할 수 있다.

2.4.1. 액체류

액체류의 경우 시료를 잘 혼합한 다음 적당한 채취 도구를 사용하여 한 번에 일정량씩

채취하여야 한다.

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2.4.2. 고체류

고체류의 경우 전체의 성질을 대표할 수 있도록 채취하여 한다. 따라서 다섯 지점에서 시

료를 채취한 한 다음 잘 혼합하여 일정량을 시료로 사용한다.

2.5. 시험절차

2.5.1. 전처리

2.5.1.1. 시료 약 1 ～ 4 g을 50 mL 플라스크에 넣고 메탄올을 10 ～ 20 mL 가한 후 초음파로

추출한 다음 실온으로 방냉하여 메탄올로 표선을 맞춘다. 이후 0.45 um 멤브레인

필터로 여과하여 시험용액으로 사용한다.

2.5.1.2. 겔(메탄올에 녹지 않는 액상 포함) 및 고상시료의 경우, 시료 1 g을 달아 삼각플라

스크에 넣고 아세톤 20 mL 및 n-헥산 20 mL을 가한 후 1시간 동안 초음파 추출

하고, 여과 후 회전식 감암농축기에서 1 mL 정도까지 농축한 다음, 부피플라스크

에 넣고 메탄올로 채워 100 mL로 한 것을 시험용액으로 사용한다.

2.5.2. 고성능액체크로마토그래프 분석

전처리에서 얻은 시험용액 20 µL를 취하여 고성능액체크로마토그래프에 주입하여 분석한다.

<표 1> 고성능액체크로마토그래프에의한MIT, CMIT, BIT의 분석조건(예)

항 목 조 건

컬럼 C18 (4.6 mm × 250 mm, 5 µm)

이동상

A : Water B : Methanol

시간 A(%) B(%)

0～5 70 30

8 5 95

12 5 95

15 70 15

20 70 15

유속 0.7 mL/min

파장 280 nm, 320nm

주입량 20 µL

컬럼 온도 30 ℃

2.5.3. 검정곡선의 작성

검정곡선 작성용 표준용액(100 mg/L)을 0 ～ 25mL를 단계별로 취하여 50 mL 부피플라스

크에 넣고 메탄올로 표선까지 채운다. 단, 정량한계 이상농도를 3 개 이상 포함하여야 한다.

분석물질의 농도(CS)를 취하여 가로축(x 축)에, 각 표준용액에 해당하는 피크 면적 (Ax)을

세로축 (y 축)에 취하여 검정곡선을 작성한다.

2.6. 결과보고

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2.6.1. 계산

검정곡선에서 얻어진 분석물질의 농도를 사용하여 다음의 식으로부터 제품 중 메틸아이소

티아졸린(MIT), 클로로메틸아이소티아졸린(CMIT), 벤즈아이조티아졸린(BIT)의 농도를 각

각 계산한다.

제품 중 분석물질의 농도(mg/kg) =

×× (식 1)

여기서, C1 : 시료의 MIT, CMIT, BIT 농도(mg/L)

C0 : 방법바탕시료의 MIT, CMIT, BIT 농도(mg/L)

ƒ : 희석배수(검정곡선의 범위를 벗어날 경우)

V : 시료 추출용액의 부피(mL)

Wd : 제품시료의 무게(g)

2.7. 참고문헌

2.7.1. 식품의약품안전평가원, 화장품 중 배합한도성분 분석법 가이드라인(2015)

2.7.2. (구) 자율안전부속서 07

(1) 시험장비

1) HPLC(High performance liquid chromatography)

2) GC-MSD 또는 LC-MSD

3) 50 mL 부피 플라스크

(2) 시험방법

1) 약 1 ~ 4 g을 50 mL 플라스크에 넣고 메탄올을 10 ~ 20 mL 가한 후 초음파로 추출한다

2) 막 필터 여과하고 여액의 분취량을 기기분석을 실시한다. 다만 검출한계

(Methyl Isothiazolin 5 mg/kg , 5-chloro methyl isothiazolin 15 mg/kg, paraben류

(Methyl paraben, Ethyl paraben, Propyl paraben) 5 mg/kg, Phenoxy ethanol

15 mg/kg, Triclosan 5 mg/kg) 미만 농도는 ‘검출 안 됨’으로 기록한다.

검출된 피크는 GC-MSD 또는 LC-MSD로 확인한다.

3) 다음의 분석조건을 참고적으로 활용할 수 있다.

4) 분석조건

가) Column : C18, 5 ㎛, 250 mm × 4.6 mm

나) Detector : UV / DAD (255, 270, 284 nm)

다) Injection Volumn : 20 μL

라) Column Temperature : 30 ℃

마) Eluent

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Min DW MeOH Flow rate

0~5 70 30

0.7 mL/min30 5 95

35 5 95

40 70 30

(3) 시험보고서에 포함되어야 할 정보

1) 분석조건(컬럼 종류 등)

2) 정량 중에 파악되거나 또는 재현성과 반복성 기준이 충족되지 않는 경우, 모든 비이상적인 특

징

HPLC 크로마토그램

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3. 액체크로마토그래피/질량분석법(LC/MS)

3.1. 측정원리



린(Benzisothiazolione, BIT)의 측정방법으로서, 시료를 증류수로 희석하거나 용매로 초음

파 추출하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석하는 방법이다.


3.2.1. 액체크로마토그래프/질량분석기(LC/MS) 또는 동등이상

3.2.2. 볼텍스 믹서(vortex mixer)

3.2.3. 초음파추출기 (Ultrasonic bath)

3.2.4. 원심분리기

3.2.5. 정제용 컬럼 알루미나 컬럼 및 비 다공성 흑연탄소 카트리지를 사용

3.2.6. 질소농축기

3.2.7. 회전감압농축기







3.3.1. 메탄올 (Methanol, CH3OH)

3.3.2. 메틸렌 클로라이드 (Methylene chloride, CH2Cl2)

3.3.3. 톨루엔 (Toluene, C6H5CH3)

3.3.4. 추출용매(메틸렌 클로라이드 : 톨루엔 = 9 : 1 (v/v))

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3.3.5. 표준용액


린(CMIT), 벤즈아이조티아졸린(BIT)이 각각 1000 mg/L의 농도수준으로 혼합된 표준용액

으로서 표준물질생산기관에서 제조되어 시판되는 표준용액을 구입하여 사용할 수 있다.

표준원액은 최대 1년 또는 표시된 사용기한까지 사용할 수 있으나 10 mg/L이하의 표

준용액은 최소한 1개월 마다 새로 조제해야 한다.

번호 IUPAC 명 관용명 약어 CAS 번호1)



3 1,2Benzisothiazol3(2H)one Benzisothiazolione BIT 2634335






3.4.1. 액체류



3.4.2. 고체류



3.5. 시험절차

3.5.1. 전처리(초음파추출법)

3.5.1.1. 시료 1g 을 분석용 저울로 측정하여 15 mL 뚜껑이 있는 원심분리용 코니컬 튜브

용기에 넣은 후, 대체표준물질(OIT-d17)을 500 ng 첨가하고 메틸렌클로라이드 :

톨루엔 =1 : 9 혼합용액을 14 mL 넣고 뚜껑을 잘 닫는다.

[주] 대체표준물질(OIT-d17)의 첨가 농도는 각 실험실의 기기감도에 따라 조절하여

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사용한다.

3.5.1.2. 볼텍스 믹서를 이용해 1분간 잘 혼합한 뒤, 10분간 초음파 추출기(200watt, 15℃)를

이용해 추출하고, 5분간 상·하 방향으로 흔들어 잘 혼합한다.

3.5.1.3. 추출이 끝난 시료는 원심분리기에 넣고 원심분리 후(4000 rpm, 10min) 상등액과

분리한다.

3.5.2. 정제

3.5.2.1. 상등액과 분리한 유기용매 층의 시료를 그림 1과 같이 충전한 알루미나 카트리지에

통과 시킨다. 통과시킨 후 메틸렌클로라이드를 6 mL를 카트리지에 통과시켜 잔여

추출시료를 충분히 빠져나오게 한다.

알루미나 카트리지

[주] 시료를 카트리지에 통과시킬 때 유속은 0.2 mL/min 정도를 유지한다.

3.5.2.2. 세정용 제품 등 거품이 다량 포함된 시료의 경우 알루미나 카트리지와 더불어 추가로

비 다공성 흑연탄소 카트리지를 통과시킨다.

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비 다공성 흑연탄소와 알루미나 카트리지의 연결방법

[주1] 시료를 카트리지에 통과시키기 전에 알루미나를 메틸렌클로라이드 6 mL를 먼저

통과시켜 알루미나를 활성화 시킨 후 사용한다.

[주2] 비 다공성 흑연탄소 카트리지를 먼저 통과 시킨 후 알루미나 카트리지를 통과

시킨다.

3.5.3. 농축

3.5.3.1. 추출과 정제를 한 시료를 질소농축기를 이용하여 25℃에서 약 100 μL 까지 농축한

다음 메탄올 0.5 mL을 넣어 용매를 치환한다.

3.5.3.2. 메탄올로 치환된 시료에 Isoproturon-d6를 200 ng을 첨가하고, 최종부피가 1 mL가

되도록 조절한다.

[주] 실린지 첨가용 내부표준물질(Isoproturon-d6)의 첨가 농도는 각 실험실의 기기

감도에 따라 조절하여 사용한다.

3.5.4. 액체크로마토그래프/질량분석기 분석

장비제조사에서 제공하는 매뉴얼에 따라 해당 표준물질을 사용하여 분석조건을 최적화한다.

(다만 측정질량은 분석기기조건별 감도, 시료 내 존재하는 분석대상물질에 대한 간섭물질의

영향 등으로 분석결과의 오차가 발생할 우려가 있는 경우 다른 질량의 적용도 가능하다.)

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<표 1> 액체크로마토그래프/질량분석기에 의한 MIT/CMIT 분석조건 (예)액체크로마토그래프 Agilent 1200 high performance liquid chromatography system 등

질량분석기 Agilent 1100 Series LC/MSD 등컬럼 Hypersil gold column (C18, 250 x 4.6 mm, 5μm)

가드 컬럼 ZORBAX Eclipse XDB-C18 guard cartridge(5 μm, 4.6 x 12.5 mm)이동상 A : Water / B : Methanol

용매조건

Time %B Flow (Unit : mL/min)5 50 0.3511 50 0.3514 50 0.425 90 0.535 100 0.5

주입량 10 μL컬럼 온도 25 ℃

이온화 분석모드 Positive ion electrospray가스유속 9 L/min 가스온도 350℃

네블라이저 압력 40 psig캐필러리 볼테이지 4000 V

<표 2> 액체크로마토그래프/질량분석기에 의한 BIT 분석조건 (예)액체크로마토그래프 Agilent 1200 high performance liquid chromatography system

질량분석기 Agilent 1100 Series LC/MSD컬럼 Hypersil gold column (C18, 250 x 4.6 mm, 5μm)

가드 컬럼 ZORBAX Eclipse XDB-C18 guard cartridge(5 μm, 4.6 x 12.5 mm)

이동상 A : 0.5% Formic acid / B : Methanol

용매조건

Time %B Flow (Unit : mL/min)4 60 0.610 70 0.615 80 0.617 90 0.620 80 0.622 80 0.623 70 0.624 70 0.6

주입량 10 μL컬럼 온도 25 ℃

이온화 모드 Positive ion electrospray가스유속 9 L/min 가스온도 350℃

네뷸라이져 압력 40 psig캐필러리 볼테이지 4000 V

<표 3> 분석조건<표1>의 각 분석물질의 머무름 시간, 선택이온 및 조각이온화에너지

분석물질

머무름시간

(min)

전구이온(m/z)

선택이온(m/z)

조각이온화에너지(V)

정량이온

확인이온(1)

확인이온(2)

정량이온

확인이온(1)

확인이온(2)

MIT 10.180 116 138 116 101 120 110 180CMIT 12.822 150 172 150 135 70 120 200

OIT-d17 31.886 231 253 231 200 160Isoproturon-d6 28.284 213 235 213 180 120

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<표 4> 분석조건<표2>의 각 분석물질의 머무름 시간, 선택이온 및 조각이온화에너지

분석물질

머무름시간

(min)

전구이온(m/z)

선택이온(m/z)

조각이온화에너지(V)

정량이온

확인이온(1)

확인이온(2)

정량이온

확인이온(1)

확인이온(2)

BIT 7.217 152 174 152 134 90 120 210OIT-d17 19.896 231 253 231 200 160

Isoproturon-d6 13.651 213 235 213 180 120


각 분석물질 분석을 위한 검정곡선 표준용액제조 방법은 다음과 같다. 분석물질에 대한 기기의

감응도를 평가를 위한 농도별 검정곡선 작성에 이용한다.

단위 : ng/mL

분석물질 CS1 CS2 CS3 CS4 CS5 CS6 CS7

표준물질 MIT 20 50 100 200 250 500 1000

표준물질 CMIT 20 50 100 200 250 500 1000

표준물질 BIT 20 50 100 200 250 500 1000

대체표준물질 OIT-d17 500 500 500 500 500 500 500

내부표준물질 Isoproturon-d6 200 200 200 200 200 200 200

*CS : Calibration Standard (검정곡선)

3.6. 결과보고

3.6.1. 계산

3.6.1.1. 각 분석대상물질의 표준용액에 대해 최소 5개 이상의 농도를 선택하여 검정곡선을 작성

한다.

3.6.1.2. 각 선택이온에 대한 크로마토그램을 작성하고, 표준물질의 선택이온과 첨가된 내부표

준물질의 선택이온의 피크면적비와 내부표준물질의 농도 비의 관계를 그래프로 나타

낸다.

여기서, y : 표준물질과 내부표준물질의 선택이온의 피크 면적비

x : 표준물질과 내부표준물질의 농도 비

a : 검정곡선의 기울기

b : 검정곡선의 절편

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3.6.1.3. 각 표준물질의 피크 면적과 이에 대응하는 내부표준물질의 상대감응계수(RRF)를 구

하고 구해진 상대감응계수의 평균값을 이용하여 농도를 계산한다.

RRFAi

An×Cn

Ci

여기서, An : 표준물질의 선택이온의 피크 면적

Ai : 표준물질에 첨가된 내부표준물질의 선택이온의 피크면적

Ci : 내부표준물질의 농도

Cn : 표준물질의 농도

농도AiAs×RRF

Ii×V

여기서, As : 시료에 함유된 대상물질의 선택이온의 피크면적

Ai : 시료에 첨가된 내부표준물질의 선택이온의 피크 면적

Ii : 시료에 첨가된 내부표준물질의 양(mg)

V : 시료량(kg)

RRF : 검량선으로부터 얻어진 상대감응계수의 평균

3.7. 참고문헌

“ 내용없음”

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4. 기체크로마토그래피/질량분석법(GC/MS)

4.1. 측정원리



린(Benzisothiazolione, BIT)의 측정방법으로서, 시료를 용매로 희석하거나 고상카드리지

로 추출하여 기체크로마토그래프/질량분석기로 분석하는 방법이다.


4.2.1. 기체크로마토그래프/질량분석기(GC/MS)

4.2.2. 정제용 컬럼 알루미나 컬럼 및 비 다공성 흑연탄소 카트리지를 사용







4.3.1. 아세톤(acetone, CH3COCH3)

4.3.2. 표준용액


린(CMIT)이 각각 1000 mg/L의 농도수준으로 혼합된 표준용액으로서 표준물질생산기관

에서 제조되어 시판되는 표준용액을 구입하여 사용할 수 있다. 표준원액은 최대 1년 또

는 표시된 사용기한까지 사용할 수 있으나 10 mg/L이하의 표준용액은 최소한 1개월

마다 새로 조제해야 한다.

번호 IUPAC 명 관용명 약어CAS

번호1)




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4.4.1. 액체류



4.4.2. 고체류



4.5. 시험절차

4.5.1. 전처리(희석법)

4.5.1.1. 시료 1 g을 0.0001 g 단위까지 정밀히 달아 신속히 100ml 용량플라스크에 넣고 아세톤에

녹여 100 mL로 한다.

4.5.1.2. 분석 전에 0.45um 시린지 필터를 사용하여 검액으로 한다.

4.5.1.3. 검액에 혼합표준물(MIT/CMIT) 1000 ng을 주입하고 내부표준물질(atrazine-d5 또는

OIT-d17)을 주입하여, 표준물 및 내부표준물질의 회수율을 확인하여 각 추출방법에

대한 회수율을 산출한다.

4.5.2. 추출(MSPD추출법)

시료 0.02mL

시료 용기 안에서 Na2So4 2g 과 시료 혼합

　알루미나 2g을 넣고 다시 혼합

10 mL 카트리지에 충진제 충진

아세톤 10mL로 추출

GC/MS

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4.5.2.1. 추출을 위한 충진제는 황산나트륨 2 g 을 저울로 측정하여 20 mL 유리 바이알에 넣

은 후, 액상 제품 0.02 mL 를 넣어 준다. 바이알 뚜껑을 닫고 제품의 물기를 다 흡수

할 수 있게 잘 섞어준다. 알루미나 2 g 을 저울로 측정하여 바이알에 추가하여 잘 섞어

제조한다.

4.5.2.2. 10 mL 용량의 빈 카트리지에 프릿을 넣고, 3.5.2.1에서 제조한 충진제를 넣어준 후,

프릿으로 고정 후 사용한다.

4.5.2.3. 추출 전 추출한 용액을 담을 바이알의 무게를 저울로 측정한다. 제작된 충진제가 충

진 된 카트리지에 10mL의 아세톤을 5 mL씩 나누어 두 번 통과 시켜준다. 유속은 중

력속도로 한다. 추출이 끝나고 추출액이 담긴 바이알의 무게를 저울로 측정한다.

4.5.2.4. 추출 후와 추출 전의 바이알의 무게를 빼주고 용액의 무게에 밀도를 나누어 주어 부

피를 계산한다.

4.5.3. 기체크로마토그래프/질량분석기 분석

장비제조사에서 제공하는 매뉴얼에 따라 해당 표준물질을 사용하여 분석조건을 최적화한다.

(다만 측정질량은 분석기기조건별 감도, 시료 내 존재하는 분석대상물질에 대한 간섭물질의

영향 등으로 분석결과의 오차가 발생할 우려가 있는 경우 다른 질량의 적용도 가능하다.)

<표 1> 기체크로마토그래프/질량분석기에 의한 MIT/CMIT 분석조건 (예)

기체크로마토그래프Agilent Gas Chromatography/Mass Selective

Detector(GC-MSD 7890) 등질량분석기 Agilent 5975C MSD 등

컬럼 DB-5MS (30m × 0.25 mm × 0.35 μm Film)

이동상 N2

컬럼 조건Initial : @60℃ (1min)

Ramp : 10℃/min to 150℃(4min)

Final : 20℃/min to 280℃(2min)

주입량 2 μL

주입 컬럼 온도 250 °C

이온화 분석모드 scan&sim mode(MIT m/z : 115, 87 CMIT m/z : 149, 85)

가스유속 1 mL/min

스캔 범위 50~400

이온화 볼테이지 70 eV

<표 2> 분석조건<표 1>의 각 분석물질의 머무름 시간, 선택이온 및 조각이온화에너지

분석물질 머무름 시간(min)

전구이온(m/z)

선택이온(m/z)

정량 이온 확인이온MIT 7.623 115 115 87

CMIT 8.310 149 149 85


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각 분석물질 분석을 위한 검정곡선 표준용액제조 방법은 다음과 같다. 분석물질에 대한 기기의

감응도를 평가를 위한 농도별 검정곡선 작성에 이용한다.

단위 : ng/mL분석물질 CS1 CS2 CS3 CS4 CS5 CS6 CS7

표준물질 MIT 20 50 100 200 250 500 1000

표준물질 CMIT 20 50 100 200 250 500 1000*CS : Calibration Standard (검정곡선)

4.6. 결과보고

4.6.1. 계산

4.6.1.1. 각 분석대상물질의 표준용액에 대해 최소 5개 이상의 농도를 선택하여 검정곡선을 작성

한다.

4.6.1.2. 각 선택이온에 대한 크로마토그램을 작성하고, 표준물질의 선택이온과 첨가된 내부표

준물질의 선택이온의 피크면적비와 내부표준물질의 농도 비의 관계를 그래프로 나타

낸다.

여기서, y : 표준물질과 내부표준물질의 선택이온의 피크 면적비

x : 표준물질과 내부표준물질의 농도 비

a : 검정곡선의 기울기

b : 검정곡선의 절편

4.6.1.3. 각 표준물질의 피크 면적과 이에 대응하는 내부표준물질의 상대감응계수(RRF)를 구

하고 구해진 상대감응계수의 평균값을 이용하여 농도를 계산한다.

RRFAi

An×Cn

Ci

여기서, An : 표준물질의 선택이온의 피크 면적

Ai : 표준물질에 첨가된 내부표준물질의 선택이온의 피크면적

Ci : 내부표준물질의 농도

- 109 -

Cn : 표준물질의 농도

농도AiAs×RRF

Ii×V

여기서, As : 시료에 함유된 대상물질의 선택이온의 피크면적

Ai : 시료에 첨가된 내부표준물질의 선택이온의 피크 면적

Ii : 시료에 첨가된 내부표준물질의 양(mg)

V : 시료량(kg)

RRF : 검량선으로부터 얻어진 상대감응계수의 평균

4.7. 참고문헌

4.7.1. (구) 자율안전부속서 07

(1) 시험장비

1) HPLC(High performance liquid chromatography)

2) GC-MSD 또는 LC-MSD

3) 50 mL 부피 플라스크

(2) 시험방법

1) 약 1 ~ 4 g을 50 mL 플라스크에 넣고 메탄올을 10 ~ 20 mL 가한 후 초음파로 추출한다

2) 막 필터 여과하고 여액의 분취량을 기기분석을 실시한다. 다만 검출한계

(Methyl Isothiazolin 5 mg/kg , 5-chloro methyl isothiazolin 15 mg/kg, paraben류

(Methyl paraben, Ethyl paraben, Propyl paraben) 5 mg/kg, Phenoxy ethanol

15 mg/kg, Triclosan 5 mg/kg) 미만 농도는 ‘검출 안 됨’으로 기록한다.

검출된 피크는 GC-MSD 또는 LC-MSD로 확인한다.

3) 다음의 분석조건을 참고적으로 활용할 수 있다.

4) 분석조건

가) Column : C18, 5 ㎛, 250 mm × 4.6 mm

나) Detector : UV / DAD (255, 270, 284 nm)

다) Injection Volumn : 20 μL

라) Column Temperature : 30 ℃

마) Eluent

min DW MeOH Flow rate

0~5 70 30

0.7 mL/min30 5 95

35 5 95

40 70 30

- 110 -

(3) 시험보고서에 포함되어야 할 정보

1) 분석조건(컬럼 종류 등)

2) 정량 중에 파악되거나 또는 재현성과 반복성 기준이 충족되지 않는 경우, 모든 비이상적인 특

징

HPLC 크로마토그램

· 전구이온 (m/z) 선택이온 (m/z) 조각이온화에너지 (v) 정량 이온 확인 이온...

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