equipo4_medios_de_cultivo_microbiologia
TRANSCRIPT
Universidad Nacional Autónoma De
México
Facultad de Estudios Zaragoza
Medios de Cultivo
Equipo 4
Castañeda Piña Juan Carlos
Escobar Blanco Luis
Ordoñez Piña Imelda
MEDIOS DE CULTIVO
¿ QUE ES?
Mezcla de nutrientes preparada
en concentraciones adecuadas
y en condiciones físicas
óptimas para favorecer el
crecimiento de
microorganismos in vitro
proporcionando condiciones
semejantes a las de su hábitat
natural
Utilidad de los medios de
cultivos Respaldar el desarrollo de los
microorganismos
Exhibir una morfología colonial y
microscópica típica
Los medios de cultivo se utilizan además
para demostrar otras características de los
microorganismos.
SEGÚN SU CONSISTENCIA
Sólidos
Semisólidos
Líquidos
SOLIDO
Presentan en su composición un agente
solidificante, el agar, en una proporción de 12
a 15 gramos por litro.
Para separar microorganismos y favorecer el
desarrollo de las colonias aisladas para
observar las características típicas de un solo
tipo de microorganismo.
Se emplean para determinar la
movilidad de los
microorganismos
microaerofílicos. Suelen
contener una concentración de
agar del 0,7 %.
SEMISOLIDOS
LIQUIDOS
No contienen ningún agente solidificante
Estos son especialmente útiles para hacer
diluciones, para homogenizar mezclas de
microorganismos, para enriquecer
cultivos y para rehidratar cepas
liofilizadas.
AGAR
Es un polisacárido complejo, un
polímero del ácido galacturónico
que se obtiene a partir de las algas
Rhodophytas. Es insoluble en
agua fría. A 80-100°C gelifica y se
disuelve. Al enfriar hasta 45-50°C
se solidifica. No se utilizan como
fuente nutritiva.
Medios de cultivo de acuerdo a su composición química
GENERALES
ESPECIALES:
Enriquecimiento
Selectivo
Diferencial
GENERALES
Permiten el crecimiento de la gran
mayoría de los microorganismos.
Se utilizan en la siembra primaria de
las muestras clínicas para recuperar
a casi cualquier agente patógeno.
Uno de los más utilizados es el agar
sangre.
ESPECIALES
• Conocidos también como
específicos, van dirigidos al
cultivo de determinadas especies
bacterianas o son utilizados con
fines de diferenciación.
Enriquecimiento
Se utiliza para favorecer el desarrollo de
un determinado patógeno.
Contiene nutrimentos específicos.
Sirve para el desarrollo de determinados
patógenos bacterianos.
Pueden estar presentes solos o con otras
especies en una misma muestra.
Suelen ser líquidos como el caldo de
tioglicolato.
Selectivos
Contienen uno o más agentes
que inhiben los microorganismos
que no son de interés.
Se utilizan colorantes, sales
biliares, alcoholes, ácidos y
antibióticos como inhibidores.
Diferenciales
Se emplea un factor en base a
características metabólicas y al color de
sus colonias.
Pueden poner de manifiesto mezclas y
contaminaciones en las placas de cultivo.
Fermentadores de lactosa---> colonias
rosas;
No fermentadores de lactosa (lactosa
negativos) ---> colonias incoloras).
Ejemplos
Agar sangre
Se utiliza para el aislamiento y cultivo de una amplia variedad de
Microorganismos.
La Base de Agar Sangre generalmente es suplementada con sangre de carnero, conejo o caballo al 5-10%
La infusión de músculo de corazón y la peptona de caseína proporcionan la fuente de nitrógeno, carbono, aminoácidos y proteínas.
El extracto de levadura provee vitaminas y aminoácidos esenciales.
El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.
Este medio está relativamente libre de azúcares reductores los cuales interfieren en las reacciones hemolíticas de estreptococos.
Verde brillante
Pluripeptona, Extracto de levadura, Cloruro de
sodio, Lactosa, Sacarosa, Rojo fenol, Verde
brillante, Agar.
El rojo fenol es el indicador de pH, que vira al
amarillo cuando hay producción de ácido a partir de
la fermentación de azúcares.
El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.
El verde brillante actúa como agente selectivo.
Para el aislamiento de Salmonella sp.
EMB
Base de peptona con lactosa y sacarosa, eosina y
azul de metileno.
Los indicadores ejercen un efecto inhibitorio sobre
muchas bacterias Gram positivas.
Es utilizado para bacilos Gram negativos de rápido
desarrollo y escasas exigencias nutricionales.
Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro
oscuro con periferia azulada o rosada, mientras que
las que no lo hacen son incoloras.
S – 110
Gelatina bacteriológica, Lactosa, Extracto de
Levadura, D- Manitol, Peptona de Caseína,
Cloruro de Sodio, Fosfato dipotásico.
El extracto de levadura proporciona vitaminas del
complejo B.
La alta concentración de cloruro de sodio tiene un
efecto en el desarrollo selectivo de los estafilococos.
Es utilizado para el aislamiento y diferenciación de
estafilococos en base a la fermentación de manitol,
la formación de pigmento y la hidrólisis de gelatina.
Requerimientos ambientales pata el desarrollo de microorganismos en medios de cultivo
Para que hongos y bacterias puedan multiplicarse en un medio artificial se deben considerar los siguientes aspectos:
+Nutrientes Requeridos
+Temperatura permisiva
+Humedad
+Composición gaseosa adecuada
+Adecuada [ ] salina
+pH adecuado
+Eliminar factores inhibitorios
Existen 3 clasificaciones para
microorganismos de acuerdo a la cantidad
de oxigeno utilizado en su desarrollo:
*Aerobios como Pseudomonas, miembros de la
familia Neisseriaceae, especies de Brucella,
Bortedella y Francisella, así como
Micobacterias, Hongos Filamentosos y otros.
*Los organismos que crecen mejor en una
atmósfera con mayor concentración de CO2
Se denominan Capnófilos.
*Existen organismos que requieren una presión
de oxigeno menor que la del aire ambiental
se denominan Microaerófilos. (Neisseria
Gonorrhoeae)
*Algunos microorganismos que aparentan ser
Microaerófilos o Capnófilos en realidad son
Humidofilos y requieren mayor contenido de
humedad en la atmósfera.
*Los campilobacter patógenos requieren un
alto contenido de CO2 (5-10%) y no mas de
6% de oxígeno.
Temperatura de Incubación
En general los patógenos se desarrollan mejor a
temperaturas próximas a las del huésped.
Temperatura aproximada del cuerpo humano normal:
35ºC-37ºC
*Temperatura superficial del cuerpo
humano: 30ºC
Ejemplo: material de lesiones presuntamente
infectadas con Mycobacterium marinum, muestras
de sangre y orina para búsqueda de leptospiras y
todos los cultivos de hongos deben ser incubados a
30ºC.
Mycobacterium marinum
*El desarrollo de ciertos organismos puede
ser estimulado si se incuban a temperaturas
Inusuales. Ejemplo:
El campilobacter jejuni, crece a 42ºC, pero la
mayoría de los otros patógenos fecales no
desarrolla esa temperatura. En consecuencia,
la incubación a 42º actúa como procedimiento
de enriquecimiento.
*La temperatura de la estufa de incubación
debe estar controlada en todas las áreas en
que se colocan cultivos.
*La humedad puede ser controlada en
forma automática si se hace llegar agua
desde una fuente externa a medida que
el sistema lo necesite.
*Una pequeña cantidad de detergente en al
agua eliminara los contaminantes.
pH en los medios de cultivo
*Generalmente los polvos deshidratados de
los medios de cultivo son tan uniformes
que incluso el pH final general es el correcto.
*Aun así se debe corroborar este con el uso del
Potenciómetro.
*El pH debe de ser reestablecido
especialmente cuando después de haber
alterado el pH del medio por haber
agregado suplementos o para usos especiales.
*Debe recordarse que los electrodos están
calibrados según la temperatura, por lo que el
pH de una solución caliente será diferente del
leído a temperatura ambiente.
*Para medir el ph de los medios con agar
puede emplearse un electrodo para
superficies, pero son muy costosos y el agar
debe estar solidificado, lo que hace difícil el
ajuste posterior del pH si fuera necesario.