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MV MG LUISA ECHEVARRÍA C

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Para tener éxito en la IA

  Momento apropiado dentro del ciclo estrual dela perra.

  Usar buena calidad de semen.

  Usar una buena técnica de IA

(Linde-Forsberg 2002)

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Experiencia en otros países

  El Kennel Club controla el uso de la IA.

  Restringe el uso a profesionales autorizados.

  Restringe la congelación y almacenaje delsemen de los reproductores a establecimientos

autorizados.

  La principal preocupación del Kennel Club es elcontrol de la identidad de las dosis de semen.

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Conocimientos básicos indispensables

  Fisiología espermática, y patologías reproductivasdel macho.

  Ciclo estrual de la perra, y variaciones en lapresentación del celo.

  Interpretación de determinación de niveleshormonales en la especie

  Frotices Vaginales  – Realización e intepretación

  Evaluación de semen  – Colección e interpretación

de resultados.

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MicroscopioMateriales para colección de semenHemocitómetro

CentrífugaDilutores- Semen diluido, semen congeladoCoolerCatéteres de IANitrógeno líquidoTanques de nitrógeno líquido

EQUIPOS Y MATERIALES

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INSEMINACION ARTIFICIAL EN

CANINOS 

1 .- Determinación de la ovulación de la perra:Progesterona,

Frotis vaginal3.- Colección y procesamiento del semen:

Fresco, refrigerado y congelado

4.- Inseminación de la hembra

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Determinación de la ovulaciónde la perra 

Se propone :

Determinación de Progesterona y

Frotis vaginal

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NIVELES HORMONALES DEPROGESTERONA PARA DETERMINAR

MOMENTO DE OVULACIÓN

(Johnston, Sh. 2002)

PROGEST

Nmol/l

DÍA DE

OVULACIÓN

DÍA DE SERVICIO

3 - 6 + 2días + 4 días ( 3 – 6)

7 - 12 .+ 1 día +3días ( 2– 5 )

13 - 32 0 días + 2 días ( 1 – 4 )

> 32* - 1 a – 5 días 0 ó +1 día

2  – 5 dìas post ovulación ---- 10-25 ng/ml (Linde-Forsberg et al)

*Siempre que en los frotices vaginales se obtengan Célulasescamosas y superficiales - ESTRO

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FROTICES VAGINALES

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OBTENCIÓN DELFROTIS VAGINAL

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EVALUACIÓN DE SEMEN

• Volumen

•Color

•Motilidad

•

Concentración espermática• Morfología  – Presencia de eritrocitos,leucocitos ú otras células en el eyaculado.

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PRO ESTRO

ESTRO

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FRACCIONES DEL EYACULADO

Volumen total 4-15 ml

Fracciones : 3

1) Pre eyaculado - Procedente de la próstata,

apariencia clara.

2) Fracción espermática - Contieneespermatozoides, color blanquecino, opaco.

3) Fracción prostática - Color claro 

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Colección de 1ra y 2da fracción en tubograduado estéril. Evaluar motilidad

La segunda fracción del eyaculado , secompleta en 1 a 2 minutos.

El volumen es de 1 a 3 ml.

La primera y tercera fracción afectaríannegativamente a los . (England and Allen,1992; Rota et al.1995)

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Colección y Procesamientodel semen 

Semen fresco 

Semen diluido refrigerado 

Semen congelado

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1.- Evaluación anticipada del semen

2.- Colección de semen

1ra y 2da fracciónEvaluar motilidad

Semen fresco 

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3.- Inseminación de la hembra

Materiales  Jeringa de 5 ó 20cc

Tubo conector

Catéter

Número y frecuencia de IA

Realizar 2 IA, días 2 y 3 ó 1 y 3

considerando el día 0 como el día

de la ovulación

Semen fresco 

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INSEMINACIONDE LA HEMBRA

MATERIAL PARA IA CON SEMEN FRESCO

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Cateter Mavic para IA en caninos MINITUB

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RAZAS ml

Pequeñas 1  – 2

Medianas 3 -4

Grandes 5 - 6

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COLECCIÓN DE SEMEN

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INSEMINACIONDE LA HEMBRA

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 VAGINA Y CERVIX EN DIFERENTESFASES DEL CICLO ESTRUAL

 ANESTRO PROESTRO

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INSEMINACION DE LA

HEMBRA

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INSEMINACION DE LA

HEMBRA

Después de laInseminación

Mantener estaposición mínimo

10 minutos

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Se recomienda la centrifugaciòn del semen para remover el lìquidoprostàtico.

El dilutor ayuda a proteger la membrana espermàtica de los dañoscausados por el cambio de temperatura y el transporte, brindando

sustrato energètico, esatbilizaciòn de pH y presiòn osmòtica. Los espermatozoides disminuyen su tasa metabòlica por lo queaumenta su viabilidad.

 Se agregan antibiòticos: 1 mg de dihydrostreptomycina a 1000 IUof benzyl penicillin, a la soluciòn final.

El semen diluido debe ser viable en promedio hasta una semanadespuès de colecciòn y preparaciòn.

Semen diluido refrigerado 

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Semen diluido refrigerado 

Centrifugar el semen

 Al mezclar el semen con el dilutor, asegurarse queambos viales estèn en igual temperatura (shock tèrmico).

 Volumen diluido finalNo mayor de 1-3 ml in IA intrauterina3-5 ml in en IA vaginal, aunque depende deltamaño de la perra.

Colocar el semen ya diluido en el refrigerador o coolerpor 30 a 60 min, dependiendo del volumen y tasa derefrigeraciòn hasta que la temperatura de la muestra lleguea+4°C.

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Semen diluido refrigerado 

Chilled semen extender:Tris 3.025 g Âcido Citric (mono hydrate) 1.7 gFructosa 1.25 gStreptomicina 0.1 g Aqua dest. to 100 mlBensyl penicillinA 0.06 g (in 0.3 ml dest H20)

 Yema de huevo 20 % (v/v) , se agrega antes de usarpH = 6.76Osmolarity = 324 mOsm

La soluciòn sin yema de huevo se puede almacenar en aliquotas de 2 -8 ml in el congeladorLa diluciòn a 20% (v/v) de yema d ehuevo (ejm. 0.5 ml a 2 ml Tris, o2 ml to 8 ml Tris) se hace inmediatamnete antes de diluir el semen.

DILUTOR BUFFER TRIS CITRATO

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Semen diluido refrigerado 

• Minitube ®

CaniPRO ™    

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Semen congelado

El semen debe mezclarse con dilutores que protejan del shocktérmico, durante la congelación y descongelación, tenga lamisma osmolaridad y mantenga el pH, del plasma seminal, asícomo proveer sustrato energético para el espermatozoide.

Buffers  – TRISCrioprotectores  – DMSO, glicerol Yema de huevo AzùcaresDetergentes  – SDS (Sodium dodecyl sulphate), Equex Antibiòticos

Comerciales : CLONE, MINITUB  – Cani PRO, Mètodo Upssala,Mètodo Ghent

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Semen congeladoSemen congelado

Las dosis de semen congelado en caninoestàn en pajillas de 0.5 o 0.25 ml, o enpellets.

Concentraciòn aproximada de 50  – 100millones por pajilla de 0.5 ml, se usan 2 a4 pajilla por IA.

 Almacenamiento en tanques de nitrògeno

lìquido.

Descongelamiento: 70 C x 8 seg37C x 30  – 60 seg

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Semen congeladoSemen congelado

The Uppsala Equex 2 Extender and Freezing Procedure:(Peña and Linde-Forsberg 2000).Uppsala Equex 2: Extender 1 Extender 2 DescongelamientomediumTris 3.025 g idem idemCitric acid (monohydrate) 1.7 g idem idemFructose 1.25 g ditto dittoStreptomycin 0.1 g idem idem Aqua dest. a 77 ml a 72 ml a 100 ml

Bensyl penicillin 0.06 g (en 0.3 ml dest H20) idem idemGlycerol 3 ml 7 ml noEquex * none 1 ml noEgg yolk 20 ml idem nopH = 6.72 6.74 6.76Osmolaridad mOsm 865 1495 324

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•  Catéter Noruego

•  Endoscopio fibro-óptico vaginalrígido

•  Laparoscopía•  Laparotomía

Inseminación con Semen congelado

CATÉTER NORUEGO

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Inseminación con Semen congelado

CATÉTER NORUEGO

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Inseminación con Semen congelado

CATÉTER NORUEGO

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El catéter escandinavo consiste en un catéter de acerode 1 - 2 mm de grosor con una punta de 0.75 mm a 1mm de diámetro, con 3 diferentes longitudes: 20, 30 o40 cm.

El catéter de tamaño mediano es adecuado para lamayoría de las perras de pequeño y mediano tamaño.

El equipo se puede obtener de Nowegian Fur Criadors’Associación, P.O. Box 136, Økern, N-0509 Oslo 5,Noruega.

Inseminación con Semen congelado

CATÉTER NORUEGO

l d

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Si el catéter se introduce a ciegas ó con fuerza, podrían ocurrirperforaciones.

La IA intra-uterina con el catéter escandinavo se realiza con laperra parada sobre el piso ó sobre una mesa.

Inseminación con Semen congelado

CATÉTER NORUEGO

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Equipo y materiales

  Endoscopio fibro-óptico rígido

  Catéter urinario de 6 - 8 Fr de diámetro

Semen congeladoInseminación con Semen congelado

endoscopio fibro-óptico rígido

Indicacionesinseminación trans cervical intra-uterinaSin sedación

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Semen congeladoInseminación con Semen congelado

endoscopio fibro-óptico rígido

Usando IA endoscópica con semen congelado-descongelado, tasas de parición de 25% (3 de 12perras) y 80% (32 de 40 perras). Una ventajasignificativa de esta técnica es que permite la

visualización directa de la apertura cervical

l d

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Inseminación con Semen congelado

endoscopio fibro-óptico rígido

i i l d

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Inseminación con Semen congelado

endoscopio fibro-óptico rígido

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TASA DE PREÑEZ EN RELACIÒN A TIPO DE SEMENY VIA DE IA

Tipo de Semen

TASA DE PREÑEZ %

Vîa de IA

VAGINAL INTRAUTERINA

SEMEN FRESCO 47.7 (2012) 62(121)SEMENREFRIGERADO 45.4 ( 348) 65 (40)

SEMEN CONGELADO 36.7 (30) 55.5 (240)

Linde Forsberg, 2003

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Número de repeticiones de IA

  Semen congelado intrauterino , si se repiteaumenta tamaño de camada

Con una sola inseminación se debe inseminarentre 2 a 5 días post ovulación.

Inseminación con Semen congelado

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COLECCIÒN DE SEMEN Vagina Artificial

Electroeyaculaciòn – Bajo sedaciòn:Medetomidina  – 80mg/Kg SCKetamina  – 5 mg/kg IM

 Axner, E. Y Linde Forsberg,

(2003) IVIS

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EVALUACIÒN DE SEMENParámetros Seminales del gato 

 Volumen 0.034  – 0.04 ml ( rango: 0.01  – 0.12) ( Vag. Artif)Concentraciòn 1730 millones/ ml ( Vag Artif.)

57  – 61 millones/eyaculadoMotilidad 56  – 84%pH 6.6  – 8.8

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PROCESAMIENTO DEL SEMEN

Diluyente de lactosa yema de huevo para la

riopreserv ción de espermatozoides de gato [8]

Lactosa 11 g

Glicerol 4 ml

Sulfato de estreptomicina  1000 mg/ml

Penicilina G 1000 IU/mlYema de huevo 20 ml

Agua destilada para 100 ml

Platz, et al (1978)

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INSEMINACIÒN ARTIFICIAL

Cateter de IA en gatas

Zambelli D, 2002

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INSEMINACIÒN ARTIFICIAL

Determinación de momento de estro de la gataFrotices Vaginales  – Cèlulas escamosas

Nùmero de espermatozoides por IA  – 5  – 50 millones

2 IA ( 5 mill. esperm) 2 dìas seguidos 75% concepciòn VAGINAL (Sojka, 1970)

1Ia (80 mill esperm) 77.8% concepciòn VAGINAL (Tsusui, et al2000)

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MUCHAS GRACIAS PORSU ATENCIÒN