第第 33节、动物的克隆节、动物的克隆第第 33节、动物的克隆节、动物的克隆

第二章 克隆技术

植物的克隆

外植体

脱分化

再分

化

胚性细胞特点：细胞质丰富、液泡小而　　　细胞核大。

一、动物细胞的培养和克隆形成

1 、广义的动物组织培养 ( 组培 ) 包括：

2 、动物组织培养技术的发展：1885 年，鸡神经板在生理盐水中培养成活。

1903 年，皮肤及白细胞培养于腹水及血清中，存活 1 个月。 1907 年，美，蛙胚神经管培养在蛙淋巴液中，观察到细胞的阿米巴运动，创立了悬浮培养法。

细胞培养、组织培养和器官培养。

3

、动物细胞培养过程

4 、原代培养、传代培养：

5 、细胞系、细胞株： 细胞系是泛指可传代的细胞，细胞株是具有特殊性质的细胞系。 通过一定的选择或 纯化后，细胞株一般具有恒定的染色体组型、同功酶类型、病毒敏感性和生化特性等。

连续细胞系

有限细胞系

致瘤性不死性

连续细胞株有限细胞株 海拉 (HeLa) 细胞系电镜照片

细 胞悬浮液

10代细

胞

50代细

胞

无限传代

原代培养 传代培养

细胞株 细胞系

如何界定原代培养和传代培养；细胞株和细胞系？

随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖

( 遗传物质改变 )

( 人教版 )

植物细胞和动物细胞培养的比较

比较项目 植物组织培养 动物细胞培养

理论基础

培养基性质

培养基特有成分

培养结果

培养目的 获得细胞或细胞分泌蛋白

细胞的全能性

细胞株、细胞系植物体

快速繁殖、培育无病毒植株等

葡萄糖、动物血清

蔗糖、植物激素

液体培养基固体培养基

细胞增殖

6 、动物细胞培养技术的应用

•（ 1 ）生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰 素、单克隆抗体等。

•（ 3 ）用于检测有毒物质。

•（ 2 ）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。

•（ 4 ）用于生理、病理、药理等方面的研究，

为治疗和预防疾病提供理论依据。

7 、克隆培养法： 把一个单细胞从群体中分离出来单独培养，使之繁衍成一个新的细胞群体 ( 纯系 ) 的技术。

提高细胞克隆形成率的措施：适宜的培养基、动物血清、滋养细胞、激素刺激、调节 pH 等。

应用：研究遗传规律和生理特性的重要材料。

二、动物的细胞融合技术及其应用

诱导方式

物理法：离心、振荡、电融合技术

化学法：聚乙二醇

生物法：灭活的仙台病毒

1 、细胞融合与细胞杂交：

灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面

细胞膜被病毒颗粒穿通，细胞膜连接

细胞融合，形成杂种细胞

2. 杂交瘤技术和单克隆抗体制备：

(1).传统抗体生产方法：

抗原 动物体内 抗体刺激 效应 B ( 抗体不纯 )

筛选单一效应 B细胞

不能增值，产生大量抗体

特异性差、纯度低；产量低、反应不够灵敏。

(2). 单克隆抗体制备过程：

设计方案：

一个 B淋巴细

胞

小鼠骨髓瘤细胞

杂交瘤细胞

+

化学性质单一、特异性强的抗体。

特性：

三、动物的克隆繁殖1 、动物细胞全能性的表现程度：

低等动物细胞的全能性一般比较容易体现。

癌细胞仍能逆转为正常细胞。

无论是分化还是癌变，变化的都是表现型，基因组成的完整性并没有改变。

2 、动物难以克隆的根本原因：

基因表达的调控使得细胞中合成了专一的蛋白质。

一类基因是维持生存的；另一类基因随着组织器官和发育阶段不同而选择性表达。

如：哺乳动物的红细胞只 有少量的线粒体。

3 、细胞核移植实验和动物的克隆繁殖：

胚胎细胞核的移植成功率远高于成体细胞。

绵羊“多莉”克隆过程：

克隆羊成功的分子细胞生物学机理：

体细胞克隆成功的意义：1 、证明了高度分化的细胞也可以回复到类似受 精卵时期的功能。2 、证明了细胞质具有调控细胞核发育的作用。

应用： 为遗传疾病的治疗、优良品种的培育等提供了重要途径；对濒危动物的保存也有重要意义。

重组移核细胞丢失了源于乳腺细胞的调节蛋白，经过三次分裂后，原乳腺细胞的调节蛋白便全部被卵细胞质中的蛋白因子替换了，因此核 DNA被重新编排，细胞开始表达自己的基因。

细胞工程常用的技术手段小结：植物组织培养植物体细胞杂交

动物的克隆：

植物的克隆：

1.动物细胞培养2.动物细胞融合3.单克隆抗体

5.胚胎移植4.核移植

6.胚胎分割移植

解决某些妊娠时间长、每胎产子数量少的优良种畜的繁殖速度问题。

4 、动物胚胎分割移植

练习：