骨 髓 检 查

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骨 髓 检 查 Bone –marrow examining

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骨 髓 检 查. Bone –marrow examining. 骨髓细胞可通过多种手段进行检查, 而最简单、最实用的方法是普通光学显微镜检查 ,它是诊断许多疾病(尤其是血液系统疾病)的重要手段之一。通过骨髓细胞学检查可以了解. 骨髓中各种 血细胞的数量、形态和有无异常细胞等 ,从而协助临床诊断疾病、观察疗效、判断预后。. 一、骨髓的基本结构. 肉眼观察 红髓 黄髓.    二、骨髓检查的意义. 诊断疾病 协助诊断疾病 提供诊断线索. 三 . 检查方法. - PowerPoint PPT Presentation

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Page 1: 骨 髓 检 查

骨 髓 检 查Bone –marrow examining

Page 2: 骨 髓 检 查

骨髓细胞可通过多种手段进行检查,而最简单、最实用的方法是普通光学显微镜检查,它是诊断许多疾病(尤其是血液系统疾病)的重要手段之一。通过骨髓细胞学检查可以了解骨髓中各种血细胞的数量、形态和有无异常细胞等,从而协助临床诊断疾病、观察疗效、判断预后。

Page 3: 骨 髓 检 查

  一、骨髓的基本结构 

诊断疾病协助诊断疾病提供诊断线索

肉眼观察红髓黄髓

   二、骨髓检查的意义

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三 . 检查方法 A small volume of bone

marrow removed under local or general anesthetic from either the hip bone (pelvis) or breast bone (sternum). Then cells in the sample are examined under the microscope to identify any abnormality.

Page 5: 骨 髓 检 查

( 一 ) 骨髓穿刺方法 1. 骨髓穿刺的适应症和禁忌症 2. 部位的选择和条件 1) 穿刺部位通常选择 :

a. 骨髓腔中髓液要丰富 b. 浅表易定位 c. 避开重要器官

Page 6: 骨 髓 检 查

骨性标记

Page 7: 骨 髓 检 查

2) 器材 骨髓穿刺针一般见二种普通型和活检型。二者穿刺针无区别,活检型针后多一节套筒。

普通型

活检型

Page 8: 骨 髓 检 查
Page 9: 骨 髓 检 查

3. 取材情况判断 a. 取材成功— 抽吸瞬间患者有酸痛感;推制涂片时有阻力感并见较多髓小粒和脂滴 b. 取材失败— 推制涂片时无阻力感犹如推血片;少见或未见骨髓小粒和脂滴

干抽

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   (二)注意事项 1. 耐心解释 2. 严格无菌操作 3. 髓液应控制 0.2ml 以内 4. 骨质疏松或多发性骨髓瘤患者需小心 5. 血小板减少等患者,穿刺后应予压迫 6. 了解病史注意禁忌症

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( 三 ) 涂片和染色 骨髓液涂片较血液难,因骨髓液中含较多细

胞、髓小粒、油滴等。所以在推制时需采取慢速加小角度,才能使涂片既薄又匀。

染色通常为瑞氏染色。

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( 四 ) .骨髓细胞学检查 选择一张染色好、骨髓小粒多、头体尾鲜明的骨髓涂片。在普通光镜下运用低、中、高三种镜头,仔细观查,对涂片中的细胞作数量和质量方面的检查与评价。

血细胞形态分析包括粒、红、巨、淋、单、浆及其他细胞。 ① 胞体异常:大小、形态。 ② 胞质异常:量、着色、内含物、颗粒。 ③ 胞核异常:数目、大小、形态、染色质结构、核仁、异常核分裂。

Tail Body Head

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骨髓小粒

HP a. 判断骨髓涂片的质量包括厚薄、染色、骨髓小粒等情况。

b. 观察巨核系统增生情况并计数。

c.全片观察有无体积较大或成堆分布的异常细胞,尤其注意观察涂片边缘和尾部。

1. 低倍镜LP

Page 14: 骨 髓 检 查

2. 高倍镜1) 观察有核细胞增生程度 , 增生程度一般采用五级分类法即:

有核细胞数 /Hp 常见病因增生极度活跃 超过 100 各种白血病

增生明显活跃 50~100 各种白血病或增生性贫血

增生活跃 20~50 正常骨髓象或增生性贫血

增生减低 5~10 造血功能低下者

增生极度减低 1~2 或几个高倍视野下才见到 2~3个

再生障碍性贫血

Page 15: 骨 髓 检 查

2)计数巨核细胞(有经验者可行分类)

增生程度

观察

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3.浸油镜 a .有核细胞分类(数量) 选择厚薄均匀、细胞分布既不重叠又不分散之处进行分类计数(巨核细胞另行计数)。 b. 观察各系细胞形态(质量 ) 、仔细观察各系、各类细胞有无变化包括胞体大小、外形。胞浆量、色、内含物。胞核大小、形态、核染质、核仁等。 c. 仔细观察涂片边缘和尾部有否异常细胞及血液寄生虫等。

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(五)骨髓象分析 1 .小粒、油滴、色泽 2 .有核细胞增生程度 3 .粒红比例 4. 细胞数量分析

如何判断骨髓标本是否被稀释?

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大致正常骨髓象: 骨髓有核细胞增生程度 增生活跃 粒红比值 2~4 : 1 粒细胞系统 40~60% 。其中原粒细胞 <2% ,早幼

粒细胞 <5% ,中性中幼粒细胞约 8% ,中性晚幼粒细胞约 10% ,中性杆状核粒细胞约 20% ,中性分叶核粒细胞约 12% ,嗜酸性中幼粒细胞约 <1% ,嗜酸性晚幼粒细胞 <2% ,嗜酸性杆状核粒细胞 <3%,嗜酸性分叶核粒细胞 <5% ,嗜碱性中幼粒和晚幼粒细胞罕见,嗜碱性杆状核和分叶核粒细胞 <1%.

红细胞系统 占 20~25% ,原红细胞 <1%, 早幼红细胞 <5%, 以中、晚幼红细胞为主,各占 10% 。

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淋巴细胞系统 占 20~25% ,均为成熟淋巴细胞,原淋巴细胞罕见,幼淋巴细胞偶见。

单核细胞系统 <4%, 均为成熟单核,原单核细胞罕见及幼单核细胞偶见。

浆细胞系统 <2% ,均为成熟浆细胞,原浆细胞罕见及幼浆细胞偶见。

巨核细胞系统 在 1.5cm×3.0cm 的片膜上,可见巨核细胞 7~35 个,其中原巨核细胞不见或偶见,幼巨核细胞占 0~5% ,颗粒型巨核细胞占 10~27% ,产血小板型巨核细胞占 44%~60% ,裸核占 8~30% 。血小板较易见,呈堆状存在。

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其他细胞 组织细胞、内皮细胞、肥大细胞、脂肪细胞等偶见,分裂象细胞少见,不见寄生虫和异常细胞。

成熟红细胞、血小板及各种有核细胞形态正常。

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组织细胞

纤维母细胞

巨噬细胞

脂肪细胞

网状细胞

Page 22: 骨 髓 检 查

成骨细胞破骨细胞

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   1. 粒细胞系 增多- 原粒、早幼粒、中幼粒、晚幼粒和杆状核

急性白血病等

急性早幼白血病

M2 、慢性粒细胞白血病等

慢性粒细胞白血病、类白、中毒等

病理骨髓象分析

减少- 再障、粒缺、急性造血停滞等。

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  2.红细胞系  增多-原红和早幼红、中幼红和晚幼红

 减少-   3.巨核细胞系  增多-

 减少-

急性红血病、急性红白血病

增生性贫血、真红、铅中毒、红白血病等

纯红再障、急性白血病未分化型、化疗后等

MPD 、 ITP 、急性巨核细胞白血病、脾亢、慢粒等

再障、急性白血病、慢粒、化疗后等

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4.单核系细胞 增多——原单及幼单 成熟单核

5.淋巴系细胞 增多——原淋及幼淋 成熟淋巴

急性单核或粒 - 单细胞血病、慢粒急单变

急性红血病、急性红白血病

急性淋巴细胞白血病、慢粒急淋变、淋巴瘤等

慢性淋巴细胞白血病、淋巴瘤、巨球蛋白血症等

再障、病毒感染等

Page 26: 骨 髓 检 查

骨髓涂片中所见寄生虫

Page 27: 骨 髓 检 查

(六 ) 结果的计算和填写检验报告单 1. 计算各系统各阶段细胞所占百分比。

2.计算粒红比值 -是指将各阶段粒细胞百分率的

总和除以各阶段有核红细胞白分率。

3.计算各期巨核细胞百分比。

4.据实填写①患者的基本情况②骨髓的取材、涂

片、染色。③各系统各阶段细胞所占百分比和

粒红比值。

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骨髓细胞形态学检查报告单 姓 名:王某某 年 龄: 30 岁 科 别:血液 病 区 :内四 床 号: 541 病历号: Z050492 抽取部位:右髂后上棘 抽取日期: 2005-4-12 临床诊断:贫血待查 检查号: 05412 骨髓小粒:丰 富 涂片张数: 10 张 涂片质量:较 佳 染色质量:好 附带血片: 3 张

细 胞 名 称 血片 骨髓片 % 正常值 ± %

原始细胞 原始粒细胞 0.42 0.42 0.5

早幼粒细胞 1.27 0.81 1.0

中性中幼粒细胞 7.23 2.77 4.0

晚幼粒细胞 11.36 2.93 7.0

杆状核细胞 2.0 2 0.01 4.47 15.0

分叶核细胞 52.0 12.85 4.38 7.0

嗜酸中幼粒细胞 0.5 0.49

晚幼粒细胞 0.8 0.64

杆状核细胞 1.06 0.95

分叶核细胞 3.0 1.90 1.48 1.0

嗜碱中幼粒细胞 0.01 0.03

晚幼粒细胞 0.02 0.03

杆状核细胞 0.03 0.07

分叶核细胞 0.16 0.24

原始红细胞 0.37 0.36 1.0

早幼红细胞 1.34 0.88 3.0

中幼红细胞 9.45 3.33 30.5

晚幼红细胞 9.64 3.50 20.0

原始淋巴细胞 0.01 0.01

幼稚淋巴细胞 0.08 0.15

成熟淋巴细胞 40.0 18.90 5.46 9.0

原始单核细胞 0.01 0.02

幼稚单核细胞 0.06 0.07

成熟单核细胞 3.0 1.45 0.88 1.0

原始浆细胞 0.002 0.01

幼稚浆细胞 0.03 0.07

成熟浆细胞 0.54 0.38

组织细胞 0.20

组织嗜碱细胞 0.03

吞噬细胞 0.19

内皮细胞 0.04

脂肪细胞成骨细胞破骨细胞

共计数有核细胞数 200 个

粒红比例 0.65: 1

原始巨核细胞 幼稚巨核细胞 4.20 %

颗粒巨核细胞 58.30 %

产板巨核细胞 37.50 %

裸 核 1 个

1. 骨髓增生明显活跃,粒红比例倒置。2. 红系增生明显活跃占 54.5% ,以中晚幼阶 段为主。幼红细胞胞体较小、边缘不整齐, 胞质量少、偏蓝。核浆发育失衡呈核老浆幼 状。成熟红细胞体积较小、中央淡染区明显 扩大,多色性红细胞可见。红系分裂象较易 见。铁染色:外铁 (—) 内铁幼红细胞阳性率 3% ,3. 粒系增生活跃,比例相对减低占 35.5% , 各阶段粒细胞比例和形态未见明显异常。4. 巨核细胞全片计数见 76 个(增生明显活 跃),成蔟血小板可见,形态未见明显异 常。5. 淋巴细胞比例相对减少,形态未见明显异常。6. 单核细胞比例未见改变,形态未见明显异常。7. 未见其他异常细胞和寄生虫。 意见和建议: 请结合临床及其他铁代谢检查,考虑小细胞 低色素性贫血。 检 验 者: 李 XX

检验日期: 2005-4-15

粒 细 胞 系

红细胞系

淋巴系单核系

浆细胞

其 他

巨核细胞系1. 结合临床分析:

一般资料 症状 体征 2. 结合血象分析: 三系数量和质量3.报告书写要求:简单扼要、条理清晰、重点突出。一般按照粒、红、巨、淋、单、浆等系统依次描写。若遇某系有明显异常,应在首位详细描写。

Page 29: 骨 髓 检 查

(七 ) 骨髓报告事项 分类记数时,破坏细胞和核分裂细胞一般不记数在内,但是报告单上可另外说明。

记数 200~500个有核细胞后,将涂片四角继续置油镜下观察(不记数)各种非造血细胞的多少,以弥补常规分类不足。

对分类不明细胞,在分类记数过程中,偶尔碰到奇特的有核细胞,其形态特异,不能归入各系统细胞者,纳入分类不明细胞,但数量不能太多,并须详细述之。

退化细胞,不应记在 200~500个有核细胞中,但可单独报告。 判断骨髓增生程度,如检验的结果介于两级之间时,则将其增生程度向上提一级。

病理情况下,血细胞发育过程紊乱,可出现胞浆、胞核发育不平衡现象。在同一细胞具有上下两阶段的特点,将其划在较晚的阶段中。

Page 30: 骨 髓 检 查

(八)诊断意见及建议骨髓涂片检查提出的临床诊断意见可分为: a.独立性和肯定性结论— 骨髓呈特异性变化(白血病、 MM 等) b.支持性诊断— 血、骨髓的改变可解释临床表现(贫血)c.疑似性诊断— 部分改变或少量异常细胞( MDS ) d.排除性诊断— 排除临床怀疑( ITP ) e.描述性报告— 简明报告特征所见而不下结论 f. 血液病治疗后复查报告— 有效 无效

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四、骨髓活检五、骨髓象和血象分析的重要性

四片联检

血片骨髓涂片骨髓切片骨髓印片

Page 32: 骨 髓 检 查

 六、细胞化学染色细胞内染色的范围通常是:蛋白类、多糖类、脂类、盐类和金属类等。

 应用 协助对各类急、慢性白

血病的确诊 对许多血液疾病诊断和

鉴别诊断 对各种良、恶性血液系

统疾病疗效和预后估计提供一定的信息

Page 33: 骨 髓 检 查

过氧化物酶染色 (peroxidase,POX)

粒细胞及分化较好的单核细胞胞浆内的 POX 能分解 H2O2 ,产生新生态氧使联苯胺氧化,与亚硝基铁氰化钠结合成兰色颗粒,再进一步氧化成棕黑色的颗粒,定位于酶活性的胞浆内。

Page 34: 骨 髓 检 查

正常情况下: 粒系:原粒——早幼粒—中幼粒—成熟粒细胞 多数( - ) ( + ) 阳性程度逐渐增强 嗜酸( + );嗜碱( - ) 单核系:原单——幼单——成熟单核细胞

( - ) (弱 + ) 阳性颗粒细少而分散

其他细胞 : ( - )有时吞噬细胞可呈阳性反应

Page 35: 骨 髓 检 查

疾病:急粒( AGL )——阳性(颗粒较粗大,呈局灶 分布)分化好的原粒呈( + ),急早幼粒 ( APL )呈强阳性反应( ++~+++ )急单( AML )——弱阳性(颗粒细小、稀少、 散在分布),原单( + ),分化差的原始单 核细胞也可阴性急淋( ALL )——阴性。各阶段淋巴细胞 POX 均呈( - )反应, ALL 骨髓中残留的原粒细 胞 POX 可为( + ),但比例小于 3% 。

Page 36: 骨 髓 检 查

应用:对急淋和急非淋做出判断,阳性率大于 5%

诊断为髓系(尤其是急粒),小于 3%不能排除淋巴系。

区别小型原始粒细胞和原淋鉴别 APL 和急单鉴别急单(阳性 ~弱阳性)和异常组织细

胞(阴性)

* 注意:单个细胞 POX阳性、阴性无鉴别 髓系的意义

Page 37: 骨 髓 检 查

苏丹黑染色 (sudan black B,SB)

SB 是一种脂溶性染料,可溶解于细胞质中的含脂的结构中,使胞质的脂类物质呈棕黑色或深黑色颗粒。

 临床意义:   SB 染色法不常用,临床意义同 POX ,敏感性好于 POX ,但稳定性和特异性不如 POX 。

急淋阳性率可以大于 5% ,仅是 SB阳性不能区别急淋和急非淋。

Page 38: 骨 髓 检 查

过碘酸 -雪夫染色 (periodic acid-Schiff,PAS)

过碘酸是一种氧化剂,能使细胞内含有乙二醇的糖类氧化产生双醛基,醛基与 schiff试剂中的品红结合,形成紫红色化合物,定位于含有多糖成分的部位。 AMLM6-

PAS染色

Page 39: 骨 髓 检 查

正常情况下1. 粒系:原粒——早幼粒——成熟粒细胞 ( - ) ( + )随细胞成熟,阳性程度逐渐增强 嗜酸( - );嗜碱( + )2. 单核系:原单——幼单——成熟单核

( - ) ( + ) ( +~++ ) 3. 红系: 幼红——成熟红细胞 ( - ) 1~2% ( + ) 4.淋巴系: TL—— 小部分( + ) BL—— 多数呈( + ) 5.巨核细胞和血小板:( + )呈块状

Page 40: 骨 髓 检 查

疾病: 白细胞系统 :各类急性白血病的辅助鉴别淋巴细胞 粗颗粒或块状 单核细胞 细颗粒弥散状 粒系细胞 细颗粒或均匀红色巨核细胞 粗颗粒或块状强阳性

Page 41: 骨 髓 检 查

红细胞系统 * 红系病态造血:

幼红细胞可呈( + )反应,百分比增加,阳性程度增加,有时红细胞也呈阳性,而其他类型急性和慢性白血病红系细胞大多呈阴性。

* 各类贫血的鉴别: 缺铁贫、地贫、 MDS——幼红可呈

( + ) AA 、溶贫、巨幼贫——( - )

Page 42: 骨 髓 检 查

碱性磷酸酶染色 成熟中性粒细胞内的

AKP 在 PH9.2~9.8缓冲液中能水解基质液中的 α-磷酸柰酚,产生 α-奈酚,其与重氮盐偶联,形成不溶性灰黑色偶氮染料沉淀,定位于酶活性处。

阳性程度: - 胞浆中无紫黑色颗粒 + 胞浆中有一层棕黑色不透明

或局限地方有紫黑色颗粒 ++ 胞浆中颗粒占胞浆 1/2 或遍布整个胞浆,但较疏松

+++ 胞浆中颗粒占 3/4 ,颗粒染色浓

++++仅见核影,其余均是黑色

Page 43: 骨 髓 检 查

AKP积分的计算积分: -——0 分 举例:细胞数 积分 +——1 分 5 5*0——0

++——2 分 5 5*1——5

+++——3 分 10 10*2——20

++++——4 分 20 20*3——60

60 60*4——240

——————————

计算阳性细胞的阳性率和总积分 100个细胞 AKP积分总分为 32

5

参考范围: 40~70 分

Page 44: 骨 髓 检 查

生理变化: AKP 活性和年龄有关,新生儿、婴幼儿高于成年人,老年人略低 , 应激状态下增加。

病理变化: ( 1 )增高 感染、 AA 、类白血病、急淋、其它 ( 2 )减低 粒缺、脾亢、病毒、白血病

Page 45: 骨 髓 检 查

鉴别: * 细菌感染—— NAP积分增加

病毒性感染——无明显变化(感染症状相似)

* 慢粒——积分明显下降可至 0 分 中性粒细胞类白血病——积分可大于 200

*急非淋——积分下降或正常下限 急淋——明显增加(慢淋增加) *PNH 、 MDS——积分下降 AA—— 明显增加 *真性红细胞增多症——积分明显增加 继发性红细胞增多症——正常或降低

Page 46: 骨 髓 检 查

酸性磷酸酶染色( ACP ) 血细胞中 ACP 在酸性条件下,将基质液中磷酸奈酚 AS-BI水解后,释放出奈酚AS-BI ,后者与重氮盐耦联,形成不溶性红色沉淀,定位于胞浆中。

抗酒石酸反应: 在基质中加入 L-酒石酸 耐酒石酸—— ( + ) 不耐酒石酸——( - )

Page 47: 骨 髓 检 查

正常情况下:单核巨噬系阳性率最高,组织细胞阳性;淋巴细胞内 T 细胞活性高, B 细胞低。

应用: * 诊断多毛细胞白血病

*辅助鉴别 TL——ACP ( + ); BL—— ( - )

戈谢病——( + );尼曼皮克病——( - )

*恶性单核、吞噬细胞系: 从( + )到( +- )到( - )

Page 48: 骨 髓 检 查

氯化醋酸 AS-D萘酚酯酶染色 ( A S – D C E )

此酶主要分布在粒细胞和肥大细胞中。通常从原粒细胞后期即可见有弱阳性反应,而到早幼粒细胞就可见强阳性反应。且酶的活性不随细胞分化成熟而增强。此酶的阳性产物比 POX更为特异。 单核细胞、淋巴细胞、巨核细胞等均为阴性,所以在临床上将 AS-DCE染色作为是粒细胞的标志性酶。

Page 49: 骨 髓 检 查

血细胞(粒细胞)中 ASDCE将基质液中氯乙酸奈酚水解,产生奈酚 AS-D ,后者与重氮盐(坚牢紫酱 GBC )偶联,形成不溶性红色沉淀,定位于胞质中酯酶所在的部位。

M3

Page 50: 骨 髓 检 查

ASDCE正常情况下: 粒系 原粒——( - )或( + ); 早幼粒 ~ 成熟粒细胞——( + ); 嗜酸——( - )或弱( + ); 嗜碱——( + );少数肥大细胞可( + )其他细胞 单核( - )个别弱( + )反应; 淋、浆、红( - )

Page 51: 骨 髓 检 查

ASDCE

疾病情况下:有助于急性白血病的分类:急粒——阳性,原粒多呈阳性,急性早幼粒为强阳性

急单——阴性,原单、幼、单多呈阴性急淋——阴性,原淋、幼阴性急粒 - 单——部分白血病细胞呈阳性

Page 52: 骨 髓 检 查

醋酸 AS-D奈酚酯酶和氟化钠抑制试验

血细胞中 ASDAE将基质液中的醋酸AS-D 奈酚水解,产生 AS-D 奈酚,后者与重氮盐(坚牢蓝 BB )偶联,形成不溶性兰色沉淀,定位于胞质内。

氟化钠抑制:在基质液中加入氟化钠

Page 53: 骨 髓 检 查

M3-NAS-DAEM3-NAS-DAEM3-NAS-DAEM3-NAS-DAE +NaF+NaF+NaF+NaF

Page 54: 骨 髓 检 查

+NaF+NaF+NaF+NaFM5-NAS-DAEM5-NAS-DAEM5-NAS-DAEM5-NAS-DAE

Page 55: 骨 髓 检 查

结果判断: 油镜计数 100个细胞,分别计算出阳 性率和阳性积分以及抑制率

抑制前阳性率 -抑制后阳性率 或阳性积分 或阳性积分抑制率%= ————————————%

抑制前阳性率或阳性积分

Page 56: 骨 髓 检 查

ASDAE正常情况下:粒系——原粒( - )或( + ); 早幼粒 ~ 成熟粒细胞阳性,一般 +~++ , 不被 NaF抑制单核系——原单( - )或( + ), 幼单 ~ 单核阳性,一般 ++~+++ ,被抑制 弥散分布胞浆各处 淋巴系——弱阳性,不被抑制 阳性呈单个孤立,符点状,定位在核周红系——早期幼红可阳性,随细胞成熟阳 性下降,不被抑制巨核、血小板——阳性

Page 57: 骨 髓 检 查

疾病情况下

急粒 急早幼粒 急粒单 急淋ASDAE 原粒可呈 白血病早幼粒细胞 白血病细胞 原淋和幼淋 ( + )反应 ( + )较原粒细胞强 呈( + ) 细胞呈阳

性 或弱阳性

NaF抑制 不被抑制 不被抑制 属单核 不被抑制 被抑制 属粒系 不被抑制

Page 58: 骨 髓 检 查

α-醋酸奈酚酯酶染色 α-NAE

血细胞中 α-NAE将基质液中的 α-醋酸奈酚水解,产生 α-奈酚,后者与坚牢蓝 B偶联,形成不溶性灰黑色或棕黑色沉淀,定位于胞质内。

Page 59: 骨 髓 检 查

临床意义:正常情况下:粒系 各期均为( - ),有时少数粒细胞可呈弱阳性反应,不被 NaF抑制。

单核系 原单( - )或弱( + ),幼单 ~ 成熟单核( + ),被 NaF抑制。巨核和血小板 ( + )幼红和淋巴系 ( - ),偶尔( + )不被 NaF抑

Page 60: 骨 髓 检 查

疾病:急单 原单( + ),幼单、成熟单大多呈

( + ),被 NaF抑制。急粒 原粒( - ),个别( + )不被 NaF抑

制急淋 原淋( - ),个别( + )不被 NaF抑

制急粒单

Page 61: 骨 髓 检 查

α-丁酸奈酚酯酶染色 α-NBE

血细胞中 α-NBE 在碱性条件下,基质液中的 α-丁酸奈酚水解,产生 α-奈酚,后者与坚牢酱紫 GBC偶联,形成不溶性红色沉淀,定位于胞质内。

Page 62: 骨 髓 检 查

α-NBE正常情况下:* 粒系——各期( - )* 单核系——强( + );原单( + )或( - ), 幼单 ~ 成熟单核( + ),可被 NaF抑制*淋巴系—— TC呈致密的局限性点符状阳性 反应,不管 TC正常或异常均为阳性反应

BC阴性,非 T非 B也可出现散在

颗粒状阳性反应。 *巨核和浆细胞——阴性或弱阳性 * 血小板——可阳性 *组织细胞——可阳性,不被抑制

Page 63: 骨 髓 检 查

α-NBE 疾病情况下:急性白血病鉴别 急粒——原粒阴性 急单——幼单 ~ 成熟单核阳性 急粒单——部分阳性,部分阴性鉴别 急单——阳性,被 NaF抑制; 组织细胞白血病——阳性,但不被抑制

Page 64: 骨 髓 检 查

双酯酶染色

非特异性酯酶检测通常应用于白血病的鉴别诊断,而白血病细胞的高度异型性或异质性使酶活性的表达出现紊乱,所以组合酯酶检测比单一检测更具价值和意义。 在临床上非特异性酯酶一般选用: α-醋酸萘酚酯酶( α- NAE) α-丁酸萘酚酯酶( α– NBE)若将上述任何一个酶与 POX或 AS-DCE染色于同一张标本片上,就被称为双酶(双酯)染色。可使

粒细胞系和单核细胞系分辨得更清楚。

Page 65: 骨 髓 检 查

各型急性白血病细胞的化学染色特征

POX PAS NAS- DCE NAS- DAE (+NaF) NAP

急淋( L1-L3 ) (-) (+)~ (+++) (-) (-)~ (+) 不抑制 ↑

急粒(M1 M2 ) (-)~ (++) (-)~ (+) (+)~ (++) (-)~ (+) 不抑制 ↓

急早幼粒(M3 ) (+++)~ (++++)(+)~ (+++) (++)~ (+++) (+)~ (+++) 不抑制 ↓

急粒单(M4 ) (-)~ (++) (-)~ (++) (-)~ (++) (+)~ (+++) 部分抑制 ↑或↓

急单(M5 ) (-)~ (+) (-)~ (++) (-)~ (±) (++)~ (+++) 抑制 ↑或↓

红白血病(M6 ) (-) (+)~ (+++) (-) (-) ↓ 幼红细胞

急巨(M7 ) (-) (+)~ (+++) (-) (-) ↓

Page 66: 骨 髓 检 查

铁染色 铁颗粒与酸性亚铁氰化钾发生普鲁

氏蓝反应,产生兰色亚铁氰化铁沉淀,定位于含铁部位。

Page 67: 骨 髓 检 查

细胞内铁:中、晚幼红细胞胞浆中有蓝绿色颗粒正常情况下 19~44%

铁粒幼细胞:胞质内有蓝绿色颗粒的幼红细胞环铁粒幼红细胞:胞质内有蓝绿色颗粒在 6个以上,并围绕于核周排列成环形者,超过 2/3 区域铁粒红细胞:含有蓝绿色颗粒的红细胞

细胞外铁:网状细胞铁,正常骨髓以含铁血黄素形式储存的铁,主要存在骨髓小粒的巨噬细胞的胞质内或外。

正常情况下 +~++

Page 68: 骨 髓 检 查

显微镜检查 肉眼观察 ———————————————— 着色程度 形态大小 分布情况 ————————————————

阳性 显色不明显 淡染 小 稀疏( +~++ ) (绿 ~蓝) (颗粒 ~ 小珠)(星状排列) 强阳性 显色明显 深染 大 密集( +++~++++ ) (蓝 ~黑) (小珠 ~ 成堆) (片状分布) ————————————————

细胞外铁反应强度的判断标准:

Page 69: 骨 髓 检 查

疾病:缺铁贫:外铁明显下降,甚至消失;内铁下降。经铁剂治疗后,外铁增加。

AA:内、外铁明显增加。铁粒幼细胞贫血:内、外铁增加,且出现环铁粒幼红细胞大于等于 15% ,有时还可见铁粒红细胞。

MDS:外铁增加,铁粒幼细胞百分比增加,出现环铁粒幼细胞

感染、肝硬化、慢性肾炎、尿毒症、血色病及多次输血后:外铁增加。

Page 70: 骨 髓 检 查

参考书籍

《现代血细胞学图谱》人民卫生出版社 主编 王淑娟《现代血液学检验与临床实践》 上海科学技术文献出版社 主编胡翊群

Page 71: 骨 髓 检 查

习 题下列关于骨髓涂片检查不正确的是:A .注意观察涂片的边缘、尾部、骨髓小粒周围,

有无体积较大或成堆分布的异常细胞B .油镜下分类计数有核细胞C .介于两个阶段之间的细胞,应按成熟方向的下

一阶段计算D .如介于浆细胞与幼稚红细胞之间的细胞,可归于浆细胞

E .原始细胞难以鉴别可做相应的细胞化学染色协助区别

D.

Page 72: 骨 髓 检 查

下列不属骨髓稀释的标志是:A .未见到骨髓小粒和脂肪滴B .骨髓有核细胞增生低下或极度低下C .杆状核粒细胞比例小于分叶核粒细胞D .镜下见到非造血细胞E .涂片中以成熟粒细胞和淋巴细胞为主 D.

Page 73: 骨 髓 检 查

作骨髓检查不能确诊的疾病是:A .白血病B .再生障碍性贫血C .巨幼细胞贫血D .溶血性贫血E .恶性组织细胞病D.

Page 74: 骨 髓 检 查

下列不属于正常骨髓象的特征是:A .有核细胞增生活跃B .粒 / 红比例为 3: 1 ~4: 1

C .原粒小于 2% ,早幼粒小于 5%

D .红系占有核细胞的 50%

E .单核和浆细胞系统均为成熟阶段的细胞

D.

Page 75: 骨 髓 检 查

为了鉴别慢粒和类白血病,下列首选的试验是:

A . SB 染色B . PAS 染色C . NAP 染色D . ACP 染色E . AS-DCE 染色

C.

Page 76: 骨 髓 检 查

为了鉴别小原粒性白血病与急淋,下列首选的试验是:

A . POX

B . PAS

C . AKP

D . AS-DCE

E . AS-DAE

A.

Page 77: 骨 髓 检 查

下列组合不正确的是:A . PAS 染色——毛细胞性白血病呈强阳性

B . POX 染色——急性早幼粒细胞白血病呈强阳性

C . NAP 染色——慢粒积分明显下降

D . AS-DCE 染色——急淋呈阴性E . α-NAE 染色——急粒呈阳性, 

  被 NaF抑制

E.