生防菌 fjat-346 对香蕉枯萎病防治效果的研究

生防菌生防菌 FJAT-346FJAT-346 对香蕉枯萎对香蕉枯萎病病

防治效果的研究防治效果的研究

报告人：余超报告人：余超

报告内容报告内容第一章绪论第一章绪论

第二章香蕉枯萎病生防菌的筛选第二章香蕉枯萎病生防菌的筛选

第三章生防菌第三章生防菌 FJAT-346FJAT-346 对香蕉枯萎病病原菌的抑制作对香蕉枯萎病病原菌的抑制作用用

第四章生防菌第四章生防菌 FJAT-346FJAT-346 抗性菌株的构建与筛选抗性菌株的构建与筛选

第五章生防菌第五章生防菌 FJAT-346FJAT-346 在香蕉植株体内的定殖在香蕉植株体内的定殖

第六章生防菌第六章生防菌 FJAT-346FJAT-346 对香蕉植株酶活的影响对香蕉植株酶活的影响

第七章生防菌第七章生防菌 FJAT-346FJAT-346 对香蕉枯萎病防效的测定对香蕉枯萎病防效的测定

第八章结论与展望第八章结论与展望

第一章绪论第一章绪论香蕉枯萎病是由尖孢镰刀菌古巴专化型 (Fusarium oxysporum f.sp.cubense) 引起的毁灭性病害，严重威胁着我国乃至世界香蕉产业的安全。

目前还未有有效的抗病品种，而且化学药剂在防治上也难以奏效，采用生物防治特别是内生生防菌是当前比较有效的途径之一，生物防治逐渐成为各国研究香蕉枯萎病防治的热点。

国内外已有许多关于香蕉枯萎病生物防治的报道，同时也分离到一些对香蕉枯萎病病原菌有抑制作用的生防菌，但大多集中在实验室的筛选阶段，目前还没有真正开发出能在田间应用的生防药剂。以铜绿假单胞菌菌作为生防菌防治植物病害，国内外也有一些报道。但利用铜绿假单胞菌防治香蕉枯萎病，国内外还没有报道。


1 香蕉内生细菌的分离、纯化与保存

2 香蕉枯萎病生防菌的筛选

3 生防菌 FJAT-346 的毒性检测


54.0554.05 ％％

59.4659.46 ％％ 45.9545.95 ％％

67.5767.57 ％％

香蕉枯萎病生防菌的筛选


样品急性经口毒性试验雄性雌性剂量

（g/kg

BW）

动物数

（只）

初体

重（g）

末体

重（g）

死亡数

（只）

动物数

（只）

初体

重（g）

末体

重（g）

死亡数

（只）

LD50

（mg/kg

BW）

5 10 203.7

±9.8

300.7

±

33.2

0 10 196.5

±7.8

296.1

±

17.0

0 ＞5000

生防菌 FJAT-346 的毒性检测

第三章生防菌第三章生防菌 FJAT-346FJAT-346 对香蕉枯萎病菌的抑制作对香蕉枯萎病菌的抑制作用用

1 平板对峙法测定铜绿 346 对枯萎病病原菌的抑制率

2 抑菌圈法测定铜绿 346 对枯萎病病原菌的抑制效果

3 悬滴法测定铜绿 346 对枯萎病病原菌孢子萌发率的影响

第三章生防菌第三章生防菌 FJAT-346FJAT-346 对香蕉枯萎病菌的抑制作用对香蕉枯萎病菌的抑制作用

CK

CK

1 生防菌 FJAT-346 对香蕉枯萎病菌的抑菌效果测定

平板对峙法

抑菌圈法

处理

处理

61.2961.29 ﹪﹪

2.8 cm2.8 cm

第三章生防菌第三章生防菌 FJAT-346FJAT-346 对香蕉枯萎病菌的抑制作用对香蕉枯萎病菌的抑制作用

CK

2 生防菌 FJAT-346 对香蕉枯萎病菌孢子萌发率的抑制效果

108

71.50 ﹪71.50 ﹪

104

27.05 ﹪27.05 ﹪

106

23.67 ﹪23.67 ﹪


1 生防菌 FJAT-346 抗利福平和卡那霉素双抗菌株的筛选

2 生防菌 FJAT-346 双抗菌株的形态观察和稳定性测定

3 生防菌 FJAT-346 双抗菌株与原始菌株生长曲线的测定

4 生防菌 FJAT-346 双抗菌株对枯萎病病原菌抑菌活性的测定


原始菌株非抗性平板11

原始菌株双抗平板22

双抗菌株非抗性平板33

双抗菌株双抗平板44

2 双抗菌株形态观察与稳定性测定


3 双抗菌株和原始菌株生长曲线的测定（ OD 值）

0. 000

0. 500

1. 000

1. 500

2. 000

2. 500

3. 000

h培养时间（）

OD值

346铜绿原始菌株 346铜绿双抗菌株


3 双抗菌株和原始菌株生长曲线的测定（活菌数量）

0. 000

50. 000

100. 000

150. 000

200. 000

h培养时间（）

10菌株数量（

8 cfu/

ml）

346铜绿原始菌株 346铜绿双抗菌株

第四章生防菌第四章生防菌 FJAT-346FJAT-346 抗性菌株的构建与筛选抗性菌株的构建与筛选4 双抗菌株和原始菌株对枯萎病菌的抑制效果

双抗菌株

原始菌株

双抗菌株

原始菌株

60.0560.05 ﹪﹪

3.2 cm3.2 cm

61.29 ﹪61.29 ﹪

3.2 cm3.2 cm


1 生防菌 FJAT-346 在香蕉组培苗体内的定殖

1.1 接种方法对生防菌 FJAT-346 在香蕉组培苗体内定殖的影响

1.2 接种浓度对生防菌 FJAT-346 在香蕉组培苗体内定殖的影响

2 生防菌 FJAT-346 在香蕉盆栽苗体内的定殖

2.1 接种浓度对生防菌 FJAT-346 在香蕉盆栽苗体内定殖效果的影响

2.2 香蕉组培苗盆栽前和盆栽后接种体内生防菌 FJAT-346 菌量的动态变化

第五章生防菌第五章生防菌 FJAT-346FJAT-346 在香蕉植株体内的定殖在香蕉植株体内的定殖1.1 接种方法的选择（香蕉组培苗）—伤根接种法

0

100

200

300

400

500

600

1 3 5 7 9 12 15 20

d接菌时间（）

10含菌量（

6 cfu/

g）

根

0

200

400

600

800

1000

1 3 5 7 9 12 15 20

d接菌时间（）

10含菌量（

6 cfu/

g）

球茎

050

100150200250300350400

1 3 5 7 9 12 15 20

d接菌时间（）

10含菌量（

6 cfu/

g）

假茎0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

1 3 5 7 9 12 15 20

d接菌时间（）

cfu/

g含菌量（

）

叶

第五章生防菌第五章生防菌 FJAT-346FJAT-346 在香蕉植株体内的定殖在香蕉植株体内的定殖1.1 接种方法的选择（香蕉组培苗）—针刺接种法

0

100

200

300

400

500

600

1 3 5 7 9 12 15 20

d接菌时间（）

10含菌量（

6 cfu/

g）

根

0

500

1000

1500

2000

2500

3000

1 3 5 7 9 12 15 20

d接菌时间（）

10含菌量（

6 cfu/

g）

球茎

0

50

100

150

200

250

300

350

400

1 3 5 7 9 12 15 20

d接菌时间（）

10含菌量（

6 cfu/

g）

假茎0

20

40

60

80

100

120

140

160

180

1 3 5 7 9 12 15 20

d接菌时间（）

10含菌量（

2 cfu/

g）

叶


109 107

105 CK

1.2 接种不同浓度的生防菌 FJAT-346 后香蕉组培苗的症状


1.2 接种浓度的选择（香蕉组培苗）— 105cfu/ml

0. 00

0. 50

1. 00

1. 50

2. 00

2. 50

3. 00

3. 50

4. 00

1 3 5 7 9 12 15 20

d接菌时间（）

10

含菌量（

4 cfu/g）

根0. 00

20. 00

40. 00

60. 00

80. 00

100. 00

120. 00

140. 00

1 3 5 7 9 12 15 20

d接菌时间（）

10

含菌量（

7 cfu/g）

茎

0. 00

1. 00

2. 00

3. 00

4. 00

5. 00

6. 00

7. 00

8. 00

9. 00

1 3 5 7 9 12 15 20

d接菌时间（）

10

含菌量（

2 cfu/g）

叶


2.1 接种浓度的选择（香蕉盆栽苗）

0

510

1520

25

3035

40

5 10 15 20 25

d时间（）

10含菌量（

5 cfu/

g）

109cf u/ ml接种 107cf u/ ml接种 105cf u/ ml接种103cf u/ ml接种 101cf u/ ml接种

根根


2.1 接种浓度的选择（香蕉盆栽苗）

05

101520253035

5 10 15 20 25

d时间（）

10含菌量（

2 cfu/

g）

109cf u/ ml接种 107cf u/ ml接种 105cf u/ ml接种103cf u/ ml接种 101cf u/ ml接种

茎茎


2.2 香蕉组培苗盆栽前和盆栽后接菌植株体内生防菌FJAT-346 菌量的动态变化

0

50

100

150

200

250

300

5 10 15 20 25 45 65

d时间（）

10

含菌量（

3 cfu/g）

1处理 2处理

处理 1 香蕉组培苗盆栽前接种 FJAT-346

处理 2 香蕉组培苗盆栽后接种 FJAT-346

第六章生防菌第六章生防菌 FJAT-346FJAT-346 对香蕉植株酶活的影响对香蕉植株酶活的影响

1 生防菌 FJAT-346 对香蕉植株多酚氧化酶（ PPO ）的影响

2 生防菌 FJAT-346 对香蕉植株超氧化物歧化酶（ SOD ）的影响

3 生防菌 FJAT-346 对香蕉植株过氧化物酶（ POD ）的影响

4 生防菌 FJAT-346 对香蕉植株过氧化氢酶（ CAT ）的影响

第六章生防菌第六章生防菌 FJAT-346FJAT-346 对香蕉植株酶活的影响对香蕉植株酶活的影响1 生防菌 FJAT-346 对香蕉植株 PPO 活性的影响

根根

茎茎叶叶

0100200300400500600700800900

1 2 3 4 5

W时间（）

PPO

U/mi

n*g

活性（

（））

1处理 2处理 4处理

0

200

400

600

800

1000

1200

1400

1600

1 2 3 4 5

W时间（）

PPO

U/mi

n*g

活性（

（））


0

500

1000

1500

2000

2500

3000

3500

4000

1 2 3 4 5

W时间（）

PPO

U/mi

n*g

活性（

（））


处理处理 11 ：接种生防菌：接种生防菌 FJAT-346FJAT-346

处理处理 22 ：先接种生防菌：先接种生防菌 FJAT-346FJAT-346，， 33 天后接种枯萎病病原菌天后接种枯萎病病原菌

处理处理 44 ：清水对照：清水对照

第六章生防菌第六章生防菌 FJAT-346FJAT-346 对香蕉植株酶活的影响对香蕉植株酶活的影响2 生防菌 FJAT-346 对香蕉植株 SOD 活性的影响

0. 00

100. 00

200. 00

300. 00

400. 00

500. 00

600. 00

700. 00

1 2 3 4 5

W时间（）

SOD

U/mi

n×g

活性（（

））


0. 00

50. 00

100. 00

150. 00

200. 00

250. 00

300. 00

350. 00

400. 00

450. 00

500. 00

1 2 3 4 5

W时间（）

SOD

U/mi

n×g

活性（

（））


0. 00

50. 00

100. 00

150. 00

200. 00

250. 00

300. 00

350. 00

400. 00

450. 00

500. 00

1 2 3 4 5

W时间（）

SOD

U/mi

n×g

活性（

（））


根根

茎茎叶叶




第六章生防菌第六章生防菌 FJAT-346FJAT-346 对香蕉植株酶活的影响对香蕉植株酶活的影响3 生防菌 FJAT-346 对香蕉植株 POD 活性的影响

根根

茎茎叶叶

0

500

1000

1500

2000

2500

3000

1 2 3 4 5

W时间（）

POD

U/mi

n*g

活性（

（））


0

200

400

600

800

1000

1200

1400

1600

1 2 3 4 5

W时间（）

POD

U/mi

n*g

活性（

（））


0

500

1000

1500

2000

2500

3000

3500

1 2 3 4 5

W时间（）

POD

U/mi

n*g

活性（

（））





第六章生防菌第六章生防菌 FJAT-346FJAT-346 对香蕉植株酶活的影响对香蕉植株酶活的影响4 生防菌 FJAT-346 对香蕉植株 CAT 活性的影响

根根

茎茎叶叶

0.000.50

1.001.502.00

2.503.003.50

4.004.50

1 2 3 4 5

W时间（）

CAT

mg/

g*mi

n活性（

（））


0.00

0.50

1.00

1.50

2.00

2.50

3.00

3.50

4.00

1 2 3 4 5

W时间（）

CAT

mg/

g*mi

n活性（

（））


0.00

1.00

2.00

3.00

4.00

5.00

6.00

1 2 3 4 5

W时间（）

CAT

mg/

g*mi

n活性（

（））






1 生防菌 FJAT-346 对香蕉盆栽苗枯萎病防效的测定

1.1 生防菌 FJAT-346 对香蕉苗期生长状况的影响 1.2 生防菌 FJAT-346 对香蕉盆栽苗枯萎病防效的测定

2 生防菌 FJAT-346 对香蕉枯萎病田间防效的测定 2.1 生防菌 FJAT-346 在香蕉植株根际土壤中的定殖研

究 2.2 生防菌 FJAT-346 对香蕉植株根际优势细菌群落结构

的影响及优势细菌的分子鉴定 2.3 生防菌 FJAT-346 对香蕉枯萎病田间防效的测定 2.4 香蕉病株回收病原菌的分子鉴定


1.1 生防菌 FJAT-346 对香蕉苗期生长状况的影响

0. 001. 00

2. 003. 00

4. 005. 006. 00

7. 008. 00

9. 0010. 00

1处理 2处理 3处理 4 处理

不同处理

叶片数（片）

处理 1 只接种 FJAT-346 处理 2 先接种 FJAT-346 ， 3 天后再接种病原菌处理 3 只接种病原菌处理 4 只接 NA 培养液



0. 00

5. 00

10. 00

15. 00

20. 00

25. 00

30. 00

35. 00

40. 00

1处理 2处理 3处理 4 处理

不同处理

cm株高（

）

处理 1 只接种 FJAT-346 处理 2 先接种 FJAT-346 ， 3 天后再接种病原菌处理 3 只接种病原菌处理 4 只接 NA 培养液



1 2 3 4 1 2 3 4

1 2 3 4 1 2 3 4


处理

编号病情等级

病情

指数

防治

效果

(％)

1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0.00 100.0

0

2 7 7 5 7 3 1 7 0 5 7 70.00 0.00

3 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0.00 100.0

0

4 0 1 7 0 1 1 7 3 1 7 40.00 42.86

5 0 0 0 3 0 0 0 0 0 5 11.43 83.67

6 7 1 0 7 1 0 0 0 1 0 24.29 65.30

1.2 生防菌 FJAT-346 对香蕉盆栽苗枯萎病防效的测定

处理 1 只接种 FJAT-346 处理 2 只接种枯萎病病原菌处理 3 只接种 NA 培养液处理 4 同时接种 FJAT-346 和枯萎病病原菌处理 5 先接种 FJAT-346 ， 3 天后接种枯萎病病原菌处理 6 先接种枯萎病病原菌， 3 天后接种 FJAT-346


处理 1 只接种 FJAT-346 处理 2 只接种枯萎病病原菌处理 3 只接种 NA 培养液处理 4 同时接种 FJAT-346 和枯萎病病原菌处理 5 先接种 FJAT-346 ， 3 天后接种枯萎病病原菌处理 6 先接种枯萎病病原菌， 3 天后接种 FJAT-346

1 2 3

4 5 6

1.2 生防菌 FJAT-346 对香蕉盆栽苗枯萎病防效的测定

83.67 ％

65.30 ％42.86 ％


2.12.1 生防菌 FJAT-346 在香蕉植株根际土壤中的定殖研究

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

7 14 21 28 35

d时间（）

10

含菌量（2cfu/g）


菌株编号形态描述 16s rDNA鉴定照片

FJAT-7618

圆形，凸起，有光泽，

边缘整齐，不透明，

乳白色

节杆菌（Arthrobacter

sp.）

FJAT-7619 圆形，凸起，有光泽，

边缘整齐，半透明

柠檬色短小杆菌

（Curtobacterium

citreum）

FJAT-7621

圆形，凸起，无光泽，

边缘整齐，不透明，

白色

枯草芽孢杆菌

(Bacillus subtilis)

2.2 香蕉植株根际优势细菌的分子鉴定


0

5

10

15

20

25

30

1 2 3 4 5

W时间（）

(10

含菌量

5 cfu/g)


处理 1 ：只接种 FJAT-346 ；处理 2 ：先接种 FJAT-346， 3 天后接种枯萎病病原菌；处理 4 ：清水对照

2.2 生防菌 FJAT-346 对香蕉植株根际优势细菌 - 菌株FJAT-7618-群落结构的影响


05

101520253035

1 2 3 4 5

W时间（）

10

含菌量（

5 cfu/g） 1处理 2处理 4处理




012345678

1 2 3 4 5

W时间（）

10

含菌量（

5 cfu/g） 1处理 2处理 4处理




病情

等级 7级 5级 3级 1级 0级

病情

指数

发病率

（％）

防效

（℅）

处理 1 0 0 0 0 0 0.00 0.00

处理 2 8 15 6 6 65 22.14 35.00

处理 3 10 14 7 6 13 47.71 74.00

处理 4 0 5 4 2 39 11.14 22.00

82.00

2.3 生防菌 FJAT-346 对香蕉枯萎病田间防效的测定

处理 1 ：只接种 FJAT-346；处理 2 ：先接种 FJAT-346， 3 天后接种枯萎病病原菌处理 3 ：只接种枯萎病病原菌；处理 4 ：清水对照


1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18

340bp

2.4 香蕉病株回收病原菌的分子鉴定

第八章结论与展望第八章结论与展望

生防菌 FJAT-346 对香蕉枯萎病病原菌的抑制率为 67.57 ％，对病原菌孢子萌发的抑制率达到 71.50 ％；生防菌 FJAT-346 能在香蕉植株体内和香蕉根际土壤定殖，且能促进香蕉植株的生长；生防菌 FJAT-

346 能提高香蕉植株体内部分和抗病性相关的酶的活性；生防菌FJAT-346 对香蕉枯萎病的盆栽防效和田间防效分别为 83.67 ％和82.00 ％。

生防菌 FJAT-346具备两个优点：一是生防菌 FJAT-346 对香蕉枯萎病病原菌有显著的抑制作用；二是该生防菌能在香蕉植株体内定殖。因此利用该生防菌开发生防制剂，在香蕉枯萎病的防治方面将发挥重大作用。

生防菌 fjat-346 对香蕉枯萎病 防治效果的研究

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生防菌 fjat-346 对香蕉枯萎病防治效果的研究