واکنش زنجیره ای پلیمراز pcr

PCRواکنش زنجيره ای پليمراز

1

تخصصی طراحی پرایمر و مهنذسی پروتئینکلینیک http://www.Taqprimer.com

PCR1ك - را DNAاختصبصي يك بحي 2اعت ك تكثيز يك تكيك آسهبيؾگبي

عبسد. ث هظر تؼزيف هوكي هي -قزار دارد DNAثيي د بحي تالي ؽبخت ؽذ

PCR هب ثبيذ در اثتذا هلكلDNA ،را ثزرعي كين. در ضؼيت عجيؼيDNA ث

ثبؽذ هي DNAاس بيي رؽترپيچ داراي صرت يك هبرپيچ د تبيي جد دارد. ايي هب

اذ ث عيل پيذبي يذرصي غجت ث يكذيگز قزار گزفت 3ك ث صرت بوغ

ؽذ. پيذبي يذرصي ثيي ثبسبي ث عر غيزكاغي كبر ن گ داؽت هي

. ز ؽذ هي، تؾكيل (C)ثب عبيتسيي (G) گايي (T)ثب تيويي (A)هكول، آديي

ز هلكل قذي اس عزيق يك 4ريجس كذام اس ثبسب ث يك هلكل قذي ث بم داكغي

ؽبهل يك DNAگز فغفبت ث هلكل قذي وجار خد هتصل هي ؽذ. يك احذ

، يك ؽد هيگز فغفبت، يك قذ يك ثبس اعت ث ػاى يك كلئتيذ ؽبخت

ؽد. ثزاي تؾخيص ثيي ؽبخت هي 5ي ث ػاى يك كلئسيذقذ يك ثبس ث تبي

بي قذ ز يك داراي پزاين بي كزثي گذاري ثبس ؽوبر گذاري قذ، ؽوبر ؽوبر

بي فغفبت ث قذبي هجبر اس عزيق گز 3´ 5´بي ( غتذ. كزثي3´ 5´)هثال

)ريجكلئيك RNAهزثع تك رؽت هلكل DNAؽذ، اس ايي ر ن صل هي

اي د رؽت DNAيك رؽت 5´غتذ. پبيب 3´ يك پبيب 5´اعيذ( داراي يك پبيب

(U)، داراي ثبس اراعيل (T)ث جبي تيويي RNAرؽت ديگز هكول غتذ. 3´ثب پبيب

ارد. ري قذ هزثع اػ )ريجس( د 2´اعت، يك گز يذركغيل اضبفي در جبيگب

جفت ؽد. Aتاذ ثب هي RNA ،Uدر

1 - Polymerase Chain Reaction

2 - Amplification

3 - Antiparallel

4 - Deoxyribose

5 - Nucleoside

PCRتکنيک

2

ایمر و مهنذسی پروتئین تک پرایمر تخصصی طراحی پرکلینیک http://www.taqprimer.com

حزف اي ااع پزايوز، پزة، كتر كبعت صىعزاحي

تخصصي در سهي اجبم پزص بي تخصصي هزتجظ ثب ثيتكلصي سيغتخذهبت

تليذيپزص بي داؾجيي، تحقيقبتي هؾبر

ؽذ در هؤعغ پيك داؼ پضبى صجب )تك پزايوز(تي

يزايؼ ال "FAST PCRنرم افزار و PCRتکنیک "اس كتبة قغوتي

زاتيبىهيز ، هحوذرضب دقبي :گبىيغذ

ك وچيي ث ػاى -ثب اعتفبد اس پزايوزبي اليگكلئتيذي DNAتكثيز

اي رؽت تك DNAب هلكلبي ؽد. ايي حبصل هي -اذ ؽبخت ؽذ 1هزب آهپلي

ث ثبؽذ. پزايوزب هكول هي DNAبي يك تالي الگي كتبي غتذ ك ثب پبيب

ب dNTPاي در حضر رؽت الگ اعزؽت ؽذ تك DNAهزاس ري پلي DNAعيل

ؽذ، هي 2تزي فغفبتب( تحت ؽزايظ هبعت ثزاي اكؼ، پليوزيش )داكغي كلئسيذ

گيزد. ايي بي الگ، صرت هي هكول ثب رؽت DNAبي جذيذ ثذيي تزتيت عتش رؽت

اي غتذ. عتش رؽت، رؽت د DNAلكلبي ب در ايي هزحل، ث صرت ه رؽت

ي DNAب ث اي، چغجيذى پزايوز د رؽت DNAتاذ ثب اعزؽت ؽذى حزارتي هي

ث 3هكول ثب كبؼ دادى دهبي هخلط اكؼ، پليوزيش ؽذى تغيل عبسي پزايوز

ز تكزار هزاس در درج حزارت هبعت ثزاي اكؼ آشين، تكزار ؽد. پلي DNAعيل

عتش ؽذ، الگيي DNAعتش رؽت، ؽبهل يك عيكل تكثيز اعت. ز رؽت جذيذ

هرد ظز تكثيز يبفت، ث عر DNAؽد ثبثزايي تالي ثزاي عيكل ثؼذي تكثيز هي

ؽد. اليي هحصالت پليوزيش ؽذى پزايوز اتخبثي عيكل ث عيكل، تكثيز داد هي

DNAي اصلي، عل هؾخصي ذارذ. اس آجبييك ، ري الگDNAحبصل اس عتش

هتقف ؽد يب آشين DNAدذ تب ايك يب عتش جذيذ اداه هي DNAهزاس ث عتش پلي

ث عيل ؽزع عيكل ثؼذي اس فؼبليت ثيفتذ. ث ز حبل، در عيكل عم قغؼبت تالي

زب ري الگي بي پزايو ؽذ ك عل هؾخص ثب هقؼيت هرد ظز عري عتش هي

صرت وبيي اصلي هغبثقت دارذ. اس عيكل چبرم ث ثؼذ تالي هرد ظز ث

(exponentially) بي هرد ظز( ث ؽد. ثبثزايي، تكثيز )تؼذاد بيي كپي تكثيز هي

2)عيل فزهل n-2n)x ؽد ك: ثيبى هي

n= ب تؼذاد عيكل

ثب 2هحصالت حبصل پظ اس عيكل + 1اليي هحصل ث دعت آهذ پظ اس عيكل

=2nبهؾخص عل

x= بي الگي اصلي تؼذاد كپي

1 - Amplimers

2 - Extend

3 - Primer extension


3


عيكل 21% اعت پظ اس 111اصال، ثب در ظز گزفتي ايك ثبسد در عي ز عيكل

PCR ثزاثز خاذ ؽذ. ثبسد 2121، تكثيزPCR اس الگيي ث الگي ديگز هتفبت اعت

اعت تغبثق دارد.ك اجبم ؽذ 1عبسي ثب درج ثي

PCR ثبؽذ. در ز هي 2يك فزايذ درگزدػ

ثزاثز بي ذف دDNAعيكل تؼذاد

ذف ثب اعتفبد DNAب در ؽذ. رؽت هي

اس اعزؽت ؽذى حزارتي اس ن جذا

ؽذ تب چغجيذى ؽذ عپظ عزد هي هي

. 3پزايوزب را ث بحي ذف هيغز عبسذ

ا عيل هزاس، پزايوزب ر پليDNAعپظ

ع 4وبيذ )درحضر پليوزيش هي

عيكل، 4كلئتيذ ثبفز هبعت( ثؼذ اس

ذف دارين. DNAافشايؼ وبيي ثزاي

عيكل 21-41عر عجيؼي تؼذاد عيكل ث

ثبؽذ. هي

1 - Optimization

2 - Cycling 3 - Annealing

هزاس اي پلي اكؼ سجيز -1-1ؽكل

PCRتکنيک

4








عيكل 25قجل ثؼذ اس PCRيك 1آبليش كويتي -1-1جذل

% 71زد ك تقزيجب ايي ثب ثبسد گي ثزاثز صرت هي 115فزض ثز ايي اعت ك تكثيز،

يش 2تكثيز هزتجظ اعت. هحصل تالي هرد ظزي )ث تالي ذف، آهپلي كى

بيؼ بي پزايوز اليگكلئتيذي در پبيب ؽد داراي تالي گيذ( ك حبصل هي هي

يي يك وب بي هرد ظز ث عزيق اي ثغيبر ثبال دارد اهب تكثيز تالي اعت. اگز چ ثبسد

فزآيذ بهحذد يغت ثلك هحذديت دارد. يك تؼذاد فبكتربيي ػلي ايي فزآيذ ػول

بي بيي % هؤثزذ. اثز تأثيزؽبى ثيؾتز در عيكل111كذ ك در ز عيكل هي

PCR عيكل 25-31ؽد. اصال هقذار آشين پظ اس هؾخص هيPCR هحذد كذ ،

ز تكثيز هغبثقت داردك ث اعغ هيشاى هالر اضبفي ذف ثزاث 116ؽد ك تقزيجب ثب هي

اعت. فؼبليت آشين يش يك فبكتر هحذد كذ اعت ك ػلت آى اعزؽت ؽذ ؽذى

حزارتي آشين درعي فزآيذ اعت.

بي هرد ظز اعت. اس رؽت 3دذ را كبؼ هي PCRفبكتر ثؼذي ك كبرآيي

يبثذ، چغجذگي هجذد لظت ؽبى افشايؼ هيآجبييك هلكلبي ذف )الگ( غ

كذ. حبئش بي هرد ظز ثب چغجيذى پزايوز ث هلكل ذف )الگ( رقبثت هي رؽت

بي ؽد تب كبرآيي ث حذاقل رعبذ هي PCRاويت اعت ك ز اريبغي در رػ

% عيكل حبصل ؽد.111

تز ثؼذا ث عر جشئيؽذ ؾبى داد هي ؽكل سيزهؼول، در PCRاجشاي اصلي

ثحث خاذؽذ.

1 - Quantitative

2 - Amplicon

3 - Reannealing


5


PCRاجشاي اصلي تكثيز -2-1ؽكل

بي ث عر آهبد اس تي كذ PCRهؼزفبي هختلف عبيل اثشار هتػي ثزاي

بي الگ يب ث عيل هحقق يب ث عيل عجيت DNAتجبري در دعتزط غتذ.

بي بي صهيك، كتبثخب ي، كتبثخببي صهDNAؽذ اس عزفي، تي هي 1ثبليي

DNA ،RNA ب وچيي ث عر تجبري در دعتزط غتذ. پزايوزبي

تاذ ب عتش ؽذ يب هي آسهبيؾگب تاذ وچيي در ثغيبري اس اليگكلئتيذي هي

ظيز ثبسب، PCRؽذ. اجشاي اكؼ ث صرت هؼزفبي عتش ؽذ هزعم خزيذاري

MgCl2 ،dNTPگيزذ ب وچيي تعظ ثغيبري اس تي كذگبى در دعتزط قزارهي

هزاسبي پلي DNAتاذ ث عيل هحقق، تي ؽذ. يك هحذد عيؼي اس يب هي

ب در دعتزط غتذ. كبرثزدب هقبم ث حزارت اكى اس ثغيبري اس كبرخب

ؽد. ديگزي ثحث هي ب ث عر جشئي تز در قغوت يضگيبي ايي

I :E.coliپليوزاس DNA، اس قغؼ كلPCRبي اصلي پزتكلثزاي تغزيغ ودى 2

ؽذ. ث ز حبل، ايي آشين در عي هزحل پليوزاس تغيل اليگكلئتيذ اعتفبد هي

ؽد ثبثزايي هحقق ثبيذ يك هقذار ثب حزارت غيزفؼبل هي PCRاعزؽت ؽذى عيكل

س اس آشين را در ز عيكل فزآيذ تكثيز، اضبف وبيذ. ثذيي اعت ك يك تب 3و

بيي ك ثزاي خدكبر كزدى تكيك، گزدد، خصصب تالػ هحذديت جذي ايجبد هي

DNAؽد. كبرثزد آشين كل ثزاي تكثيز قغؼبت كتب گيزد هحذد هي صرت هي

(<200bp) بي ثشرگتز، هأيط كذ ثد. اغلت ىك ؽذ. اهب ثزاي آهپلي ث كبر ثزد هي

هيشاى هحصالت كن ثد در ضوي تع اذاس هحصالت هؾد ثد. ايي اهز ث اعغ

( ثد ك ثبيذ ثزاي آشين كل ث ºc37) 4عبسي درج حزارتبي پبييي چغجيذى عيل

1 - Clinician

2- DNA Klenow fragment 3 - Aliquot 4 - Extension

PCRتکنيک

6








ز در رسبي ال ؽذ تب اس لحبػ كبتبلتيكي فؼبل ثبؽذ. هحذديت جذي ديگ كبر گزفت هي

حزارتي بي قبلتبي آة يب ب ثيي حوبم ، اعتفبد اس اتقبل دعتي وPCRتكيك

هرد يبس ثد. د عيل PCRدر درج حزارتبي اختصبصي اثقبء ؽذ ثزاي ز عيكل

بي تحقيقبتي را ث صرت يك رػ كليذي در آسهبيؾگب PCRتكلصيكي ثغيبر هن

اذ: بخت كلييكي ع

هزاسبي هقبم ث حزارت ك كل رػ را ثغيبر آعبى پلي DNAاعتفبد اس -1

اذ ث ايي دليل ك اضبف كزدى آشين تبس ثؼذ اس ز هزحل دبتراعيى ديگز السم كزد

DNAب القبء ؽذ، تك PCRهزاس هقبم ث حزارت ك ث پلي DNAيغت. اليي

ثد. 1پليوزاس

بي عبد عيكليگ درج حزارت )وچيي ث ػاى كغزي دعتگبتعؼ ي -2

PCRؽبخت ؽذ اذ( هجز ث اتهبتيك ؽذى PCRبي تزهبل عبيكلزب يب دعتگب

ؽذ.

Hoffmann-La Rocheتعظ اهتيبسب حق ثجت احصبري هتؼلق ث PCRفزآيذ

Inc Ltd ،Roche F.Hoffmann-La ؽد پؽؼ داد هي.

1 - Taq DNA polymerase

منتشر می شود:توسط تک پرایمر زودی به

تکنیک کتبةPCR و نرم افسارFAST PCR رایش جذیذوی

آموزش طراحی پرایمر و نرم افسار کتبةGENERUNNER

زیر به آدرس 2931تهیه این کتببهب می توانیذ از اول آررمبه برای

مراجعه فرمبییذ:

http://www.taqprimer.com

http://www.taqprimer.com/

http://www.taqprimer.com/

واکنش زنجیره ای پلیمراز pcr

Education