7/22/2019 G08sya

1/15

A

TIVITA

(Guazu

AKULT

S ANTI

a ulmifo

DA

AS MA

I

KSIDA

iaLamk

SALAM

PROGR

EMATI

STITU

I FORM

), JAMB

(Eugeni

SYAEF

M STU

A DAN

PERT

BOG

200

ULA EK

U BIJI (

polyant

DIN

I BIOK

ILMU P

NIAN B

R

STRAK

sidium g

aWight

MIA

NGET

GOR

ATI BE

uajavaLi

.)

HUAN

ANDA

nn.),

LAM

7/22/2019 G08sya

2/15

ABSTRAK

SYAEFUDIN. Aktivitas Antioksidasi Formula Ekstrak Jati Belanda (Guazuma

ulmifolia Lamk.), Jambu Biji (Psidium guajava Linn.), dan Salam (Eugenia

polyantha Wight.). Dibimbing oleh SULISTIYANI dan EDY DJAUHARI

PURWAKUSUMAH.

Penelitian ini bertujuan menentukan dan membandingkan aktivitas

antioksidasi campuran ekstrak dedaunan: jati belanda (Guazuma ulmifoliaLamk.),

jambu biji (Psidium guajavaLinn.), dan salam (Eugenia polyanthaWight.) pada

konsentrasi tertentu. Semua bahan diekstraksi menggunakan pelarut etanol 70%

dengan metode maserasi. Aktivitas antioksidasi ekstrak daun dianalisis dengan uji

Thiobarbituric Acid (TBA Assay) menggunakan metode spektrofotometri pada

=532 nm. Formula yang diuji meliputi kombinasi ketiga ekstrak daun dan

kombinasi dua ekstrak daun (jati belanda+jambu biji, jati belanda+salam, jambu

biji+salam).Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak tunggal jati belanda, jambu

biji, dan salam pada 200 ppm mempunyai aktivitas antioksidasi berturut-turut

sebesar 77.44%, 79.14%, dan 75.99% (p>0.05). Aktivitas tersebut lebih tinggi

daripada vitamin E (66.47%). Adapun keempat formula ekstrak memiliki aktivitas

antioksidasi yang sebanding dengan vitamin E (85.41%), yakni berada pada

rentang 82.71%-83.30%.

7/22/2019 G08sya

3/15

ABSTRACT

SYAEFUDIN. Antioxidative Activity from Formula of Jati Belanda (Guazuma

ulmifolia Lamk.), Jambu Biji (Psidium guajava Linn.), and Salam (Eugenia

polyanthaWight.). Under the direction of SULISTIYANI and EDY DJAUHARIPURWAKUSUMAH.

The objectives of this research are to determine and to compare

antioxidative activity from mixtures of leaves extracts: jati belanda (Guazuma

ulmifolia Lamk.), jambu biji (Psidium guajava Linn.), and salam (Eugenia

polyanthaWight.) at certain concentrations. All herbs are extracted with ethanol

70% using maceration method. Antioxidative activity were analyzed with

Thiobarbituric Acid (TBA) Assay using spectrophotometric method at =532 nm.

Formulas tested were combination of three extracts and combination of two

extracts (jati belanda+jambu biji, jati belanda+salam, jambu biji+salam).

The results showed that single extract of jati belanda, jambu biji, and

salam at 200 ppm have antioxidative activity as follow: 77.44%, 79.14%, and

75.99% respectively (p>0.05). Those activities were significantly higher than that

of control vitamin E (66.47%). All formulas, however, have similar antioxidative

activity with vitamin E (85.41%).

7/22/2019 G08sya

4/15

AKTIVITAS ANTIOKSIDASI FORMULA EKSTRAK JATI BELANDA

(Guazuma ulmifoliaLamk.), JAMBU BIJI (Psidium guajava Linn.),

DAN SALAM (Eugenia polyanthaWight.)

SYAEFUDIN

Skripsi

sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar

Sarjana Sains pada

Program Studi Biokimia

PROGRAM STUDI BIOKIMIA

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

INSTITUT PERTANIAN BOGORBOGOR

2008

7/22/2019 G08sya

5/15

Judul Skripsi : Aktivitas Antioksidasi Formula Ekstrak Jati Belanda (Guazuma

ulmifoliaLamk.), Jambu Biji (Psidium guajava Linn.), dan

Salam (Eugenia polyanthaWight.)

Nama : Syaefudin

NRP : G44104019

Disetujui

Komisi Pembimbing

drh. Sulistiyani, M.Sc., Ph.D

Ketua

Drs. Edy Djauhari PK, M.Si

Anggota

Diketahui

Dr. Hasim, DEA

Dekan Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam

Tanggal lulus:

7/22/2019 G08sya

6/15

PRAKATA

Alhamdulillah, segala puji hanya bagi Allah SWT atas segala rahmat dan

karunia-Nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan karya ilmiah ini. Sholawat

serta salam semoga tercurahkan keharibaan Rasulullah akhir zaman, MuhammadSAW beserta keluarga dan orang-orang yang berjuang menegakkan ajaran agama-

Nya. Judul karya ilmiah ini adalah Aktivitas Antioksidasi Formula Ekstrak Jati

Belanda (Guazoma ulmifolia Lamk.), Jambu Biji (Psidium guajava Linn.), dan

Salam (Eugenia polyanthaWight.).

Setulus hati penulis menyampaikan terima kasih kepada pembimbing

penelitian, drh. Sulistiyani, M.Sc, Ph.D dan Drs. Edy Djauhari PK, M.Si atas

arahan, masukan, dan nasehat yang berharga selama pelaksanaan penelitian.

Penghargaan juga penulis sampaikan kepada staf laboratorium, Falakh, Abi,

Auline, Aswan, Iqbal, serta segenap keluarga besar Depertemen Biokimia yang

telah membantu penyelesaian skripsi ini.

Ucapan terima kasih juga penulis sampaikan kepada Ayah dan Ibunda

tercinta, sumber inspirasi hidup dan motivasi menuju perubahan yang lebih baik.

Terima kasih penulis sampaikan pula kepada keluarga Sudirman Said, MBA yang

telah berbagi karunia-Nya. Salam perjuangan kepada teman-teman di UKM

Forces, GeKa, dan seluruh pejuang tangguh tim 45-41K IPB yang ikhlas

berkorban demi kemenangan terjanjikan.

Semoga karya kecil ini bermanfaat bagi ilmu pengetahuan dan berbagai

pihak yang membutuhkan.

Bogor, September 2008

Syaefudin

7/22/2019 G08sya

7/15

RIWAYAT HIDUP

Penulis dilahirkan di Brebes pada tanggal 9 Juli 1985 sebagai anak tunggal

dari pasangan Suminto dan Taryu (Almh). Penulis menyelesaikan sekolah

menengah umum di SMU N 1 Brebes pada tahun 2004. Pada tahun yang sama,

penulis diterima IPB melalui jalur Undangan Seleksi Masuk IPB sebagai

mahasiswa Program Studi Biokimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan

Alam (FMIPA).

Selama mengikuti perkuliahan, penulis aktif di berbagai organisasi

keilmiahan baik intra maupun ekstrakampus. Tahun 2005 penulis pernah menjabat

sebagai kepala departemen HRD UKM Forum for Scientific Studies (Forces) IPB.

Pada tahun yang sama penulis mendapat amanah sebagai wakil ketua Community

of Research and Education in Biochemistry (CREBs). Penulis juga aktif di

Masyarakat Ilmuwan dan Teknolog Indonesia-Mahasiswa (MITI-M) sebagai staf

PSDM masa periode 2007-2008.Penulis pernah mendapatkan penghargaan sebagai juara 1 lomba debat

himpunan profesi FMIPA 2007. Pada tahun yang sama, BEM FMIPA IPB

memberikan penghargaan kepada penulis sebagai juara 1 lomba penulisan esai

mahasiswa. Pada periode 2007-2008, penulis mendapatkan kesempatan sebagai

konsultan karya ilmiah dan penelitian oleh UKM Forces. Penulis yang pernah

mendapatkan beasiswa Goodwill International tahun 2007-2008 ini mendapat

penghargaan sebagai mahasiswa berprestasi pertama tingkat Departemen

Biokimia dan juara dua di Tingkat Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan

Alam tahun 2008. Selain itu, penulis pernah menjadi asisten matakuliah Biologi

Dasar TPB tahun 2005 dan 2006 dan matakuliah Pendidikan Agama Islam tahun

2006 dan 2008. Penulis melakukan Praktik Lapangan di Laboratorium MakananOlahan Balai Besar Industri Agro (BBIA), Bogor.

7/22/2019 G08sya

8/15

DAFTAR ISI

Halaman

DAFTAR GAMBAR ............................................................................................. ix

DAFTAR LAMPIRAN .......................................................................................... ix

PENDAHULUAN .................................................................................................. 1

TINJAUAN PUSTAKA

Bahan-Bahan Antioksidan Alami .................................................................. 1

Radikal Bebas, Antioksidan, dan Lipid Peroksida ......................................... 3

Peranan Antioksidan di Bidang Kesehatan .................................................... 5

Metode Asam Tiobarbiturat (TBA) ............................................................... 5

BAHAN DAN METODE

Bahan dan Alat ............................................................................................... 6

Metode Penelitian .......................................................................................... 6

HASIL DAN PEMBAHASAN

Hasil Ekstraksi ............................................................................................... 8

Penentuan Waktu Inkubasi Asam Linoleat .................................................... 8

Aktivitas Antioksidasi Ekstrak Tunggal Herbal.................................................8Aktivitas Antioksidasi Formula Ekstrak ........................................................ 9Interaksi Formula Ekstrak Herbal ................................................................ 10

SIMPULAN DAN SARAN .................................................................................. 11

DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 12

LAMPIRAN .......................................................................................................... 15

7/22/2019 G08sya

9/15

DAFTAR GAMBARHalaman

1 Tumbuhan jati belanda (Guazuma ulmifoliaLamk.). .......................................... 2

2 Tumbuhan jambu biji (Psidium guajava Linn.). .................................................. 3

3 Tumbuhan salam (Eugenia polyantha Wight.). .................................................. 3

4 Rancangan penelitian aktivitas antioksidasi formula campuran herbal. .............. 7

5 Nilai absorbansi hidroperoksida terhadap waktu. ................................................ 8

6 Konsentrasi MDA ekstrak daun jati belanda, jambu biji, dan salam 200 ppm. ... 9

7 Konsentrasi MDA formula ekstrak herbal. ........................................................ 10

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman1 Proses ekstraksi herbal secara umum ................................................................. 16

2 Rendemen hasil ekstraksi simplisia ketiga herbal .............................................. 16

3 Analisis hidroperoksida asam linoleat dengan metode Diena Terkonjugasi ..... 17

4 Hasil analisis hidroperoksida asam linoleat ....................................................... 17

5 Pembuatan kurva standar TMP .......................................................................... 18

6 Contoh hasil pengukuran standar TMP .............................................................. 19

7 Pengukuran konsentrasi Malonaldehida (MDA) ............................................... 20

8 Hasil pengukuran MDA sampel metode TBA ................................................... 21

9 Analisis statistika aktivitas antioksidasi sampel ................................................ 22

7/22/2019 G08sya

10/15

1

PENDAHULUAN

Ilmu pengetahuan dan teknologi yangberkembang pesat mendorong manusiamengubah pola hidup, tidak terkecuali pola

konsumsi terhadap makanan cepat saji. Polahidup kurang sehat menyebabkan penuaandini dan penyakit generatif. Asupan makanan

yang kurang sehat juga mengakibatkanterbentuknya radikal bebas di dalam tubuh.Radikal bebas menimbulkan beragampenyakit, seperti penurunan sistem kekebalan,disfungsi otak dan sistem saraf (Atmosukarto& Mitri 2003), kanker, diabetes melitus,aterosklerosis, katarak, dan penyakit jantung

koroner (Napoli et al. 2001). Hal tersebut jugadisebabkan adanya stres oksidatif, yaitu akibattidak seimbangnya jumlah oksidan dan

prooksidan di dalam tubuh.Berbagai penelitian yang telah dilakukan

menunjukkan bahwa stres oksidatif dapat

dikurangi dengan mengkonsumsi antioksidandalam jumlah yang cukup. Pencegahan serta

pengobatan telah diupayakan oleh sebagianmasyarakat Indonesia dengan cara

mengkonsumsi obat baik sintetik maupunalami. Namun, semakin mahalnya harga obat-obatan sintetik di pasaran menyebabkanmasyarakat cenderung memanfaatkan bahan-bahan alami, terutama yang berasal daritumbuhan. Selain terjangkau dan mudah

didapat, obat-obat tradisional juga telahterbukti secara empiris memiliki efek sampingyang lebih kecil dibandingkan dengan obat-obatan sintetik.

Beberapa tumbuhan telah diketahui dapatberkhasiat mengobati penyakit-penyakitdegeneratif. Beberapa diantaranya ialah jati

belanda (Guazuma ulmifolia Lamk.), jambubiji (Psidium guajavaLinn.), salam (Eugeniapolyantha Wight.), keji beling (Strobilanthescrispus Bl), dan mahkota dewa (Phaleriamacrocarpa(Scheff.) Boerl.).

Daun jati belanda, daun jambu biji, dan

daun salam telah dilaporkan dapatmenghambat peroksidasi lipid (Martsolich

2007, Indriani 2006, Ekawati 2007). Namun,penelitian yang selama ini ada masih terbatas

pada masing-masing tumbuhan saja. Sampaisaat ini belum ada penelitian yangmembandingkan kekuatan aktivitasantioksidasi ketiga bahan tersebut. Selain itu,studi ilmiah tentang aktivitas antioksidasiketiga tumbuhan tersebut dalam formula

campuran belum dilakukan.Penelitian ini bertujuan membandingkan

aktivitas antioksidasi tiga macam dedaunan:jati belanda (Guazuma ulmifolia Lamk.),

jambu biji (Psidium guajavaLinn.), dan salam(Eugenia polyantha Wight.). Penelitian jugabertujuan menentukan aktivitas antioksidasiformula campuran ekstrak etanol ketiga bahanalam antioksidan tersebut.

TINJAUAN PUSTAKA

Bahan-Bahan Antioksidan Alami

Bahan-bahan alami yang biasa digunakansebagai antioksidan dapat berasal dari buah-

buahan, sayuran, maupun tumbuhan. Di dalampenelitian ini telah dilakukan kajian mengenai

khasiat antioksidasi dari tumbuhan, khususnyacampuran jati belanda, jambu biji, dan salam.

Jati Belanda (Guazuma ulmifoliaLamk.)

Tumbuhan ini berasal dari negara Amerikadan tumbuh subur di daerah tropis. Tumbuhanini juga tumbuh secara liar di daerah tropislainnya seperti Indonesia, khususnya di pulauJawa dan Madura. Tumbuhan ini mempunyai

beragam nama, misalnya di daerah JawaTengah, tumbuhan ini biasa disebut jati londoatau jotos landi. Tumbuhan jenis pohon inimemiliki tinggi batang 10-22 meter. Teksturbatangnya keras, bulat, kasar, banyak alur,berkayu, bercabang, warna hijau keputih-putihan (Gambar 1).

Jati belanda banyak tumbuh di hutan-

hutan. Tumbuhan ini mempunyai dauntunggal berbentuk bulat telur, permukaankasar, tepi bergerigi, dan berujung runcing.Selain itu, daun jati belanda memiliki pangkalberlekuk, pertulangan menyirip, panjang 10-16 cm, lebar 3-6 cm, dan warnanya hijau.Bunganya tunggal, bulat di ketiak daun, dan

berwarna kuning berbintik merah atau hijaumuda. Jati belanda memiliki buah berbentuk

kotak, bulat, keras dengan permukaan berduri,beruang lima, dan berwarna hitam. Bijinyakecil, keras, berdiameter 2 mm, berwarnakuning kecoklatan, berlendir, dan rasanya

agak manis. Tumbuhan ini tertutup olehrambut berbentuk seperti bintang dan

mempunyai akar tunggang (Sugati et al.1991). Berdasarkan taksonominya, jati

belanda termasuk ke dalam divisiSpermatophyta dengan subdivisiAngiospermae, kelas Dicotyledonae, bangsaSterculiaceae, dan marga Guazuma (Dewi etal. 2000).

Kulit jati belanda mengandung lemak,glukosa, dan lendir. Daunnya mengandung

alkaloid, flavonoid, saponin, steroid,triterpenoid, dan tanin (Rachmadani 2001).

Selain itu, serbuk daun jati belanda

7/22/2019 G08sya

11/15

2

mengandung fenol hidrokuinon (Miradiono2002). Menurut Hartanto (1986) daun jatibelanda mengandung asam fenolat, tanin,steroid atau triterpenoid, dan karotenoid.

Hasil penelitian secara in vivo

menunjukkan bahwa daun jati belanda mampumenghambat peningkatan kadar lipidperoksida pada darah kelinci yang diberi

pakan kolesterol (Tombilangi 2004). Daun jatibelanda berkhasiat sebagai obat pelangsingtubuh sehingga simplisia daun ini banyakdigunakan dalam ramuan galian singset.Penelitian Lestari dan Muhtadi (1997)menunjukkan bahwa pemberian ekstrak etanol

daun jati belanda sebanyak 1 g/kg bobotbadan tikus yang hiperlipidemia mampu

menurunkan kadar kolesterol. Namun, hasilpenelitian yang dilakukan oleh Rachmadani

(2001) menunjukkan bahwa pemberianekstrak air daun jati belanda sebanyak 1 g/kgbobot badan tidak menurunkan kadarkolesterol tubuh.

Konsumsi rebusan daun jati belanda secaraberlebihan dapat mengakibatkan iritasi usus,

sedangkan pemakaian biji tumbuhan jatibelanda secara berlebihan dapat menimbulkandiare atau radang usus. Rebusan bijitumbuhan jati belanda yang dibakar dapatdigunakan sebagai obat sembelit, sedangkanjika dicampur dengan minyak adas dapatdimanfaatkan sebagai obat perut kembung dan

sesak nafas (Heyne 1987).

Gambar 1 Tumbuhan jati belanda (GuazumaulmifoliaLamk.). (http://www.asiamaya.com/jamu/isi/jatibelanda_ste

rculiaceae.htm).

Jambu Biji (Psidium guajavaLinn.)

Jambu biji merupakan tumbuhan jenisperdu dan berasal dari Brazil, AmerikaTengah. Tumbuhan ini menyebar ke Indonesia

melalui Thailand. Jambu biji mempunyaiberaneka sebutan, diantaranya petokal, jambu

klutuk, bayawas, tokal (Jawa), jambu batu

(Sunda), jambu bender (Madura), sotong

(Bali), dan glima breuh (Aceh). Berdasarkantaksonominya, jambu biji termasuk ke dalamdivisi Spermatophyta, subdivisiAngiospermae, kelas Dicotyledonae, bangsaMyrtales, marga Psidium, dan jenis Psidium

guajavaLinn. (Gambar 2).Senyawa kimia yang terkandung dalam

jambu biji antara lain polifenol dan tanin.

Daun dan batangnya mengandung saponin,minyak atsiri, dan tanin. Senyawa aktif yangpaling berperan dalam jambu biji adalahkuersetin. Senyawa turunan kuersetinbiasanya berhubungan dengan antidiare.Penelitian fitokimia terhadap daun jambu bijimenunjukkan bahwa lebih dari 20 zat kimiadapat diisolasi. Beberapa di antaranya ialah

alkaloid, anthosianin, minyak esensial, asamlemak, lektin, dan triterpenoid (Matsuo et al.

1993). Analisis kandungan logam dalamekstrak menunjukkan bahwa daun jambu bijitidak mengandung logam berat (Pb, Cu, As)yang membahayakan. Uji mikrobiologi jugamenunjukkan bahwa ekstrak etanol daunjambu biji tidak mengandung mikrob

berbahaya (Indriani 2006).Jambu biji merupakan tumbuhan yang

bermanfaat bagi kesehatan tubuh. Selainuntuk menjaga kesehatan jantung danpembuluh darah serta mencegah munculnyakanker, jambu biji juga dapat memperkuatdaya tahan tubuh terhadap serangan penyakit,

meningkatkan kesehatan gusi, gigi danpembuluh kapiler. Jambu biji dapat membantu

penyerapan zat besi dan mempercepatpenyembuhan luka. Tumbuhan ini memilikikandungan vitamin C yang tinggi dan cukupmengandung vitamin A. Vitamin C yangtinggi di dalam jambu biji dapatmeningkatkan kekebalan tubuh dalam

melawan bakteri. Penelitian terhadap khasiatjambu biji menunjukkan bahwa ekstrak inidapat menghambat pertumbuhan bakteriStaphylococcus aureus(Triarsari 2006).

Selain itu, tumbuhan ini juga berkhasiat

sebagai antioksidan. Hal ini didukung olehhasil penelitian Indriani (2006) yangmenunjukkan bahwa ekstrak jambu biji putih

lokal mempunyai faktor protektif yangmendekati vitamin E (tokoferol), yaitu sebesar1.10 sedangkan faktor protektif tokoferolsebesar 1.16. Ekstrak etanol daun jambu putihlokal dapat menghambat oksidasi lipid sampai94.19% terhadap kontrol yang tidak diberiantioksidan. Penggunaan jambu biji sebagai

obat oleh masyarakat biasanya dengan caramerebus daun jambu biji selama 15 menit,

kemudian air rebusan tersebut diminum

(Wijayakusuma 1993).

7/22/2019 G08sya

12/15

3

Gambar 2 Tumbuhan jambu biji (Psidiumguajava Linn.). (Encartaencyclopedia2006).

Salam (Eugenia polyanthaWight.)

Salam ialah jenis tumbuhan obat yang

tergolong bangsa Myrtales, genus Eugenia,dan spesies Eugenia polyantha Wight.(Tjiptoseopomo 2005). Tumbuhan inimemiliki nama lain, yaitu Sczygiumpolyanthum(Wight.) Walp. (Wijayakusuma et

al. 1996). Masyarakat Indonesia menyebuttumbuhan salam beragam, di antaranya

maselangan, ubar serai, gowok, manting, dankastolam.

Salam merupakan tumbuhan liar yangdapat tumbuh di hutan, pegunungan, maupundi pekarangan rumah (Gambar 3). Tumbuhanini dapat ditemukan di dataran rendah maupun

dataran tinggi dengan ketinggian mencapai1800 dpl (Wijayakusuma et al. 1996) bahkan

ada yang sampai 2000 dpl (PSB 2006).Menurut Dalimartha (2000), salam merupakanpohon bertajuk rimbun dengan tinggimencapai 25 m, batang bulat denganpermukaan licin, dan akarnya tunggang. Daunsalam berbentuk lonjong dan elips. Selain itu,

daun salam mempunyai sistem pertulanganyang menyirip, letaknya berhadapan, dantunggal. Bunga salam majemuk bersusun,berwarna putih, dan baunya harum. Buahnyamerupakan buah buni dengan bentuk bulat

berdiameter 8-9 mm, rasanya sepat, berwarnahijau (saat muda), dan merah gelap (saatmasak). Biji salam berwarna coklat danbentuknya bulat dengan luas penampang

sekitar 1 cm. Senyawa kimia yangterdapat di dalam daun salam antara lainminyak atsiri, tanin, dan flavonoid(Wijayakusuma et al. 1996). Menurut Ekawati(2007), daun salam mengandung senyawaalkaloid, saponin, fenolik hidrokuinon, dan

triterpenoid. Daun salam dapat digunakansebagai bumbu masak maupun obat yang

bermanfaat bagi kesehatan. Selain itu, salam

dapat dimanfaatkan sebagai pewarna baranganyaman terutama kulitnya (Heyne 1987).

Penelitian yang dilakukan olehAnggadiredja (1998) menunjukkan bahwaekstrak air daun salam dapat menurunkan

konsentrasi rata-rata glukosa darah sampai45.5%. Penelitian menggunakan tikus yangsengaja dibuat diare dengan pemberian

minyak jarak telah membuktikan bahwa infus90 dan 270 mg/100 g bobot badan (BB) telahmenunjukkan efek antidiare. Efek inisebanding dengan loperamid 0,12 mg/100 gBB. Efek antidiare daun salam ini munculberkat kandungan tanin dalamnya. Penelitianlain yang menguji daya antibakteri minyakatsiri daun salam menunjukkan bahwa

pengaruh buruk bakteriE. colidapat dihambat40% sedangkan bakteri S. aureus50%.

Gambar 3 Tumbuhan salam (Eugenia

polyantha Wight.).(http://www.iptek.net.id/ind/pd

_tanobat/gambar/Salam.jpg).

Radikal Bebas, Antioksidan, dan Lipid

Peroksida

Radikal bebas ialah suatu senyawa kimiayang memiliki atom atau molekul dengan satuatau lebih elektron yang tidak berpasangan(Hernani & Rahardjo 2005, Mimic-Oka etal.1999). Elektron bebas tersebut

menyebabkan molekul tidak stabil dan bersifat

reaktif karena berusaha mendapatkanpasangan elektron (Muhilal 1991). Secarateoritis, radikal bebas terbentuk karenapemisahan ikatan kovalen (Martsolich 2007).

Radikal bebas menimbulkan berbagaipenyakit degeneratif. Hal ini disebabkan sifatsenyawa bebas yang sangat reaktif dan dapat

bereaksi cepat dengan makromolekul proteinseperti enzim, lipid, karbohidrat, atau DNA

yang ada di dalam tubuh (Musthafa et al.2000). Menurut Murray et al. (1999), radikalbebas dihasilkan secara endogenus (di dalamtubuh) maupun eksogenus (di luar tubuh)

melalui sederetan reaksi (Tabel 1). Secara

7/22/2019 G08sya

13/15

4

umum, reaksi radikal bebas terdiri atas tigatahapan. Tahap pertama ialah reaksipembentukan radikal bebas awal (inisiasi).Tahap kedua berupa perambatan ataupembentukan radikal baru (propagasi). Reaksi

ini terjadi berantai. Tahap terakhir ialahterminasi, yaitu penghentian reaksi berantairadikal bebas dengan penambahan elekron

dari luar.Radikal bebas yang terbentuk secara

endogenus dapat berasal dari metabolismenormal tubuh seperti proses reduksi molekuloksigen dalam rangkaian transport elektronpada rantai respirasi mitokondria, maupun

pada proses enzimatik. Oksigendimetabolisme menjadi H2O dengan

penambahan 4 elektron melalui beberapatahapan reaksi (Siregar 1992). Reaksi molekul

oksigen dengan elektron pertamamenghasilkan anion radikal superoksida (O2

-),kemudian bereaksi lanjut dengan elektronkedua dan dua atom hidrogen menghasilkanhidrogen peroksida (H2O2).

Penambahan elektron ketiga pada molekul

hidrogen peroksida akan memicupembentukan radikal hidroksil (OH*).Molekul air akan terbentuk melalui reaksiradikal hidroksil dengan elektron keempat dansebuah atom hidrogen. Reaksi radikal bebasakan terjadi terus-menerus sampai adamolekul yang memberikan elektron. Reaksi

ini juga akan berhenti apabila terjadipertemuan dua radikal bebas. Kedua radikalbebas tersebut akan bereaksi membentukikatan nonradikal (Murray et al. 1999).

Senyawa lain yang mempunyai sifat miripdengan radikal bebas ialah oksidan. Oksidanmerupakan senyawa penerima elektron yangmempunyai kemampuan untuk menarik

elektron dari berbagai molekul yangmengakibatkan terjadinya oksidasi molekultersebut. Adapun radikal bebas adalah atomatau molekul dengan elektron tidakberpasangan pada orbit terluarnya dan

bertindak sebagai akseptor elektron. Radikalbebas adalah oksidan, namun tidak semua

oksidan merupakan radikal bebas. Radikalbebas lebih berbahaya dibandingkan oksidanyang bukan radikal.

Beberapa kerusakan yang ditimbulkanradikal bebas adalah kerusakan membran,

protein, DNA, dan terjadinya peroksidasi lipidsebagai penyebab penyakit kardiovaskuler.Menurut Halliwel dan Gutteridge (1999),

peroksidasi lipid adalah reaksi yang terjadiakibat serangan radikal bebas terhadap asamlemak tak jenuh majemuk (Poly UnsaturatedFatty Acid, PUFA). Reaksi peroksidasi lipiddiawali dengan pengambilan sebuah atomhidrogen dari gugus metilen (-CH2-) pada

PUFA yang disebabkan oleh radikal bebas.Pembentukan radikal bebas karbon (-*CH-)

disebabkan penghilangan satu atom H padaCH2. Ikatan rangkap pada asam lemak dapat

melemahkan ikatan antar atom C dan H yangberdekatan dengan ikatan rangkap, sehinggaatom H mudah diambil oleh radikal bebas.Tahap selanjutnya berupa penstabilan radikalbebas karbon melalui penataan ulang ikatanrangkap, sehingga terbentuk diena

terkonjugasi. Apabila diena terkonjugasibereaksi dengan O2, akan terbentuk radikallipid peroksida (ROO*). Tahap ini dapatmenimbulkan reaksi propagasi. Tahapterminasi terjadi apabila radikal lipidperoksida bereaksi dengan radikal bebas lainseperti senyawa antioksidan atau senyawa

biologi seperti protein.Radikal bebas yang terdapat di dalam

tubuh manusia merupakan turunan oksigen(Reactive Oxygen Species, ROS) seperti O2

-,H2O2, HO*, ROO*, dan RO*. Para penelitimeyakini bahwa ROS berperan dalampatofisiologi manusia seperti kanker,kardiovaskuler, dan penyakit neurodegeneratif

(Tuminah 2000). ROS dapat diproduksi secarakonstan di dalam tubuh melalui prosesmetabolisme normal khususnya pada reduksiO2 menjadi H2O2 dalam rantai respirasimitokondria. Efek oksidatif radikal bebas

dapat menyebabkan peradangan dan penuaandini (Yagi 1994).

Tabel 1 Reaksi pembentukan radikal bebas

No Tahapan Reaksi

1 Inisiasi RH + OHR* + H2O2 Propagasi R* + O2ROO*

ROO* + RHROOH + R*3 Terminasi ROO* + ROO*ROOR + O2

ROO* + R*ROORR* + R*RR

7/22/2019 G08sya

14/15

5

Peran Antioksidan di Bidang Kesehatan

Antioksidan adalah sejumlah vitamin atauzat yang dapat menetralkan radikal bebas

(Kartawiguna 1998). Senyawa antioksidan

dapat diperoleh dari berbagai tumbuhanmaupun buah-buahan. Beberapa antioksidanalami juga dapat dihasilkan dari rempah-rempah dan sayuran. Namun, herbaltumbuhan obat mempunyai daya aktivitasantioksidan lebih tinggi dibandingkan dengan

buah dan sayuran (Hernani & Rahardjo 2005).Berbagai penelitian tentang antioksidanmenyatakan bahwa perlawanan berbagaimacam penyakit degeneratif seperti kankerdapat dilakukan dengan mengkonsumsisayuran dan buah yang banyak mengandung

antioksidan. Hal ini bermanfaat untuk

mengurangi reaksi berantai radikal bebas.Senyawa kimia yang tergolong ke dalamkelompok antioksidan ialah golonganpolifenol, flavonoid, vitamin C, vitamin E,dan karotenoid.

Senyawa antioksidan dari golonganpolifenol sangat mudah larut dalam air danlemak. Antioksidan tersebut digunakan untukmencegah terjadinya kerusakan akibat reaksi

oksdidasi pada makanan, kosmetik, farmasi,dan plastik. Antioksidan golongan flavonoidberpotensi mencegah pembentukan radikalbebas. Senyawa flavonoid dapat dibagi

menjadi beberapa jenis, seperti flavon,flavonol, flavonon, antosianidin, katekin, danisoflavon (Hernani & Rahardjo 2005).

Antioksidan dapat dikelompokan menjaditiga, yaitu antioksidan primer, sekunder, dantersier (Kartawiguna 1998). Antioksidanprimer bekerja dengan mencegahpembentukan senyawa radikal bebas baru,misalnya enzim katalase. Antioksidan

sekunder berfungsi menangkap senyawaradikal bebas serta mencegah terjadinya reaksi

berantai seperti vitamin E, vitamin C,betakaroten, asam urat, bilirubin, dan albumin.

Antioksidan tersier berguna dalammemperbaiki kerusakan sel dan jaringan yangdisebabkan radikal bebas.

Metode Asam Tiobarbiturat (TBA)

Metode asam barbiturat (TBA) merupakansalah satu metode analisis uji antioksidasisuatu senyawa yang diduga mempunyaiaktivitas sebagai antioksidan. Uji potensi

antioksidasi lainnya antara lain metodeoksigen aktif (Active Oxygen Methode,

AOM), ferotiosianat (FTC), uji Schall, uji

masa simpan, metode Rancimat (Adawiyah et

al. 2004), uji bilangan peroksida, metodebilangan ansidin, metode Kreis, dan metodediena terkonjugasi (Santoso 2001).

Metode yang telah digunakan untukmenguji aktivitas antioksidasi ekstrak herbal

ialah metode TBA. Alasan penggunaanmetode ini antara lain: metode TBAmerupakan cara analisis antioksidan yang

telah lama digunakan untuk mengukurperoksidasi asam lemak pada membran danmakanan, pereaksi TBA mempunyaisensitivitas tinggi terhadap peroksida lipidyang dijadikan sebagai parameter terjadinyaoksidasi di dalam tubuh, serta reaksi yangditimbulkan antara malonaldehida denganasam tiobarbiturat menghasilkan produk yang

sama dengan reaksi yang ditimbulkan antaralipid peroksida dan asam tiobarbiturat (Yagi

1994). Selain itu, penggunaan metode TBAdisebabkan penelitian ini membandingkanpenelitian terdahulu yang juga menggunakanmetode TBA. Penelitian yang dimaksudadalah penelitian potensi antioksidasi daun jatibelanda (Martsolich 2007), jambu biji

(Sulistiyani et al. 2007), dan salam (Ekawati2007). Uji aktivitas antioksidasi dilakukansetelah pengukuran hidroperoksida yangmerupakan produk primer oksidasi asamlinoleat dengan metode diena terkonjugasi.Pengukuran hidroperoksida bertujuanmenentukan waktu inkubasi asam linoleat.

Pengukuran potensi antioksidan denganmetode TBA lebih baik dilakukan setelah satu

atau beberapa hari dari puncak absorbansiasam linoleat. Harapannya, semuahidroperoksida yang dihasilkan telahmengalami dekomposisi membentukmalonaldehida (Kikuzaki & Nobuji 1993).Metode TBA menggunakan 1,1,3,3-

tetrametoksipropana (TMP) sebagai standarpengukuran. Senyawa TMP merupakansejenis TBA-reacting substance (TBA-rs)atau senyawa hasil oksidasi lipid yang dapatbereaksi dengan TBA membentuk senyawa

berwarna merah jambu. Senyawa ini dapatdiukur absorbansinya pada panjanggelombang 532 nm.

Waktu inkubasi linoleat pada pembuatanstandar TMP maupun sampel didasarkan padapengukuran diena terkonjugasi selama prosesoksidasi. Saat masa inkubasi, asam linoleatakan dioksidasi oleh oksigen. Pada tahapawal, oksidasi ini akan membentuk senyawahidroperoksida terkonjugasi yang selanjutnya

diikuti tahap propagasi dimana kadarhidroperoksida terus meningkat. Asam

linoleat yang mengandung dua ikatan rangkap

terkonjugasi menunjukkan intensitas

7/22/2019 G08sya

15/15

6

absorbansi pada panjang gelombang 234 nm(Rossel 1983 dalam Tensiska 2001). Setelahmencapai konsentrasi maksimum,hidroperoksida akan mengalami tahapdekomposisi membentuk MDA.

BAHAN DAN METODE

Bahan dan Alat

Bahan-bahan yang digunakan dalampenelitian ialah ekstrak etanol 70% daun jatibelanda, ekstrak etanol 70% daun jambu biji,dan ekstrak etanol 70% daun salam. Simplisia

diperoleh dari Pusat Studi Biofarmaka-InstitutPertanian Bogor (PSB IPB). Selain itu, bahan

yang digunakan juga berupa akuades, etanol

70%, etanol 75%, TMP, TBA 1% (b/v) dalamasam asetat 50%, Trichloroaceticacid (TCA)20%, asam linoleat 50 mM dalam etanol99.8%, bufer fosfat 0.1 M pH 7, dan -tokoferol.

Alat-alat yang dipakai meliputi peralatangelas, penangas air, neraca analitik, corong,spektrofotometer UV, autopipet, dan pipetkapiler. Selain alat-alat yang telah disebutkan,penelitian ini juga memakai vorteks dansentrifus.

Metode Penelitian

Tahapan penelitian yang telah dilakukanantara lain ekstraksi senyawa aktif daun jatibelanda, daun jambu biji, dan daun salam,penentuan waktu inkubasi asam linoleatdengan metode diena terkonjugasi, serta

analisis konsentrasi malonaldehida (MDA)menggunakan metode TBA.

Ekstraksi Herbal

Serbuk kering daun jati belanda, daunjambu biji, dan daun salam diekstrak denganpelarut organik etanol 70%. Masing-masingsebanyak 20 g serbuk kering daun yang diujidimaserasi terpisah selama seminggu.Perbandingan serbuk kering terhadap etanol

yang digunakan dalam teknik maserasi adalah1:5 (b:v). Filtrat yang diperoleh dipekatkandengan rotavapor pada suhu 50

oC. Hasil

pemekatan dioven selama 24 jam pada suhu40oC.

Penentuan Waktu Inkubasi Asam Linoleat

dengan Metode Diena Terkonjugasi

(Esterbauer et al. 1989, diacu dalam Taher

2003)

Analisis hidroperoksida dari oksidasi asam

linoleat dilakukan dengan memasukkan 2 ml

bufer fosfat 0.1 M pH 7, 2 ml asam linoleat 50mM dalam etanol 99.8%, dan 1 ml akuades kedalam botol gelap berulir, kemudiandiinkubasi pada suhu 40

oC. Inkubasi linoleat

dilakukan selama 10 hari.

Campuran sampel tersebut diambil 50 lke dalam 6 ml etanol 75%, kemudianabsorbansi diena terkonjugasi sampel diukur

langsung menggunakan spektrofotometersinar UV pada panjang gelombang 234 nm.Analisis hidroperoksida ini diukur setiap hari.

Analisis Konsentrasi Malonaldehida

(MDA) dengan Metode TBA (Kikuzaki

1993)

Campuran sampel terdiri atas 2 ml buferfosfat 0.1 M pH 7, 2 ml asam linoleat 50 mM

dalam etanol 99.8%, dan 1 ml larutan uji

dalam air bebas ion. Campuran kontrol tanpaperlakuan dibuat sama seperti campuransampel tetapi 1 ml larutan uji diganti dengan 1ml air bebas ion. Campuran pembanding yangdibuat terdiri atas 2 ml bufer fosfat 0.1 M pH7, 2 ml asam linoleat 50 mM dalam etanol99.8% yang mengandung vitamin E sebanyak200 ppm, dan 1 ml air bebas ion.

Larutan uji yang dianalisis adalah

larutan tunggal ekstrak etanol bahanantioksidan (daun jati belanda (x), daun jambubiji (y), dan daun salam (z)). Selain itu,dianalisis juga larutan uji yang mengandung

campuran ketiga ekstrak etanol bahanantioksidan tersebut dengan perbandinganberturut-turut (1x:1y:1z), (1x:1y:0z),

(1x:0y:1z), dan (0x:1y:1z). Koefisien satumerepresentasikan konsentrasi minimum yangdapat menimbulkan efek antioksidan daribahan uji. Berdasarkan literatur yangdiperoleh, konsentrasi minimum ekstrak daunjati belanda dan daun jambu biji masing-

masing 50 ppm dan daun salam 100 ppm.Koefisien nol menunjukkan bahwa ekstrak

yang dimaksud tidak dicampurkan.Semua campuran tersebut diinkubasi

dalam penangas air yang bersuhu 40 oCdengan lama inkubasi 9 hari. Masing-masingcampuran reaksi diambil 1 ml laluditambahkan 2 ml TCA 20% dan 2 ml larutanTBA 1% (b/v) dalam asam asetat 50%.Kemudian campuran reaksi ditempatkan pada

penangas air bersuhu 100oC selama 10 menit.

Setelah itu didinginkan dan disentrifus dengankecepatan 3000 rpm selama 15 menit,selanjutnya diukur absorbansinya denganspektrofotometer pada panjang gelombang532 nm. Kurva standar dibuat denganmengencerkan larutan stok pereaksi 1,1,3,3-

tetrametoksipropana (TMP) berkonsentrasi 6